Nonratt021972小干擾rna在制備心肌缺血損傷、交感神經(jīng)疾病藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于心肌缺血損傷、心血管及交感神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物用途發(fā)明領域。
【背景技術】
[0002] 急性心肌肌缺血通常是由冠狀動脈已經(jīng)或者即將閉塞而引起的心肌需氧和供氧 之間的失衡所致。急性冠脈綜合征是指急性心肌缺血導致的一系列癥狀，包括心肌梗死（ST 段抬高和壓低、Q波型和無Q波型）和不穩(wěn)定型心絞痛等癥狀。臨床研究發(fā)現(xiàn)，切除頸上神 經(jīng)節(jié)（superiorcervicalganglion，SCG)、星狀神經(jīng)節(jié)（stellateganglion，SG)等交感 神經(jīng)節(jié)后可使50-60%冠心病患者的心絞痛癥狀消失，提示支配心臟的交感神經(jīng)涉及心肌 缺血損傷反應。心臟同時接受心交感神經(jīng)和心迷走神經(jīng)的支配，在生理狀態(tài)下，心迷走神經(jīng) 對心臟的作用占主導地位，比心交感更占優(yōu)勢。在心臟外周信息傳遞中，心臟感覺傳入神經(jīng) 與頸部交感心臟傳出節(jié)后神經(jīng)元形成反饋環(huán)路，改變交感傳出節(jié)后神經(jīng)元的功能。頸部交 感神經(jīng)節(jié)不是簡單的信號中繼站，而是對各種信息具有整合作用。心肌缺血傷害性信號可 通過感覺神經(jīng)的傳入信息影響頸部交感神經(jīng)節(jié)細胞的功能，進而加強交感節(jié)后神經(jīng)活動， 引起血壓升高和心率加快等交感興奮性增強的反射，進而加重心肌缺血損傷。心交感神經(jīng) 興奮增強本身也可導致血壓升高，引發(fā)高血壓。
[0003] 三磷酸腺苷（adenosine5' -triphophate，ATP)，是一種噪呤類物質(zhì)，它通過興奮P2X受體參與神經(jīng)傳遞和神經(jīng)調(diào)節(jié)。P2受體分有P2X和P2Y受體兩大類，P2X受體為配體 門控型離子通道受體，P2Y受體為G-蛋白耦聯(lián)受體。到目前為止，已有七種P2X受體亞型 P2\ 7和八種類型P2Y受體亞型（P2Yuun14)被克隆。心肌缺血發(fā)生時，心肌組織以及 交感神經(jīng)末梢（頸上神經(jīng)節(jié)節(jié)前、節(jié)后纖維）均可通過胞吐或外滲作用釋放ATP，使心臟感 覺傳入神經(jīng)末梢興奮，引發(fā)胸痛，由此產(chǎn)生的交感傳出興奮性反射常表現(xiàn)為血壓升高和交 感神經(jīng)活動增加。心交感興奮性加強可加重心肌缺血、缺氧使心絞痛加重。酪氨酸羥化酶 (tyrosinehydroxylase，TH)是交感神經(jīng)的標志物。
[0004] P2X7受體由595個氨基酸組成，其前395個氨基酸編碼兩個跨膜區(qū)、一個大的胞外 環(huán)和N端，P2X7受體的胞內(nèi)C端長于其它成員。P2X7受體是雙功能受體，受刺激持續(xù)時間、 強度和其他因素影響，產(chǎn)生兩種不同反應：P2X7受體在低濃度激動劑短暫刺激時引起非選 擇性陽離子內(nèi)流，幾乎無失活；在較高濃度激動劑長時間或反復激活后可形成質(zhì)膜孔道，分 子量達800Da的大分子和離子可通透，細胞骨架重排，終致細胞死亡。
[0005] 本發(fā)明前期用SOLiD高通量測序并通過生物信息學預測和分子生物學驗證 確定大鼠頸部交感神經(jīng)節(jié)（頸上神經(jīng)節(jié)和星狀神經(jīng)節(jié)）、心肌存在長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972[http://www.noncode·org]，并發(fā)現(xiàn)心肌缺血模型大鼠頸部交感神經(jīng)節(jié)長 非編碼核糖核酸N0NRATT021972表達較對照組明顯增加，提示心臟的長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972與心血管、交感神經(jīng)的病理變化有關。長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小 干擾核糖核酸是否可對心肌缺血損傷產(chǎn)生保護作用尚不清楚，是否可作用于頸部交感神經(jīng) 節(jié)神經(jīng)細胞P2X7受體影響心肌缺血引發(fā)的交感增強反射對心肌、心血管、心交感神經(jīng)損傷 產(chǎn)生保護作用目前尚無文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一個目的在于提供長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核 酸的第一個新用途，即N0NRATT021972小干擾核糖核酸在制備預防治療心肌缺血損傷（急 性冠脈綜合征等）藥物中的應用。
[0007] 本發(fā)明的第二個目的在于提供長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核 酸的第二個新用途，即N0NRATT021972小干擾核糖核酸在制備預防治療高血壓藥物中的應 用。
[0008] 本發(fā)明的第三個目的在于提供長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核 酸的第三個新用途，即N0NRATT021972小干擾核糖核酸在制備預防治療交感神經(jīng)系統(tǒng)疾病 藥物中的應用。
[0009] 長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸可降低心肌缺血大鼠引起的 交感神經(jīng)反射（血壓升高、心率和呼吸加快等），從而減輕或緩解心肌缺血損傷、心血管病 變。長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸在預防治療心肌缺血損傷（急性冠 脈綜合征等）、心血管和交感神經(jīng)病變的作用機理為：影響P2X7受體介導的交感興奮反射 傳遞，產(chǎn)生防治心肌缺血損傷、心血管和交感神經(jīng)疾病的作用。
[0010] 本發(fā)明的技術效果：長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸可降低心 肌缺血損傷引起的交感神經(jīng)反射（血壓升高、心率和呼吸加快等），避免因為心交感興奮增 強所引起的進一步加重心肌缺血缺氧現(xiàn)象，從而減輕或緩解心肌缺血損傷。長非編碼核糖 核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸抑制頸部交感神經(jīng)節(jié)興奮增強傳遞可防治心血管疾 病、抑制交感異常興奮及相關病理過程可防治交感神經(jīng)疾病。
【附圖說明】
[0011] 圖1為長非編碼核糖核酸N0NRATT021972在心肌缺血大鼠頸上神經(jīng)節(jié)、星狀神經(jīng) 節(jié)中表達量的變化；
[0012] 圖2為長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸對心肌缺血損傷模型大 鼠心電圖的影響圖。其中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模型組；心肌缺血模型+亮藍 G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干擾核糖核酸 組；心肌缺血模型+嘌呤2X7受體小干擾核糖核酸組。
[0013] 圖3為蘇木精-伊紅染色法（HE)染色觀察長非編碼核糖核N0NRATT021972小 干擾核糖核酸對模型大鼠缺血損傷心肌的影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌 缺血模型組；心肌缺血模型+亮藍G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模 型+N0NRATT021972小干擾核糖核酸組；心肌缺血模型+嘌呤2心受體小干擾核糖核酸組 (Scalebars:50μm)〇
[0014] 圖4為N0NRATT021972小干擾核糖核酸對血清中腫瘤壞死因子（TNF-α)、白細胞 介素6(IL-6)濃度影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模型組；心肌缺血模型 +亮藍G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干擾核糖 核酸組；心肌缺血模型+嘌呤2X7受體小干擾核糖核酸組。wp〈0. 01與對照組比較；##p〈0. 01 與心肌缺血模型組比較。
[0015] 圖5為N0NRATT021972小干擾核糖核酸對血清中去甲腎上腺素、腎上腺素濃度影 響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模型組；心肌缺血模型+亮藍G組；心肌缺 血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模型+N0NRATT021972小干擾核糖核酸組；心肌缺血 模型+嘌呤2X7受體小干擾核糖核酸組。wp〈0. 01與對照組比較；##p〈0. 01與心肌缺血模型 組比較。
[0016] 圖6為實時定量聚合酶鏈式反應檢測N0NRATT021972小干擾核糖核酸對頸上神經(jīng) 節(jié)、星狀神經(jīng)節(jié)P2X7受體信使核糖核酸表達的影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心 肌缺血模型組；心肌缺血模型+亮藍G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模 型+N0NRATT021972小干擾核糖核酸組；心肌缺血模型+嘌呤2X7受體小干擾核糖核酸組。 、〈0. 01與對照組比較；##p〈0. 01與心肌缺血模型組比較。
[0017] 圖7為免疫組織化學檢測N0NRATT021972小干擾核糖核酸對頸上神經(jīng)節(jié)（圖 7(&)#21受體免疫反應性表達的影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模 型組；心肌缺血模型+亮藍G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模型 +N0NRATT021972小干擾核糖核酸組；心肌缺血模型+嘌呤2心受體小干擾核糖核酸組。圖 7(b)為統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)的柱狀圖。、〈0. 01與對照組比較；##p〈0. 01與心肌缺血模型組比較 (Scalebars:20μm)〇
[0018] 圖8為免疫組織化學檢測N0NRATT021972小干擾核糖核酸對星狀神經(jīng)節(jié)（圖 8(&)#21受體免疫反應性表達的影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模 型組；心肌缺血模型+亮藍G組；心肌缺血模型+亂序小干擾處理組；心肌缺血模型 +N0NRATT021972小干擾核糖核酸組；心肌缺血模型+嘌呤2心受體小干擾核糖核酸組。圖 7(b)為統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)的柱狀圖。、〈0. 01與對照組比較；##p〈0. 01與心肌缺血模型組比較 (Scalebars:20μm)〇
[0019] 圖9為蛋白印跡檢測N0NRATT021972小干擾核糖核酸對頸上神經(jīng)節(jié)嘌呤2心受體 蛋白表達的影響圖。圖中分別為對照組；假手術組；心肌缺血模型組；