一種蘆薈發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蘆薈發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 蘆薈（Aloe)系百合科，多年生常綠肉質(zhì)多汁草本植物。蘆薈是一種集藥食、保 健、美容和觀賞于一體的重要經(jīng)濟植物。蘆薈的化學(xué)成分相當(dāng)復(fù)雜，經(jīng)長期研究發(fā)現(xiàn)蘆薈 中含有以蘆薈素為首的80多種有效成分。主要含有蒽醌及其甙類、苷、萘酮、樹脂、有機 酸、糖類、蛋白質(zhì)、草酸鈣、纖維、微量元素等。蘆薈在美容及化妝品方面起主要作用的是黏 液成分，其中的多糖物質(zhì)與氨基酸構(gòu)成了天然的保濕劑，可以補充皮膚中的水分，恢復(fù)膠 原蛋白的功能，防止面部皺紋，保持皮膚光滑，富有彈性。蘆薈中的蘆薈熊果苷、蘆薈烏辛 (Aloeulcin)能治療胃及十二指腸潰瘍、黏膜潰爛。蘆薈熊果苷還可以預(yù)防皮膚老化。我國 蘆薈資源豐富，為開發(fā)應(yīng)用蘆薈提供有利條件。隨著薈栽培業(yè)迅速發(fā)展及應(yīng)用范圍拓寬，對 蘆薈營養(yǎng)成分及在醫(yī)療保健作用方面研究也逐步深入。對蘆薈活性物質(zhì)的提取工藝也不斷 完善，但是提取方法主要以閃式提取法、水提法為主。
[0003] 現(xiàn)有的蘆薈活性物提取最常采用的是水提法：蘆薈干品粉碎后加去離子水，真空 抽濾后取濾液，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，最后冰箱冷藏并使用乙醇沉淀，離心后得到產(chǎn) 物。但是該方法在提取過程中引入有機物，不僅破壞環(huán)境，且在應(yīng)用的過程中存在潛在的安 全隱患。因此，為了避免上述問題，需要提供一種利用發(fā)酵工程技術(shù)對蘆薈活性物質(zhì)進行提 取的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種蘆薈發(fā)酵原漿化妝品及其制備方法與應(yīng)用，該方法利用 發(fā)酵工程技術(shù)從蘆薈中提取活性物質(zhì)，操作簡單，且由于不添加任何外來物質(zhì)，制備得到的 蘆薈發(fā)酵物即蘆薈發(fā)酵原漿對皮膚安全無傷害，具有更高的美白和抗衰老活性。
[0005] 本發(fā)明提供的蘆薈發(fā)酵原漿的制備方法，包括如下步驟：將蘆薈原漿、水和發(fā)酵菌 混合得到初始體系，并對初始體系進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到所述蘆薈發(fā)酵原漿。
[0006]上述的制備方法中，所述初始體系中，所述發(fā)酵菌、所述蘆薈原漿和水的配比可為 (18~35)mL: (15~30)g: (250~400)mL，所述發(fā)酵菌的濃度可為（106~10 9)CFU/mL;具 體地，所述初始體系中，所述發(fā)酵菌、所述蘆薈原漿和水的配比可（18~35)mL:(15~30) g:320mL;更具體地，所述初始體系中，所述發(fā)酵菌、所述蘆薈原楽;和水的配比為20mL:18g: 320mL，所述蘆薈原漿的濃度可為106~10 9CFU/mL。
[0007]上述的制備方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度可為30~45°C，具體可為35°C;時間可 為24~38h，具體可為28h。
[0008]上述的制備方法中，所述發(fā)酵菌可為鏈球菌，具體可為嗜熱鏈球菌Streptococcus thermophilus;所述蘆薈原楽:來自蘆薈的葉片，為勾楽;機粉碎后得到的楽;狀物，具體可為在 1000~1200r/min轉(zhuǎn)速下粉碎3~lOmin獲得的漿狀物質(zhì)。
[0009] 上述的制備方法中，所述發(fā)酵菌以其培養(yǎng)液或懸浮液的形式存在；所述發(fā)酵菌培 養(yǎng)液或所述發(fā)酵菌懸浮液的pH值可為6. 5~7. 5,具體可為7. 0。
[0010] 上述的制備方法中，所述方法在所述發(fā)酵培養(yǎng)之后，還包括對發(fā)酵液依次進行滅 菌、離心和取上清液的步驟。
[0011] 上述的制備方法中，所述滅菌的條件如下：滅菌溫度可為115~121°C，具體可為 115°C;滅菌時間可為15~25min，具體可為20min。
[0012] 上述的制備方法中，所述離心的條件如下：離心轉(zhuǎn)速可為4000~6000r/min，具體 4700r/min;所述離心時間可為20~30min，具體可為25min;所述離心的半徑可為9cm。
[0013] 本發(fā)明進一步提供了一種由上述的制備方法制備得到的蘆薈發(fā)酵原漿。
[0014] 上述蘆薈發(fā)酵原漿在制備具有下述1)_4)中至少一種功能的化妝品中的應(yīng)用或 在直接作為具有下述1)_4)中至少一種功能的化妝品中的應(yīng)用，也在本發(fā)明的保護范圍 內(nèi)：
[0015] 1)抑制酪氨酸酶活性；
[0016] 2)皮膚美白；
[0017] 3)清除DPPH自由基；
[0018] 4)抗衰老。
[0019] 上述的1)_4)的應(yīng)用中，所述化妝品包括但不限于：面膜、精華液或爽膚水。
[0020] 本發(fā)明具有如下有益效果：
[0021] (1)本發(fā)明提供的蘆薈發(fā)酵物（即蘆薈發(fā)酵原漿）的制備方法采用發(fā)酵工程技術(shù)， 通過選擇合適的菌種及發(fā)酵條件，從蘆薈中提取得到活性物質(zhì)。一方面，最大程度的保留了 植物中的活性成分，且相對與傳統(tǒng)的水提法，避免了有機溶劑的引入，安全環(huán)保；另一方面， 不需要添加酶等外來物質(zhì)，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本，而且最大化的簡化了生產(chǎn)步驟，使該發(fā)酵技 術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，并能夠充分保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
[0022] (2)本發(fā)明提供的蘆薈發(fā)酵原漿中含有健康皮膚不可或缺的氨基酸、礦物質(zhì)等自 然成分，且由于在制備過程中未引入外來物質(zhì)，不含任何化學(xué)成分，可以直接作為面膜或精 華液或爽膚水的成品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會給肌膚造成任何負作 用；且獲得成分分子量小，易于讓皮膚充分吸收。
[0023] (3)本發(fā)明提供的蘆薈發(fā)酵原漿，具有較強的抗氧化能力可清除自由基，促進細胞 代謝，增強細胞活力，改善機體的結(jié)構(gòu)和功能，提高機體生命力，從而延緩細胞老化，具有抗 衰老的功效。
[0024] (4)本發(fā)明提供的蘆薈發(fā)酵原漿，可抑制酪氨酸酶的活性，其美白效果相當(dāng)于 0.44%的熊果苷的效果，具有一定的美白功效。
【附圖說明】
[0025] 圖1為蘆薈發(fā)酵原漿的活性多肽分子量分布HPLC圖譜。
[0026]圖2為不同濃度的蘆薈發(fā)酵原漿與DPPH自由基清除率的關(guān)系曲線。
[0027]圖3為10%的蘆薈發(fā)酵原漿和1%的熊果苷對酪氨酸酶的抑制率的對比圖。
【具體實施方式】
[0028] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0029] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0030] 下述實施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，pH值為7. 0。
[0031] 下述實施例中的YTO培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：酵母提取物1% (質(zhì)量分數(shù)），胰蛋白胨2% (質(zhì)量分數(shù)），葡萄糖2% (質(zhì) 量分數(shù)），pH值為7.0。
[0032] 下述實施例中的蘆薈原漿為蘆薈葉片在轉(zhuǎn)速為1000~1200r/min的勻漿機中粉 碎3~lOmin得到的漿狀物質(zhì)，所用蘆薈葉片來自市面銷售。
[0033] 下述實施例中的嗜熱鏈球菌Streptococcusthermophilus的ATCC編號為19258， 公眾可從ATCC購買得到。
[0034] 下述實施例中的嗜熱鏈球菌菌液通過如下步驟制備得到：
[0035] 1、菌種的活化
[0036] 挑取嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus)菌落一環(huán)于液體培養(yǎng)基中，放入 搖床中將菌種活化，得到活化后嗜熱鏈球菌菌液。
[0037] 2、菌種的純化
[0038] 將步驟1得到的活化后的菌液梯度稀釋鋪板，以便獲取單菌落，得到純化后嗜熱 鏈球菌。
[0039] 3、菌種的擴大培養(yǎng)
[0040] 將步驟2得到的純化后的菌種接種到Y(jié)H)培養(yǎng)基（pH值為7. 0)中，在25°C的搖床 中培養(yǎng)，當(dāng)0D值=0. 6~1. 2時，得到發(fā)酵菌菌液（菌種處在對數(shù)期，濃度為106~10 9CFU/ mL)〇
[0041] 實施例1、制備蘆薈發(fā)酵原漿
[0042] 按照如下步驟制備蘆薈發(fā)酵原漿
[0043] (1)將20mL上述步驟3得到的嗜熱鏈球菌發(fā)酵菌菌液接種到18g的蘆薈原漿和 320mL的水中，得到發(fā)酵體系；
[0044](2)將發(fā)酵體系在35°C搖床中發(fā)酵28小時，得到發(fā)酵產(chǎn)物；
[0045] (3)將發(fā)酵產(chǎn)物在115°C下滅菌20min，使菌失活，得到滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物；
[0046] (4)將滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物在4700r/min、離心半徑為9cm的條件下離心25min，棄沉 淀，收集上清液，即為蘆薈發(fā)酵原漿。
[0047] 實施例2、蘆薈發(fā)酵原漿在作為化妝品中的應(yīng)用
[0048] 一、蘆薈發(fā)酵原漿的性質(zhì)
[0049] 將實施例1所制備所得的發(fā)酵原漿采用活性炭脫色、去味。其外觀為粘稠液體、顏 色為淡黃色至棕黃色。pH值5. 2-6. 3,粘度200-500cP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0%，菌落 總數(shù)小于50CFU/mL，無致病菌檢出。根據(jù)化妝品衛(wèi)生標準GB7916-87,化妝品細菌總數(shù)不高 于1000CFU/mL，所以此發(fā)酵原漿符合化妝品質(zhì)量要求。
[0050]對該蘆薈發(fā)酵原漿進行成分分析，蛋白質(zhì)檢測方法參照GB5009. 5-2010 ;粗多糖 檢測方法參照GB/T5009. 8-2008 ;黃酮檢測方法參照GB/T5009. 124-2003 ;總酚檢測方法 參照GB/T8313-2008,所得結(jié)果如下：
[0051] 本發(fā)明制得的蘆薈發(fā)酵原漿含蛋白質(zhì)4. 35g/kg、粗多糖15. 36g/kg、總黃酮 0· 086g/kg(以蘆丁計）、總酸 0· 14g/kg。
[0052] 二、蘆薈發(fā)酵原漿的安全性檢測
[0053] 人體斑貼試驗主要是用于檢測化妝品終產(chǎn)品或原料的刺激性。本發(fā)明對實施例1 獲得的蘆薈發(fā)酵原漿進行人體封閉式斑貼試驗，旨在對其潛在皮膚刺激性進行評估。
[0054] 1、試驗對象
[0055] 選擇合適的志愿者30人，年齡范圍在18-60歲隨機選擇。
[0056] 2、試驗方法
[0057] 稱取0. 020g_0. 025g固體樣品或半固體的樣品放入斑試器中備用。將液體樣品 0. 2mL到0. 025mL滴加在濾紙片上，再將濾紙片置于斑試器內(nèi)。每個樣品均設(shè)置空白對照， 在對照斑試器孔內(nèi)加入與樣品等量的樣品溶劑，如蒸餾水或橄欖油（本實施例采用蒸餾 水）。
[0058] 試驗部位選為人體背部，利用無刺激性的膠帶將斑試器固定貼敷于受試者背