法：
[0092] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將 栓劑溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18,14. 4， 11. 5,9. 2, 7. 4 (g. kg-Ι)，在動(dòng)物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小 時(shí)），每次〇. 5ml，觀察動(dòng)物死亡情況。
[0093] 2、最大耐受劑量測(cè)定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將栓劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動(dòng)物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動(dòng)為準(zhǔn)。在動(dòng)物禁食（不禁水）18 小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次〇. 5ml (每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g 生藥/kg. d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0094] 三、試驗(yàn)結(jié)果：
[0095] 在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg. d)，未見 小鼠死亡，即未測(cè)出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動(dòng)物其食欲、活動(dòng)、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD > 18g/Kg. d。
[0096] 試驗(yàn)例2 :本發(fā)明急性皮膚刺激試驗(yàn)報(bào)告
[0097] 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測(cè)本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度
[0098] 2、材料和方法：
[0099] 2. 1.受試物：本發(fā)明口服液（按實(shí)施例方法2制得）
[0100] 2. 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：壹級(jí)大耳白種家兔，10只，雌性，體重2. 1-2. 3kg;由青島大學(xué)醫(yī)學(xué) 院生物系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0101] 2. 3.試驗(yàn)方法：
[0102] 選用皮膚完好的健康家兔10只，于試驗(yàn)前24小時(shí)將其背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去 毛面積左、右各約4cmX4cm。試驗(yàn)時(shí)取受試物0. 2ml涂于2. 5cmX2. 5cm的二層紗布上，敷 貼于一側(cè)去毛皮膚表面，油紙覆蓋，膠布固定。另一側(cè)皮膚作為空白對(duì)照。封閉4小時(shí)后， 去除覆蓋物，并用溫水清洗去殘留受試物，于去除受試物后的1、24和48小時(shí)觀察涂抹部位 皮膚反應(yīng)，并評(píng)分。
[0103] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚未出現(xiàn)任何紅斑，紅腫，發(fā)炎現(xiàn)象。
[0104] 4、小結(jié)：根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（1999)中皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定，本發(fā)明對(duì)動(dòng) 物皮膚刺激強(qiáng)度屬無刺激性。
[0105] 實(shí)施例3 :長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)資料
[0106] 1、實(shí)驗(yàn)方法
[0107] 將豚鼠隨機(jī)份成4組，每組15只。在豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使其 脫毛范圍約40平方厘米。洗凈脫毛劑，觀察24小時(shí)后每組豚鼠分別涂本發(fā)明口服液溶液 0. 2、0. 4和0. 8ml，分別含生藥92、184和368mg，另一組涂溶媒0. 8ml每日二次，連續(xù)30天， 觀察豚鼠的一般情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理學(xué)檢查。
[0108] 2、結(jié)果
[0109] 上述三組用藥豚鼠軀干去毛區(qū)，未見局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點(diǎn)及潰瘍。 用藥組與對(duì)照組動(dòng)物毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動(dòng)等對(duì)照組無明顯差異，血液生化檢查，用藥 組與對(duì)照組均在正常范圍。病理組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)各組心、肝、腎及局部皮膚均未見明顯病 變。提示，本發(fā)明中藥口服液長(zhǎng)期用藥對(duì)局部皮膚及全身重要臟器均未見明顯的毒性作用。
[0110] 試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明口服液實(shí)驗(yàn)安全。該藥對(duì)乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大 腸桿菌的最小抑制濃度為1 : 150,淋球菌為1 : 150,白色念珠菌為1 : 300,對(duì)1 : 20稀 釋度時(shí)的殺滅時(shí)間為5分鐘，1 : 50時(shí)為10分鐘，1 : 100時(shí)為20分鐘，1 : 200時(shí)為40 分鐘，1 : 400時(shí)為8小時(shí)。
[0111] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0112] 大黃對(duì)正常小鼠由四氯化碳引起的肝損傷有明顯保護(hù)作用，表現(xiàn)為SG0T顯著降 低，使肝體比降低（大劑量）。對(duì)正常大鼠有顯著的利膽作用，膽汁流量增加持續(xù)2h。熊去 氧膽酸流量增加持續(xù)1小時(shí)。膽汁中膽固醇、膽紅素給藥前和給藥后組間比較未見顯著差 異性。為此我們進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。
[0113] 1、材料與方法
[0114] 藥物：本發(fā)明提醇沉液的制備：取一定量本發(fā)明原料藥，水煎兩次，水浴上濃縮至 一定體積后加95乙醇沉淀雜質(zhì)，過液，濾液回收乙醇。配成100%濃度。
[0115] 對(duì)照組為白云山消炎利膽片，國(guó)藥準(zhǔn)字Z44022243。熊去氧膽酸為日本三菱化成生 產(chǎn)。
[0116] 動(dòng)物ICR小鼠，SD大鼠均由本院動(dòng)物研究室提供。
[0117] 1. 1對(duì)四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護(hù)作用：雄性小鼠78只，體重18_23g，按體 重隨機(jī)分層分成六組，每組13只。本發(fā)明3個(gè)劑量組2. 5g/kg、5. Og/kg、10.0 g/kg，陽(yáng)性對(duì) 照藥白云山消炎利膽片l〇g/kg，模型組，水對(duì)照組每天灌胃給藥一次，連續(xù)6d，于第六天給 藥后lh除水對(duì)照組外其余各組均皮下注射0. 15的四氯化碳菜油5ml/kg。16h后摘眼球取 血用北京化工廠產(chǎn)的試劑盒測(cè)定血清SGPT、SG0T。解剖出肝臟稱重，根據(jù)處死時(shí)體重計(jì)算 每只小鼠的肝體比、數(shù)據(jù)以均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0118] 1. 2對(duì)正常大鼠膽汁流量的影響1. 2. 1
[0119] 膽汁流量的測(cè)定：取大鼠60只，雄性，體重250~350g，稱重隨機(jī)分成五組，每組 12只，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水。實(shí)驗(yàn)以10 %烏拉坦1. Og/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于手術(shù) 臺(tái)，沿腹正中線切開腹壁，找出十二指腸，在降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下 穿二根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作"V"形切口，插入硬質(zhì)塑料管，結(jié)扎固定，即可見有 淡黃綠色膽汗流出，試管收集膽汁，術(shù)后以鹽水紗布覆蓋腹腔，待穩(wěn)定lh后，先收集30min 的膽汁，作為給藥前的基礎(chǔ)值，然后分組給藥（經(jīng)十二指腸）。本發(fā)明3個(gè)劑量組2. 5g/kg、 5. Og/kg、10.0 g/kg，水對(duì)照組，陽(yáng)性藥熊去氧膽酸0. 5g/kg。給藥后每隔30min收集測(cè)量1 次膽汁。共4h。
[0120] 1. 2. 2膽汁成分的測(cè)定：將給藥前，給藥后4h收集的膽汁測(cè)定膽紅素（伊利康生 物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，咖啡因法）。膽固醇含量測(cè)定用東歐生物工程公司生產(chǎn)的試劑盒，酶 法測(cè)定。
[0121] 2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0122] 2. 1對(duì)四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護(hù)作用：四氯化碳引起的SGPT、SG0T顯著 升高P < 0. 01，說明造型成功。本發(fā)明使SG0T顯著降低三個(gè)劑量組均P < 0. 05,本發(fā)明對(duì) SGPT無明顯影響。白云山消炎利膽片使SGPT、SG0T顯著降低（P-~0. 05)。澤蘭10g/kg 組使肝體比顯著低于四氯化碳模型組。詳見表1。
[0123] 表1本發(fā)明對(duì)四氯化碳中毒小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的影響（X土S)
[0126] 注：組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，與四氯化碳組比*P < 0. 05, #P < 0. 01
[0127] 2. 2對(duì)正常大鼠膽汁流量的影響：本發(fā)明2. 5g/kg組使正常大鼠膽汁流量增加， 持續(xù)2h，以給藥后的30min增加最顯著< 0. 05)。5. Og/kg組給藥2h各時(shí)相都顯著增加 < 0. 05. 10.0 g/kg組給藥后90min內(nèi)各時(shí)相都比對(duì)照組顯著升高（P < 0. 01，P < 0. 05)。 陽(yáng)性藥熊去氧膽酸也使流量增加，持續(xù)lh。P < 0. 05詳見表2。
[0128] 表2本發(fā)明對(duì)麻醉大鼠膽汁流量的影響（X土S)
[0129]
[0130] 注t以給藥前流量為100%，組問進(jìn)行t檢驗(yàn)，與對(duì)照組比*P < 0. 05, #P < 0. 01. 本發(fā)明給藥前、給藥后涓定膽汁中膽紅素和膽同醇含量與對(duì)照組相比未見顯著差異。詳見 表3〇
[0131] 表3本發(fā)明對(duì)大鼠膽汁中膽固醇、膽紅素排出量的影響（X土S)

[0134]討論：
[0135] 生大黃瀉下力強(qiáng)，故欲攻下者宜生用，入湯劑應(yīng)后下，或用開水泡服；久煎則瀉下 力減弱。酒炙大黃瀉下力較弱，活血作用好，易于瘀血證治療。大黃炭則多用于止血。肝膽 疾病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病多發(fā)病，目前無特效藥物促進(jìn)肝細(xì)胞再生和防止肝細(xì)胞 壞死。我們的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明本發(fā)明有良好抗實(shí)驗(yàn)性肝硬變作用。本實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明對(duì)CCL4 引起的急性肝損傷有明顯的保護(hù)作用，有使SG0T顯著降低作用。血清轉(zhuǎn)氨酶升高主要反映 肝細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞膜通透性升高，使肝細(xì)胞內(nèi)GPT、GOT釋放入血所致。有文獻(xiàn)報(bào)道由 CCL4中毒引起的動(dòng)物SGPT、SG0T升高與肝細(xì)胞損傷程度呈粗略平行關(guān)系。本發(fā)明有選擇 性地降低SG0T作用，大劑量使肝臟指數(shù)減少，也說明本藥有較好的保肝作用。
[0136] 大黃在增加膽汁分泌的同時(shí)，還可降低狗總管奧狄氏括約肌張力。給狗以2m 1/k g體重行十二指腸灌注竺。20%的大黃煎劑1小時(shí)后觀察對(duì)肝膽汁流出量及對(duì)奧狄氏括約 肌灌流量的影響，結(jié)果表明：大黃能利膽.增加膽汁流量；促進(jìn)排膽松馳奧狄氏括約?。淮?進(jìn)膽內(nèi)容物（包括郁結(jié)的膽汁沉積的膽泥，甚則小的結(jié)石）的排出，進(jìn)而降低膽道內(nèi)壓力， 緩解膽絞痛。
[0137] 自2012年3月至2015年6月，筆者采用自擬清肝利濕降脂湯治療脂肪肝60例， 取得顯著療效，臨床資料本組60例中為體檢發(fā)現(xiàn)者和同行單位的門診患者，年齡40~50 歲，平均44歲；均為男性，療程1~6年不等。兩組資料經(jīng)R idit檢驗(yàn)，年齡、病程等方面 均無顯著差異性。具有可比性。診斷依據(jù)臨床表現(xiàn)和影像學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢查，均符合脂肪肝 特征。按就診順序隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各30例。診斷標(biāo)準(zhǔn)：國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)肝 病重點(diǎn)?？茖懽鹘M主編《中醫(yī)肝病診療常規(guī)》2005年10月第1版。
[0138] 治療方法
[0139] 治療組：本發(fā)明口服液，方藥組成大黃30g，茵陳12g，茯苓llg，夏枯草llg，梔子 llg，白芍12g，淡竹葉12g，玉米須12g，白鮮皮llg，虎杖llg，連翹1