述
【發(fā)明內(nèi)容】
對實施方案進行非本質(zhì)的改進 和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0042] 實施例一緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑組合物1
[0043] 緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑組合物，包括中藥和益生菌，按重量份 計具體由以下組分組成：
[0044] 黃精35份；
[0045] 玉竹10份；
[0046] 決明子20份；
[0047] 其中每克組合物中混合有IO9CFU的益生菌。
[0048] 實施例二緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑組合物2
[0049] 緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑配方，包括中藥組合物和益生菌，按重 量份計具體由以下組分組成：
[0050] 黃精60份；
[0051] 玉竹9份；
[0052] 決明子25份；
[0053] 其中每克組合物中混合有IO9CFU的益生菌。
[0054] 實施例三益生菌中藥制劑的制備
[0055] 實驗菌株：植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌和青春雙岐桿 菌。
[0056] 培養(yǎng)基：
[0057] MRS固體培養(yǎng)基配方為：葡萄糖2. 0%、檸檬酸銨0. 2%、乙酸鈉0. 5%、磷酸氫二 鉀0. 5%、硫酸錳0. 02%、硫酸鎂0. 05%、蛋白胨1. 0%、牛肉膏1. 0%、酵母膏0. 5%、土 溫-800. 1%，1. 5%瓊脂粉（進口），調(diào)pH6. 0。液體培養(yǎng)基為不含瓊脂的固體培養(yǎng)基配方。
[0058]TPY固體培養(yǎng)基配方為：酪蛋白胨1%、大豆蛋白胨0. 5%、酵母粉0. 25%、磷酸氫 二鉀0? 2%、MgCl2?6H20 0? 05%、氯化鈣0? 015%、ZnS04?7H20 0? 025%、氯化鐵0? 01%、 L-半胱氨酸鹽酸鹽0. 005%、葡萄糖1. 5%、吐溫-80ImL(1000 mL加ImL)，1. 5%瓊脂粉（進 口），調(diào)節(jié)pH至6.3-6. 6,115°C條件下滅菌20min。液體培養(yǎng)基為不含瓊脂的固體培養(yǎng)基配 方。
[0059] 將植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和嗜酸乳桿菌分別接入MRS固體斜 面培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)24h ;接著轉(zhuǎn)接到MRS液體培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)24h，制得一級種子液； 然后再以5%的接種量轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基進行高密度培養(yǎng)，發(fā)酵條件為3r C間歇震蕩72h。
[0060] 將青春雙歧桿菌接入TPY固體斜面培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h ;接著轉(zhuǎn)接到TPY液 體培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)24h，制得一級種子液；然后再以5%的接種量轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng) 基進行高密度培養(yǎng)，發(fā)酵條件為37°C靜置72h。
[0061] 待發(fā)酵液中菌體密度達到109cfu/mL，收集發(fā)酵液。離心收集獲得菌體，加入由 10%脫脂奶粉91 %，蔗糖8 %，丙三醇1 %構(gòu)成的保護劑，凍干成菌粉。最后按照植物乳桿 菌：鼠李糖乳桿菌：羅伊氏乳桿菌：嗜酸乳桿菌：青春雙岐桿菌=2 :1 :1 :1 :1的比例復(fù)配 凍干菌粉。
[0062] 取實施例1重量份的中藥經(jīng)切段，氣流粉碎，得超微粉，粉碎后粒徑最大不超過 50um，將其混合得中藥混合物。
[0063] 在上述復(fù)配凍干菌粉，加入所述中藥混合物中，充分混合即得益生菌中藥制劑產(chǎn) 品，益生菌中藥制劑成品中5株菌菌落總數(shù)不少于6X 109cfu/g。
[0064] 實施例四動物實驗驗證
[0065] 小鼠模型的構(gòu)建：
[0066] 材料：甲狀腺素、利血平、阿拉伯樹膠、活性炭。甲狀腺素可加速機體代謝；利血平 可耗竭機體內(nèi)的去甲腎上腺素，降低交感-腎上腺素能神經(jīng)的功能，使副交感神經(jīng)功能亢 進；兩者并用可加速機體陰虛。
[0067] 采用每日灌胃給予小鼠甲狀腺素3mg和利血平0? 02mg各1次，連續(xù)7d，結(jié)果模型 小鼠表現(xiàn)出體重下降、心率增快、躁動不安、唇舌暗紫、糞便干結(jié)，量少，即造模成功。
[0068] 檢測指標(biāo)：
[0069] 小鼠飲水量、飲食量及體重的變化：詳細記錄每天每組小鼠的飲食量和飲水量，小 鼠的初始體重和終體重。
[0070] 小鼠首粒排黑便時間、排便粒數(shù)：空白組和模型組小鼠給予墨汁，每組灌胃相同劑 量的墨汁（〇. 4ml/只），同時開始計時每只小鼠單獨飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，觀察記錄每只小 鼠首次排黑便所需時間、5h內(nèi)排便粒數(shù)和重量。
[0071] 觀察結(jié)束后糞便在100°C下干燥至恒重，計算糞便含水量：陰虛模型組的小鼠與 對照組小鼠相比，體重和采食量和飲水量都顯著低于對照組，小鼠狀態(tài)萎靡，排便粒數(shù)和排 便時間也顯著長于對照組，小鼠糞便含水量測定發(fā)現(xiàn)，模型組的糞便含水量顯著低于對照 組，造模比較成功。
[0072] 小鼠模型的治療：
[0073] 試驗小鼠：
[0074] 對照組（空白組）：正常注射生理鹽水。
[0075] 陽性組：便可通中成藥。
[0076] 配方組（ZY1組）：菌+中藥（高劑量），黃精+玉竹+決明子（5:3:2)。
[0077] 結(jié)果分析：
[0078] 小鼠排便粒數(shù)、排便時間以及糞便含水量結(jié)果
[0079]
[0080] 小鼠腸道菌群計數(shù)結(jié)果
[0081]
[0083] 由以上兩個表中實驗數(shù)據(jù)和圖1，2,3,4中可以看出，配方組治療效果與陽性組的 效果相比，小腸推進率及糞便含水量略高，更能夠有效修復(fù)陰虛所導(dǎo)致的便秘，同時能促進 小腸的蠕動，維護腸道菌群的健康。
[0084] 實施例五益生菌中藥制劑的應(yīng)用
[0085] 為驗證本發(fā)明的益生菌中藥制劑在緩解老年人陰虛型便秘的功效，符合入選標(biāo)準(zhǔn) 的100例陰虛型便秘患者，入選人群為50-85歲之間，知情同意自愿參加本試驗并簽署知情 同意書，其中男性45例，女性55例，病程6-48個月，平均18. 2個月，達到顯著治愈效果94 例、有效5例、效果不太明顯1例。治愈率99%，顯效94%，無效1%。
[0086] 最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較 佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技 術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本 發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項】
1. 緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑組合物，其特征在于， 包括中藥和益生菌，按重量份計具體由以下組分組成： 黃精30-70份； 玉竹1-15份； 決明子10-25份； 所述益生菌為植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、青春雙岐桿菌 中的任一種或多種。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌中藥制劑組合物，其特征在于，包括中藥和益生菌，按 重量份計具體由以下組分組成： 黃精40-50份； 玉竹5-10份； 決明子15-25份； 所述益生菌為植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、青春雙岐桿菌 中的任一種或多種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌中藥制劑組合物，其特征在于，每克所述組合物中含 有8-109CFU的益生菌。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌中藥制劑組合物，其特征在于，所述嗜酸乳桿菌 BLCC2-0024 保藏編號為 CCTCC M 2015129。5. 基于權(quán)利要求1-4所述的益生菌中藥制劑組合物制備益生菌中藥制劑的方法，其特 征在于，包括以下步驟： 1) 制備凍干菌粉： a將所述益生菌的各菌種經(jīng)培養(yǎng)活化，一級種子培養(yǎng)，制得一級種子液，再進行發(fā)酵培 養(yǎng)，得發(fā)酵液； b將步驟a所述發(fā)酵液離心，收集菌體，加入保護劑凍干，得各菌種凍干菌粉； 2) 取上述重量份的中藥經(jīng)切段，粉碎，混合得中藥混合物，粉碎后粒徑< 50um ; 3) 將步驟1)所述的各菌種凍干菌粉混合，加入步驟2)所述中藥混合物中，充分混合得 益生菌中藥制劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1)所述轉(zhuǎn)接到一級種子培養(yǎng)基的接 種量為1-5% ;所述發(fā)酵液中的菌體密度彡109cfu/mL。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1)所述保護劑按重量份計具體由以 下組分組成：10%脫脂奶粉70-90份，蔗糖1-15份，丙三醇0. 1-5份。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3)所述各菌種凍干菌粉的重量比為： 植物乳桿菌：鼠李糖乳桿菌：羅伊氏乳桿菌：嗜酸乳桿菌：青春雙岐桿菌=2-5 :1-3 :1-2 : 1_3 :1_2 〇9. 權(quán)利要求5所述的方法制備的緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑產(chǎn)品，其特 征在于，包括粉劑和/或片劑和/或膠囊。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的益生菌中藥制劑產(chǎn)品中益生菌菌落總數(shù)彡6X 10 9cfu/g。
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種緩解老年人陰虛型便秘的益生菌中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的益生菌中藥制劑組合物包括中藥和益生菌，按重量份計由以下組分組成：黃精30-70份，玉竹1-15份，決明子10-25份，所述益生菌為植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、青春雙岐桿菌中的一種或多種，其中每克組合物中混合有108-109CFU的益生菌；制備益生菌中藥制劑的方法操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)；本發(fā)明的益生菌中藥制劑具有緩解老年人陰虛型便秘的作用，同時還可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，提高抵抗力；且安全，保存期長，制劑產(chǎn)品可制成粉劑，片劑，膠囊等。CCTCC NO: M 201512920150318
【IPC分類】A61K36/8969, A61K35/745, A61K35/747, A61P1/10
【公開號】CN105079450
【申請?zhí)枴緾N201510477603
【發(fā)明人】單寶龍, 王靜, 任寶濤, 李鳳娟, 楊婷婷, 侯曉瑞, 孫海馨, 田兆才
【申請人】山東鳳凰生物有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月6日