甘薯提取物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種甘薯提取物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，癌癥是導(dǎo)致人類死亡的主要疾病之一，世界衛(wèi)生組織發(fā)布的最新數(shù)據(jù)顯示， 預(yù)計(jì)全球80-100目癌癥發(fā)病率將從2012年的1400萬急劇上升到2032年的2200萬。而在 同一期間，癌癥死亡人數(shù)也將由每年820萬人升高到每年1300萬人。而我國的癌癥在2012 年的發(fā)病個(gè)案幾乎占了全球一半，高居第一位。傳統(tǒng)的癌癥治療方法（如放療和化療）在 一定程度上可有效殺傷癌細(xì)胞，但是也會(huì)損傷及破壞正常細(xì)胞。與傳統(tǒng)的癌癥治療相比，天 然抗癌活性成分的優(yōu)點(diǎn)就在于高活性、以及無或低不良反應(yīng)。
[0003] 甘薯（Ipomoea batatas)是旋花科甘薯屬的一個(gè)重要栽培品種，原產(chǎn)于南美洲，由 于其高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)并具有抗干旱、耐瘠薄、適應(yīng)性強(qiáng)、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，在我國被大量種植，年產(chǎn) 量約0. 8億噸，僅次于水稻、小麥和玉米，占世界甘薯總產(chǎn)量的80%以上。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，甘 薯不僅營養(yǎng)豐富，同時(shí)具有很高的藥用價(jià)值。已有研究報(bào)道指出，從海藻、菠菜和靈芝孢子 中分離出的活性物質(zhì)對(duì)乳腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺腺癌和胃癌細(xì)胞等均有一定的抑制作 用。然而，有關(guān)甘薯抗癌提取物的研究還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種甘薯提取物及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明所提供的甘薯提取物是按照包括下述步驟的方法制備得到的：
[0006] 1)原料預(yù)處理：將收獲的新鮮甘薯洗凈、浙干、切片、干燥后粉碎，得甘薯粉；
[0007] 2)甘薯粗提物的提?。阂月确潞图状嫉幕旌先芤簽樘崛?duì)所述甘薯粉進(jìn)行提 取，收集提取液，并除去所述提取液中的提取劑得到甘薯粗提物；
[0008] 3)甘薯粗提物的初步分離：對(duì)步驟2)中所制得的甘薯粗提物進(jìn)行固相萃取分離， 得到初步純化的甘薯粗提物；
[0009] 所述固相萃取分離的步驟為：將所述甘薯粗提物加入固相萃取柱中，依次以氯仿 和丙酮為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集丙酮洗脫組分，并除去其中所含的溶劑，得到所述初步純化 的甘薯粗提物；
[0010] 4)甘薯提取物的制備：將步驟3)中所制得的初步純化的甘薯粗提物溶于甲醇中， 得到甲醇溶液，將所述甲醇溶液通過以大孔吸附樹脂為吸附劑的層析柱進(jìn)行吸附層析，得 到甘薯提取物；
[0011] 所述吸附層析中依次采用水、體積分?jǐn)?shù)為20% -40%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為 50% -60%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為70% -80%的乙醇溶液對(duì)層析柱進(jìn)行洗脫，收集體積分 數(shù)為70% -80%的乙醇溶液的洗脫組分，并除去其中所含的溶劑，得到所述甘薯提取物。
[0012] 其中，上述方法步驟1)中，所述新鮮甘薯可為任一甘薯品種，優(yōu)選徐薯18。
[0013] 步驟1)中，所述干燥的方式具體可為熱風(fēng)干燥或冷凍干燥，優(yōu)選冷凍干燥。
[0014] 所述冷凍干燥在真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行。所述冷凍干燥的條件如下：真空度為 50-1OOPa，溫度為-60--70°C，時(shí)間為36-60小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)。
[0015] 所述冷凍干燥前還包括在_20°C--40°C冰箱里預(yù)凍24h-36h的步驟。
[0016] 所述粉碎是在萬能粉碎機(jī)中進(jìn)行的，粉碎后所得甘薯粉的粒徑為80-100目。
[0017] 上述方法步驟2)中，所述提取劑中氯仿和甲醇的體積比可為具體可為 1:1、2:1 或 3:1。
[0018] 所述提取的方法具體可為浸提法。
[0019] 所述浸提至少進(jìn)行一次，具體可進(jìn)行2-5次，優(yōu)選進(jìn)行3次。每次浸提的溫度 為-4一-20°C，時(shí)間為12-48小時(shí)，優(yōu)選24小時(shí)。每次浸提時(shí)，所述甘薯粉與提取劑的配比 為 lg: (2_5)mL，具體可為 lg:2mL、lg:3mL 或 lg:5mL。
[0020] 當(dāng)所述浸提進(jìn)行兩次或兩次以上時(shí)，所述步驟2)中還包括合并提取液的步驟。
[0021] 步驟2)中所述提取液中所含的提取劑可通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方法去除，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的 條件為：溫度為35-40°C，轉(zhuǎn)速為50-70rpm，真空度為0. 05-0. 09MPa。。
[0022] 上述方法步驟3)中，所述固相萃取分離之前，還包括：將所述甘薯粗提物溶于氯 仿和甲醇混合液中，制備甘薯粗提物溶液的步驟。所述氯仿和甲醇混合液中，氯仿和甲醇的 體積比為具體可為或3:1 ;所述甘薯粗提物與氯仿和甲醇混合液的配比 可為 lg: (l_3)mL。
[0023] 所述固相萃取柱具體可為反相萃取柱、鍵合柱或硅膠柱，優(yōu)選硅膠柱；所述固相萃 取柱的規(guī)格為：（3-5)mg/20mL。
[0024] 步驟3)中每種洗脫劑的用量均為3-5倍柱體積，優(yōu)選3倍柱體積。
[0025] 上述方法步驟4)中，所述甲醇溶液中初步純化的甘薯粗提物與甲醇的配比為Ig: 10mL。所述大孔樹脂的型號(hào)可為D4020、D101和HP-20,優(yōu)選D4020。
[0026] 所述大孔樹脂在使用前需進(jìn)行活化，具體活化步驟如下：稱取大孔樹脂，用體積 分?jǐn)?shù)為95 %乙醇溶液浸泡24-48h，蒸餾水反復(fù)清洗至無醇味，加入2mol/L NaOH溶液浸泡 4_6h，用蒸餾水洗至中性，加入2mol/L HCl溶液浸泡4-6h，用蒸餾水洗至中性，抽濾去除水 分，即得；
[0027] 其中，所述大孔樹脂與體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液、2mol/L NaOH溶液和2mol/ LHCl溶液的配比為分別為Ig: (5-10)mL。
[0028] 步驟4)中，所述吸附層析中，所述水的用量為所述層析柱柱體積的2-5倍，具體可 為5倍或4倍柱體積。
[0029] 所述體積分?jǐn)?shù)為20 % -40 %的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為50 % -60 %的乙醇溶液和體 積分?jǐn)?shù)為70% -80%的乙醇溶液的用量均為所述層析柱柱體積的3-5倍，具體可為4倍或 5倍柱體積。
[0030] 所述吸附層析的洗脫條件可具體選自下述任意一種：
[0031] 1)依次采用水、體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液、體積 分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液對(duì)層析柱進(jìn)行洗脫，收集體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液的洗脫組分；
[0032] 2)依次采用水、體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液、體積 分?jǐn)?shù)為80 %的乙醇溶液對(duì)層析柱進(jìn)行洗脫，收集體積分?jǐn)?shù)為80 %的乙醇溶液的洗脫組分；
[0033] 3)依次采用水、體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液、體積 分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液對(duì)層析柱進(jìn)行洗脫，收集體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液的洗脫組分。
[0034] 所述洗脫的流速為0. 5-2. OmL/min，具體可為1.0 mL/min或2. OmL/min。
[0035] 步驟4)中，所述吸附層析中上樣的方式具體采用干法上樣。
[0036] 具體方法如下：將所述甲醇溶液加入到活化的大孔吸附樹脂中，減壓濃縮至干，使 所述初步純化的甘薯粗提物完全吸附于大孔吸附樹脂上，得到樣品大孔吸附樹脂混合物； 然后將所述樣品大孔吸附樹脂混合物加于大孔吸附樹脂層析柱上層，完成上樣操作。
[0037] 上述方法中，所述甲醇溶液與活化的大孔吸附樹脂的配比為（10-20)mL:lg; 所述大孔吸附樹脂層析柱的規(guī)格（內(nèi)徑X長度）為：（15-35) X (300-500)mm，具體為 15X400mm、20X500mm、30X500mm。所述大孔吸附樹脂層析柱中空白大孔吸附樹脂（即未 與樣品混合的大孔吸附樹脂）與樣品大孔吸附樹脂混合物的體積比可為3 :1-5 :1，優(yōu)選5 : 1〇
[0038] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供所述甘薯提取物的應(yīng)用。
[0039] 本發(fā)明所提供的甘薯提取物的應(yīng)用是其在下述方面的應(yīng)用：
[0040] 1)制備真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用；2)制備真核生物腫瘤細(xì)胞粘附 抑制劑中的應(yīng)用；3)制備真核生物腫瘤細(xì)胞遷移抑制劑中的應(yīng)用；4)在制備預(yù)防和/或治 療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0041] 所述真核生物為哺乳動(dòng)物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞；所述癌細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞或 結(jié)腸癌細(xì)胞；所述乳腺癌細(xì)胞具體為人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37,所述結(jié)腸癌細(xì)胞具體為人結(jié) 腸癌細(xì)胞HT-29。
[0042] 所述腫瘤為癌；所述癌為乳腺癌或結(jié)腸癌。
[0043] 以本發(fā)明提供的甘薯提取物為活性成分制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物或真核 生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑或真核生物腫瘤細(xì)胞粘附抑制劑或真核生物腫瘤細(xì)胞遷移抑制 劑也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0044] 所述預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或 化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹 后導(dǎo)入機(jī)體。
[0045] 需要的時(shí)候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載 體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面 活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0046] 以甘薯提取物為活性成分制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可以制成注射液、片 劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥 學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
[0047] 本發(fā)明提供的甘薯提取物及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0048] (1)該方法操作簡(jiǎn)