上打孔，將 孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合；再加入不同濃度 不同的藥液并標(biāo)記，樣品加至滿而不溢為止3每組做3個(gè)平行試驗(yàn)，另外做3組對(duì)照，在 一個(gè)平板中加入無菌蒸餾水作為空白對(duì)照。
[0034] 1. 2. 5最小抑菌濃度（MIC)的測(cè)定： 選擇較小藥物濃度，并且對(duì)比前后2倍稀釋濃度的藥物抑菌圈大小，肉眼觀察是否 有細(xì)菌生長，以不出現(xiàn)肉眼可見生長的最低藥物濃度為該藥對(duì)沙門氏菌的最小抑菌濃度 (MIC)。在MIC測(cè)定的基礎(chǔ)上，繼續(xù)培養(yǎng)24h，以完全無菌生長的最低藥物濃度為最小殺 菌濃度（MBC) 2結(jié)果與分析： 2. 1不同濃度提取物的抑菌效果： 以沙門氏菌為試驗(yàn)細(xì)菌，以3種復(fù)方中藥精油及單方對(duì)照為供試藥劑，測(cè)定不同藥物 的抑菌活性與效果，沙門氏菌中藥藥敏試驗(yàn)抑菌結(jié)果如表1所示。
[0035] 表 1
由表1可知，從的抑菌作用是第2個(gè)中藥復(fù)方效果最好，其次復(fù)方3和復(fù)方1，復(fù)方的 抑菌作用均強(qiáng)于單方。
[0036] 3 結(jié)論： 試驗(yàn)結(jié)果表明，3種復(fù)方及3個(gè)對(duì)照藥物均對(duì)鴿沙門氏菌有抑制作用，且復(fù)方2抑菌 作用最好，其次是復(fù)方3,表明復(fù)方精油在較低的濃度下就能抑制和殺死供試細(xì)菌，顯示 了較好的抑菌和殺菌活性。
[0037] 實(shí)施例3 : 鴿沙門氏菌病病原特性的研究： 鴿沙門氏菌病又名鴿副傷寒、翅麻痹、腿麻痹和眩暈病。國外科技工作者對(duì)本病及其病 原特性已進(jìn)行過不少研究工作。概括如下：（1)沙門氏菌可導(dǎo)致幼鴿下痢、關(guān)節(jié)炎和運(yùn)動(dòng)神 經(jīng)障礙。（2)病原菌的血清型絕大多數(shù)為鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種。這個(gè)變種與典型 的鼠傷寒沙門氏菌略有不同，它缺少菌體抗原，該菌極少能感染人類。是副傷寒型特異性 感染鴿的唯一例子。（3)多侵犯1歲以下的幼鴿，感染率通常為10-25%，耐過的成鴿常成 為帶菌者，從糞便中持續(xù)排菌。（4)本病病原在自然界中廣泛分布，主要通過蛋及消化道 傳染。蛋的傳染包括由帶菌鴿所產(chǎn)的帶菌蛋和本菌污染蛋殼后侵入蛋內(nèi)而引起。消化道感 染主要是食進(jìn)受病原菌污染的飼料和飲水所致，也可通過接吻以及親鴿哺喂鴿乳而發(fā)生。
[0038] 為探討防治鴿的沙門氏菌的感染的臨床效果，申請(qǐng)人先后在甘肅4個(gè)不同類型的 鴿場(chǎng)進(jìn)行了防治試驗(yàn)和研究，結(jié)果如下。
[0039] 材料與方法 一、米樣： 在蘭州市郊、河西地區(qū)的4個(gè)大、中、小型鴿場(chǎng)的鴿群中，選取拉黃綠色或灰白色稀糞、 翅關(guān)節(jié)和腿關(guān)節(jié)麻痹或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)障礙的病鴿或死鴿，以無菌操作采取心、肝和腫脹關(guān)節(jié)的 內(nèi)容物作病料，或用經(jīng)滅菌的棉簽擦拭直腸粘膜取樣。
[0040] 二、病原菌分離： 取上述病料和直腸拭子樣本作細(xì)菌培養(yǎng)后，進(jìn)行形態(tài)特征、培養(yǎng)特性和生化特性檢 查。
[0041] 三、菌株的分型鑒定： 經(jīng)上述檢查后，定為沙門氏菌屬者，再用沙門氏菌因子血清作玻片凝集反應(yīng)，結(jié)合生 化反應(yīng)特點(diǎn)最后定型。
[0042] 四、對(duì)鴿和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的人工感染試驗(yàn)： 實(shí)驗(yàn)1 :取分離的鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種菌株P(guān)3。制備感染液各自接種健康肉 用幼鴿。觀察14天，若發(fā)生死亡，除進(jìn)行剖檢觀察病變外，還采取心血和肝組織分離細(xì) 菌并鑒定其是否為接種的沙門氏菌，并用3個(gè)復(fù)方3個(gè)單方進(jìn)行預(yù)防(每公斤飼料添加100g 所制備的樣品)。
[0043] 實(shí)驗(yàn)2 :不同血清型的沙門氏菌菌株對(duì)幼鴿致病試驗(yàn)。取分離的鼠傷寒沙門氏菌 哥本哈根變種菌株平P109,制備感染液各自接種健康肉用幼鴿。觀察14天，若發(fā)生死亡， 除進(jìn)行剖檢觀察病變外，還采取心血和肝組織分離細(xì)菌并鑒定其是否為接種的沙門氏菌， 并用3個(gè)復(fù)方3個(gè)單方(每公斤飼料添加100g所制備的樣品)。
[0044] 實(shí)驗(yàn)3 :不同血清型的沙門氏菌菌株對(duì)幼鴿致病試驗(yàn)。取分離的鼠傷寒沙門氏菌 菌株P(guān)203,制備感染液各自接種健康肉用幼鴿。觀察14天，若發(fā)生死亡，除進(jìn)行剖檢觀 察病變外，還采取心血和肝組織分離細(xì)菌并鑒定其是否為接種的沙門氏菌，并用3個(gè)復(fù)方 3個(gè)單方(每公斤飼料添加100g所制備的樣品）。
[0045] 實(shí)驗(yàn)4 :不同血清型的沙門氏菌菌株對(duì)幼鴿致病試驗(yàn)。取分離的鼠傷寒沙門氏菌 菌株P(guān)206,制備感染液各自接種健康肉用幼鴿。觀察14天，若發(fā)生死亡，除進(jìn)行剖檢觀 察病變外，還采取心血和肝組織分離細(xì)菌并鑒定其是否為接種的沙門氏菌，并用3個(gè)復(fù)方 3個(gè)單方(每公斤飼料添加100g所制備的樣品）。
[0046] 試驗(yàn)結(jié)果： 1.從蘭州市郊、河西地區(qū)的4個(gè)大、中、小型鴿場(chǎng)的鴿群中分離出24個(gè)沙門氏菌菌株 中，有20個(gè)屬于鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種，占85%。
[0047] 2.I、BI::、I、驟組鴿在注射P3、Pl〇9、P2〇3和P2〇6。菌株的肉湯培養(yǎng)物后，各組 分別死亡見表1。對(duì)照組5只皆健康。
[0048] 感染組大部分在4-8天死亡，少數(shù)于24-48小時(shí)死亡，2只分別于感染后10和12 天死亡。感染后48小時(shí)內(nèi)死亡的鴿，口、鼻粘液增多，泄殖腔周圍的羽毛有綠色或灰白色 稀糞。剖檢可見心外膜血管擴(kuò)張充血，心冠溝有少最針頭大小出血點(diǎn)，肝臟呈不同程度郁 血、腫大、腸粘膜充血出血，直腸和泄殖腔處尤為嚴(yán)重，腸道內(nèi)含有較多量的黃綠或灰黃色 內(nèi)容物。在感染4天后死亡的鴿，剖檢有時(shí)可見心、肝、脾、腎和肺有數(shù)量不等的針尖至大 頭針大的灰白色病灶。病理組織學(xué)檢查，可見肝組織有多量單核樣細(xì)胞浸潤，在肝實(shí)質(zhì)細(xì) 胞中有許多局灶性壞死區(qū)，壞死區(qū)中肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完全消失，僅見多量的大小不勻的藍(lán)色 核碎肩。在肺組織中有灶性壞死，壞死灶中間成均質(zhì)紅染，周圍有多核巨細(xì)胞和單核樣細(xì) 胞分布，最外圍有纖維細(xì)胞增生和多量淋巴細(xì)胞包裹。24個(gè)沙門氏菌菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果如 表2所示。
[0049] 表 2
結(jié)論： 1.從蘭州4個(gè)鴿場(chǎng)分離出的24個(gè)沙門氏菌菌株中，有20個(gè)屬于鼠傷寒沙門氏菌哥 本哈根變種，占84% ;4個(gè)為鼠傷寒沙門氏菌，占15%。這與前人所報(bào)道的鴿副傷寒的病原 絕大多數(shù)為鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種的結(jié)論是一致的。
[0050] 2.分離到的鼠傷寒沙門氏菌哥本哈根變種菌菌株和鼠傷寒沙門氏菌菌株均對(duì)該 發(fā)明的復(fù)方及單方制劑敏感，因此，在疫場(chǎng)用藥時(shí)可供參考。
[0051] 3.發(fā)病鴿群中外表健康鴿的直腸拭子可分離出本菌，這與資料中報(bào)道的患過此 病的鴿?？沙蔀閹Ь卟⒃诩S便中間歇排菌的情況是一致的。
[0052] 本試驗(yàn)選取3種復(fù)方精油中藥與3種對(duì)照，進(jìn)行了對(duì)沙門氏菌的抑菌活性研究對(duì) 鴿子養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)，預(yù)防治療和有效控制致病菌的相互傳染有積極指導(dǎo)作用，為今后進(jìn)一 步研究提供寶貴的資料。
[0053] 最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油，其特征在于，是由按照重量份計(jì)的 以下原料制備得到的：青蒿油5-50份、苦豆子油2-20份、百里香酚5-50份、腐殖酸2000份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油，其特征在 于，是由按照重量份計(jì)的以下原料制備得到的：青蒿油25份、苦豆子油16份、百里香酚25 份、腐殖酸2000份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油的制備方 法，其特征在于，按照重量配比稱取青蒿油、苦豆子油和百里香酚，加入50ml乙醇，在室溫 下加入至配比量的腐殖酸中，振蕩18h，減壓蒸出乙醇后，40°C干燥即可。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油在制備預(yù) 防肉鴿腹瀉的飼料中的應(yīng)用。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，每公斤肉鴿飼料中添加100g所述的用于 預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于預(yù)防肉鴿腹瀉的飼料添加劑復(fù)方精油，是由按照重量份計(jì)的以下原料制備得到的：青蒿油5-50份、苦豆子油2-20份、百里香酚5-50份、腐殖酸2000份；并提供了其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明是針對(duì)在肉鴿飼養(yǎng)過程中使用抗生素的鴿場(chǎng)的用戶日益下降的局面，抗生素曾經(jīng)為鴿場(chǎng)解決眾多的疾病問題，同時(shí)產(chǎn)生了對(duì)抗生素產(chǎn)品的耐藥性和藥物殘留等問題的情況下，根據(jù)中藥配方規(guī)律，科學(xué)組方，通過腐殖酸吸附精油后，制備的穩(wěn)定新制劑，其組方合理，安全有效，原料易得，制備工藝簡(jiǎn)單，易于操作，且生產(chǎn)成本低。
【IPC分類】A61P31/04, A61K47/30, A23K1/16, A61K36/489, A23K1/18, A61K31/05, A61P1/12, A61P31/10
【公開號(hào)】CN105055504
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510488980
【發(fā)明人】梁劍平, 趙鳳舞, 陶蕾, 郝寶成, 王學(xué)紅, 郭文柱, 楊珍, 賈忠, 尚若鋒, 劉宇, 郭志廷
【申請(qǐng)人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年8月11日