用于刺激骨生長(zhǎng)的組合物的制作方法
【專利說明】
[0001]本發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及組合物在維持骨和/或軟骨健康或者預(yù)防、緩解和/或治療骨和/或軟骨病癥中的應(yīng)用。
[0003]發(fā)明背景
[0004]骨量在整個(gè)生命期間都在發(fā)展，并且受到遺傳、機(jī)械和激素機(jī)制的調(diào)節(jié)。骨礦物質(zhì)獲取發(fā)生在兒童期間且在20歲左右達(dá)到骨量峰值。在此期間，骨形成超過骨吸收。在生命后期且特別是在絕經(jīng)前后或在老年人群中，骨量和骨質(zhì)量由于具有過度骨吸收的較高的骨轉(zhuǎn)換而受損，導(dǎo)致骨量、微結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度逐步損失。
[0005]為了維持骨，重要的是恢復(fù)骨形成與骨吸收之間的平衡。這種骨重建過程在牽涉骨形成細(xì)胞(成骨細(xì)胞)與骨吸收細(xì)胞(破骨細(xì)胞)之間的緊密相互作用的骨細(xì)胞水平上進(jìn)行調(diào)節(jié)。
[0006]在健康成年人男性或動(dòng)物中，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的聯(lián)合作用使得能夠隨時(shí)間推移維持骨量，同時(shí)確保通過骨的吸收和從頭合成來重建骨組織。
[0007]在健康成年人中，破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的形成速率使得在骨形成與骨吸收之間取得平衡。然而，在骨質(zhì)疏松個(gè)體中，產(chǎn)生了骨重建過程的失衡，這在骨丟失以比骨形成速率更快的速率進(jìn)行時(shí)達(dá)到高峰。盡管大多數(shù)個(gè)體在他們變老時(shí)存在一定程度的這種失衡，但是這種失衡在骨質(zhì)疏松個(gè)體中嚴(yán)重得多并且在較年輕時(shí)發(fā)生。
[0008]因此，在男性和其它哺乳動(dòng)物中，很多種病癥涉及骨吸收和骨形成的異常代謝，導(dǎo)致代謝或骨重建失衡。
[0009]此外，在男性和動(dòng)物中，存在很多種以需要增加骨形成為特征的病癥。例如，在骨折情況中，必須刺激骨生長(zhǎng)以加速骨的完全修復(fù)。這種需求也存在于牙周疾病、骨的轉(zhuǎn)移性疾病、溶骨性疾病和需要結(jié)締組織修復(fù)的病癥，例如用于愈合或再生軟骨缺損或創(chuàng)傷。在原發(fā)性和繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)中以及在糖尿病相關(guān)性骨質(zhì)疏松癥和糖皮質(zhì)激素相關(guān)性骨質(zhì)疏松癥的情況中也需要刺激骨生長(zhǎng)。
[0010]盡管當(dāng)今存在大量用于刺激骨形成和/或抑制骨吸收的活性化合物，但是仍然持續(xù)地需要新的活性化合物，特別是因?yàn)楝F(xiàn)有治療的成功有限。
[0011]另一種關(guān)節(jié)病癥是骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthrtis)，它是老年群體的首要致殘?jiān)颉Ｄ壳?，不存在用于骨關(guān)節(jié)炎的治愈手段，并且療法僅僅是旨在改善癥狀的緩解療法。
[0012]發(fā)曰月概沐
[0013]申請(qǐng)人已經(jīng)令人驚奇地證明:維生素D與羥基酪醇和/或齊墩果苷(為來源于橄欖樹的多酚)的組合能夠協(xié)同發(fā)揮作用以刺激骨形成和/或軟骨合成代謝。通過刺激成骨細(xì)胞分化和活動(dòng)和膠原蛋白合成，該組合能夠刺激骨形成和軟骨合成代謝。維生素D與齊墩果苷或羥基酪醇中一者或兩者的組合的添加導(dǎo)致刺激成骨細(xì)胞，使得其在強(qiáng)度上增強(qiáng)和在時(shí)間上向前(即，引起刺激比各組分自身引起的刺激早)。在本申請(qǐng)的上下文中，添加維生素D的作用被稱為“增強(qiáng)”多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的作用。
[0014]因此，在第一方面，本發(fā)明涉及用于增強(qiáng)一種或多種多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的作用的包含維生素D的組合物。
[0015]在另一方面，本發(fā)明涉及包含維生素D和一種或多種多酚的組合物，其用于增強(qiáng)所述多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的刺激。
[0016]在另一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的用于應(yīng)用的組合物，其包含維生素D和一種或多種多酚，每日施用至少I次，持續(xù)至少2個(gè)月、優(yōu)選至少3個(gè)月的時(shí)間期。
[0017]在另一方面，本發(fā)明涉及包含維生素D和一種或多種多酚的藥物組合物。
[0018]在另一方面，本發(fā)明涉及治療、緩解和/或預(yù)防骨和/或軟骨病癥的方法，該方法包括給需要其的個(gè)體施用有效量的維生素D與一種或多種多酚的組合。
[0019]附圖簡(jiǎn)沐
[0020]在所有附圖中，1，25 (OH) 2D3 = 10 9M I, 25 二羥基維生素D3 ；0LP = I μΜ齊墩果苷；HTy = I μΜ羥基酪醇；C+ =優(yōu)化培養(yǎng)基用作陽性對(duì)照；C-=最小培養(yǎng)基用作陰性對(duì)照。
[0021]數(shù)據(jù)表示為平均值土SEM(重復(fù)3次)。統(tǒng)計(jì)學(xué):克-瓦二氏(Kruskal Wallis)檢驗(yàn)，然后是曼-懷二氏(Mann Whitney) U 檢驗(yàn)(雙尾)，*ρ〈0.05 ;**ρ〈0.01 ;***ρ〈0.001，對(duì)比于陰性對(duì)照(C-)。
[0022]圖1顯示了響應(yīng)于1，25 (OH) 2D30LP和HTy組合的刺激的培養(yǎng)9天后的成骨細(xì)胞的膠原蛋白合成，通過相對(duì)于每毫克總蛋白質(zhì)而言的所產(chǎn)生的膠原蛋白的微克數(shù)測(cè)定。
[0023]圖2顯示了響應(yīng)于I，25 (OH) 2D3、OLP和HTy組合的培養(yǎng)9天后的堿性磷酸酶(ALP)活性，由微摩爾ALP/毫克蛋白質(zhì)/小時(shí)表示。
[0024]圖3顯示了在5、9、12或15天處理后在1，25 (OH) 2D3的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0025]圖4Α顯示了在5、9、12或15天處理后在齊墩果苷的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0026]圖4Β顯示了在5、9、12或15天處理后在1，25 (OH) 2D3和齊墩果苷的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0027]圖5Α顯示了在5、9、12或15天處理后在羥基酪醇的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0028]圖5Β顯示了在5、9、12或15天處理后在1，25 (OH) 2D3和羥基酪醇的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0029]圖6Α顯示了在5、9、12或15天處理后在齊墩果苷和羥基酪醇的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0030]圖6Β顯示了在5、9、12或15天處理后在1，25 (OH) 2D3、齊墩果苷和羥基酪醇的存在下培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(ALP)活性。
[0031]發(fā)明詳述
[0032]定義
[0033]在更詳細(xì)地討論本發(fā)明之前，首先定義如下術(shù)語和規(guī)定:
[0034]在本發(fā)明的上下文中，提及的百分比是重量/重量百分比，另有指示除外。
[0035]“X和/或Y”中所用的術(shù)語“和/或”應(yīng)解釋為“X”或“Y”或“X和Y”。
[0036]本文所用的數(shù)值范圍意欲包括該范圍內(nèi)的每一個(gè)數(shù)值和數(shù)值子集，無論是否特別公開。而且，這些數(shù)值范圍應(yīng)當(dāng)被視為給涉及該范圍中的任意數(shù)值或數(shù)值子集的權(quán)利要求提供了支持。例如，公開1-10應(yīng)被視為支持1-8、3-7、4-9、3.6-4.6、3.5-9.9的范圍，以此類推。
[0037]本發(fā)明對(duì)單數(shù)特征或限定的稱謂應(yīng)當(dāng)包括相應(yīng)的復(fù)數(shù)特征或限定，反之亦然，除非所述稱謂的上下文有相反的具體說明或清楚暗指。
[0038]除非另有定義，否則本文所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解相同的含義。
[0039]用于應(yīng)用的包含維生素D的組合物
[0040]之前已經(jīng)證明多酸對(duì)炎癥和骨代謝具有有益作用。
[0041]發(fā)明人已經(jīng)出人意料地證明:維生素D與一種或多種多酚如HT和OLP中的一種或多種的組合增強(qiáng)這些多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的刺激作用(參見實(shí)施例2及其討論和圖2) ο
[0042]〃刺激骨形成和/或軟骨合成代謝〃指維生素D、齊墩果苷和羥基酪醇的組合刺激成骨細(xì)胞活性且由此促進(jìn)骨和/或軟骨的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)合成的能力。這導(dǎo)致礦物質(zhì)、特別是鈣沉積在這些蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)中，即刺激骨礦化(也稱作骨形成)和刺激軟骨合成代謝。
[0043]“增強(qiáng)多酚的刺激作用”指一種或多種多酚的刺激作用在強(qiáng)度上增強(qiáng)和在時(shí)間上向前(即，引起刺激比沒有維生素D存在的情況早)。
[0044]因此，在第一方面，本發(fā)明涉及用于增強(qiáng)一種或多種多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的作用的包含維生素D的組合物。多酚可以例如是齊墩果苷和羥基酪醇中的一種或多種。
[0045]維生素D可以以任意適宜的形式存在。維生素D的各種有用形式是可獲得的，包括例如膽鈣化醇(D3)、麥角骨化醇(D2)及它們的生物活性代謝物和前體如l-α -羥基維生素D、25-羥基維生素D、I, 25- 二羥基維生素D等。
[0046]在本發(fā)明的該方面的一個(gè)實(shí)施方案中，維生素D可以與一種或多種多酚的提供同時(shí)提供或依次提供。維生素D可以與一種或多種多酚在同一組合物中提供，或者可以在單獨(dú)組合物中提供，例如在套件藥盒或一系列相互作用產(chǎn)品中提供。如果所述維生素D和所述一種或多種多酚存在于一種或多種單獨(dú)組合物中，則它們可以在施用前進(jìn)行混合或者可以同時(shí)或依次施用。
[0047]維生素D的增強(qiáng)作用在與單一多酚的組合中、例如在與齊墩果苷或羥基酪醇的組合中已經(jīng)是清楚的。
[0048]當(dāng)指定將維生素D與齊墩果苷和羥基酪醇二者組合時(shí)，這種增強(qiáng)作用甚至進(jìn)一步增加。
[0049]在另一方面，本發(fā)明涉及維生素D在制備用于增強(qiáng)一種或多種多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的作用的組合物或藥劑中的應(yīng)用。
[0050]用于應(yīng)用的組合物
[0051]在另一方面，本發(fā)明涉及包含維生素D和一種或多種多酚的組合物，其用于增強(qiáng)所述多酚對(duì)骨形成和/或軟骨合成代謝的刺激。
[0052]多酚可以例如是橄欖多酚，例如選自齊墩果苷、女貞甙(Iigstroside)、羥基酪醇和或酪醇的多酚。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，橄欖多酚包含齊墩果苷和羥基酪醇中的一種或多種，甚至更優(yōu)選多酚包含齊墩果苷和羥基酪醇。
[0053]本發(fā)明的組合物可以例如包含800-1200IU/單份量的量的維生素D。所述一種或多種多酸可以各自以0.0lmg至約lg、優(yōu)選0.1mg至lg、甚至更優(yōu)選Img至約Ig/單份量的量存在。
[0054]當(dāng)然，實(shí)現(xiàn)治療作用所需的本發(fā)明的組合物的有效量將隨特定的組合物、施用途經(jīng)、接受者的年齡和狀況以及待治療的具體病癥或疾病而不同。
[0055]作為示例，補(bǔ)充有維生素D、羥基酪醇和齊墩果苷的組合的RTD (即飲產(chǎn)品)將含有0.0lmg至500mg的各活性成分/單份量。
[0056]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含例如800-1200IU維生素D，例如800-1100、800-1000、850-1000、850-950、900-950，例如約 900 或約 950IU。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物除維生素D外還包含0.0lmg-1g的量