中較大的吸收峰有3409. 92cm1、1648. 13cm1、 1410.84011^1237.84011^1098.03011^875.06011 1,如實(shí)施例圖 1所示。3409.92cm1附 近出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰是由于糖類的O-H和蛋白質(zhì)N-H伸縮振動(dòng)引起的，存在分子內(nèi)氫鍵； 在3000-2800cm1之間存在小的吸收峰，是糖類C-H伸縮振動(dòng)（-CH2-)引起的吸收峰； 1648. 13cm1附近的吸收峰屬于酰胺I帶吸收峰；1410. 84cm1附近的吸收峰是由C-C-H或 H-C-O產(chǎn)生的，而在1237. 84cm1處的吸收峰也是由該基團(tuán)中的C-O產(chǎn)生的，1098. 03cm1附 近為糖醛酸的特征吸收峰；在875. 06cm1處的特征吸收峰，是P-D-吡喃糖C-H的變角振 動(dòng)所引起的，表明該組分含有P-D-吡喃葡萄糖環(huán)，分子以(6-糖苷鍵連接，650-450CH11處 出現(xiàn)吸收峰表明甜葉懸鉤子提取水溶性多糖中含有酰氨基，由紅外光譜圖可以推斷甜葉懸 鉤子提取水溶性多糖是P-D-吡喃環(huán)蛋白多糖。
[0020] 甜葉懸鉤子提取草酸鹽溶果膠類多糖中較大吸收峰有3422. 90cm\2933. 82cm\ 1743. 95cm\l630. 19cm\l441. 18cm\l328. 22cm\l235. 27cm\ll43. 57cm\ 1101.65011^1019.05011^919. 11011^829.50011^637. 11011^536. 19cm1，如實(shí)施例圖 2所 示。3422. 90cm1出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰是由于糖類的O-H和蛋白質(zhì)N-H伸縮振動(dòng)引起的，存在分 子內(nèi)氫鍵；2933. 82cm1處出現(xiàn)小的吸收峰，是糖類C-H伸縮振動(dòng)（-CH2-)引起的吸收峰； 1743. 95cm\ 1630. 19cm1是氨基酸的C= 0和N-H的變角振動(dòng)引起的強(qiáng)吸收峰，證明有 蛋白質(zhì)的存在；1441. 18011^1328. 22011^1235. 27cm1這幾組峰是糖類的O-H內(nèi)面彎曲振 動(dòng)、-CH2-的搖擺和扭曲振動(dòng)；1143. 57cm1UlOL65cm\ 1019. 05cm1附近的三個(gè)強(qiáng)吸收峰 說(shuō)明甜葉懸鉤子提取草酸鹽溶果膠類多糖為吡喃糖；916. 71cm\829. 50cm1附近的吸收峰 表明該多糖具有a-糖苷鍵；637.Ilcm\536. 19cm1處出現(xiàn)吸收峰，表明該多糖結(jié)構(gòu)中存在 酰氨基，由紅外光譜分析可推測(cè)甜葉懸鉤子提取草酸鹽溶果膠類多糖是含有a構(gòu)型吡喃 環(huán)的糖蛋白綴合物。
[0021] 甜葉懸鉤子提取堿溶性多糖中較大的吸收峰有3415. 47cm1、2930. 30cm1、 1648. 60cm\ 1405. 68cm\ 1042. 51cm\896. 23cmi、645. 26cm\ 如實(shí)施例圖 3所示。在 3415. 47cm1出現(xiàn)的吸收峰，是糖類分子內(nèi)或分子間O-H鍵的伸縮振動(dòng)，2930. 30cm1處出現(xiàn) 一個(gè)弱吸收峰，是糖類不對(duì)稱C-H的伸縮振動(dòng)，1648. 60cm1處的吸收峰，是-CHO的C=O造成的，1405. 68cm1處的吸收峰屬于C-H的變角振動(dòng)吸收峰；1042. 51cm1處的吸收峰是 C-O-C基團(tuán)振動(dòng)所致或六元環(huán)C-H面內(nèi)彎曲振動(dòng)，896. 23cm1處的特征吸收峰，是P-D-吡 喃糖C-H的變角振動(dòng)所引起的，表明該組分含有P-D-吡喃葡萄糖環(huán)，分子以(6-糖苷鍵連 接，1548. 74cm1和645. 26cm1處出現(xiàn)吸收峰，表明結(jié)構(gòu)中存在酰氨基，由此可推斷甜葉懸鉤 子提取堿溶性多糖可能是一種含有0構(gòu)型的吡喃環(huán)蛋白多糖。
[0022] (4)平均分子量及分子量分布
[0023] 通過(guò)高效凝膠滲透色譜法測(cè)定從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性 多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖的分子量，結(jié)果如實(shí)施例圖4-6以及表2所示。從 薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖重均分子量Mw為8. 29E+°4,數(shù)均分子量 Mn為3. 29E+°3,質(zhì)均分子量Mz為I. 80E+°6，Mw/Mn為25. 23;從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤 子提取的草酸鹽溶果膠類多糖重均分子量Mw為7. 90E+°5,數(shù)均分子量Mn為7. 63E+°3,質(zhì)均分 子量Mz為4. 96E+°6,Mw/Mn為103. 54;從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多 糖重均分子量Mw為I. 35E+°6,數(shù)均分子量Mn為5. 28E+°3,質(zhì)均分子量Mz為4. 04E+°6,Mw/Mn為 25. 68〇
[0024] 4.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿 溶性多糖的混合物甜葉懸鉤子多糖用于抑制血液的凝固
[0025] (1)制備貧血小板血漿
[0026] 20周齡雄性家兔，麻醉，靜脈取血，置于枸櫞酸鈉凝血試管中，抗凝劑與血液的比 例為1 : 9,充分混勻，2800-3200rpm離心8-12min，分離血漿，分裝至離心管內(nèi)，制得貧血小 板血漿（PPP)，-20 °C保存，備用。
[0027] (2)血液凝固抑制的應(yīng)用
[0028] 1)樣品制備：取甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多 糖及以上三者以質(zhì)量比I:I: 1混合的混合物甜葉懸鉤子多糖，分別溶于生理鹽水，配 制成0. 5g/L、I. 0g/L、2.Og/L甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多 糖及以上三者的混合物甜葉懸鉤子多糖各溶液為待測(cè)樣品，進(jìn)行體外血液凝固抑制活性測(cè) 定，待測(cè)樣品與貧血小板血漿（PPP)以1 : 4的體積比混勻，此為待測(cè)血漿，3.06yg/mL濃 度的肝素作為陽(yáng)性對(duì)照，等量生理鹽水作為溶劑對(duì)照。
[0029] 2)凝血酶時(shí)間（Thrombintime，TT)的測(cè)定：取37°C預(yù)溫3min的待測(cè)血衆(zhòng)0?2mL， 加入37°C預(yù)溫的TT試劑0. 2mL，混勻，開(kāi)動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，不斷地傾斜試管至液體流動(dòng)緩慢趨于 停止時(shí)，終止計(jì)時(shí)，記錄所需時(shí)間，重復(fù)測(cè)定3次以上。
[0030] 3)凝血酶原時(shí)間（Prothrombintime，PT)的測(cè)定：取37°C預(yù)溫3min的待測(cè)血衆(zhòng) 0.lmL，加入37°C預(yù)溫的PT試劑0. 2mL，混勻，開(kāi)動(dòng)秒表計(jì)時(shí)。不斷地傾斜試管至液體流動(dòng) 緩慢趨于停止時(shí)，終止計(jì)時(shí)，記錄所需時(shí)間，重復(fù)測(cè)定3次以上。
[0031] 4)活化部分凝血酶原時(shí)間（Aetivedpartialthromboplastintime，APTT)的測(cè) 定方法：取37°C預(yù)溫3min的待測(cè)血漿0.lmL，加入37°C預(yù)溫的APTT試劑0.lmL，37°C孵育 5min，再加入37°C預(yù)溫的0. 025mol/LCaCl2溶液0.lmL，混勻，開(kāi)動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，不斷地傾斜 試管至液體流動(dòng)緩慢趨于停止時(shí)，終止計(jì)時(shí)，記錄所需時(shí)間，重復(fù)測(cè)定3次以上。
[0032]5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行方差分 析，組間比較采用Dunett's檢驗(yàn)，P彡0. 05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0033] 本發(fā)明的應(yīng)用效果：從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖、草酸 鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖及其混合物甜葉懸鉤子多糖均能延長(zhǎng)TT、PT以及APTT，其中 以甜葉懸鉤子多糖混合物作用最強(qiáng)，表現(xiàn)出較強(qiáng)的體外抑制血液凝固的作用。薔薇科懸鉤 子屬植物甜葉懸鉤子在民間有悠久的應(yīng)用歷史，其食用性以及藥用性早已為當(dāng)?shù)孛耖g醫(yī)藥 所證實(shí)。較之于傳統(tǒng)抗凝藥物如最常用的口服抗凝藥華法林，從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉 懸鉤子提取的甜葉懸鉤子多糖則更加安全和方便，具有較高的有效/安全系數(shù)等特點(diǎn)；較 之于臨床最常用的抗凝藥肝素，由于肝素口服不吸收，需要注射用藥，而甜葉懸鉤子多糖 不僅口服吸收良好，且口感良好，適于長(zhǎng)期應(yīng)用；而較之于只能延長(zhǎng)APTT的茶多糖，甜葉懸 鉤子多糖既能延長(zhǎng)APTT，也能延長(zhǎng)TT以及PT，表明甜葉懸鉤子多糖既能通過(guò)影響內(nèi)源性 以及外源性凝血系統(tǒng)而發(fā)揮抗凝血作用，也能通過(guò)增強(qiáng)纖維蛋白溶解活性而發(fā)揮抗凝血作 用。從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的甜葉懸鉤子多糖作為抗凝劑具有安全、有效、