一種治療燒燙傷的新型大黃素明膠微球與納米銀復(fù)合凝膠制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于治療燒燙傷的新型復(fù)合凝膠及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 燒燙傷是人們?cè)谌粘Ｉ钪薪?jīng)常會(huì)遇到的創(chuàng)傷，如不及時(shí)處理，傷口處會(huì)形成淤 血、引起炎癥產(chǎn)生疼痛，傷口會(huì)被細(xì)菌感染加重傷情，甚至?xí)＜吧?。目前，抗生素治療?西醫(yī)常用的方法，雖有一定的療效，但是創(chuàng)面收縮慢，長(zhǎng)期用藥會(huì)產(chǎn)生耐藥性，使藥物失去 作用，甚至?xí)箵p傷肝腎等進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體免疫功能降低。而中醫(yī)采用的外用膏藥在治療外 傷方面卻有著獨(dú)特的療效。市場(chǎng)上比較盛行的治療燒燙傷的膏藥有京萬(wàn)紅軟膏、普濟(jì)燒傷 膏、冰王燒燙傷膏等，這些膏藥各有優(yōu)缺點(diǎn)。京萬(wàn)紅價(jià)格便宜，治療燒燙傷效果較好，但是主 要用于治療輕度燒燙傷，對(duì)深度燒燙傷效果不佳；普濟(jì)燒傷膏治療燒傷效果良好，且能治療 深度大面積燒燙傷，但是價(jià)格昂貴；冰王燒燙傷膏價(jià)格便宜，主要用于輕度燒燙傷，且療效 較慢。
[0003] 大黃素具有抑菌抗炎、活血化瘀、去腐生肌等藥理作用。納米銀是新一代天然抗菌 材料，具有廣譜抗菌、滲透性強(qiáng)、修復(fù)再生、安全無(wú)毒、無(wú)耐藥性等藥理特點(diǎn)，且銀的效價(jià)高， 極少的納米銀即可產(chǎn)生強(qiáng)大的藥效，成本低。膠原蛋白是一種生物高分子蛋白質(zhì)，具有良好 的纖維再成形性，易被人體吸收，能促進(jìn)血小板凝結(jié)，促進(jìn)細(xì)胞成活與生長(zhǎng)，促進(jìn)傷口愈合。 分子量在1000道爾頓以下的膠原蛋白無(wú)需分解可被人體直接吸收，是一種很好的醫(yī)學(xué)材 料。水性凝膠劑是近年來(lái)發(fā)展較快的劑型，具有美觀(guān)、使用舒適、生物利用高、穩(wěn)定性好、不 良反應(yīng)少、不污染衣物等優(yōu)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在開(kāi)發(fā)一種療效好，生產(chǎn)成本低，且能治療各種燒燙傷的水性凝膠制劑。
[0005] 本發(fā)明為一種治療燒燙傷的新型復(fù)合凝膠，它是由下列重量比的成分制成的新型 復(fù)合凝膠：
[0006] 大黃素明膠微球43. 1份納米銀0. 2份 [0007]魚(yú)鱗膠原蛋白3. 4份卡波姆基底953. 3份
[0008] 所述治療燒燙傷的新型復(fù)合凝膠的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 第一步：從魚(yú)鱗中提取膠原蛋白，備用；
[0010] 第二步：制備大黃素明膠微球，備用；
[0011] 第三步：制備卡波姆基底，備用；
[0012] 第四步：取納米銀加蒸餾水超聲20min的納米銀混懸液，備用；
[0013] 第五步：將上述第一步的魚(yú)鱗膠原蛋白、第二步的大黃素明膠微球、第三步的卡波 姆基底和第四步的納米銀混懸液混合，攪拌均勻，制成新型復(fù)合凝膠。
[0014] 所述的方法中，大黃素、納米銀和魚(yú)鱗膠原蛋白三者之間不發(fā)生反應(yīng)，將三者結(jié)合 制成新型復(fù)合凝膠，涂抹于常見(jiàn)的燒燙傷上，不僅能消腫抗炎，活血化瘀，修復(fù)再生，還能對(duì) 微生物引起的傷口感染起到良好的殺菌作用。 圖1是各組小鼠I. 5d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖2是實(shí)驗(yàn)組小鼠3d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖3是對(duì)照組小鼠3d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖4是空白組小鼠3d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖5是實(shí)驗(yàn)組小鼠9d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖6是對(duì)照組小鼠9d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖7是空白組小鼠9d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖8是實(shí)驗(yàn)組小鼠21d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖9是對(duì)照組小鼠21d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖10是空白組小鼠21d時(shí)傷口組織的病理切片圖； 圖11是各組小鼠傷口完全愈合后創(chuàng)傷部位的病理切片圖。 具體實(shí)施方案
[0015] 以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0016] 實(shí)施例1:治療燒燙傷的新型復(fù)合凝膠的制備方法包括以下步驟：
[0017] 第一步：從魚(yú)鱗中提取膠原蛋白：稱(chēng)量魚(yú)鱗20g，加蒸餾水用磁力攪拌器攪拌 0. 5h，除去雜質(zhì)，再用蒸餾水清洗干凈；晾干后加200mL 0. 6mol/L鹽酸溶液浸泡，用磁力攪 拌器攪拌5h ;用蒸餾水洗至無(wú)懸浮雜質(zhì)，瞭干后加200mL 0. lmol/L鹽酸溶液、0. 8g胃蛋白 酶，置于冰箱保鮮室（溫度為4°C)放置酶解24h;將酶解后的魚(yú)鱗用紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中 加入IOg氯化鈉，靜置6h ;將TGL-16高速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速調(diào)至5000r/min，將上述濾液離心 20min，傾出上清液，取出離心管中類(lèi)白色沉淀，即得魚(yú)鱗膠原蛋白。
[0018] 第二步：制備大黃素明膠微球：在50ml液體石蠟中加入0. 8g司盤(pán)80,預(yù)熱至 60°C，將磁力攪拌器的轉(zhuǎn)速調(diào)至400rpm，攪拌均勾；取20% (w/v)明膠溶液5ml，預(yù)熱至 60°C，加入上述液體石賭中，攪拌15min ;取0.1 g大黃素溶于5ml乙醇中，預(yù)熱至60°C，加入 上述混合液體中，攪拌15min，并迅速冷卻至5°C，離心制得大黃素明膠微球。
[0019] 第三步：制備卡波姆基底：取卡波姆0.5g、甘油40ml、三乙醇胺0.45ml、1 %苯甲酸 鈉水溶液2ml混合均勻，制得基底。
[0020] 第四步：取納米銀0. 06g，加蒸餾水12ml，水浴超聲20min，即得納米銀混懸液。
[0021] 第五步：將上述第一步中得到的魚(yú)鱗膠原蛋白lg、第二步中制得的大黃素明膠微 球12. 6g、第三步中制得的卡波姆基底278. 6g和第四步制得的納米銀混懸液混合，攪拌均 勻，再用磁力攪拌器攪拌lh，即制成新型復(fù)合凝膠。
[0022] 實(shí)施例2 :用制成的新型復(fù)合凝膠，進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)，考察其療效。具體實(shí)驗(yàn)方法如 下：
[0023] 取24只昆明種小鼠，雄性，25g左右，均分為3組，編號(hào)為一、二、三組，每組8只。 采用持續(xù)麻醉的方法，用乙醚麻醉小鼠后，用專(zhuān)用剃毛器剃干凈小鼠背部的毛，使其皮膚裸 露。將小鼠置于俯臥位，四肢伸展，用夾子將其四肢固定在操作板上，使背部皮膚呈平坦?fàn)睿?以小鼠脊柱為中線(xiàn)，用從室溫加熱3min的小鐵塊（面積為IcmX Icm)燙傷小鼠肩胛骨后 方，左右對(duì)稱(chēng)位置各燙一個(gè)傷口，用力適中，時(shí)間為5s。
[0024] 燙傷模型制成后，第一組小鼠左邊部分涂抹0.9%生理鹽水，右邊傷口涂抹新型復(fù) 合凝膠；第二組小鼠左邊涂抹新型復(fù)合凝膠，右邊涂抹京萬(wàn)紅藥膏（藥店購(gòu)買(mǎi)）；第三組小 鼠左邊涂抹京萬(wàn)紅藥膏，右邊涂抹0.9%生理鹽水。每天一次，認(rèn)真觀(guān)察小鼠。具體觀(guān)察指 標(biāo)如下：
[0025] 1、大體觀(guān)察：觀(guān)察小鼠精神狀況、進(jìn)食、睡眠以及活動(dòng)情況。
[0026] 2、對(duì)各組小鼠皮膚感染創(chuàng)面進(jìn)行仔細(xì)觀(guān)察，記錄創(chuàng)面顏色變化，有無(wú)膿性分泌物 滲出，是否出現(xiàn)潰瘍、流血、結(jié)痂等現(xiàn)象。
[0027] 3、將小鼠用乙醚迷暈后，用0.IcmXO. Icm標(biāo)準(zhǔn)透明計(jì)算方格紙覆蓋于傷口上，進(jìn) 行創(chuàng)面愈合百分率的測(cè)定。
[0028] 愈合率=[(An_「An) /An_J X 100 %
[0029] 式中Alri=燙傷后第n-1天創(chuàng)面面積，An=術(shù)后第n天創(chuàng)面面積（開(kāi)放創(chuàng)面）。
[0030] 計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表一：
[0031] 表一
[0032]
[0033] 由表一結(jié)果可得新型復(fù)合凝膠的愈合率優(yōu)于京萬(wàn)紅和生理鹽水。
[0034] 實(shí)施例3:分別于1. 5(1、3(1、9(1、21(1、完全愈合后各組取小鼠一只，取傷口組織，用 4%多聚甲醛固定，交由重慶醫(yī)科大學(xué)做成病理切片，進(jìn)行觀(guān)察，觀(guān)察結(jié)果如下：
[0035] I. 5d:三組并無(wú)太大差別，炎細(xì)胞數(shù)量相差無(wú)幾。如圖1。
[0036] 3d:實(shí)驗(yàn)組小鼠傷口組織炎細(xì)胞數(shù)量相對(duì)空白組和對(duì)照組較少，且有成纖維細(xì)胞 生成，如圖2;對(duì)照組小鼠傷口組織炎細(xì)胞數(shù)量最多，如圖3;空白組小鼠傷口組織炎細(xì)胞數(shù) 量非常多，如圖4。
[0037] 9d:實(shí)驗(yàn)組炎細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于空白組和對(duì)照組較少，成纖維細(xì)胞數(shù)量增多，且有毛 細(xì)血管生成，如圖5;對(duì)照組炎細(xì)胞數(shù)量非常多，有成纖維細(xì)胞生成，如圖6;空白組炎細(xì)胞 數(shù)量非常多，未見(jiàn)成纖維細(xì)胞生成，如圖7。
[0038] 21d:實(shí)驗(yàn)組已長(zhǎng)出肉芽組織，數(shù)量較多，如圖8 ;對(duì)照組肉芽組織數(shù)量較少，如圖 9 ;空白組肉芽組織數(shù)量較多，如圖10。
[0039] 完全愈合后：三組情況類(lèi)似，皮膚組織層次鮮明，內(nèi)部都仍可見(jiàn)少量炎細(xì)胞，如圖 Ilo
[0040] 實(shí)施例4 :在新型復(fù)合凝膠制成后5d、65d、130d后，對(duì)新型復(fù)合凝膠中的中藥成分 進(jìn)行穩(wěn)定性考察，鑒定其是否變質(zhì)。取新型復(fù)合凝膠5g，加入甲醇20ml，水浴超聲20min，過(guò) 濾，濃縮，用薄層色譜法鑒定（展開(kāi)劑：石油醚60-90 :乙酸乙酯：甲酸=15 : 5 : 1)。 在254nm波長(zhǎng)的紫外燈下觀(guān)察，計(jì)算Rf值，結(jié)果見(jiàn)表二。
[0041] 表二
[0042]
[0043] 本發(fā)明治療燒燙傷過(guò)程中，小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其對(duì)傷口的愈合率高于京萬(wàn)紅軟膏 和生理鹽水。
[0044] 應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)上訴說(shuō)明加以改進(jìn)或變換， 而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療燒燙傷的新型復(fù)合凝膠，其特征在于，它是由下列重量比的成分制成的新 型復(fù)合凝膠： 大黃素明膠微球43. 1份納米銀 0. 2份 魚(yú)鱗膠原蛋白 3. 4份卡波姆基底953. 3份。2. -種如權(quán)利要求1所述的大黃素明膠微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 第一步：在液體石蠟中加入司盤(pán)80,預(yù)熱至60°C，攪拌均勻，備用； 第二步：20% (w/v)明膠溶液，預(yù)熱至60°C，加入上述液體石蠟中，攪拌均勻，備用； 第三步：取大黃素溶于乙醇中，預(yù)熱，加入上述混合溶液中，攪拌均勻并迅速冷卻至 5°C，離心即得大黃素明膠微球。3. 如權(quán)利要求2所述的大黃素明膠微球，其特征在于，所述第一步、第二步中液體石 蠟：司盤(pán)80 : 20% (w/v)明膠溶液=10 : 0. 1565 : Uv/w/v)，所述第三步中大黃素： 乙醇=1 : 50 (w/v)。4. 一種如權(quán)利要求1所述的魚(yú)鱗膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟： 第一步：取魚(yú)鱗除雜，加0. 6mol/L鹽酸溶液攪拌5h，清洗干凈，晾干備用； 第二步：將上述魚(yú)鱗加〇. lmol/L鹽酸溶液、胃蛋白酶，置于冰箱保鮮室放置酶解24h ; 第三步：將上述酶解后的魚(yú)鱗過(guò)濾，濾液中加入氯化鈉，靜置6h后，離心20min，傾出上 清液，取出離心管中類(lèi)白色沉淀即得魚(yú)鱗膠原蛋白。5. 如權(quán)利要求4所述的魚(yú)鱗膠原蛋白，其特征在于，所述第一步、第二步和第三步中 原料試劑比例為魚(yú)鱗：〇.6mol/L鹽酸溶液：0? lmol/L鹽酸溶液：胃蛋白酶：氯化鈉= 4. 65 ： 46. 42 ： 46. 42 ： 0. 19 ： 2. 33 (w/v/v/w/w) 〇6. -種如權(quán)利要求1所述的卡波姆基底的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 按照一定比例取卡波姆、甘油、三乙醇胺、1%苯甲酸鈉水溶液混合制得基底。7. 如權(quán)利要求6所述的卡波姆基底，其特征在于，它的比例為卡波姆：甘油：三乙醇 胺：1%苯甲酸鈉水溶液= 1.17 : 93.14 : 1.04 : 4.66 (w/v/v/v)。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種治療燒燙傷的新型大黃素明膠微球與納米銀復(fù)合凝膠制劑及其制備方法，它是由下列重量比的成分制成的新型復(fù)合凝膠：大黃素明膠微球，43.1份，納米銀，0.2份，魚(yú)鱗膠原蛋白，3.4份，卡波姆基底，953.3份。本發(fā)明是一種水性凝膠制劑，具有美觀(guān)、使用舒適、生物兼容性好、生物利用高、穩(wěn)定性好、不良反應(yīng)少和不污染衣物等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】A61K33/28, A61P31/02, A61K9/06, A61K38/39, A61P17/02, A61K31/122
【公開(kāi)號(hào)】CN104971345
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510368421
【發(fā)明人】張起輝, 王丹, 古今, 張昭, 孫宗良, 張育珍, 郭圓圓
【申請(qǐng)人】重慶大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2015年6月26日