寡肽聯(lián)合或與嗎啡的組合在制備用于鎮(zhèn)痛的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及聯(lián)合或與嗎啡的組合在制備用于鎮(zhèn)痛的藥物中的用途。具體而言，本發(fā)明涉及寡肽Asqffglm-NH2在提高受試者中δ阿片受體的轉(zhuǎn)錄和/或表達(dá)水平的用途，進(jìn)而可用于與嗎啡組合或聯(lián)合用于治療或緩解疼痛。
【背景技術(shù)】
[0002]速激肽是具有共同羧基末端序列(FXGLM-NH2)的肽家族，其最為人所熟知的成員包括:P物質(zhì)(SP)、神經(jīng)激肽A (NKA)和神經(jīng)激肽Β(ΝΚΒ)，它們是從兩個(gè)不同的基因編碼而來(lái):Ppta編碼SP、NKA ；Pptb編碼NKB。在2000年和2002年，第三個(gè)前速激肽基因Pptc被鑒定，它編碼HK-1。HK-1最初是在小鼠造血細(xì)胞中被鑒定出來(lái)，它在祖B細(xì)胞發(fā)育到前B細(xì)胞的過程中起著重要的作用。后來(lái)，它在大鼠和人中也被鑒定出來(lái)。
[0003]許多證據(jù)表明，人和小鼠HK-1與SP對(duì)神經(jīng)激肽受體具有類似的激活活性，都對(duì)神經(jīng)激肽受體I (NKl受體)有著很高的親和性和選擇性。然而，與r/mHK-l和SP不同的是，hHK-Ι和hHK-1 (4-11)對(duì)于神經(jīng)激肽受體I的親和性降低許多(分別是14倍和70倍)。一些研究者研究了人和小鼠HK-1在免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和痛覺系統(tǒng)的一些生物學(xué)活性。在調(diào)控痛覺傳遞方面，本發(fā)明的發(fā)明人之前發(fā)現(xiàn)，r/mHK-1和hHK_l在側(cè)腦室注射后都能產(chǎn)生劑量和時(shí)間依賴的鎮(zhèn)痛效果，并且神經(jīng)激肽受體I的拮抗劑和μ阿片受體拮抗劑能夠分別顯著阻斷由r/mKH-1和hHK_l引起的鎮(zhèn)痛效果。也就是說(shuō)r/mKH-1和hHK_l的鎮(zhèn)痛效果分別依賴于神經(jīng)激肽受體I和μ阿片受體。
[0004]內(nèi)源性的阿片肽和阿片受體參與了疼痛的調(diào)節(jié)過程。目前，臨床上大多使用μ阿片受體的激動(dòng)劑來(lái)緩解疼痛，但是其耐受性和極易產(chǎn)生的身體和精神的依賴性等副作用嚴(yán)重制約了其使用。相反，選擇性的激活S阿片受體在產(chǎn)生強(qiáng)效止痛效果的同時(shí)，很少有副作用產(chǎn)生。因此，激活δ阿片受體目前被認(rèn)為是一種理想的止痛手段。有文獻(xiàn)報(bào)道，上調(diào)和增加脊髓水平的δ阿片受體能有效增強(qiáng)δ阿片受體激動(dòng)劑在慢性炎癥性疼痛模型中的止痛效果(C.Μ.Cahill, A.Morinvilie, C.Hoffert, D.0，Donnell, A.Beaudet.Up-regulat1n and trafficking ofδop1id receptor in a model of chronicinflammat1n:1mplicat1ns for pain control.Pain, 101(2003) 199 208.)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了上調(diào)δ阿片受體，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過長(zhǎng)期不懈地努力發(fā)現(xiàn)寡肽Asqffglm-NH2能夠上調(diào)δ阿片受體的表達(dá)。
[0006]因此，本發(fā)明一方面提供了一種上調(diào)受試者體內(nèi)δ阿片受體表達(dá)水平的方法，其包括向所述受試者(例如哺乳動(dòng)物，例如人)使用有效劑量的寡肽asqffglm-nh2。
[0007]本發(fā)明的另一方面提供了寡肽Asqffglm-Nh2在制備用于上調(diào)受試者(例如哺乳動(dòng)物,例如人)體內(nèi)δ阿片受體表達(dá)水平的制劑(例如藥物)中的用途。
[0008]本發(fā)明還提供了寡肽Asqffglm-NH2聯(lián)合或與嗎啡的組合在制備用于在受試者(例如哺乳動(dòng)物，例如人)中鎮(zhèn)痛的制劑(例如藥物)中的用途。
[0009]本發(fā)明進(jìn)一步地還提供了寡肽Asqffglm-NH2在制備用于增強(qiáng)嗎啡的鎮(zhèn)痛效果的制劑(例如藥物)中的用途。
[0010]本說(shuō)明書以及權(quán)利要求書中有可能涉及一些縮寫，這些縮寫所代表的內(nèi)容是本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知的。但是，為了便于理解本發(fā)明的內(nèi)容，將相關(guān)的縮寫所代表的內(nèi)容引述如下:
[0011]r/mHK-1:大鼠/小鼠hemokinin-1 ;FAM:羧基熒光素；PPT:前速激肽原；M0R:μ -阿片受體；P0MC:阿黑皮素原；K0R: K -阿片受體；PDYN:強(qiáng)啡肽原；D0R: δ -阿片受體；PENK:腦啡肽原；GAPDH:甘油醛 _3_ 磷酸脫氫酶；HK_1 (4-11):ASQFFGLM_NH2。
【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1:小鼠側(cè)腦室注射寡肽Asqffglm-NH2后，nki受體和不同前速激肽原在mRNA水平的表達(dá)變化情況。a，b和c分別是用ABI7300系統(tǒng)軟件獲得的具有代表性的NKl受體，PPT-A和PPT-C的擴(kuò)增曲線。A，B和C直方圖顯示的分別是來(lái)自至少獨(dú)立三次重復(fù)的NKl受體、PPT-A和PPT-C的相對(duì)mRNA表達(dá)水平，內(nèi)參基因?yàn)楣芗一騁APDH。所有反應(yīng)每次一式三份，至少進(jìn)行三次獨(dú)立重復(fù)。每個(gè)值被注射生理鹽水的對(duì)照組所標(biāo)準(zhǔn)化，對(duì)照組的值設(shè)為1，結(jié)果以平均值土SEM呈現(xiàn)。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組沒有顯著性差異。
[0013]圖2:小鼠側(cè)腦室注射寡肽Asqffglm-NH2后內(nèi)源性阿片受體和內(nèi)源性阿片肽在mRNA水平的表達(dá)變化情況。a，b，c, d，e和f分別是用ABI7300系統(tǒng)軟件獲得的具有代表性的M0R( μ -阿片受體)，P0MC(阿黑皮素原)，K0R( K -阿片受體)，PDYN(強(qiáng)啡肽原)，DORO-阿片受體)和PENK(腦啡肽原)的擴(kuò)增曲線。A，B，C，D，E和F直方圖顯示的分別是來(lái)自至少獨(dú)立三次重復(fù)的MOR，POMC, KOR, PDYN, DOR和PENK的相對(duì)mRNA表達(dá)水平，內(nèi)參基因?yàn)楣芗一騁APDH。所有反應(yīng)每次一式三份，至少進(jìn)行三次獨(dú)立重復(fù)。條對(duì)應(yīng)于平均值的標(biāo)準(zhǔn)差。***P ( 0.001:與各自對(duì)照組相比有極顯著性差異。
[0014]圖3:半定量Western Blotting實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠側(cè)腦室注射寡肽ASQFFGLM_NH2后NKl受體，MOR, POMC和DOR蛋白表達(dá)和對(duì)照組蛋白表達(dá)情況。這些圖片是來(lái)自于至少三次獨(dú)立重復(fù)的代表性圖片。柱形圖分別表示的是NKl受體(A)，MOR(B), POMC(C)and DOR(D)的相對(duì)蛋白表達(dá)水平情況，內(nèi)參基因?yàn)棣?actin。*p彡0.05;**p彡0.01:與各自對(duì)照組相比有顯著性差異。
[0015]圖4:側(cè)腦室注射人HK-1 (4-11)聯(lián)合皮下注射嗎啡后，在48.5°C的溫浴甩尾實(shí)驗(yàn)中能劑量和時(shí)間依賴的產(chǎn)生協(xié)同鎮(zhèn)痛效果。*P ( 0.05，**p ( 0.01和( 0.001,表明人HK-1 (4-11)聯(lián)合嗎啡注射組與單獨(dú)嗎啡注射組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異。
【具體實(shí)施方式】
[0016]本發(fā)明的發(fā)明人以ICR小鼠(由浙江省杭州市杭州師范大學(xué)動(dòng)物中心提供)為研究對(duì)象，研究了寡肽Asqffglm-NH2對(duì)各種阿片肽受體及其配體的表達(dá)水平的影響。我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示nki受體和前速激肽原的表達(dá)水平不受側(cè)腦室注射寡肽Asqffglm-Nh2的影響。相對(duì)應(yīng)我們目前的工作，與生理鹽水對(duì)照組相比，側(cè)腦室注射寡肽Asqffglm-Nh2之后，mor(μ阿片受體)[和K0R(k阿片受體)，以及它們各自的內(nèi)源性配體POMC和TOYN的表達(dá)水平幾乎沒有改變。有趣的是，在我們目前的研究中，DOR(S阿片受體)的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平發(fā)生極其顯著的上調(diào)，然而PENK (DOR的內(nèi)源性配體)的表達(dá)水平?jīng)]有發(fā)生顯著變化。
[0017]因此，本發(fā)明一方面提供了一種提高受試者中δ阿片受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的方法，其包括向所述受試者施用有效量的寡肽asqffglm-nh2。本發(fā)明也提供了寡肽Asqffglm-Nh2在制備用于提高受試者中δ阿片受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的制劑(例如藥物)中的用途。本發(fā)明的再一方面提供了一種藥學(xué)產(chǎn)品(例如藥物或藥劑)或藥物組合物，其包括作為活性成分的提高受試者中s阿片受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的寡肽Asqffglm-Nh2 ;以及包括該涉及藥學(xué)產(chǎn)品的說(shuō)明書。
[0018]本發(fā)明一方面提供了一種提高受試者中嗎啡的鎮(zhèn)痛效果的方法，其包括向所述受試者施用有效量的寡肽asqffglm-nh2，該施用是在嗎啡的施用之前或之后進(jìn)行，或者與嗎啡同時(shí)施用。本發(fā)明也提供了寡肽Asqffglm-Nh2在制備用于提高在受試者中嗎啡的鎮(zhèn)痛效果的制劑(例如藥物)中的用途。本發(fā)明的再一方面提供了一種藥學(xué)產(chǎn)品(例如藥物或藥劑)或藥物組合物，其包括作為活性成分的提高受試者中嗎啡的鎮(zhèn)痛效果的寡肽Asqffglm-Nh2 ；以及包括該涉及藥學(xué)產(chǎn)品的說(shuō)明書。
[0019]對(duì)于本發(fā)明所述的受試者，其優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。
[0020]對(duì)于本發(fā)明的提高受試者中寡肽Asqffglm-NH2的活性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)其作出任何修飾，前體是所述修飾不負(fù)面影響其活性。例如，可以對(duì)該寡肽進(jìn)行PEG化，以提高其在體內(nèi)的半衰期；可以與已知的穿透肽連接，以促進(jìn)本發(fā)明寡肽的透皮吸收等?？傊绢I(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)本發(fā)明的寡肽進(jìn)行各種修飾以提高遞送效率并保持其活性。這類修飾的寡肽也是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)的。
[0021]本發(fā)明的作為活性成分的寡肽Asqffglm-NH2可以連同藥學(xué)上可接受的載體一起使用。除活性成分外，本發(fā)明的方法、用途和產(chǎn)品還可以包含合適的藥學(xué)上可接受的載體，包括促進(jìn)活性化合物加工成制劑的賦形劑和助劑。
[0022]例如適于注射或輸注的制劑包括水性和非水性無(wú)菌注射液和水性和非水性無(wú)菌混懸劑，所述無(wú)菌注射液可任選地包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和能使制劑與目的接收者的血液等壓的溶質(zhì)，所述無(wú)菌混懸劑可包括懸浮劑和增稠劑。所述制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿，并且可以保存在凍結(jié)干燥的(凍干)條件，在立即使用前僅需要加入無(wú)菌液體載體，例如注射用水。
[0023]本發(fā)明的活性成分任選地可與固體賦形劑相組合，且任選地磨碎所得到的混合物，并且需要時(shí)，在加入合適的助劑后，加工顆粒的混合物，以獲得所需劑型。合適的賦形劑特別是填充劑例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纖維素或淀粉制劑、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。需要時(shí)，