組織生成的方法
【專利說(shuō)明】組織生成的方法
[0001] 本申請(qǐng)要求2012年9月4日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/696, 487的優(yōu)先權(quán)， 通過(guò)引用將其全文公開的內(nèi)容合并入本文。
[0002] L 介紹
[0003] 本文提供了在體內(nèi)生成三維組織的方法，包括向受試者沉積和/或施用細(xì)胞和細(xì) 胞外基質(zhì)組分。 2.【背景技術(shù)】
[0004] 生物打?。ɡ缙鞴俅蛴。儆谘绣澈凸こ填I(lǐng)域，其涉及打印設(shè)備，例如改良的噴 墨打印機(jī)，其沉積生物材料。該技術(shù)涉及快速產(chǎn)生和釋放包含細(xì)胞的液滴，并隨后將其精確 沉積在基材上。使用基礎(chǔ)的細(xì)胞材料通過(guò)生物打印的方式構(gòu)建的組織和器官代表著現(xiàn)今標(biāo) 準(zhǔn)移植方法中所使用的供者來(lái)源的組織和器官的有前景的替代物。
[0005] 3.概沭
[0006] 本發(fā)明提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法。在一種實(shí)施方式中，本文提供了在體 內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合 物。在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體內(nèi)或體 表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物和至少一種包含細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的組合物。 在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體內(nèi)或體表 的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物，至少一種包含細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的組合物，和 至少一種其他附加組分。下述4. 1.1節(jié)描述了根據(jù)本文所述方法可用的細(xì)胞。下述4. 1.2 節(jié)描述了根據(jù)本文所述的方法可以沉積在其上的組織和器官的細(xì)胞、ECM、和/或其他附加 組分。下述4. 1. 3節(jié)描述了根據(jù)本文所述方法可用的ECM。在下述4. 1. 4節(jié)描述了根據(jù)本 文所述的方法可以沉積在其上的表面細(xì)胞，ECM，和/或其他附加組分。
[0007] 在一種實(shí)施方式中，本文描述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和ECM 作為同一組合物的部分進(jìn)行沉積。在另一種實(shí)施方式中，本文描述的在體內(nèi)形成三維組織 的方法中使用的細(xì)胞和ECM作為不同的組合物的部分進(jìn)行沉積。在一種【具體實(shí)施方式】中， 本文描述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的ECM包含可流動(dòng)ECM。在另一種具體實(shí)施 方式中，本文描述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和ECM作為不同的組合物的 部分沉進(jìn)行積，例如，其中ECM與細(xì)胞的沉積分開沉積，例如在細(xì)胞沉積之前沉積，和/或其 中在細(xì)胞沉積之前使ECM脫水。在ECM脫水的實(shí)施方式中，它可以之后在期望的時(shí)間再水 化，例如在細(xì)胞沉積到已經(jīng)沉積有ECM和細(xì)胞的表面上的時(shí)間。
[0008] 在一種【具體實(shí)施方式】中，本文所述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和 /或ECM與一種或多種附加組分，例如生長(zhǎng)因子、交聯(lián)劑、可聚合單體、聚合物、水凝膠等等 的沉積同時(shí)，在其之前，或在其之后沉積到受試者體內(nèi)或體表的表面上。在一種具體實(shí)施方 式中，根據(jù)本文所述的方法，將一種或多種附加組分生物打印到所述表面上。
[0009] 在一種具體體表上的表面上，其中所述生物分子包含一種類型的膠原、一種類型 的纖連蛋白、一種類型的層粘連蛋白、或組織粘合劑。在一種【具體實(shí)施方式】中，根據(jù)本文所 述的方法，將生物分子生物打印到所述表面上。
[0010] 在一種【具體實(shí)施方式】中，不是將本文所述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的 細(xì)胞和/或ECM三維打印到受試者體內(nèi)或體表的表面上，例如不是生物打印細(xì)胞和ECM，而 是通過(guò)不包括生物打印的方法將其施加于所述表面上。在一種【具體實(shí)施方式】中，將不是被 生物打印到受試者體內(nèi)或體表的表面上的細(xì)胞和/或ECM施加于已經(jīng)過(guò)生物打印的表面 上，例如將細(xì)胞和/或可流動(dòng)ECM施加到已經(jīng)過(guò)生物打印到受試者體內(nèi)或體表的支架，例如 合成支架（如合成基質(zhì)）上。在一種【具體實(shí)施方式】中，細(xì)胞和/或ECM僅被施加于支架（例 如表面）的一部分，例如一面上。在另一種【具體實(shí)施方式】中，細(xì)胞和/或ECM被施加于支架 的所有面上，即整個(gè)支架都具有施加于其上的細(xì)胞和/或ECM。在另一種【具體實(shí)施方式】中， 該支架是聚己酸內(nèi)酯（PCL)。
[0011] 在某些實(shí)施方式中，本文所述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和/或 可流動(dòng)ECM(以及附加組分）被打印到所述表面上，例如細(xì)胞和ECM被生物打?。ɡ缡褂?噴墨打印機(jī)）。在某些實(shí)施方式中，本文所述的在體內(nèi)形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和 可流動(dòng)ECM(以及附加組分）被噴涂到所述表面上。在某些實(shí)施方式中，本文所述的在體內(nèi) 形成三維組織的方法中使用的細(xì)胞和/或可流動(dòng)ECM(以及附加組分）通過(guò)霧化沉積到所 述表面上。
[0012] 在一種【具體實(shí)施方式】中，可將細(xì)胞、ECM、和/或附加組分沉積于其上的表面包括 人造表面，即人為制造的表面。在另一種【具體實(shí)施方式】中，可將細(xì)胞、ECM、和/或附加組 分沉積于其上的表面包括受試者（例如人受試者）的組織或一種具體的實(shí)施方式中，根據(jù) 本文描述的方法，可將ECM、和/或附加組分沉積于其上的表面是已進(jìn)行生物打印，例如已 根據(jù)本文所述的方法進(jìn)行生物打印的表面。在一種【具體實(shí)施方式】中，該表面是聚己酸內(nèi)酯 (PCL) 〇
[0013] 在一種【具體實(shí)施方式】中，本文所述的方法用于治療目的，例如該方法用于將對(duì)應(yīng) 于特定組織類型的細(xì)胞，或?qū)?yīng)于多種組織類型的細(xì)胞沉積到所述受試者的表面（組織或 器官）上，所述受試者將會(huì)從所述細(xì)胞的沉積中受益。這種方法可以另外包括將ECM(例如 可流動(dòng)ECM)和/或附加組分沉積到所述受試者的所述表面上。
[0014] 在另一個(gè)方面，本文提供了包含細(xì)胞和ECM(例如可流動(dòng)ECM)的組合物，其中所述 組合物適用于本文所述的方法。本文還提供了包含所述組合物的試劑盒，其中所述組合物 在一個(gè)或多個(gè)容器中，以及根據(jù)本文所述的一種或多種方法使用所述組合物的說(shuō)明書。
[0015] 3. 1附圖簡(jiǎn)述
[0016] 圖1顯示包含聚己酸內(nèi)酯（PCL)的支架，所述PCL以不同的角度并以產(chǎn)生不同孔 徑的支架的方式被生物打印。
[0017] 圖2顯示生物打印支架的多個(gè)視圖，其中細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)被施加于支架的兩面 上并隨后被脫水。
[0018] 圖3顯示細(xì)胞增殖檢測(cè)的結(jié)果。在包含生物打印的PCL和脫水的ECM的混合支架 上培養(yǎng)的胎盤干細(xì)胞在8天的培養(yǎng)期中增殖。
[0019] 圖4顯示細(xì)胞活力檢測(cè)的結(jié)果。在包含生物打印的PCL和脫水的ECM的混合支架 上培養(yǎng)的胎盤干細(xì)胞在8天的培養(yǎng)期中增殖并保持存活。
[0020] 圖5顯示包含PCL、ECM和胎盤干細(xì)胞的完整的三維混合支架，其中每一個(gè)被生物 打印成層（PCL層和ECM/細(xì)胞層）。
[0021] 圖6證明在7天的培養(yǎng)期中胎盤干細(xì)胞遍布在整個(gè)三維生物打印支架上。
[0022] 圖7顯示細(xì)胞活力檢測(cè)的結(jié)果。與ECM和PCL -起生物打印以形成三維混合支架 的胎盤干細(xì)胞在7天的培養(yǎng)期中增殖并保持存活。
[0023] 圖8證明與ECM和PCL -起生物打印以形成三維混合支架的胎盤干細(xì)胞在7天的 培養(yǎng)期中遍布在混合支架的ECM上。
[0024] 圖9顯示細(xì)胞增殖檢測(cè)的結(jié)果。在通過(guò)生物打印PCUECM和胎盤干細(xì)胞生成的三 維混合支架上培養(yǎng)的胎盤干細(xì)胞在7天的培養(yǎng)期中增殖。
[0025] 圖10顯示包含PCL、胎盤ECM和胰島素產(chǎn)生細(xì)胞（β -TC-6細(xì)胞）的生物打印支 架。
[0026] 圖11顯示細(xì)胞增殖檢測(cè)的結(jié)果，在包含PCL、胎盤ECM和胰島素產(chǎn)生細(xì)胞的生物打 印支架中的胰島素產(chǎn)生細(xì)胞（β-Τ06細(xì)胞）的數(shù)量在14天的培養(yǎng)期中保持穩(wěn)定。
[0027] 圖12顯示由包含PCL、胎盤ECM和胰島素產(chǎn)生細(xì)胞（I3-TC-6細(xì)胞）的生物打印支 架產(chǎn)生的胰島素水平。
[0028] 圖13顯示在暴露于葡萄糖負(fù)荷之后㈧或在對(duì)照條件下，由包含PCL、胎盤ECM和 胰島素產(chǎn)生細(xì)胞（β-TC-e細(xì)胞）的生物打印支架產(chǎn)生的胰島素水平。 4.【具體實(shí)施方式】
[0029] 本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法。在一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi) 形成三維組織的方法，包括在受試者內(nèi)部（體內(nèi)，in)或其上（體表，on)的表面上沉積至 少一種包含細(xì)胞的組合物。在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法， 包括在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物和至少一種包含細(xì)胞 外基質(zhì)（ECM)的組合物。在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包 括在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物、至少一種包含細(xì)胞外基 質(zhì)（ECM)的組合物、和至少一種其他附加組分。下述4. 1.1節(jié)描述了根據(jù)本文所述的方法 可用的細(xì)胞。下述4. 1. 2節(jié)描述了根據(jù)本文所述的方法細(xì)胞、ECM、和/或其他附加組分可 以沉積在其上的組織和器官。下述4. 1.3節(jié)描述了根據(jù)本文所述的方法可用的ECM。在下 述4. 1. 4節(jié)描述了根據(jù)本文所述的方法細(xì)胞、ECM，、和/或其他附加組分可以沉積在其上的 表面。
[0030] 在一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體內(nèi) 或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物。在一種【具體實(shí)施方式】中，使用生物打印 機(jī)來(lái)沉積所述細(xì)胞。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含單一類型的細(xì)胞。在另一種
【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含多于一種類型的細(xì)胞。
[0031] 在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體 內(nèi)或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物和至少一種包含細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的 組合物，其中所述ECM包含可流動(dòng)ECM。在一種【具體實(shí)施方式】中，使用生物打印機(jī)來(lái)沉積所 述細(xì)胞和所述ECM。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含單一類型的細(xì)胞。在另一種具 體實(shí)施方式中，所述細(xì)胞包含多于一種類型的細(xì)胞。
[0032] 在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體 內(nèi)或體表的表面上沉積包含細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的組合物，其中所述ECM包含可流動(dòng) ECM。在一種【具體實(shí)施方式】中，使用生物打印機(jī)來(lái)沉積所述細(xì)胞和所述ECM。在另一種具體 實(shí)施方式中，所述細(xì)胞包含單一類型的細(xì)胞。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含多于 一種類型的細(xì)胞。
[0033] 在另一種實(shí)施方式中，本文提供了在體內(nèi)形成三維組織的方法，包括在受試者體 內(nèi)或體表的表面上沉積至少一種包含細(xì)胞的組合物，至少一種包含細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的組 合物，和至少一種其他附加組分。在一種【具體實(shí)施方式】中，使用生物打印機(jī)來(lái)沉積所述細(xì) 胞、所述ECM和所述一種或多種附加組分。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含單一類 型的細(xì)胞。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述細(xì)胞包含多于一種類型的細(xì)胞。在另一種具體 實(shí)施方式中，將所述細(xì)胞、所述ECM和所述一種或多種附加組分配制成同一組合物的部分。 在另一種【具體實(shí)施方式】中，將所述細(xì)胞、所述ECM和所述一種或多種附加組分配制成單獨(dú) 的組合物的部分。在另一種【具體實(shí)施方式】中，所述一種或多種附加組分是生長(zhǎng)因子、可聚合 單體、交聯(lián)劑、聚合物和水凝膠。
[0034] 在某些實(shí)施方式中，根據(jù)本文公開的方法，可將細(xì)胞、ECM、和/或附加組分沉積于 其上的表面包含人造表面，即人為制造的表面（例如假體）。在另一種【具體實(shí)施方式】中，根 據(jù)本文公開的方法，將細(xì)胞、ECM、和/或附加組分沉積于其上的表面包含受試者（例如人受 試者）的組織或器官（或其部分）。在一種【具體實(shí)施方式】中，受試者中的所述組織或器官的 表面可以被脫細(xì)胞，例如進(jìn)行處理以從組織或器官的全部或部分表面除去細(xì)胞。在一種具 體實(shí)施方式中，根據(jù)本文描述的方法，可將ECM、和/或附加組分沉積于其上的表面是已進(jìn) 行生物打印，例如已根據(jù)本文所述的方法進(jìn)行生物打印的表面。在一種【具體實(shí)施方式】中，該 表面包含合成材料，例如合成聚合物。在另一種實(shí)施方式中，合成聚合物是PCL。
[0035] 在某些實(shí)施方式中，細(xì)胞和ECM (例如可流動(dòng)ECM)不同時(shí)沉積，但沉積成層。在一 種【具體實(shí)施方式】中，在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積一層細(xì)胞，然后在受試者體內(nèi)或體 表上的表面上沉積一層ECM，然后在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積一層細(xì)胞。在某些實(shí)施 方式中，可以在受試者體內(nèi)或體表的表面上沉積多層ECM，然后在受試者體內(nèi)或體表的表面 上沉積多層細(xì)胞，反之亦然。同樣地，根據(jù)本文所述的方法，與細(xì)胞和/或ECM沉積同時(shí)，或 在其之前或之后沉積的附加組分可以在細(xì)胞和ECM之間成層。
[0036] 在某些實(shí)施方式中，沉積細(xì)胞和ECM(例如可流動(dòng)ECM)以使得受試者體內(nèi)或體表 的沉積表面完全被細(xì)胞和ECM覆蓋。在其他實(shí)施方式中，沉積細(xì)胞和ECM (例如可流動(dòng)ECM) 以使得受試者體內(nèi)或體表的沉積表面部分被細(xì)胞和ECM覆蓋。
[0037] 在某些實(shí)施方式中，沉積細(xì)胞和ECM(例如可流動(dòng)ECM)以使得受試者體內(nèi)或體表 的沉積表面在特定的、所期望的區(qū)域上被細(xì)胞覆蓋；并且在特定的、所期望的區(qū)域上被ECM 覆蓋，其中這些特定的區(qū)域可以重疊或可以不重疊。
[0038] 在某些實(shí)施方式中，可以以三維的方式將細(xì)胞和ECM(例如可流動(dòng)ECM)沉積/打 印到表面上。本文所使用的"三維打印"或"三維沉積"指這樣的打印/沉積過(guò)程，例如生 物打印機(jī)的打印頭在三維表面（例如受試者中的器官或骨頭）下方、上方、或圍繞它移動(dòng)， 例如機(jī)械控制打印頭以使其沿著特定的路徑旋轉(zhuǎn)。本文所使用的三維打印和三維沉積與本 領(lǐng)域已知的生物打印的標(biāo)準(zhǔn)方法相反，在所述標(biāo)準(zhǔn)方法中通過(guò)在扁平/平面/二維表面上 開始構(gòu)建組織進(jìn)行打印。
[0039] 4. 1牛物打印
[0040] 本文使用的"生物打印"通常指使用標(biāo)準(zhǔn)或改良的打印技術(shù)，例如噴墨打印技術(shù)將 活細(xì)胞以及其他組分（例如可流動(dòng)ECM ;合成基質(zhì)）沉積到表面上。將細(xì)胞沉積到表面上， 以及生物打印細(xì)胞，包括與水凝膠的組合的細(xì)胞的基本方法在Warren等的US 6, 986, 739、 Boland 等的 US 7, 051，654、Yoo 等的 US 2009/0208466 和 Xu 等的 US 2009/0208577 中描 述，通過(guò)合并將其全文公開的內(nèi)容合并入本文。另外，適用于本文所述方法的生物打印機(jī)是 可商購(gòu)的，例如 Envisiontec GmbH(Gladbeck,德國(guó)）的 3D_BioplotterTM;和 Organovo (San Diego, CA)的 NovoGen MMX Bioprinter?。
[0041] 本文所述方法中使用的生物打印機(jī)可以通過(guò)改變例如打印機(jī)驅(qū)動(dòng)軟件和/或 打印機(jī)的物理組成，從而包括能夠控制溫度、濕度、剪切力、打印速度、和/或噴墨頻率 (firing frequency)的機(jī)構(gòu)和/或軟件。在某些實(shí)施方式中，優(yōu)選可以構(gòu)建和/或設(shè)定生 物打印機(jī)軟件和/或硬件，以在打印過(guò)程中保持細(xì)胞溫度為大約37°C。
[0042] 在某些實(shí)施方式中，噴墨打印裝置可以包括二維或三維打印機(jī)。在某些實(shí)施方式 中，在打印，例如與噴墨閥連接之前，生物打印機(jī)包括直流電磁噴墨閥，包含一種或多種類 型的細(xì)胞，例如可流動(dòng)組合物中的細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)容器，和/或ECM(例如可流動(dòng)ECM)。 生物打印機(jī)可以具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個(gè)或更多個(gè)容器，例如每一種細(xì)胞類型或每 一種ECM使用一個(gè)容器，用于構(gòu)建本文所述的組織和器官?？梢酝ㄟ^(guò)氣壓、機(jī)械壓力、或通 過(guò)其他方式將細(xì)胞從容器遞送至噴墨閥。典型地，生物打印機(jī)（例如生物打印機(jī)中的打印 頭）是計(jì)算機(jī)控制的，以使得一種或多種細(xì)胞類型，和所述ECM以預(yù)定的模式進(jìn)行沉積。所 述預(yù)定的模式可以是這樣的模式，其在作為細(xì)胞來(lái)源的或用于獲得細(xì)胞的器官或組織中再 造或重演所述一種或多種類型的細(xì)胞的天然排列，或者是這樣的模式，其不同于所述一種 或多種類型的細(xì)胞的天然排列。
[0043] 在某些實(shí)施方式中，本文提供的方法中使用的生物打印機(jī)可以是熱泡噴墨打印 機(jī)，參見(jiàn)，例如Niklasen等的US 6, 537, 567,或者壓電晶體振動(dòng)打印頭，例如，使用高達(dá) 30kHz的頻率和12-100瓦特的動(dòng)力源。生物打印機(jī)打印頭噴嘴，在一些實(shí)施方式中，各自 獨(dú)立地直徑在0. 05-200微米之間，或者直徑在0. 5-100微米之間，或者直徑在10-70微米 之間，或者直徑在20-60微米之間。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，噴嘴各自獨(dú)立地直徑為大約 40-50微米?？梢允褂镁哂邢嗤虿煌睆降亩鄠€(gè)噴嘴。在一些實(shí)施方式中，噴嘴具有圓形 開口；在其他實(shí)施方式中，可以使用其他適當(dāng)?shù)男螤睿鐧E圓形、正方形、長(zhǎng)方形等等，而 不背離本發(fā)明的精神。
[0044] 在某些實(shí)施方式中，根據(jù)本文所述的方法使用的生物打印機(jī)包括多個(gè)打印頭和/ 或多個(gè)打印噴嘴，其中所述多個(gè)打印頭或打印噴嘴可以，在某些實(shí)施方式中，被單獨(dú)控制。 在某些實(shí)施方式中，每一個(gè)所述的打印頭或打印噴嘴與其余的所述打印頭或打印噴嘴獨(dú)立 操作。在某些實(shí)施方式中，至少一個(gè)所述的多個(gè)打印頭或多個(gè)打印噴嘴可以打印包含細(xì)胞 的組合物，并且至少一個(gè)所述的多個(gè)打印頭或多個(gè)打印噴嘴可以打印包含ECM的組合物。 在某些實(shí)施方式中，至少一個(gè)所述的多個(gè)打印頭或多個(gè)打印噴嘴可以打印包含細(xì)胞的組合 物，至少一個(gè)所述的多個(gè)打印頭或多個(gè)打印噴嘴可以打印包含ECM的組合物，并且至少一 個(gè)所述的多個(gè)打印頭或多個(gè)打印噴嘴可以打印包含附加組分的組合物。
[0045] 在某些實(shí)施方式中，可以改變根據(jù)本文所述的方法使用的生物打印機(jī)的一個(gè)或多 個(gè)打印頭或打印噴嘴以使得它適合于在特定的表面上打印。例如可以通過(guò)將其與特定的手 術(shù)器械，例如腹腔鏡連接來(lái)改變打印頭或打印噴嘴。根據(jù)這樣的實(shí)施方式，可以為手術(shù)器械 提供一個(gè)或多個(gè)有助于打印程序的其他部件，例如照相機(jī)。
[0046] 在某些實(shí)施方式中，可以使用軟件，例如計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)（CAD)軟件程序來(lái)構(gòu)建 要打印的組織或器官的解剖圖像。根據(jù)這樣的實(shí)施方式，可以生成允許在代表要打印的組 織或器官的結(jié)構(gòu)的三維表面上進(jìn)行三維打印的程序。例如，如果希望在骨上打印，可以構(gòu)建 骨的解剖圖像并生成指導(dǎo)生物打印機(jī)的打印頭在打印過(guò)程中圍繞受試者表面內(nèi)部的三維 骨旋轉(zhuǎn)的程序。
[0047] 在某些實(shí)施方式中，在所述受試者的體內(nèi)或體表掃描要打印的組織或器官的表面 以形成表面地圖（surface map)，并且用所述表面地圖指導(dǎo)要打印的細(xì)胞、ECM、和/或任何 附加組分的沉積。這種掃描可以包括，但不限于使用激光、電子束、磁共振成像、微波、或計(jì) 算機(jī)斷層掃描。所述表面的掃描可以包含至少1〇〇〇、1〇、1〇、1、或〇.1微米的分辨率。
[0048] 在某些實(shí)施方式中，本文提供的生物打印方法包括將細(xì)胞（例如包含單一細(xì)胞的 組合物或包含多種細(xì)胞的組合物）和可流動(dòng)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的單個(gè)液滴遞送/沉積到受 試者體內(nèi)或體表的表面上。
[0049] 在某些實(shí)施方式中，本文提供的生物打印方法包括將單一細(xì)胞類型和可流動(dòng)ECM 沉積在受試者體內(nèi)或體表。根據(jù)這種方法可以使用的示例性細(xì)胞類型在下述4. I. 1節(jié)中提 供。ECM，包括可流動(dòng)ECM在下述4. 1.3節(jié)中描述。
[0050] 在其他實(shí)施方式中，本文提供的生物打印方法包括將多種（例如兩種、三種、四 種、五種或更多種）細(xì)胞類型和可流動(dòng)ECM沉積在受試者體內(nèi)或體表。在某些實(shí)施方式中， 多種細(xì)胞類型作為同一個(gè)組合物的部分進(jìn)行沉積，即細(xì)胞來(lái)源是包含多種細(xì)胞類型的單一 組合物。在另一種【具體實(shí)施方式】中，多種細(xì)胞類型作為不同的組合物的部分進(jìn)行沉積，即細(xì) 胞來(lái)源是包含多種細(xì)胞類型的不同組合物。在另一種【具體實(shí)施方式】中，多種細(xì)胞類型的一 部分作為一個(gè)組合物的部分進(jìn)行沉積（例如兩個(gè)或更多種細(xì)胞類型在單一組合物中），并 且多種細(xì)胞類型的另一部分作為不同的組合物進(jìn)行沉積（例如一種或多種細(xì)胞類型在單 一組合物中）。根據(jù)這種方法可使用的示例性細(xì)胞類型在下述4. 1. 2節(jié)中提供。
[0051] 在某些實(shí)施方式中，要沉積的細(xì)胞和可流動(dòng)ECM在受試者體內(nèi)或體表的表面上作 為同一個(gè)組合物的部分一起（即同時(shí)）沉積。在另一種【具體實(shí)施方式】中，要沉積的細(xì)胞和 可流動(dòng)ECM在受試者體內(nèi)或體表的表面上作為不同的組合物的部分一起沉積。在另一種具 體實(shí)施方式中，要沉積的細(xì)胞和可流動(dòng)ECM在受試者體內(nèi)或體表的表面上分別（即在不同 時(shí)間）沉積。
[0052] 在某些實(shí)施方式中，將細(xì)胞和可流動(dòng)ECM與一種或多種附加組分沉積在受試者體 內(nèi)或體表的表面上。在一種實(shí)施方式中，將一種或多種附加組分與細(xì)胞配制在同一個(gè)組合 物中。在另一種實(shí)施方式中，將一種或多種附加組分與ECM配制在同一個(gè)組合物中。在另 一種實(shí)施方式中，將一種或多種附加組分與細(xì)胞和ECM配制在同一個(gè)組合物中（即一個(gè)組 合物包含細(xì)胞、可流動(dòng)ECM、和一種或多種附加組分）。在另一種實(shí)施方式中，將一種或多種 附加組分配制在與包含細(xì)胞和/或ECM的組合物不同的組合物中，并且在受試者體內(nèi)或體 表的表面上與細(xì)胞和/或ECM同時(shí)、在其之前、或在其之后沉積。在某些實(shí)施方式中，一種 或多種附加組分促進(jìn)細(xì)胞的生存