中藥組合物在制備抗皰疹病毒藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及中藥組合物的新用途，尤其涉及中藥組合物在制備抗皰瘆病毒藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]HSV-U HSV-2屬于皰瘆科病毒，HSV-1和HSV-2不僅引起口唇或生殖粘膜皰瘆，同時也是引起腦炎、肝炎、全身嚴(yán)重感染甚至宮內(nèi)感染的重要病原。目前市場缺乏有效安全的治療方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提出一種中藥組合物在制備抗皰瘆病毒藥物中的應(yīng)用。從藥理實驗看出，這種中藥組合物有較好的抗皰瘆病毒的作用。
[0004]本發(fā)明首次公開中藥組合物在制備抗皰瘆病毒方面的藥理作用，所述中藥組合物由如下重量份數(shù)的原料制備得到:古羊藤15份、野酒花10份、紫梢花20份、川層草12份、旱田草18份。
[0005]所述中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
[0006]濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時相對密度為1.30。噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)溫度為120°C，出風(fēng)溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為10ml/s。
[0007]經(jīng)實驗證明，中藥組合物對HSV-1、HSV-2有顯著的抑制作用:抑制HSV-1、HSV-2在 HEK293 細(xì)胞出現(xiàn) CPE 效應(yīng)(Cytopathic Effect，CPE)，IC50 為 2-8.54、2-7.93，TI 分別為442.62,297.51。
[0008]古羊藤為蘿藤科馬連鞍屬植物馬連鞍Streptoculon griffithii Hook.f.以根入藥。全年可采，鮮用或曬干用。清熱解毒，散淤止痛。用于感冒發(fā)燒，腸炎，痢疾，胃痛，跌打腫痛，毒蛇咬傷。
[0009]野酒花，拉丁名為Humulus lupulus L.Var.Cordifolius (Miq.) Maxim.，為?？浦参锶A忽布的花。味苦，性平。入心、肺、胃經(jīng)。健胃，鎮(zhèn)靜，抗結(jié)核。治消化不良，不思飲食，癔病，失眠證，結(jié)核病。
[0010]紫梢花為淡水海綿科動物脆針海綿的干燥群體。補(bǔ)腎，益精，助陽。用于陽瘺遺精，小便失禁，白帶。
[0011]川層草為中國蕨科植物毛軸碎米蕨的全草。拉丁名為Pteris multifda poir，性味微苦；寒；無毒，治痢疾，小便痛，腳軟無力，身疼發(fā)熱，喉痛，蛇咬傷，癰癤腫疬。
[0012]旱田草，拉丁名為Lindernia ruell1ides (Colsm) Pennell.，玄參科母草屬一年生草本，高10-15cm。莖柔弱，少直立，多分枝而長蔓，節(jié)上生根，近無毛。葉對生；柄長3-20mm，基部多少抱莖；葉片長圓形、橢圓表、卵狀長圓形或圓形，長l_4cm，寬0.6_2cm，先端圓鈍或急尖，基部寬楔形，邊緣明顯的急尖細(xì)鋸齒，無芒刺，兩面被粗澀的短毛。總狀花序頂生，花2-10朵；苞片披針狀條形；花梗短，向頂端漸粗而連于萼，無毛；花萼5深裂，裂片線狀披針形，無毛；花冠紫紅色，花冠管圓柱狀，上唇直立2裂，下唇擴(kuò)展，3裂，裂片幾相等；雄蕊4，前方2枚不育，后方2枚能育，無附屬物；花柱有寬而扁的柱頭。蒴果圓柱形，長1.5-2cm，比宿萼長約2倍。種子橢圓形，褐色?；ㄆ?-9，果期7-11月。理氣活血，消腫止痛。用于閉經(jīng)，痛經(jīng)，胃痛，乳腺炎，頸淋巴結(jié)結(jié)核；外用治跌打損傷，癰腫疼痛，蛇咬傷，狂犬咬傷。本發(fā)明以全草入藥。
[0013]本發(fā)明涉及的中藥組合物在制備治療皰瘆病毒(HSV-1、HSV-2)藥物中的用途屬于首次公開，由于中藥組合物成分的復(fù)雜性，而且其對于皰瘆病毒(HSV-1、HSV-2)抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他中藥給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于皰瘆病毒(HSV-l、HSV-2)的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0015]實施例1:取古羊藤15g、野酒花10g、紫梢花20g、川層草12g、旱田草18g，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒，濃縮條件為:0.07MPa、60-70°C下減壓濃縮至65°C時相對密度為1.30。噴霧干燥條件為:進(jìn)風(fēng)溫度為120°C，出風(fēng)溫度為80°C，物料溫度為90°C，霧化壓力為0.4兆帕，噴霧速度為lOml/s。
[0016]實施例2:本發(fā)明中藥組合物對皰瘆病毒(HSV-l、HSV-2)的作用研宄
[0017](I)按照上述實施例1的方法制備本發(fā)明中藥組合物作為試驗藥品。
[0018](2)細(xì)胞株與病毒株:人胚腎細(xì)胞(HEK293，HSV-1, HSV-2病毒敏感細(xì)胞)購自美國Clontech公司；皰瘆病毒(HSV-1、HSV-2) Long株引自中國CDC病毒病研宄所。
[0019](3)細(xì)胞毒性測定:
[0020]參照文獻(xiàn)(汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對皰瘆病毒抑制作用的實驗研宄，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008 ;24(1):25-27)的方法，將樣品以2倍比做系列稀釋(2°_5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上，每孔lOOuL，每稀釋度縱向重復(fù)3孔(A、B、C行)，平行設(shè)微孔板D的1-6孔為細(xì)胞對照，7-12孔不接種細(xì)胞為空白對照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7d，中性紅染色，在540nm波長測定OD值，將實驗組與細(xì)胞對照組OD值相比計算細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計算藥物半數(shù)細(xì)胞中毒濃度(TD5tl)。
[0021]⑷抑毒試驗:
[0022]參照文獻(xiàn)(汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對皰瘆病毒抑制作用的實驗研宄，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008 ；24(1):25-27)的方法，將樣品按稀釋順序(2_2_13)橫向接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔100uL，每稀釋度縱向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行加含100個TCID5tl的病毒10uL作為試驗組，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物對照，平行設(shè)F行作為病毒對照，E行的1-12作為細(xì)胞對照。37°C、5% CO2培養(yǎng)，每日觀察CPE，連續(xù)觀察4d。病毒對照出現(xiàn)90 %以上CPE時，加I %中性紅染色，用酶標(biāo)儀在波長540nm波長讀取A值，各組A值去除病毒對照組A值，將各試驗組與細(xì)胞對照組A值相比，獲得細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計算半數(shù)抑毒濃度(IC5tl)，最終將TD5tl和IC 5(|相比獲得抑毒指數(shù)(TI)ο
[0023](5)結(jié)果:
[0024]①樣品TD5tl的測定:對照組細(xì)胞顯微鏡下觀察貼壁生長致密、形態(tài)良好。本發(fā)明中藥組合物對HEK293的TD5tl為2 _6.25ο
[0025]②抑毒實驗:對照組細(xì)胞貼壁致密、形態(tài)良好。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，HSV-U HSV-2病毒對照組在第2d出現(xiàn)90%以上的CPE，HSV-l、HSV-2在HEK293CPE以折光性增強(qiáng)、變圓、脫落、破碎為主要特征。而抑毒試驗各組細(xì)胞，按照樣品稀釋梯度，梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE:
[0026]HSV-U HSV-2-HEK293試驗組細(xì)胞在第9稀釋度之前，細(xì)胞完全被保護(hù)，之后出現(xiàn)CPE, CPE隨樣品濃度減少逐漸加重。
[0027]將上述實驗板用I %中性紅染色、用酶標(biāo)儀測450nmA值，各組A值減掉病毒對照組A值后，各實驗組A值與細(xì)胞對照組A值相比獲得IC5Q，IC5tl與TD 5Q相比獲得T1:抑制HSV-1、HSV-2 在 HEK293 細(xì)胞發(fā)生 CPE, IC50 為 2-8.54、2-7.93，TI 分別為 442.62,297.51。
[0028]結(jié)論！Aspeverin具有顯著的抗副粘科病毒皰瘆病毒HSV-1、HSV-2的作用，可以用來制備抗副粘科病毒皰瘆病毒HSV-1、HSV-2藥物。
【主權(quán)項】
1.一種中藥組合物在抗皰瘆病毒藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份數(shù)的原料制備得到:古羊藤15份、野酒花10份、紫梢花20份、川層草12份、旱田草18份。
2.如權(quán)利要求1所述中藥組合物在抗皰瘆病毒藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物的制備方法為:取上述中藥，加水煎煮2次，第一次加水量為藥材重量的10倍量，煎煮2小時，第二次加水量為藥材重量的8倍量，煎煮I小時，合并煎液，濃縮，干燥，粉碎得中藥組合物顆粒。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中藥組合物在制備抗皰疹病毒藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實驗證明，本發(fā)明中藥組合物對皰疹病毒HSV-1、HSV-2有顯著的抑制作用，本發(fā)明為中藥組合物臨床用于治療皰疹病毒HSV-1、HSV-2感染性疾病提供實驗依據(jù)，對研制抗皰疹病毒HSV-1、HSV-2的藥物提供了一定的指導(dǎo)意義，具有重要的參考價值。
【IPC分類】A61K36-80, A61K35-655, A61P31-22
【公開號】CN104758435
【申請?zhí)枴緾N201510222368
【發(fā)明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年5月5日