2h、 2. 3h、2. 4h、2. 5h、2. 6h、2. 7h、2. 8h、2. 9h 或 3h，優(yōu)選為 2h。
[0022] 優(yōu)選地，所述超聲波提取的條件為：溫度25~35°C，例如可以是25°C、26°C、27°C、 28 °C、29 °C、30 °C、31°C、32 °C、33 °C、34 °C 或 35 °C，優(yōu)選為 30 °C ;功率 1，000 ~1，500W，例如 可以是 1，000W、1，050W、1，100W、1，150W、1，200W、1，250W、1，300W、1，350W、1，400W、1，450W 或1，500W，優(yōu)選為1，200W ;循環(huán)攪拌轉(zhuǎn)速為800~1，500rpm，例如可以是800rpm、900rpm、 1，OOOrpm、1，lOOrpm、1，200rpm、1，300rpm、1，400rpm 或 1，500rpm，優(yōu)選為 1，OOOrpm ;占空比 為 I :(1 ~3)，例如可以是 I :1、I :1. 2、I :1. 4、I :1. 6、I :1. 8、I :2、I :2. 2、I :2. 4、I :2. 6、I : 2. 8或1 :3,優(yōu)選為1 :1 ;提取時(shí)間為1.0~2. 5h，例如可以是1.0h、l. lh、1.2h、1.3h、1.4h、 I. 5h、l. 6h、l. 7h、l. 8h、l. 9h、2. 0h、2. lh、2. 2h、2. 3h、2. 4h 或 2. 5h，優(yōu)選為 2h。
[0023] 優(yōu)選地，所述微波提取的方式為：在微波提取儀中進(jìn)行提取，功率為1，000~ 1，500W，例如可以是 1，000W、1，050W、1，100W、1，150W、1，200W、1，250W、1，300W、1，350W、 1，400W、1，450W或1，500W，優(yōu)選為1，200W ;提取時(shí)間為1~2h，例如可以是lh、l. lh、l. 2h、 I. 3h、I. 4h、I. 5h、I. 6h、I. 7h、I. 8h、I. 9h 或 2h，優(yōu)選為 I. 5h。
[0024] 優(yōu)選地，步驟（2)所述濃縮的方法為真空減壓濃縮和/或膜濃縮。
[0025] 其中，步驟（2)所述固液分離可以以各種形式進(jìn)行，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可根據(jù)經(jīng) 驗(yàn)進(jìn)行選擇；典型但非限制性地，本發(fā)明采用的方式是離心。
[0026] 優(yōu)選地，所述溶液B的體積為溶液A體積的5~20%，例如可以是5%、6%、7%、 8 %、9 %、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19 % 或 20%，優(yōu)選為 10%。 如果濃縮的濃度過(guò)高，會(huì)有不溶的顆粒出現(xiàn)，影響后續(xù)的提取；如果濃縮的濃度過(guò)低，會(huì)造 成層析柱利用不充分，還會(huì)造成上層析柱的液體量增大，樹(shù)脂和能量的消耗都會(huì)增大。
[0027] 優(yōu)選地，步驟（3)所述葡聚糖凝膠層析柱的葡聚糖凝膠樹(shù)脂為DEAE Sephadex A 系列，例如可以是 DEAE Sephadex A 50 或 DEAE Sephadex A 25,優(yōu)選為 DEAE Sephadex A 25〇
[0028] 優(yōu)選地，步驟（3)所述葡聚糖凝膠層析柱的葡聚糖凝膠樹(shù)脂上柱后的直徑與其高 度比為 1 : (8 ~20)，例如可以是 1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、 1:18、1:19或1:20,優(yōu)選為1 :10。一般來(lái)講，這一比值越大，分離的效果越好；但是如果比 值過(guò)大，會(huì)造成樹(shù)脂下層和上層的顆粒度不均一，影響層析的效果。
[0029] 優(yōu)選地，步驟（3)所述酶解反應(yīng)的溫度為30~40°C，例如可以是30°C、31°C、 32 °C、33 °C、34°C、35 °C、36 °C、37 °C、38 °C、39 °C 或 40 °C，優(yōu)選為 34 ~36 °C，更優(yōu)選為 35 °C。 該范圍為酶解反應(yīng)的最佳活性范圍，一般來(lái)講，酶的活性會(huì)隨著溫度的升高而提高，但當(dāng)酶 活性達(dá)到最高后會(huì)隨溫度的繼續(xù)升高而下降；如果反應(yīng)溫度低于30°C，反應(yīng)速度過(guò)慢；如 果反應(yīng)溫度高于40°C，蛋白質(zhì)會(huì)變性，酶失活，酶解反應(yīng)無(wú)法進(jìn)行。
[0030] 優(yōu)選地，步驟（3)所述酶解反應(yīng)的時(shí)間為10~20h，例如可以是10h、llh、12h、 13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h或20h，優(yōu)選為15~16h，更優(yōu)選為16h。如果酶解反應(yīng)的 時(shí)間低于l〇h，會(huì)造成反應(yīng)不徹底；到20h左右，酶解反應(yīng)已經(jīng)基本完成。
[0031] 酶解反應(yīng)的目的是使具有抑制a -葡萄糖苷酶活性功能的部分結(jié)構(gòu)從層析柱上 通過(guò)化學(xué)鍵斷裂而分離下來(lái)，再用超純水洗脫，此部分即存在于洗脫液中。
[0032] 優(yōu)選地，步驟（3)所述洗脫液的體積為葡聚糖凝膠層析柱體積的2~6倍，例如可 以是2倍、2. 5倍、3倍、3. 5倍、4倍、4. 5倍、5倍、5. 5倍或6倍，優(yōu)選為3倍。在層析柱純化 的過(guò)程中，隨著洗脫液的增加，所需要的物質(zhì)就會(huì)被洗脫出來(lái)；如果洗脫液的體積過(guò)小，會(huì) 在層析柱上殘留活性物質(zhì)，造成浪費(fèi)和提取效率過(guò)低；經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，可以確定本發(fā)明限定 的洗脫體積基本可以把所有需要的物質(zhì)從層析柱上洗脫下來(lái)；如果洗脫液的體積過(guò)大，就 會(huì)有更多的洗脫液，給后期的干燥帶來(lái)更大的液體量，浪費(fèi)不必要的時(shí)間和能耗。
[0033] 優(yōu)選地，步驟（4)所述濃縮的方法為真空減壓濃縮或膜濃縮。
[0034] 優(yōu)選地，步驟（4)所述干燥的方法為冷凍干燥、真空干燥或噴霧干燥中的任意一 種或至少兩種的組合，例如可以是冷凍干燥，真空干燥，噴霧干燥和冷凍干燥，或冷凍干燥、 真空干燥和噴霧干燥的結(jié)合。目前在植物提取后續(xù)干燥工藝中主要使用的就是這三種干 燥；真空干燥和冷凍干燥都是溫度相對(duì)柔和的干燥方式，活性物質(zhì)失活程度相對(duì)比較低； 噴霧干燥是最快的干燥方法，雖然干燥過(guò)程中溫度相對(duì)比較高，會(huì)造成活性物質(zhì)失活，但是 速度比較快；如果直接用烘箱干燥，物質(zhì)會(huì)聚集在一起，而且是一大塊，后續(xù)還需要粉碎。
[0035] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的制備方法包括如下步驟：
[0036] (1)將瑪咖原料粉碎至粉末狀投入水和/或醇溶液，然后提取液體部分，得到溶液 A ;所述瑪咖原料為鮮瑪咖根、鮮瑪咖葉、干燥瑪咖根或干燥瑪咖葉中的任意一種或至少兩 種的混合物；所述粉末狀瑪咖的粒徑為20~60目，優(yōu)選為40目；所述粉末狀瑪咖與水和/ 或醇溶液的體積比為1 : (5~20)，優(yōu)選為1:10 ;所述醇為甲醇、乙醇或丙醇中的任意一種 或至少兩種的混合物，優(yōu)選為乙醇；所述醇溶液中醇的體積分?jǐn)?shù)為1~70%，優(yōu)選為50~ 70% ;所述提取的方法為熱水提取、超聲波提取或微波提取中的任意一種或至少兩種的組 合；
[0037] (2)將溶液A進(jìn)行固液分離后，取上清液進(jìn)行濃縮，得到溶液B ;所述濃縮的方法為 旋蒸濃縮、真空減壓濃縮或膜濃縮中的一種或至少兩種的組合；所述溶液B的體積為溶液A 體積的5~20%，優(yōu)選為10% ;
[0038] (3)將溶液B過(guò)葡聚糖凝膠層析柱，然后將硫酸酯酶和/或黑芥子酶加入葡聚糖凝 膠層析柱進(jìn)行酶解反應(yīng)，用超純水進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；所述葡聚糖凝膠層析柱的葡聚糖 凝膠樹(shù)脂為DEAE Sephadex A系列，優(yōu)選為DEAE Sephadex A 25;所述葡聚糖凝膠層析柱 的葡聚糖凝膠樹(shù)脂上柱后的直徑與其高度比為1 : (8~20)，優(yōu)選為1 :10 ;所述酶解反應(yīng)的 溫度為30~40°C，優(yōu)選為34~36°C，更優(yōu)選為35°C;所述酶解反應(yīng)的時(shí)間為10~20h，優(yōu) 選為15~16h，更優(yōu)選為16h ;所述洗脫液的體積為葡聚糖凝膠層析柱體積的2~6倍，優(yōu) 選為3倍；
[0039] (4)將洗脫液進(jìn)行濃縮和干燥，制備完成；所述濃縮的方法為旋蒸濃縮、真空減壓 濃縮或膜濃縮中的一種或至少兩種的組合；所述干燥的方法為冷凍干燥、真空干燥或噴霧 干燥中的任意一種或至少兩種的混合。
[0040] 第三方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第一方面所述的a -葡萄糖苷酶活性抑制劑在制 備治療和/或預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥的食品和/或藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的抑制劑可以與 輔料混合，形成各種形式的丸劑、散劑、片劑、膏劑、粉劑、水劑、顆粒劑、膠囊及注射劑等藥 物；食品可以是液體，例如可以是清涼飲料和碳酸飲料等。
[0041] 第四方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第一方面所述的a -葡萄糖苷酶活性抑制劑在作 為降血糖食品的添加劑中的應(yīng)用，例如可以加入到面食類、果凍、冰淇淋、腌制品及點(diǎn)心等 中。
[0042] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明至少具有以下有益效果：
[0043] 本發(fā)明為治療糖尿病開(kāi)辟了一種新的原料，以來(lái)源廣泛、無(wú)毒副作用且營(yíng)養(yǎng)豐富 的瑪咖植物為原料，將瑪咖經(jīng)粉碎、提取、固液分離、濃縮、過(guò)葡聚糖凝膠層析柱、酶解反應(yīng)、 洗脫、濃縮和干燥而制成，所得提取物經(jīng)過(guò)a -葡萄糖苷酶活性抑制實(shí)驗(yàn)證明，具有顯著的 抑制a-葡萄糖苷酶活性的作用，抑制率普遍在50%以上。本發(fā)明的a-葡萄糖苷酶活性 抑制劑無(wú)毒副作用、安全性高且成本廉價(jià)