甲烷-乙醇(10:1)洗脫部分經(jīng)C18反相ODS色譜分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫)，收集35%的甲醇洗脫部位，經(jīng)葡聚糖凝膠S印hadexLH-20分離(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脫；洗脫液流速lml/min)，收集50%甲醇洗脫餾分，回收溶劑后，溶解于乙醇溶液中，一 4°C重結(jié)晶得化合物延胡索丁素109mg ；
實施例4延胡索總生物堿片劑的制備
處方:延胡索總生物堿0.5g，淀粉150g，糊精100g，硫酸鈣200g，硬脂酸鎂2g。
[0032]制法:取延胡索總生物堿，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0033]實施例5 延胡索丁素片劑的制備
處方:延胡索丁素20mg，淀粉150g，糊精100g，硫酸鈣200g，硬脂酸鎂2g。
[0034]制法:取延胡索丁素，加淀粉、糊精、硫酸鈣，硬脂酸鎂，混合均勻，制成顆粒，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0035]
實施例6延胡索總生物堿、延胡索丁素對膽結(jié)石的作用
C57BL / 6小鼠，雄性，10周齡。分籠飼養(yǎng)，控制光照12h (06:00AM 一 18:00PM)，
普通飼料飼養(yǎng)2周后，隨機(jī)分為組(每組各10只)。
[0036]對照組:每日喂普通顆粒飼料，同時給予等量空白液灌胃；
結(jié)石組:每日喂飼15%脂肪、1%膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予等量空白液灌胃；陽性藥組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予消炎利膽片50mg / kg 灌胃。
[0037]延胡索總生物堿組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予延胡索總生物堿50mg / kg灌胃。
[0038]延胡索丁素組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予延胡索丁素5mg / kg灌胃。
[0039]持續(xù)四周，實驗前，動物禁食12h，3%戊巴比妥(35mg / kg)麻醉，剖腹，結(jié)扎膽囊管，迅速取肝組織置液氮中冷凍，一 80°C冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br>[0040]摘取膽囊，觀察成石情況，抽取膽汁，觀察結(jié)晶形成，剩余膽汁經(jīng)lOOOOr/min高速離心 30min 后，加 I % (v / v) I mmol / L苯甲基橫酸氟(Phenylmethylsulfonylfluoride,PMSF)和0.02%疊氮鈉使其在膽汁中的終濃度為2% (V / V)，保存于一 20°C備用。
[0041]膽脂測定:膽汁中的總膽固醇、磷脂、膽汁酸應(yīng)用全自動生化分析儀上測定。膽固醇飽和指數(shù)(Cholesterol saturat1n index, CSI)通過 Carey 表計算。
[0042]結(jié)石觀測:結(jié)石判斷標(biāo)準(zhǔn):肉眼觀察膽汁內(nèi)成形粗大顆粒，光鏡見致密大團(tuán)塊膽固醇結(jié)晶。結(jié)石成分用紅外光譜分光光度計定性。
[0043]統(tǒng)計分析:采用SPSS統(tǒng)計程序，做成組t檢驗，P〈0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0044]結(jié)果
成石情況
結(jié)石組8 / 10出現(xiàn)膽囊結(jié)石，10 / 10出現(xiàn)膽固醇結(jié)晶，
延胡索總生物堿、延胡索丁素組和陽性藥組無結(jié)石和結(jié)晶。
[0045]溴化鉀壓片紅外光譜結(jié)果顯示，在波長2856.6,2927.8,3383.2 CM-1、到膽固醇特征吸收峰，證實為膽固醇結(jié)石，沒有見到膽色素吸收峰。
[0046]膽脂水平
顯示，結(jié)石組CSI>1，為膽固醇過飽和膽汁，對照組CSK1，膽汁酸和磷脂的含量變化差異不大，與結(jié)石組相比，延胡索總生物堿、延胡索丁素組的膽汁中總膽固醇及CSI均明顯低于結(jié)石組(P〈0.05)。
[0047]TC:總膽固醇(mmol/L) ;PL:磷月旨(mmol/L) ;BS:膽汁酸(mmol/L) ;TL:總脂(g/dL) ；CS1:膽固醇飽和指數(shù)
組別，TC，PL,BS,TL,CSI
空白組，4.12±0.15， 19.58±4.71， 52.36±11.14， 5.03±0.65， 0.67±0.08 膽石組，15.36±0.97，55.3±3.16， 91.25±12.36， 8.91±0.27， 1.73±0.65 陽性藥組，7.56±0.17， 35.7±2.18， 78.4± 11.56，8.29±0.53， 0.98±0.28 延胡索總生物堿，9.24±0.83,26.1±4.15,65.2±10.13，7.21±0.14,0.85±0.14 延胡索丁素，6.61±0.42，23.7±3.41， 61.3±12.12， 7.13±0.51， 0.76±0.23
實施例7延胡索總生物堿、延胡索丁素對對醋酸刺激膽結(jié)石小鼠疼痛的作用 C57BL / 6小鼠，雄性，10周齡。分籠飼養(yǎng)，控制光照12h (06:00AM 一 18:00PM)， 普通飼料飼養(yǎng)2周后，隨機(jī)分為組(每組各10只)。
[0048]對照組:每日喂普通顆粒飼料，同時給予等量空白液灌胃；
結(jié)石組:每日喂飼15%脂肪、1%膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予等量空白液灌胃；陽性藥組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予消炎利膽片50mg / kg 灌胃。
[0049]延胡索總生物堿組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予延胡索總生物堿50mg / kg灌胃。
[0050]延胡索丁素組:每日喂飼15%脂肪、I %膽固醇、0.5%膽酸飼料，同時給予延胡索丁素5mg / kg灌胃。
[0051]持續(xù)四周，實驗前，動物禁食12h，各小鼠均腹腔注射0.6%醋酸溶液1ml / kg。觀察注射15min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，以腹部內(nèi)凹、軀干與后腿伸張為觀察指標(biāo)。
[0052]組別，扭體反應(yīng)次數(shù)空白組， 10.5±8.4 膽石組， 28.7±10.5 陽性藥組， 27.5 ±9.8 延胡索總生物堿， 21.4±7.3 延胡索丁素， 17.8±9.2
與空白組比較，延胡索總生物堿及延胡索丁素組15min都能明顯降低小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，差異有顯著性意義
實施例8薄層色譜法:
吸附劑:硅膠G薄層預(yù)制板(青島)；
展開劑:乙酸乙酯-異丙醇-乙醇-氨水(10: 4: 5: 3: 1)，
實施例2樣品I μ L點板，
展開溫度室溫，展開前預(yù)飽和15min,展距1cm,
取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。
[0053]6.1cm僅出現(xiàn)唯一的斑點。
[0054]實施例9高效液相色譜法:
色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；島津液相儀流動相為乙腈-1 %乙酸水溶液(20: 80體積比)，等度洗脫；
流速1.0mL/min ;柱溫30°C ;檢測波長280nm。
[0055]在上述條件下，分別吸取去實施例2樣品(流動相溶液)10 μ L，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，
該圖譜中I個色譜峰，出峰時間19.34分鐘，峰面積639867.24AU。
【主權(quán)項】
1.玄胡索的新用途，玄胡索在制備治療膽結(jié)石藥物中的應(yīng)用。
2.延胡索總生物堿在制備治療膽結(jié)石藥物中的應(yīng)用。
3.延胡索總生物堿的制藥用途，延胡索總生物堿在制備抗膽結(jié)石疼痛藥物中的應(yīng)用。
4.一種延胡索總生物堿的制藥用途，所述的延胡索丁素來源于延胡索總生物堿。
5.一種延胡索總生物堿的制藥用途，取延胡索生藥，加入鹽酸溶液加熱提取，合并提取液，過濾，減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH值至堿性，繼而用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層，回收溶劑至干，精制，得延胡索丁素。
6.一種延胡索總生物堿的制藥用途，是由有效量的延胡索丁素為活性成分，加上藥學(xué)上課接受的輔料或輔助性成分制備成常用的藥物制劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了玄胡索治療膽結(jié)石的用途。
【IPC分類】A61P29-00, A61K36-66, A61P1-16
【公開號】CN104644762
【申請?zhí)枴緾N201510035016
【發(fā)明人】汪甬娜
【申請人】汪甬娜
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年1月25日