一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜的制備方法及其產(chǎn)品的制作方法
【專利說明】一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜的制備方法及其產(chǎn)口叩
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種制備含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜的方法以及通過所述方法獲得的含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜產(chǎn)品。特別地，本發(fā)明涉及采用自體脂肪來源的脂肪干細(xì)胞和自體外周血來源的富含血小板的血漿，加入到瓊脂糖中形成半凝膠狀面膜，同時還可以添加營養(yǎng)因子，以及通過所述方法獲得的個性化生物美容面膜產(chǎn)品。本發(fā)明的生物美容面膜可用于醫(yī)學(xué)美容，對皮膚具有祛皺、粉刺瘢痕與疤痕修復(fù)、除斑以及抗氧化等作用。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，各種面膜產(chǎn)品已經(jīng)在市場上得到普遍的使用，其中絕大多數(shù)面膜通過由無紡布、水晶布和生物纖維等，添加一些植物提取精華素或者其他深海營養(yǎng)物質(zhì)制備成的美容面膜產(chǎn)品。市場上也有通過化學(xué)試劑制備成的水凝膠面膜，同時也添加一些植物提取精華素或者其他深海營養(yǎng)物質(zhì)，對皮膚起到保濕、美白和控油等作用。但盡管這些面膜含有一些營養(yǎng)物質(zhì)，但因其保存方式和時間等問題，在皮膚修復(fù)、祛皺和除斑等方面還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足。
[0003]近年來，應(yīng)用活細(xì)胞進(jìn)行美容成為市場上追捧的熱點，特別是干細(xì)胞的使用，通過在皺紋、瘢痕和疤痕上直接注射，使得活細(xì)胞能在皮膚中分化生長，對皮膚起著填充和修復(fù)功能。這些應(yīng)用活細(xì)胞多數(shù)來源同源異體的，進(jìn)入機(jī)體內(nèi)自身免疫系統(tǒng)將對其產(chǎn)生免疫排斥作用，產(chǎn)生的美容效果是較低。脂肪干細(xì)胞是近年研究發(fā)現(xiàn)的一種新的成體干細(xì)胞，該細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，體外培養(yǎng)能保持穩(wěn)定的生長增殖活性，且具有多項分化潛能，也已被應(yīng)用到美容治療中。但單純用脂肪干細(xì)胞注射液用于美容，脂肪干細(xì)胞定向分化為脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的效率較低，見效較慢。脂肪干細(xì)胞在體外擴(kuò)增后，被注射入真皮層或肌肉層。細(xì)胞生長的微環(huán)境改變，脂肪干細(xì)胞需要一定的時間來適應(yīng)生長環(huán)境，這樣脂肪干細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化為脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞速度較慢，其刺激成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原纖維和膠原蛋白的生成也出現(xiàn)較晚。另外，通過注射器真皮層或肌肉層注射活細(xì)胞，這種痛楚非常痛苦，一般人難以接受。即使注射時使用局部麻醉，但是過后疼痛還是難以忍受。
[0004]本發(fā)明采用獲取自體脂肪組織來源的脂肪干細(xì)胞聯(lián)合自體外周血來源的富含血小板的血漿制備成生物面容面膜，利用富含血小板的血漿中豐富的細(xì)胞因子和營養(yǎng)物質(zhì)，保證脂肪干細(xì)胞在皮膚內(nèi)增殖和分化能力，并有助于其分化為脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，產(chǎn)生良好的皮膚修復(fù)的作用。同時還可以添加一些營養(yǎng)因子，進(jìn)一步保證了脂肪干細(xì)胞皮膚內(nèi)成活效率。利用體內(nèi)溫度和皮膚毛孔，生物面容面膜中脂肪干細(xì)胞趨熱性作用進(jìn)入皮膚內(nèi)，減去了真皮層或肌肉層注射帶來的痛苦，可得到普遍的接受。
[0005]綜上所述，現(xiàn)在市場上生物美容面膜對皮膚美容的作用是非常有限，僅限于保濕、美白和控油等作用。而為了對皮膚產(chǎn)生更好地祛皺、粉刺瘢痕與疤痕修復(fù)、除斑和抗氧化等作用，本發(fā)明利用自體來源脂肪干細(xì)胞和富含血小板的血漿的生物學(xué)作用，并添加了一些營養(yǎng)因子，在生物學(xué)有效期內(nèi)更好儲存及時使用，將對皮膚產(chǎn)生最佳的修復(fù)、再生、填充、祛斑和抗氧化等美容作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了對皮膚的皺紋、粉刺瘢痕、疤痕以及斑痕等產(chǎn)生更好地修復(fù)、再生、填充和抗氧化等美容作用，本發(fā)明利用自體脂肪干細(xì)胞和自體富含血小板的生物學(xué)作用，產(chǎn)生高效的皮膚美容作用，而且聯(lián)合美容物理療法將產(chǎn)生更好功效。本發(fā)明通過采集自體脂肪組織來源單細(xì)胞培養(yǎng)獲得脂肪干細(xì)胞，高表達(dá)脂肪干細(xì)胞標(biāo)志物。利用脂肪干細(xì)胞能產(chǎn)生各種的細(xì)胞因子，如血管內(nèi)皮生長因子、肝細(xì)胞生長因子、類胰島素生長因子、血小板衍生因子和轉(zhuǎn)化生長因子等，分泌細(xì)胞因子作為脂肪干細(xì)胞一個基本功能，將能活化成纖維細(xì)胞，促進(jìn)成纖維細(xì)胞擴(kuò)增，能調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的膠原酶；脂肪干細(xì)胞產(chǎn)生的各種生長因子還有抗氧化作用，保護(hù)成纖維細(xì)胞免于承受被氧化的壓力。成纖維細(xì)胞可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)；同時細(xì)胞生長因子還有促使皮膚愈合的功能。
[0007]自體富含血小板的血漿含有豐富的生長因子，即血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β?與β 2、類胰島素生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、表皮生長因子、上皮細(xì)胞生長因子等。自體富含血小板的血漿聯(lián)合了脂肪干細(xì)胞，在真皮淺層中將保護(hù)脂肪干細(xì)胞活性、增殖和分化，分化為脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，可刺激大量膠原蛋白、彈性纖維、膠質(zhì)等的產(chǎn)生，將促使組織再生，對凹陷性疤痕、組織缺失有特殊功效，達(dá)到強(qiáng)力祛皺抗衰目的。
[0008]同時將添加營養(yǎng)因子，如表皮生長因子、堿性成纖維生長因子、角蛋白18和海藻酸鈉等，將更好地保證了脂肪干細(xì)胞在皮膚內(nèi)存活，并有效地增殖分化為脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，對皺紋、瘢痕、疤痕和斑痕等起到更佳的修復(fù)、再生、填充、祛斑和抗氧化等美容效果O
[0009]本發(fā)明提供了一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜的制備方法，其中，所述方法包括通過從自體脂肪中培養(yǎng)獲取脂肪干細(xì)胞，并從自體外周血中得到富含血小板的血漿；取瓊脂糖加入生理鹽水后加熱溶解，待溫度降至40度左右加入富含血小板的血漿，混勻后加入自體脂肪干細(xì)胞從而制備成生物美容面膜，同時還可以添加營養(yǎng)因子。
[0010]本發(fā)明提供了的自體脂肪干細(xì)胞從腹部抽脂獲得脂肪組織液，分離純化得到的有核細(xì)胞懸液經(jīng)過體外原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)后獲得脂肪干細(xì)胞，放置冰箱4°c存放，也可用40%脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)液、10%二甲基亞砜和50%胎牛血清組成的凍存液，儲存在-196°C液氣iiS中，以備今后復(fù)蘇后使用。
[0011]本發(fā)明制備得到的自體脂肪干細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，高表達(dá)⑶29+ >90%、CD44+ 彡 90%和 CD105+ 彡 90%，低表達(dá) CD34+ ( 10%、CD45+ 彡 10%和 CD14+ 彡 10% ;更優(yōu)選，自體脂肪干細(xì)胞高表達(dá)CD29+為99.85%、CD44+為99.59%和CD105+為98.56%，低表達(dá) CD34+ 為 0.00%、CD45+為 0.04%和 CD 14+ % 0.21% 0
[0012]本發(fā)明提供了的自體富含血小板的血漿由采集人自體抗凝外周血中，經(jīng)離心去除紅細(xì)胞和部分白細(xì)胞后獲得的富含血小板血漿，將用于制備含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜。
[0013]優(yōu)選地，自體外周血使用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-2K)和肝素作為抗凝劑。
[0014]本發(fā)明提供了的一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜，其中，所述制備方法包括通過先將自體富含血小板的血漿加入到溶解的瓊脂糖溶液中，混勻后加入含自體脂肪干細(xì)胞的生理鹽水，制備成半凝膠狀的生物美容面膜。
[0015]優(yōu)選地，使用的瓊脂糖為低熔點瓊脂糖，溶解溫度為65°C以下。
[0016]本發(fā)明還提供了一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜，其還添加了營養(yǎng)因子，即為表皮生長因子、堿性成纖維生長因子、角蛋白18和海藻酸鈉等。
[0017]本發(fā)明還提供了一種含自體脂肪干細(xì)胞的生物美容面膜的產(chǎn)品，其中，該產(chǎn)品主要由如下成分組成:
[0018]Dlml 1-40 X 16自體脂肪干細(xì)胞；
[0019]2)4_10ml自體富含血小板的血漿；
[0020]3) Iml 2% (質(zhì)量體積比)瓊脂糖；
[0021]4)任選的l_500ng/ml營養(yǎng)因子；
[0022]半凝膠狀生物美容面膜裝入1ml無菌的