[0032] (5)將步驟（4)得到的接種的SPF雞胚置于孵化箱中培養(yǎng)，每日觀察雞胚死亡情 況，24h內(nèi)死亡的雞胚棄去，24h-144h死亡的雞胚暫存于4°C保存，144h以上時(shí)無論雞胚是 存活還是死亡均全部取尿囊液，檢測(cè)HA，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
[0033] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述抗生素為青鏈霉素。
[0034] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述純化水中的濃度為1000IU/ml。
[0035] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述預(yù)設(shè)的至少兩種稀釋比例為1:100、1 :1000、1:5000、 1:10000。
[0036]優(yōu)選的，步驟（2)中所述禽病毒為新城疫病毒（NDV)、禽流感H9亞型病毒（H9N2) 和禽流感H7亞型病毒（H7N9)中的任意一種或任意多種組合。
[0037] 優(yōu)選的，步驟（2)中各病毒量為200ELD50/0.1ml。
[0038] 優(yōu)選的，步驟（3)中所述混合物置37°C作用45min。
[0039] 優(yōu)選的，步驟（4)中所述SPF日齡為10日齡。
[0040] 優(yōu)選的，步驟（4)中每種稀釋度接種于10枚雞胚。
[0041] 優(yōu)選的，步驟（5)中所述接種雞胚24h后每隔8h觀察一次。
[0042] 為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的一種檢驗(yàn)原兒茶酸在禽 病治療方面應(yīng)用的新方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0043] 以下通過具體的實(shí)例，來對(duì)本發(fā)明做出詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí) 施例的限制。
[0044] 1試驗(yàn)材料的準(zhǔn)備
[0045] 原兒茶酸可溶性粉：由山東信得科技股份有限公司提取制備。
[0046]SPF雞胚：購自濟(jì)南斯派福瑞禽業(yè)科技有限公司。
[0047] 純化水：山東信得科技股份有限公司GMP車間制備。
[0048] 毒株：禽流感H9N2、H7N9和新城疫病毒。
[0049]2試驗(yàn)方法
[0050] 本次試驗(yàn)選擇禽流感H9N2、H7N9和新城疫病毒作為檢驗(yàn)病毒，三種病毒均按照下 列操作進(jìn)行：
[0051] (1)向純化水中添加青鏈霉素，使抗生素濃度均為1000IU/ml，將原兒茶酸分別用 該純化水做 1:100、1:1000、1:5000、1:10000 稀釋。
[0052] (2)試驗(yàn)分為5組，第1組為禽病毒與1:100倍稀釋的原兒茶酸試驗(yàn)組，第2、3、4 組分別為禽病毒與1:1000、1:5000、1:10000倍稀釋的原兒茶酸試驗(yàn)組，第5組為病毒與含 抗生素的純化水作用的對(duì)照組。詳細(xì)分組情況見表1。
[0053] (3)每種病毒的含量均為200ELD50/0. 1ml，病毒與原兒茶酸稀釋組以1:1的比例 混合，在37°C作用45min后，接種于10日齡SPF雞胚，每組10枚，每胚0. 2ml。
[0054] (4)每日觀察各組雞胚死亡情況，24h內(nèi)死亡的棄掉，24h后死亡的雞胚置于4°C暫 存，連續(xù)觀察至144h，144h時(shí)未死亡與之前死亡雞胚同時(shí)取尿囊液進(jìn)行HA檢測(cè)，記錄每組 胚的血凝價(jià)。
[0055] 表1試驗(yàn)分組情況
[0056]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種檢驗(yàn)原兒茶酸在禽病治療方面應(yīng)用的新方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將所述原兒茶酸可溶性粉用含抗生素的純化水按照預(yù)設(shè)的至少兩種稀釋比例稀 釋，得到具有至少兩種稀釋度的原兒茶酸可溶性粉稀釋液； (2) 將步驟（1)得到的至少兩種稀釋度的原兒茶酸可溶性粉稀釋液分別與禽病毒等比 例混合，得到至少兩種混合物，同時(shí)用含抗生素的無菌生理鹽水與禽病毒等比例混合作為 對(duì)照； (3) 將步驟（2)所述至少兩種混合物置37°C作用30-60min，每隔5min輕輕搖動(dòng)一次； (4) 將經(jīng)過步驟（3)處理的所述至少兩種混合物接種于9-10日齡無特定病原體SPF雞 胚，每個(gè)稀釋度6-10枚，0. 2ml/枚； (5) 將步驟（4)得到的接種的SPF雞胚置于孵化箱中培養(yǎng)，每日觀察雞胚死亡情況，24h 內(nèi)死亡的雞胚棄去，24h-144h死亡的雞胚暫存于4°C保存，144h以上時(shí)無論雞胚是存活還 是死亡均全部取尿囊液，檢測(cè)HA，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（1)中所述抗生素為青鏈霉素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（1)中所述純化水中的濃度為 1000IU/ml〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（1)中所述預(yù)設(shè)的至少兩種稀釋 比例為 1:100、1:1000、1:5000、1:10000。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（2)中所述禽病毒為新城疫病毒 (NDV)、禽流感H9亞型病毒（H9N2)和禽流感H7亞型病毒（H7N9)中的任意一種或任意多種 組合。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（2)中各病毒量為 200ELD50/0. lml。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（3)中所述混合物置37°C作用 45min〇
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（4)中所述SPF日齡為10日齡。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（4)中每種稀釋度接種于10枚 雞胚。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)方法，其特征在于，步驟（5)中所述接種雞胚24h后每 隔8h觀察一次。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢驗(yàn)原兒茶酸在禽病治療方面評(píng)價(jià)應(yīng)用的新方法，包括以下步驟：(1)原兒茶酸可溶性粉的稀釋得到至少兩種稀釋度原兒茶酸可溶性粉稀釋液；(2)所述原兒茶酸可溶性粉稀釋液與禽病毒混合作用得到至少兩種混合物；(3)將所述至少兩種混合物置37℃作用30-60min，每隔5min輕輕搖動(dòng)一次；(4)將步驟(3)中所述至少兩種混合物接種于9-10日齡無特定病原體SPF雞胚，每個(gè)稀釋度6-10枚，0.2ml/枚；(5)接種好的SPF雞胚置于孵化箱中培養(yǎng)，每日觀察雞胚死亡情況，檢測(cè)HA，做出詳細(xì)統(tǒng)計(jì)，本方法操作簡(jiǎn)單易行，成本較低，省去人工飼養(yǎng)試驗(yàn)雞的繁瑣工作。
【IPC分類】A61P31-16, A61K31-192
【公開號(hào)】CN104523670
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410811749
【發(fā)明人】李朝陽, 趙鋒祥, 喬彥良, 馬廣斌, 李廣森, 吳慶海, 薛希娟
【申請(qǐng)人】山東信得科技股份有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月23日