專利名稱：用于心血管適應癥的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制劑和煙酸類衍生物的聯(lián)合形式的制作方法
本申請要求以U.S.臨時申請序列號60/142,550(1999年7月7日提交)和U.S.臨時申請序列號60/113,955(1998年12月23日提交)為優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
有關(guān)現(xiàn)有技術(shù)的描述已確定的是，與高濃度的總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇有關(guān)的高脂血癥被公認為是冠心病、特別是動脈粥樣硬化的主要危險因素。由于高水平的LDL膽固醇增加了動脈粥樣硬化的危險性，降低血漿LDL膽固醇的方法應在治療上對動脈粥樣硬化和其他與血管內(nèi)脂質(zhì)蓄積有關(guān)的疾病產(chǎn)生有益效果。這些疾病包括但不限于冠心病、外周血管疾病和中風。
動脈粥樣硬化是多數(shù)冠狀動脈疾病(CAD)的基礎，已經(jīng)成為現(xiàn)代社會中發(fā)病和死亡的一個主要原因。高LDL膽固醇(高于約180mg/dl)和低HDL膽固醇(低于35mg/dl)對于動脈粥樣硬化的惡化已顯示出重要作用。其他疾病或危險因素如外周血管疾病、中風和高膽固醇血癥會受到不利HDL/LDL比例的消極影響。
人們發(fā)現(xiàn)干擾由腸道腔的膽汁酸的再循環(huán)可以因果性地降低血清膽固醇水平。業(yè)已累積的流行病學數(shù)據(jù)表明，這種降低作用可以在動脈粥樣硬化的疾病狀態(tài)中引起好轉(zhuǎn)。Stedronsky在“膽汁酸和膽固醇與具有降膽固醇血癥特性的非全身性藥物的相互作用”(Biochimica et Biophysica Acta，1210，255-287(1994))中圍繞膽汁酸類物質(zhì)和膽固醇探討了生物化學、生理學和已知的活性劑。
在患有遺傳性IBAT活性缺乏的人體中已表明，暫時性病理生理變化與膽汁酸腸肝循環(huán)的間斷相一致，正如Heubi，J.E.等人所報導的，參見“初級膽汁酸吸收障礙體外回腸活性膽汁酸轉(zhuǎn)運缺損”，Gastroenterology，83，804-11(1982)。
在另一條減少膽汁酸的再循環(huán)的途徑中，回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)對于特異性轉(zhuǎn)運抑制劑而言是一個公認的藥物靶向，適合于以腸肝循環(huán)間斷為基礎的高膽固醇血癥的治療(Kramer，等，″腸內(nèi)膽汁酸吸收″The Journal of Biological Chemistry，268(24)，18035-46(1993)。
在數(shù)個各別專利申請中，Hoechst Aktiengesellschaft公開了腸肝循環(huán)系統(tǒng)的多種天然成分的聚合物及其衍生物，包括膽汁酸在內(nèi)，它們抑制生理膽汁酸轉(zhuǎn)運，具有降低LDL膽固醇水平的作用，足以作為有效藥物且特別是用作降膽固醇血試劑。公開了此類膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物的各個Hoechst專利申請分別如下所列R1.加拿大專利申請?zhí)?,025,294.R2.加拿大專利申請?zhí)?,078,588.R3.加拿大專利申請?zhí)?,085,782.R4.加拿大專利申請?zhí)?,085,830.R5.EP申請?zhí)? 379 161.R6.EP申請?zhí)? 549 967.R7.EP申請?zhí)? 559 064.R8.EP申請?zhí)? 563 731.
選擇苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物(benzothiepines)公開在國際專利申請?zhí)朩O93/321146中用于包括脂肪酸代謝和冠狀血管疾病的多種用途。
其他選擇的苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物已知用作降血脂和降膽固醇血試劑，尤其是用于治療或預防動脈粥樣硬化，公開在申請?zhí)朎P508425中。法國專利申請FR2661676公開了其他用作降血酯和降膽固醇血試劑的苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物。此外，專利申請?zhí)朩O92/18462列出了適合用作降血脂和降膽固醇血試劑的其他苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物。U.S.專利號5,994,391(Lee等)在上述各專利申請中公開的各種苯并硫雜環(huán)庚三烯類降血脂和降血膽固醇藥物被限定為一種酰胺，該酰胺鍵合于稠合雙環(huán)苯并硫雜環(huán)庚三烯環(huán)的苯環(huán)相鄰碳。
其他適于高脂血和高膽固醇血的治療的苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物公開在專利申請?zhí)朠CT/US95/10863中。許多用于預防和治療高膽固醇血和高脂血的苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物和這些苯并硫雜環(huán)庚三烯的藥物組合物公開在PCT/US97/04076中。另外，適合預防和治療高膽固醇血和高脂血的其他苯并硫雜環(huán)庚三烯類化合物及其組合物公開在U.S.申請序列號08/816,065中。
在The Wellcome Foundation Limited公開的專利申請?zhí)朩O93/16055“降血脂苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯類化合物(benzothiazepine)”中描述了體外膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制與降血脂活性有關(guān)。該文獻描述了多種降血脂苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯類化合物。另外的降血脂苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯類化合物(特別是2，3，4，5-四氫苯并-1-硫-4-氮雜環(huán)庚三烯類化合物)公開在專利申請?zhí)朩O96/05188。公開在WO96/05188中的特別有效的苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯是式B-2的化合物。其他降血脂苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯類化合物公開在專利申請?zhí)朩O96/16051中。 (3R，5R)-3-丁基-3-乙基-2，3，4，5-四氫-7，8-二甲氧基-5-苯基-1-4-苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯1，1-二氧化物可以用于有效控制膽固醇的其他苯并硫雜氮雜環(huán)庚三烯化合物公開在PCT專利申請?zhí)朩O99/35135。說明書中包括式B-7的化合物。 其他IBAT抑制劑化合物包括一種萘類化合物，由T.Ichihashi等公開在J.Pharmacol.Exp.Ther.，284(1)，43-50(1998)中。在此類化合物中，S-8921(1-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3-乙基戊?；?-4-羥基-6，7，8-三甲氧基-2-萘甲酸甲酯)特別有效。S-8921的結(jié)構(gòu)如式B-20所示。其他用于治療或預防高脂血或動脈粥樣硬化的萘類化合物或木質(zhì)素類衍生物公開在PCT專利申請?zhí)朩O94/24087。
煙酸(煙酸)是一種復合維生素B，早在1955年就報導可作為降脂血劑(R.Altschl，等，Arch.Biochem.Biophys.，54，558-9(1955))。該化合物有時用來提高低HDL水平并且降低VLDL和LDL水平。有效的煙酸市售制劑包括Niacor、Niaspan、Nicobid、Nicolar、Slo-煙酸。煙酸對于肝功能不良、活動性消化潰瘍或動脈出血的患者是禁忌物。此類適合心血管適應癥的另一種化合物是戊四煙酯(T.Kazumi等，Curr.Ther.Res.，55，546-51)。J.Sasaki等(Int.J.Clin.Pharm.Ther.，33(7)，420-26(1995))公開了利用戊四煙酯單一療法可以降低膽固醇酯轉(zhuǎn)移活性。阿昔莫司(5-甲基哌嗪-2-甲酸4-氧化物，U.S.專利號4,002,750)在結(jié)構(gòu)上類似煙酸并且具有抗高脂血活性。
一些用于治療心血管疾病的聯(lián)合療法已經(jīng)公開在文獻中。U.S.專利申請?zhí)?9/037,308公開有效治療心血管疾病的IBAT抑制劑和HMG CoA還原酶抑制劑的聯(lián)合形式。
J.Sasaki等(同上)公開了氟伐地汀和戊四煙酯的聯(lián)合療法。那些研究人員推斷，氟伐地汀和戊四煙酯的聯(lián)合形式“在750mg/天劑量下給藥似乎不會增強或消弱氟伐地汀的效果”。
L.Cashin-Hemphill等(J.Am.Med.Assoc.，264(23)，3013-17(1990))描述了考來替泊和煙酸的聯(lián)合形式對冠狀動脈粥樣硬化的有益效果。所述效果包括使天然冠狀動脈損害不再進行且消退。
阿昔莫司和辛伐他汀的聯(lián)合形式在具有高甘油三酯水平的患者中顯示出有益的HDL作用(N.Hoogerbrugge等，J.Internal Med.，241，151-55(1997))。
谷甾烷醇酯人造黃油和普伐他汀的聯(lián)合療法由H.Gylllng等(J.Lipid Res.，37，1776-85(1996))公開。該療法據(jù)報導可以在非胰島素依賴性糖尿病男子中可同時抑制膽固醇吸收并且明顯降低LDL膽固醇。
Brown等(New Eng.J.Med.，323(19)，1289-1339(1990)，)描述了洛伐他汀和考來替泊的聯(lián)合療法，其與洛伐他汀單用對比可以減少動脈粥樣硬化損害進程，并且增進損害消退。
Buch等(PCT專利申請?zhí)朩O9911263)描述了含有氨氯地平和他汀類化合物的聯(lián)合療法用于治療患有心絞痛、動脈粥樣硬化、復合型高血壓和高血脂的對象，并且用于治療心搏停止的癥狀。Buch等在PCT專利申請?zhí)朩O9911259中描述了含有氨氯地平和阿托他汀(atorvastatin)的聯(lián)合療法。
Scott等(PCT專利申請?zhí)朩O9911260)描述了含有阿脫他汀和抗高血壓藥的聯(lián)合療法。
Dettmar和Gibson(UK專利申請?zhí)朑B2329334A)主張一種有效降低血漿低密度脂蛋白和膽固醇水平的治療組合物，其中該組合物含有HMG CoA還原酶抑制劑和膽汁絡合劑。
上述參考文獻表明始終需要安全、有效的藥物用于預防或治療心血管疾病。
在其若干實施方式中，本發(fā)明提供了一種聯(lián)合療法，其包含第一種量的IBAT抑制劑和第二種量的另一種有效預防或治療高脂血癥、動脈粥樣硬化或高膽固醇血癥的心血管治療藥物的應用，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量、抗動脈粥樣硬化病癥有效量或抗高膽固醇血癥有效量的所述化合物。譬如，本發(fā)明許多實施方式中的一種方式是包含治療劑量的IBAT抑制化合物和煙酸衍生化合物的聯(lián)合療法。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式是包含治療劑量的苯并硫雜環(huán)庚三烯IBAT抑制化合物和煙酸衍生化合物的聯(lián)合療法。
本發(fā)明的另一個實施方式包含本申請所述任何心血管聯(lián)合療法在預防或治療高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化或高脂血癥中的應用。所以，在一個實施方式中，本發(fā)明提供一種預防或治療高脂血癥的方法，該方法包含給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中該聯(lián)合形式包含第一種量的回腸煙汁酸轉(zhuǎn)運抑制性化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量的該化合物。
在另一實施方式中，本發(fā)明提供一種預防或治療動脈粥樣硬化病癥的方法，該方法包含給汁給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中所述聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制性化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中該第一種量和第二種量均包含抗動脈粥樣硬化病癥有效量的該化合物。
在另一實施方式中，本發(fā)明提供預防或治療高膽固醇血癥的方法，所述方法包含給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中所述聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制性化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中該第一種量和第二種量均包含抗高膽固醇血癥有效量的該化合物。
本發(fā)明的應用性的進一步范圍應根據(jù)下文提供的詳細說明而更加清楚。然而應理解，下列詳述和實施例雖然表示本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但它們僅僅是舉例說明，因為所屬技術(shù)領域的技術(shù)人員根據(jù)這些詳述顯然可以在本發(fā)明的實質(zhì)和范圍內(nèi)進行多種變化和改進。
優(yōu)選實施方式的詳述下面的詳述為所屬領域技術(shù)人員實施本發(fā)明提供幫助。即使如此，這些詳述不應解釋為對本發(fā)明的過度限定，因為所屬領域普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的實質(zhì)或范圍下可以對在此探討的實施方式進行改進和變化。
本申請引用的各個參考文獻的內(nèi)容，包括這些基本參考文獻中引用的參考文獻的內(nèi)容，均在此全文引入作為參考。a.定義提供下列定義的目的在于有助于讀者理解本發(fā)明的詳述“回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運蛋白”或“IBAT”是頂端鈉協(xié)同依賴性膽汁酸轉(zhuǎn)運蛋白或ASBT的同意詞。
“苯并硫雜環(huán)庚三烯IBAT抑制劑”是指回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑，其中包含含有2，3，4，5-四氫-1-苯并硫雜環(huán)庚三烯1，1-二氧化物結(jié)構(gòu)的治療化合物。
“煙酸衍生物”是指包含吡啶-3-羧酸酯結(jié)構(gòu)或吡嗪-2-羧酸酯結(jié)構(gòu)的治療化合物，包括酸形式、鹽、酯、兩性離子和互變異構(gòu)體。煙酸衍生物包括例如煙酸(煙酸)、戊四煙酯和阿昔莫司。
“聯(lián)合療法”是指給予兩種或多種治療劑治療高脂血癥，例如動脈粥樣硬化和高膽固醇血癥。這種給藥包括這些治療劑以大體上同時的方式共同給藥，例如在單一劑型中內(nèi)含有固定比例的活性成分，或各種抑制劑藥物分別存在于多個、分開的劑型中。另外，所述給藥也可以包括以順序方式應用各種類型治療劑。在上述兩種情況中，治療方案在治療高脂血癥中應提供藥物聯(lián)合的有益效果。
短語“治療有效”是指在聯(lián)合療法中抑制劑的合并量。這種合并量應達到減輕或消除高脂血癥的目標。
“治療化合物”是指可有效預防或治療高脂血癥，包括動脈粥樣硬化和高膽固醇血癥在內(nèi)的化合物。b.聯(lián)合形式本發(fā)明的聯(lián)合形式應具有多種用途。譬如，通過劑量調(diào)整和藥物監(jiān)測，治療化合物在本發(fā)明聯(lián)合形式中的獨立劑量應小于該治療化合物在單一藥物療法中所用的典型劑量。劑量的降低將提供多種優(yōu)越性，包括各個治療化合物比單一藥物療法降低的副作用。另外，與單一藥物療法相比，聯(lián)合療法的副作用較小將為使用該治療方案提供更高的患者依從性。
適用于本發(fā)明的化合物包括廣泛的治療化合物。專利申請?zhí)朠CT/US95/10863(在此引入作為參考)公開了一些適用于本發(fā)明的IBAT抑制劑。更多的IBAT抑制劑公開在PCT/US97/04076(在此引入作為參考)中。其他適用于本發(fā)明的IBAT抑制劑公開在U.S.申請序列號08/816,065(在此引入作為參考)中。適用于本發(fā)明的許多IBAT抑制劑化合物公開于WO98/40375(在此引入作為參考)中。其他適用于本發(fā)明的IBAT抑制劑化合物公開在U.S.申請序列號08/816,065(在此引入作為參考)中。另外的適用于本發(fā)明的IBAT抑制性化合物公開在U.S.專利號5,994,391(在此引入作為參考)中。本發(fā)明特別感興趣的IBAT抑制劑包括表1中所示的那些化合物，以及表1的IBAT抑制劑的非對映體、對映體、外消旋體、鹽和互變異構(gòu)體。
表1
適用于本發(fā)明聯(lián)合形式和方法的煙酸衍生物包含多種結(jié)構(gòu)和官能度。本發(fā)明的優(yōu)選煙酸衍生物如表2所述。表2的治療化合物在本發(fā)明中可以以多種形式應用，包括酸形式、鹽形式、外消旋體、對映體、兩性離子和互變異構(gòu)體。表2中參考的各個專利文獻分別在此引入作為參考。
表2
適用于本發(fā)明的化合物(例如，回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物或煙酸衍生化合物)可以不具有不對稱碳原子，或者另外，所述有效化合物具有一個或多個不對稱碳原子。當有效化合物具有一個或多個不對稱碳原子時，它們包括外消旋體和立體異構(gòu)體，例如純凈形式或混合物形式的非對映體和對映體。利用常規(guī)技術(shù)、通過反應對映性起始原料或通過分離本發(fā)明化合物的異構(gòu)體可以制備上述立體異構(gòu)體。
異構(gòu)體可以包括幾何異構(gòu)體，例如通過雙鍵的順式異構(gòu)體或反式異構(gòu)體。所有這些異構(gòu)體被認為是適于本發(fā)明的化合物。
用于本發(fā)明的化合物也包括互變異構(gòu)體。
下文探討的適用于本發(fā)明的化合物包括其鹽、溶劑化物和前藥。
劑量，制劑和給藥途徑本發(fā)明的組合物可以通過任何方式、優(yōu)選通過口服給藥，用于預防和治療高脂血疾病，令這些化合物與其機體中的作用位點相接觸，譬如哺乳動物(如人體)的回腸、血漿或肝臟。
為了預防或治療上述病癥，適用于本發(fā)明組合物和方法的化合物可以利用化合物本身?？伤幱名}特別適用于醫(yī)學用途，因為它們具有比其母體化合物更高的水溶性。所述的鹽顯然必須具有可藥用陰離子或陽離子。當可行時，本發(fā)明化合物的適宜可藥用酸加成鹽包括那些由無機酸衍生的的鹽，所述酸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、磺酸和硫酸；和由有機酸衍生的鹽，所述酸如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、乙醇酸、異硫碳酸(isothionic)、乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸和三氟乙酸。從醫(yī)學目的上考慮特別優(yōu)選氯化物鹽。適合的可藥用堿性鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(如鈉和鉀鹽)，和堿土金屬鹽(如鎂和鈣鹽)。
顯然，適用于本發(fā)明的陰離子也必須是藥學可接受的并且選自上述陰離子。
適用于本發(fā)明的化合物可以與可接受載體以藥物組合物的形式存在。顯然，載體在和組合物中的其他成分相容的意義上必須是可接受的，同時必須對接受者無害。載體可以是固體或液體，或兩者兼是，并且優(yōu)選與所述化合物配制成為單位劑型的組合物，譬如片劑，其可以含有0.05％-95％(重量)的活性化合物。其他藥理學活性物質(zhì)也可以存在，包括本發(fā)明的其他化合物。本發(fā)明的藥物組合物可以通過任何公知制藥技術(shù)制備，主要由將諸成分混合組成。
任選地，本發(fā)明的聯(lián)合形式可以包括一種組合物，該組合物包含回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和煙酸衍生化合物。在所述組合物中，回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制劑和煙酸衍生物是以單一劑量形式存在，例如含有兩種化合物的丸劑、膠囊或液體。
這些化合物可以通過任何適于藥物聯(lián)合應用的常規(guī)方式給藥，或者是分開的治療化合物，或者是治療化合物的聯(lián)合形式。
顯然，獲得預期生物效果所需要的化合物的量應取決于多種因素，如所選擇的特定化合物、預期用途、給藥的方式和接受者的臨床癥狀。
通常，IBAT抑制劑的總?cè)談┝靠梢允羌s0.01至約1000mg/天，優(yōu)選約0.1mg至約50mg/天，更優(yōu)選約1至約10mg/天。
一般地，煙酸衍生物的總?cè)談┝靠梢允羌s500至約10,000mg/天，優(yōu)選約1000至約8000mg/天，更優(yōu)選約3000至約6000mg/天，一次或分次劑量給藥。
上面段落中描述的多種治療化合物的日劑量可以以單一劑量給予患者，或以成比例的多個亞劑量給藥。亞劑量可以每天給藥2-6次。劑型可以是有效獲得預期效果的緩釋形式。
在可藥用鹽的情況中，上述重量是指由鹽衍生的治療化合物的酸當量或堿當量的重量。
本發(fā)明聯(lián)合形式的口服給藥可以包括所屬技術(shù)領域熟知的、通過任何多種機理在胃腸道內(nèi)提供長效或緩釋給藥的制劑。這些包括但不限于，基于小腸的變化pH劑型發(fā)生pH敏感性釋放，片劑或膠囊的緩慢侵蝕，基于制劑的物理特性保留在胃中，使劑型生物粘著在腸道的粘膜內(nèi)層，或劑型酶促釋放出活性藥物。對于一些適用于本發(fā)明的治療化合物(例如，IBAT抑制劑或煙酸衍生物)，預期效果將延長時間，在這段時間內(nèi)活性藥物分子通過劑型的處理傳遞到作用位點(例如回腸)。因此，腸溶包衣和腸溶包衣控釋制劑屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。適合的腸溶包衣包括鄰苯二甲酸乙酸纖維素、聚鄰苯二甲酸乙酸乙烯酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素和甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的陰離子聚合物。
本發(fā)明的聯(lián)合形式可以以固體、半固體或液體形式口服給藥。當是液體或半固體形式時，本發(fā)明的聯(lián)合形式可以例如是液體、糖漿，或含在明膠膠囊(如明膠帽)中。在一個實施方式中，當本發(fā)明的聯(lián)合形式中采用IBAT抑制劑時，IBAT抑制劑可以以液體、糖漿的形式提供，或含在明膠膠囊中。在另一實施方式中，當煙酸衍生物應用于本發(fā)明的聯(lián)合形式中時，煙酸衍生物可以以液體、糖漿的形式提供，或含在明膠膠囊中。
當靜脈內(nèi)給藥時，煙酸類衍生物的劑量譬如是約150mg/kg體重至約3000mg/kg體重，優(yōu)選約約300mg/kg體重至約2000mg/kg體重，更優(yōu)選約500mg/kg體重至約1000mg/kg體重。
任何這些治療化合物的劑量一般可以作為每分鐘約10ng/kg體重至約100ng/kg體重的輸注液給藥。適合此目的的輸注液可以含有如約0.1ng至約10mg，優(yōu)選約1ng至約10mg/mL的治療化合物。單位劑量可以含有例如約1mg至約10g的本發(fā)明化合物。因此，注射用安瓿可以含有例如約1mg至約100mg的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的藥物組合物包括那些適合口服、直腸、局部、經(jīng)頰(如舌下)和非胃腸道(如皮下、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的組合物的本質(zhì)，而在任何指定情況中最恰當?shù)耐緩綉Q于被治療病癥的本質(zhì)和嚴重性以及所用的特定化合物的本質(zhì)。在多數(shù)情況中，優(yōu)選的給藥途徑是口服。
適合口服給藥的藥物組合物可以以不連續(xù)單位存在，例如膠囊、囊形片、錠劑或片劑，分別含有預定量的至少一種適用于本發(fā)明的治療化合物；粉末或顆粒劑；存在于水或非水液體中的溶液或混懸液；或水包油或油包水乳液。如上所述，所述組合物可以通過適當?shù)闹扑幏椒▉碇苽?，所述方法包括將活性化合物和載體(其可以組成一種或多種輔助成分)混合在一起的步驟。通常，通過均勻或緊密地混合活性化合物和液態(tài)或微粉化固體載體或兩者兼?zhèn)洌⑶译S后如果需要使產(chǎn)物成型可以制得所述組合物。譬如，通過壓縮或模制化合物的粉末或顆粒和任選的一種或多種輔助成分可以制得片劑。通過在適當設備中壓縮自由流動形式(如粉末或顆粒)的、任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性劑和/或分散劑混合的化合物可以制得壓縮片劑。在適當設備中通過模制用惰性液態(tài)稀釋劑濕潤的粉狀化合物可以制得模制片劑。
適合經(jīng)頰(舌下)給藥的藥物組合物包括在矯味基質(zhì)中含有本發(fā)明化合物的糖錠劑，所述矯味基質(zhì)一般為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠；和在惰性基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含有所述化合物的軟錠劑。
適合非胃腸道給藥的藥物組合物適宜包含本發(fā)明化合物的滅菌含水制劑。這些制劑優(yōu)選經(jīng)靜脈內(nèi)給藥，雖然給藥也可以采取皮下、肌肉內(nèi)或真皮下注射的方式。此類制劑一般通過將所述化合物與水混合和把所得溶液滅菌并與血液等滲制備。本發(fā)明的可注射組合物通常含有0.1至5％(w/w)的本發(fā)明所公開的化合物。
適合直腸給藥的藥物組合物優(yōu)選作為單位劑量的栓劑提供。通過把本發(fā)明的化合物與一種或多種常規(guī)固態(tài)載體(如可可脂)混合且隨后使所得混合物成型可以制備這些制劑。
適合局部涂敷在皮膚上的藥物組合物優(yōu)選采用軟膏、霜劑、洗劑、膏劑、明膠、噴霧劑、氣溶膠或油的形式。可利用的載體包括石油凝膠(例如凡士林)、羊毛脂、聚乙二醇類、醇類，和它們兩種或多種的混合物?；钚曰衔锎嬖诘臐舛纫话闶窃摻M合物的0.1至50％(w/w)，例如0.5至2％。
透皮給藥也可行。適合透皮的藥物組合物可以提供為不連續(xù)貼劑，該貼劑可在長時間內(nèi)保持與接受者的表皮緊密接觸。此類貼劑適當?shù)睾斜景l(fā)明的化合物，所述化合物存在于任選緩沖的水溶液中，溶解和/或分散在粘合劑中，或分散在聚合物中。活性化合物的適當濃度為約1％至35％，優(yōu)選約3％至15％。作為一種特定的可能性，所述化合物可以由貼劑通過電轉(zhuǎn)運或離子電滲療法給藥，如Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中所述。
在任何情況中，可以與載體原料混合制成單劑量形式給藥的活性成分的量應根據(jù)被治療宿主和特定的給藥方式而改變。
口服給藥的固體劑型包括上述膠囊、片劑、丸劑、粉末、明膠囊和顆粒，其中含有一種或多種適用于本發(fā)明的化合物與至少一種惰性稀釋劑如蔗糖、乳糖或淀粉混合。在普通實踐中，所述劑型還可包含除惰性稀釋劑以外的附加物質(zhì)，例如潤滑劑如硬脂酸鎂和增溶劑如環(huán)糊精。在膠囊、片劑、粉末、顆粒、明膠囊和丸劑的情況中，所述劑型還可以含有緩沖劑。片劑和丸劑可以另外利用腸溶包衣制成。
口服給藥的液體劑型可以包括可藥用乳液、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑，其中含有所屬領域常用的惰性稀釋劑，如水。此類組合物還可以含有輔劑，例如濕潤劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑。
可注射制劑如滅菌可注射水或油混懸液可以按照所屬領域的已知方法、利用適當?shù)姆稚⒒蚰Y(jié)劑和助懸劑來配制。滅菌可注射制劑也可以是存在于無毒腸胃外可接受稀釋劑或溶劑中的滅菌可注射溶液或混懸液，例如存在于1，3-丁二醇中的溶液。在可接受載體和溶劑中可以采用水，林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌、不揮發(fā)油一般用作溶劑或助懸介質(zhì)。出于這個目的，可以采用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成甘油一酯或二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于可注射的制劑。
可藥用載體包括所有上述載體及類似物。
在聯(lián)合療法中，一種或多種適于本發(fā)明的治療劑的給藥可以采取將分開的制劑順序給藥，或可以將單一制劑或分開制劑同時給藥。給藥可以通過口服途徑，或通過靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下注射實施。制劑可以是快速濃注的形式，或含水或非水等滲滅菌注射溶液或混懸液的形式。這些溶液和混懸液可以由滅菌粉末或顆粒制成，其中具有一種或多種可藥用載體或稀釋劑，或粘合劑如明膠或羥丙基甲基纖維素，以及一種或多種潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。
為了口服給藥，藥物組合物可以采取例如片劑、膠囊、混懸液或液體的形式。膠囊、片劑等可以利用所屬領域公知的常規(guī)方法制成。藥物組合物優(yōu)選被制成含有特定量的一種或多種活性成分的劑量單位形式。劑量單位的實例是片劑或膠囊。這些適宜含有一種或多種上述量的治療化合物。例如，在IBAT抑制劑的情況中，所屬領域已知，劑量范圍可以是約0.01mg/天至約500mg/天或任何其他劑量，該范圍取決于具體的抑制劑。在煙酸衍生物的情況中，劑量范圍可以是約0.01mg至約500mg或任何其他劑量，如所屬領域所知，這取決于特定的抑制劑。
活性成分也可以通過注射作為組合物給藥，其中例如可以用鹽水、葡萄糖或水作為適當載體。各種活性治療化合物的適宜日劑量是指由于上述口服給藥獲得的同樣血清水平的量。
治療化合物可以進一步通過口服/口服、口服/非胃腸道，或非胃腸道/非胃腸道的途徑的任何聯(lián)合途徑給藥。
本發(fā)明治療方法中所用的藥物組合物可以以口服形式給藥或通過靜脈內(nèi)給藥。優(yōu)選聯(lián)合療法的口服給藥。為了口服給藥，給藥劑基可以是采取每天給藥一次的方案，或每隔一天給藥一次的方案，或全天中多次、間隔劑量給藥。構(gòu)成聯(lián)合療法的治療化合物可以同時給藥，或以組合劑型或以獨立劑型用于基本上同時的口服給藥。構(gòu)成聯(lián)合療法的治療化合物也可以順序給藥，通過所謂的兩步式攝取的方案施用上述治療化合物。因此，一種方案可以采取順序施用治療化合物，通過間隔開攝取分開的活性劑。多次攝取步驟的間隔時間可以在數(shù)分鐘至數(shù)小時內(nèi)，這取決于各治療化合物的特性如效價、溶解度、生物利用度、血漿半衰期和治療化合物的動力學性能，并且取決于食物攝取的效應和患者的年齡和病癥。靶向分子濃度的24小時生理節(jié)奏變化也可以測定出最佳給藥間隔。無論是同時、基本上同時或是順序給藥，聯(lián)合療法的治療化合物可以包括一種方案，該方案通過口服途徑施用一種治療化合物并且通過靜脈內(nèi)途徑施用另一種治療化合物。無論聯(lián)合療法的治療化合物是通過單獨或一起地口服或靜脈內(nèi)給藥，各種所述治療化合物應含在可藥用賦形劑、稀釋劑或其他制劑成分的適當藥物制劑中。含有治療化合物的口服給藥的適當可藥用制劑的實例如上所述。
治療方案利用本發(fā)明的化合物和/或組合物預防、緩解或改善具有高脂血作為疾病組成部分的病癥(如動脈粥樣硬化)，或者防護或治療進一步的高膽固醇血漿或血液水平的給藥方案是根據(jù)多種因素進行選擇的。這些因素包括患者的種族、年齡、重量、性別、飲食和臨床癥狀，疾病的嚴重性，給藥途徑，藥理學因素(如所用特定化合物的活性、功效、藥動學和毒理學特性)，是否采用一種給藥系統(tǒng)，和化合物是否作為藥物聯(lián)合形式的組成部分給藥。因此，實際采用的給藥方案可以多樣化，因而不同于上面給出的優(yōu)選給藥劑量方案。
患有高脂血癥的患者的起始治療可以采用上述劑量。治療一般將根據(jù)需要持續(xù)數(shù)周或數(shù)月或若干年直至高脂血癥得到控制或消除。正在接受本發(fā)明所公開的化合物或組合物治療的患者可以接受例行監(jiān)測，譬如利用所屬技術(shù)領域熟知的任何方法測量血清LDL和總膽固醇水平，從而判斷聯(lián)合療法的有效性。此類數(shù)據(jù)的連續(xù)分析可以使治療期間的治療方案得到完善，由此及時在任何時間點施用各種治療化合物的最佳有效量，還可以判斷治療的延續(xù)時間。因此，治療方案和/或劑量計劃表可以在治療過程中合理改變，從而給予最低量且表現(xiàn)出令人滿意的有效性的治療化合物，并且只要必要就可以連續(xù)給藥至成功治愈高脂血癥。
本文公開的聯(lián)合療法的潛在優(yōu)越性可以是減少任何各別治療化合物或所有治療化合物的劑量，有效治療高脂血癥如動脈粥樣硬化和高膽固醇血癥。劑量降低提供了多種優(yōu)選性，其中包括當和單一療法比較時可以減少各別治療化合物的副作用。
本發(fā)明若干實施方式之一包含一種聯(lián)合療法，其中包含應用第一種量的IBAT抑制劑和第二種量的另一種適于預防或治療高脂血或動脈粥樣硬化的心血管治療劑，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量或抗動脈粥樣硬化病癥有效量的所述化合物。譬如，本發(fā)明的多種實施方式之一是一種聯(lián)合療法，其包含IBAT抑制劑和煙酸衍生物的治療劑量。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式是一種聯(lián)合療法，其包含治療劑量的苯并硫雜環(huán)庚三烯類IBAT抑制劑和煙酸衍生物。
下列非限定實施例舉例用于說明本發(fā)明的各個方面。
c.實施例表3舉例說明本發(fā)明的一些聯(lián)合形式的實施例，其中所述聯(lián)合形式包含第一種量的IBAT抑制劑和第二種量的煙酸衍生物，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量或抗動脈粥樣硬化癥有效量的所述化合物。
表3
些物學試驗通過下列試驗可以顯示出本發(fā)明的聯(lián)合形式的實用性。這些實驗是在體外和動物模型中進行，主要采用了顯示本發(fā)明實用性的方法。化合物抑制[14C]-丙氨酸的攝取的體外試驗丙氨酸攝取試驗是以和?；悄懼猁}試驗相同的方式進行的，除了用標記丙氨酸代替標記牛磺膽汁酸鹽。大鼠糞便膽汁酸濃度(FBA)的測定在24或48小時內(nèi)收集單獨圈養(yǎng)的大鼠的全部糞便排泄物，氮氣流下干燥，粉碎、混合，稱重。稱量出約0.1克。提取到有機溶劑(丁醇/水)中。分離和干燥后，將殘余物溶解在甲醇中，利用3α-羥基類固醇類固醇脫氫酶與膽汁酸反應、通過酶促方法還原NAD測量出膽汁酸的含量(參見Mashige，F(xiàn).等Clin.Chem.，27，1352(1981)，在此引入作為參考)。大鼠管飼法試驗利用口腔管飼法給予雄性Wister大鼠(275-300g)IBAT抑制劑。將不同劑量的藥物或載體(0.2％吐溫80，在水中)每天給藥一次(900-100a.m.)共4天，最終體積為2mL/kg體重。(吐溫80是20摩爾聚氧化乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯表面活性劑，由ICISpecialty Chemicals，Wilmington，Delaware，U.S.A.生產(chǎn))。在處理期的最后48小時內(nèi)收集全部糞便樣本，利用上述酶促試驗分析膽汁酸含量。通過對比處理大鼠中糞便膽汁酸(FBA)濃度的增量和載體組中大鼠平均FBA濃度可以測定出化合物的功效。兔子刷狀緣膜囊(BBMV)中[3H]?；悄懼耕}攝取由冷凍回腸粘膜、按照Malathi等(Biochimica Biophysica Acta，554，259(1979)，在此引入作為參考)所述鈣沉淀法制備兔子回腸刷狀緣膜。除了分析體積是200μl而不是100μl，?；悄懼猁}的測量方法基本上按照Kramer等(Biochimica Biophysica Acta，1111，93(1992)，在此引入作為參考)所述方法進行。簡單地說，室溫下，令190μl含有2μM[3H]牛磺膽汁酸鹽(0.75μCi)、20mMTris、100mMNaCl、100mM甘露糖醇pH7.4的溶液和10μl刷狀緣膜囊(60-120μg蛋白質(zhì))一起培養(yǎng)5秒。在渦流的同時加入BBMV引發(fā)該培養(yǎng)，通過加入5ml冰冷的緩沖液(20mMHepes-tris，150mMKCl)終止該反應，隨后立刻經(jīng)尼龍濾膜(0.2μm孔)過濾并且用另外的5ml終止緩沖液沖洗。Acvl-CoA膽固醇乙?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)按照上述方法(J.Biol.Chem.，255，9098(1980)，在此引入作為參考)由組織制備倉鼠肝臟和大鼠腸微粒體，并用作ACAT酶的來源。試驗將采用2.0ml的培養(yǎng)物，其中在50mM磷酸鈉中含有24μM油?；?CoA(0.05μCi)，2mMDTT pH7.4緩沖液含有0.25％BSA和200μg微粒體蛋白。通過加入油?；?CoA引發(fā)該試驗。反應在37℃下進行5分鐘，加入8.0ml氯仿/甲醇(2∶1)終止該反應。向提取物中加入125μg存在于氯仿甲醇中的膽固醇油酸酯作為載體，在充分渦流后通過離心分離提取物有機相和水相。干燥氯仿相，隨后點在硅膠60TLC平板上，在己烷/乙醚(9∶1)中展開。通過點在TLC平板上的膽固醇油酸酯中摻雜放射性的量、利用Packard Instaimager裝置測定該放射性量來測定生成的膽固醇酯的量。肝臟膽固醇(HEPATIC CHOL)濃度的測量稱重肝臟組織并且在氯仿∶甲醇(2∶1)中勻漿。勻漿和離心后分離出上清液并且在氮氣下干燥。將殘留物溶解在異丙醇中，通過酶促方法利用膽固醇氧化酶和過氧化物酶的組合物測定膽固醇含量，如Allain，C.A.等，Clin.Chem.，20，470(1974)(在此引入作為參考)所述方法進行。肝臟HMG CoA-還原酶活性(HMG COA)的測定通過在磷酸鹽/蔗糖緩沖液中勻漿肝臟樣本、隨后離心分離制得肝臟微粒體。將最后沉淀的物團重新懸浮在緩沖液中，通過在37℃、14C-HMG-CoA(Dupont-NEN)的存在下培養(yǎng)60分鐘以便分析等份試樣的HMG CoA還原酶活性。加入6NHCl終止反應，隨后離心。利用薄層層析分離上清液的等份試樣，刮下平板上相當于酶產(chǎn)物的斑點，提取且利用閃爍計數(shù)測定放射性(參考文獻Akerlund，J.andBjorkhem，I.(1990)J.Lipid Res.31，2159)。肝臟膽固醇7-α-羥化酶活性(7a-OHase)的測量通過在磷酸鹽/蔗糖緩沖液中勻漿肝臟樣本、隨后離心分離制得肝臟微粒體。將最后沉淀的物團重新懸浮在緩沖液中，通過在37℃、于NADPH的存在下培養(yǎng)5分鐘分析等份樣品中的膽固醇7-α-羥化酶活性。隨后提取到石油醚中，蒸發(fā)有機溶劑且將殘余物溶解在乙腈/甲醇中。通過將等份的提取物注射在C18反相HPLC柱上分離酶解產(chǎn)物，并且利用240nm下UV檢測定量分析洗脫物質(zhì)(參考文獻Horton，J.D.，等(1994)J.Clin.Invest.93，2084)。血清膽固醇(SER.CHOL，HDL-CHOL，TGI和VLDL+LDL)的測定利用Wako Fine Chemicals(Richmond，VA)；CholesterolCll(目錄號Catalog No.276-64909)提供的市售試劑盒、采用酶促方法測量總血清膽固醇(SER.CHOL)。使用相同的試劑盒、在用SigmaChemical Co.HDL膽固醇試劑(目錄號352-3)沉淀VLDL和LDL之后(葡聚糖硫酸鹽法)分析HDL膽固醇(HDL-CHOL)。總血清甘油三酯(空白)(TGI)是用Sigma Chemical Co.GPO-Trinder(目錄號.337-B)通過酶促方法分析。由總的膽固醇和HDL膽固醇之差計算得到VLDL和LDL(VLDL+LDL)膽固醇濃度。大鼠糞便膽汁酸濃度(FBA)的測定在24或48小時內(nèi)收集單獨圈養(yǎng)的大鼠的全部糞便排泄物，氮氣流下干燥，粉碎、并稱重。稱量出約0.1克。提取到有機溶劑(丁醇/水)中。分離和干燥后，將殘余物溶解在甲醇中，利用3α-羥基類固醇類固醇脫氫酶與膽汁酸反應、通過酶促方法還原NAD測量出存在的膽汁酸的含量(Mashige，F(xiàn).等Clin.Chem.，27，1352(1981)，在此引入作為參考)。用于評價降脂藥物的狗模型由賣主如Marshall farms獲得體重6-12kg的雄性長耳短腿小獵犬，每天喂食一次，每次2小時并且隨意獲取水?？蓪⒐冯S機分配成分別由6-12只狗組成的給藥組。每個狗譬如賦形劑，i.g.(胃內(nèi))；1mg/kg，i.g.；2mg/kg，i.g.；4mg/kg，i.g.；2mg/kg，p.o.(粉末存在于膠囊內(nèi))。溶于水溶液中的治療物質(zhì)的胃內(nèi)給藥(例如0.2％吐溫80溶液[聚氧化乙烯一油酸酯，Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO])可以利用飼管。在開始給藥之前，可以在清晨進食之前由頭側(cè)靜脈采集血樣用來評估血清膽固醇(總膽固醇和HDL)和甘油三酯。在連續(xù)數(shù)天內(nèi)，動物在清晨進食前給藥。動物進食2個小時，隨后取走剩余食物。在研究結(jié)束的2天內(nèi)收集糞便，可以分析膽汁酸或脂質(zhì)含量。在處理期結(jié)束時也采集血樣，與研究之前的血清脂質(zhì)水平比較。利用標準學生t試驗測定統(tǒng)計學差異且p＜0.05。
狗血清脂質(zhì)測量由禁食狗的頭側(cè)靜脈收集血液收集至血清分離器管(VacutainerSST，Becton Dickinson和Co.，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)中。血液在2000rpm下離心20分鐘并且傾析血清。
利用Wako酶診斷試劑盒(Cholesterol CII)(Wako Chemicals，Richmond，VA)、通過膽目醇氧化酶反應生成可用比色法測量的過氧化氫在96孔格板中測定總膽固醇。在平板的第一個兩縱列中制備0.5至10μg膽固醇的標準曲線。將血清樣本(20-40μl，取決于預期的脂質(zhì)濃度)或已知的血清對照樣本一式雙份加入分開的孔中。加入水使各孔中的體積達到100μl。向各孔內(nèi)加入100μl等份的著色試劑。37℃下培養(yǎng)15分鐘后在500nm下讀取平板。
HDL膽固醇可以利用Sigma試劑盒號352-3(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)分析，該試劑盒采用葡聚糖硫酸酯和Mg離子來選擇性沉淀LDL和VLDL。將體積為150μl的各種血清樣本加入各個微免(microfuge)管中，隨后加入15μl的HDL膽固醇試劑(Sigma352-3)。將樣本混合且在5000rpm下離心5分鐘。隨后將50μl等份上清液與200μl鹽水混合，利用與總膽固醇測量相同的方法進行分析。
利用Sigma試劑盒號337在96孔平板格中測量甘油三酯。這種方法將測量出通過甘油三酯和脂蛋白脂酶的反應后釋放出的甘油。用1-24μg的標準甘油溶液(Sigma339-11)繪制標準曲線。將血清樣本(20-40μl，取決于預期的脂質(zhì)濃度)一式雙份加入孔中。加入水使各孔中體積達到100μl。向各孔中還100μl著色試劑?；旌虾团囵B(yǎng)15分鐘后，在540nm下讀取平板，由標準曲線計算出甘油三酯值。復制平板也利用空白酶試劑進行分析以修正血清樣本中任何內(nèi)源性甘油。狗糞便膽汁酸測量收集糞便樣本可以測定各動物的糞便膽汁酸(FBA)濃度。糞便收集是在研究的最后48小時內(nèi)進行，也就是在每天給藥和進食之前的900am和1000am期間連續(xù)進行兩個24小時。稱量由各動物獲得的單獨兩天的收集物，合并且在蒸餾水中、于處理機(Cuisinart)內(nèi)均化得到勻漿。在37℃水浴中將約1.4g勻漿在終濃度為50％叔丁醇/蒸餾水(2∶0.6)中提取45分鐘，在2000×g下離心13分鐘。膽汁酸的濃度(mmoles/天)可以利用96孔酶分析體系(1，2)測定。將20μl等份的糞便提取物加入96孔分析平板中分別一式三份的孔中的兩組孔內(nèi)。另外，分析標準化?；悄懼徕c溶液和標準化糞便提取溶液(由合并樣本預先制得并且對其膽汁酸濃度定性)用于分析定性對照。連續(xù)稀釋得到標準曲線的20微升等份?；悄懼徕c類似地加入一式三份孔的兩組中。向各孔中加入230μl反應混合物，該混合物含有1M水合肼、0.1M焦磷酸鹽并且向各孔中加入0.46mg/mlNAD。將50μl等份的3α-羥基類固醇脫氫酶(HSD；0.8單位/ml)或試驗緩沖液(0.1M焦磷酸鈉)加入一式三份的兩組的一個中。所有試劑均可以得自SigmaChemical Co.，St.Louis，MO。隨后室溫下培養(yǎng)60分鐘，測定340nm下的光密度，計算出各組一式三份樣本的平均值?；谂；悄懼徕c標準曲線，利用光密度±HSD酶之差可用來測定各樣本的膽汁酸濃度(mM)。用提取物的膽汁酸濃度、糞便勻漿的重量(克)和動物的體重計算出相應的各動物的FBA濃度(mmoles/kg/天)，由各處理組的FBA濃度減去賦形劑組的平均FBA濃度(mmoles/kg/天)可以測定FBA濃度的增量(δ值)作為處理結(jié)果。腸內(nèi)膽固醇吸收試驗多種化合物顯示出對腸道膽固醇吸收的抑制。這些化合物通過減少腸道對外源性(食物膽固醇)和內(nèi)源性膽固醇(由膽囊分泌到腸道內(nèi))的膽固醇的吸收來降低血清膽固醇水平。
在倉鼠中，利用二元同位素血漿比例法測量腸道膽固醇吸收并且按照Turley等所述方法評價(J.Lipid Res.35，329-339(1994)，在此引入作為參考)。
重量80-100g的雄性倉鼠在具有12小時交替光照和黑暗期的室內(nèi)隨意接受食物和水。光照期4小時后，各個倉鼠首次接受2.5μCi[1，2-3H]膽固醇的靜脈內(nèi)給藥，該膽固醇懸浮在Intralipid(20％)中，隨后接受[4-14C]膽固醇的口服給藥，該膽固醇存在于中鏈甘油三酯(MCT)的油中。靜脈內(nèi)給藥是通過將體積0.4ml的Intralipid混合物注射至遠側(cè)股靜脈。利用聚乙烯管通過管飼0.6ml體積的MCT油混合物口服給藥到胃內(nèi)。72小時后，由倉鼠取血，并且通過液體閃爍光譜測定法測定血漿中3H和14C的量和所施用標記的初始量。膽固醇吸收基于以下公式計算
吸收膽固醇的百分比＝ 微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白(MTP)試驗利用Ohringer等所述標準方法(Acta Crystallogr.D52，224-225(1996)，在此引入作為參考)可以由肝組織或培養(yǎng)細胞(例如HepG2細胞)純化MTP。
隨后的MTP活性的分析可以按照Jamil等(Proc.Natl.Acad.Sci.93，11991-11995(1996)，在此引入作為參考)所述方法進行。
該試驗的基礎是測定標記甘油三酯由總的供體囊在MTP存在下向總的受體囊的轉(zhuǎn)移。通過在引入MTP之前將其加入混合物中可以評價MTP的抑制劑。通過超聲處理卵磷脂、心肌磷脂、3H標記磷脂和14C標記甘油三酯的含水混合物可以制備供體囊。受體囊是通過超聲處理卵磷脂的含水混合物制成。將加入或未加入MTP抑制劑的囊溶液混合在一起，加入MTP引發(fā)轉(zhuǎn)移反應。60分鐘后通過加入0.5ml的DE-52纖維素終止該試驗，隨后離心沉淀出供體分子。利用液體閃爍光譜測定法測定沉淀中和混合物中初始量標記中的3H和14C量?；谝患墑恿W、利用以下表達法計算出脂質(zhì)轉(zhuǎn)移率[S]＝[S]0e-kt其中[S]0和[S]是14C標記物分別在0和t時在供體膜沉淀中的分數(shù)，術(shù)語k是每單位時間轉(zhuǎn)移的標記物的分數(shù)。兔子中血漿脂質(zhì)試驗按照J.R.Schuh等，J.Clin.Invest.91，1453-1458(1993)(在此引入作為參考)的報導、利用標準方法測定血漿脂質(zhì)。多組的雄性、新西蘭白兔接受標準飲食(100g/天)，食物中補充有0.3％膽固醇和2％玉米油(Zeigler Bothers，Inc.，-Gardners，PA)。兔子隨意獲取水。處理1和3個月后處死對照組和處理動物的組。取出組織且對動脈粥樣硬化損害定性。采集血樣測定血漿脂質(zhì)濃度。
血漿脂質(zhì)由耳靜脈采集血液至含EDTA的管(Vacutainer；BectonDickenson&Co.，Rutherford，NJ)中隨后離心分離細胞可以獲得脂質(zhì)分析用的血漿。通過酶促方法、利用膽固醇氧化酶反應測定總膽固醇(C.A.Allain等，Clin.Chem.，20，470-475(1974)，在此引入作為參考)。在利用葡聚糖硫酸酯和鎂選擇性沉淀LDL和VLDL后，通過酶促方法測定HDL膽固醇(G.R.Warnick等，Clin.Chem.，28，1379-1388(1982)，在此引入作為參考)。通過測定由脂蛋白脂酶、經(jīng)酶聯(lián)試驗釋放的甘油量可以測出血漿甘油三酯水平(G.Bucolo等，Clin.Chem.19.476-482(1973)，在此引入作為參考)。
動脈粥樣硬化注射戊巴比妥處死動物。迅速取出胸主動脈，浸潰固定在10％中性緩沖福爾馬林中，用油紅0(0.3％)染色。在沿動脈開口相反的側(cè)壁作一條縱向切口之后，將血管開放釘住以評價斑面積。由被檢查的總面積值和染色面積值通過閾值法、利用真色(true color)成像分析器(Videometric150；American Innovision，Inc.，San Diego，CA)測定出斑覆蓋百分率，該分析器與彩色照相機(Toshiba3CCD)界面接觸，該照相機帶有解剖顯微鏡。按照Folch等(J.Biol.Chem.，226，497-509(1957)，在此引入作為參考)所述方法用氯仿/甲醇(2∶1)提取后，通過上述酶促方法測定組織膽固醇。
體外血管反應在注射戊巴比妥鈉后，迅速切取腹部主動脈，置于充氧Krebs碳酸氫鹽緩沖液中。除去血管周圍組織后，切出3mm的環(huán)狀段，置于37℃的含有Krebs碳酸氫鹽緩沖液的肌肉浴中，并且懸掛在兩根不銹鋼線之間，一根不銹鋼線和應力傳感器(Grass Instrument Co.，Quincy，MA)相連。對加入該浴中的血管緊張素II的響應的應力變化將記錄在圖表記錄儀上。
通過用一般性或具體描述的治療化合物或惰性成分代替上述實施例所用的那些可以進行本申請的實施例。
根據(jù)本發(fā)明所述，顯然同樣的方案可以以多種方式變化。這些改變不脫離本發(fā)明的實質(zhì)和范圍，并且所有改進和等效方案對于所屬領域技術(shù)人員而言是顯而易見的，包含在下面的權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種治療聯(lián)合形式，該聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中該第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量、抗動脈粥樣硬化癥有效量或抗高膽固醇血癥有效量的所述化合物。
2.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物具有式B-2的結(jié)構(gòu) 或其對映體或外消旋體。
3.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物具有式B-12的結(jié)構(gòu) 或其對映體或外消旋體。
4.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物具有式B-29的結(jié)構(gòu) 或其對映體或外消旋體，其中PEG是分子量約3000至約4000的聚乙二醇聚合物鏈。
5.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物具有式B-7的結(jié)構(gòu) 或其對映體或外消旋體。
6.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述煙酸衍生物是煙酸或其鹽。
7.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述煙酸衍生物是戊四煙酯。
8.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中所述煙酸衍生物是阿昔莫司。
9.權(quán)利要求1的治療聯(lián)合形式，其中該聯(lián)合形式包含含有回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和煙酸衍生化合物的組合物。
10.一種預防或治療高脂血癥的方法，該方法包含給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中該聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高脂血癥有效量的所述化合物。
11.一種預防或治療動脈粥樣硬化癥的方法，該方法包含給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中該聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中所述第一種量和第二種量均包含抗動脈粥樣硬化癥有效量的所述化合物。
12.一種預防或治療高膽固醇血癥的方法，該方法包含給需要其的患者施用單位劑型的聯(lián)合形式，其中該聯(lián)合形式包含第一種量的回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制化合物和第二種量的煙酸衍生化合物，其中所述第一種量和第二種量均包含抗高膽固醇血癥有效量的所述化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供用于預防或治療心血管疾病的心血管治療化合物的聯(lián)合形式,所述心血管疾病包括高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化或高脂血癥。所公開的聯(lián)合形式包括回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運抑制劑和煙酸衍生物。
文檔編號A61P9/10GK1338946SQ99816327
公開日2002年3月6日 申請日期1999年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月23日
發(fā)明者B·T·凱勒, K·C·格倫, D·T·康諾利 申請人:G·D·瑟爾有限公司