專利名稱：：化學(xué)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物組合物，該組合物含有通過拮抗CCR2受體(還已知稱為MCP-1受體)，尤其是致使單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白-1(MCP-1)抑制而起作用的抗炎和免疫調(diào)節(jié)化合物，這些化合物包含雙環(huán)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明還涉及用于所述組合物的新化合物，它們的制備方法、用于制備它們的中間體以及它們作為治療劑的用途。MCP-1是介導(dǎo)白細(xì)胞趨化性和活化的促炎蛋白趨化因子家族中的一員。MCP-1是一種C-C趨化因子，它是最有效和最具選擇性的已知T-細(xì)胞和單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑和活化劑之一。MCP-1參與多種炎癥疾病的病生理過程，它們包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、肺纖維化、再狹窄(國際專利申請(qǐng)WO94／09128)，牙槽炎(Jones等，1992，J．Immunol．，149，2147)和哮喘。據(jù)認(rèn)為MCP-1在其病理中起作用的其它疾病是動(dòng)脈粥樣硬化(如，Koch等，1992，J．Clin．Invest．，90，772-779)、牛皮癬(Deleuran等，1996，J．DermatologicalScience，13，228-236)、延遲型皮膚過敏反應(yīng)、炎癥性腸病(Grimm等，1996，J．LeukocyteBiol．，59，804-812)、多發(fā)性硬化和腦損傷(Berman等，1996，J．Immunol．，156，3017-3023)。CCR2拮抗劑也可用于治療中風(fēng)、再灌注損傷、局部缺血、心肌梗塞和移植排斥反應(yīng)。MCP-1通過CCR2受體起作用。MCP-2和MCP-3也可至少是部分地通過該受體起作用。因此，在本說明書中，當(dāng)其它細(xì)胞因子是通過MCP-1受體起作用時(shí)，提及的“抑制或拮抗MCP-1”或者“MCP-1介導(dǎo)的作用”包括抑制或拮抗這些其它細(xì)胞因子介導(dǎo)的作用，包括MCP-2和／或MCP-3介導(dǎo)的作用。J．Chem．Soc．PerkinTransI(1995)1131-1136公開了多種雙環(huán)化合物，它們是制備生物活性吲哚化合物的中間體。EP-A-189690公開了某些可用于治療眼內(nèi)壓升高的環(huán)烷烴并吡咯衍生物，而WO9730704建議相關(guān)化合物可用于治療或預(yù)防水腫斑。本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)一類含雙環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物是CCR2受體拮抗劑。另外，它們表現(xiàn)出抑制RANTES誘導(dǎo)的趨化因子。RANTES(調(diào)節(jié)活化，正常T-細(xì)胞表達(dá)和分泌的)是與MCP-1同族的另一種趨化因子，它與MCP-1具有相似的生物學(xué)特性，但它是通過CCR1起作用的。因此，這些化合物可用于治療由這些物質(zhì)介導(dǎo)的疾病，尤其是炎癥疾病。因此，本發(fā)明提供一種藥物組合物，它含有式(Ⅰ)化合物或其可藥用的鹽、酯或酰胺和可藥用載體，式(Ⅰ)化合物是單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白-1的抑制劑；其中A和B形成可任選取代的亞烷基鏈以與和它們相連的碳原子形成一個(gè)環(huán)；X是CH2或SO2；R1是可任選取代的芳基或雜芳基；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR4、-SO2NHR5、四唑-5-基、SO3H或者式(Ⅵ)的基團(tuán)其中R4選自氫、烷基、芳基、氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或者鹵代烷基，或者R4是基團(tuán)-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)并且各個(gè)R10基團(tuán)獨(dú)立地選自氫或烷基；R5是烷基，可任選取代的芳基，例如可任選取代的苯基或可任選取代的雜芳基，例如5或6元雜芳基，或者基團(tuán)COR6，其中R6是氫、烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基；R7和R8獨(dú)立地選自氫或烷基，尤其是C1-4烷基；并且R3是氫、官能團(tuán)、可任選取代的烷基、可任選取代的鏈烯基、可任選取代的炔基、可任選取代的芳基、可任選取代的雜環(huán)基、可任選取代的烷氧基、可任選取代的芳烷基、可任選取代的芳烷氧基、可任選取代的環(huán)烷基。適宜的組合物含有式(Ⅰ)化合物或者其鹽或體內(nèi)可水解的酯。這類化合物的實(shí)例是這樣一些化合物，其中A、B、X、R1和R3如上所定義，并且R2如上所定義的，但R4選自氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基，或者R4是基團(tuán)(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)并且各個(gè)R10基團(tuán)獨(dú)立地選自氫或烷基；R5是可任選取代的苯基或可任選取代的雜芳基，或者基團(tuán)COR9，其中R6是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基；R7和R8獨(dú)立地選自氫或烷基，尤其是C1-4烷基。式(Ⅰ)化合物是單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白-1的抑制劑，因此可用于治療炎癥疾病。因此，本發(fā)明還提供一種用于治療炎癥疾病的式(Ⅰ)化合物。在另一個(gè)方案中，本發(fā)明提供式(Ⅰ)化合物在制備治療炎癥疾病的藥物中的應(yīng)用。在本說明書中，術(shù)語“烷基”在單獨(dú)或作為前后綴使用時(shí)都包括直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)。這些基團(tuán)可包含有至多10個(gè)，優(yōu)選至多6個(gè)，更優(yōu)選至多4個(gè)碳原子。同樣，術(shù)語“鏈烯基”和“炔基”是指不飽和的包含例如2-10個(gè)，優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)。環(huán)狀結(jié)構(gòu)，例如環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基和環(huán)炔基同樣具有至少3個(gè)碳原子。術(shù)語，例如“烷氧基”包含本領(lǐng)域中理解的烷基。術(shù)語“鹵代”包括氟、氯、溴和碘。芳基包括芳族碳環(huán)，如苯基和萘基。術(shù)語“雜環(huán)基”包括例如含4-20個(gè)，適宜地是含5-8個(gè)環(huán)原子芳香或非芳香環(huán)，其中的至少一個(gè)環(huán)原子是雜原子，例如氧、硫或氮。這類基團(tuán)的實(shí)例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑基、三唑基、噻唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基。“雜芳基”是指那些上述具有芳香性的基團(tuán)。術(shù)語“芳烷基”是指芳基取代的烷基，例如芐基。本說明書中使用的其他表達(dá)方式包括“烴基”，它是指含碳和氫原子的任何結(jié)構(gòu)。例如，可以是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜環(huán)基、烷氧基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基或環(huán)炔基。術(shù)語“官能團(tuán)”是指反應(yīng)性取代基。它們包括供電子或吸電子基團(tuán)。這類基團(tuán)的實(shí)例包括鹵素、氰基、硝基、氧代、=CR11R12、C(O)nR11、OR11、S(O)mR11、NR12R13、C(O)NR12R13、OC(O)NR12R13、=NOR11、-CHNOR11、-NR12C(O)nR11、-NR11CONR12R13、-N=CR12R13、S(O)mNR12R13或-NR12S(O)mR11，其中R11、R12和R13獨(dú)立地選自氫或可任選取代的烴基，或者R12和R13一起形成可任選取代的環(huán)，該環(huán)可任選包含其他雜原子，例如S(O)m、氧和氮，n是1或2的整數(shù)，m是O或者1-3的整數(shù)。在有兩個(gè)鍵可利用的條件下，官能團(tuán)應(yīng)理解為僅僅是雙鍵合的。因此，例如，R3不可以是氧代或者=CR11R12或=NOR11。當(dāng)官能團(tuán)包含S(O)mNR12R13或者-NR12S(O)mR11時(shí)，m通常是1-3的整數(shù)。為避免產(chǎn)生疑問，其中R12和R13一起形成可任選取代的環(huán)，該環(huán)將包括如上定義的非芳香的雜環(huán)基。烴基R11、R12和R13的適宜任選取代基包括鹵素、全鹵代烷基(例如三氟甲基)、巰基、羥基、羧基、烷氧基、雜芳氧基、鏈烯氧基、炔氧基、烷氧烷氧基、芳氧基(其中芳基可被鹵素、硝基或羥基取代)、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、肟基(如羥基亞氨基或烷氧基亞氨基)或者S(O)mRy，其中m定義如上，Ry是烷基。適宜的A和B形成包含3-6個(gè)碳原子的亞烷基鏈，以便與和它們相連的碳原子一起形成5-8個(gè)原子的環(huán)。A-B鏈的適宜取代基包括如上定義的官能團(tuán)或者可任選取代的烴基或可任選取代的雜環(huán)基。這些烴基和雜環(huán)基的適宜取代基包括上面列出的那些R11、R12、R13的取代基。A-B鏈的取代基的特別實(shí)例包括氧代；=NOR11，其中R11定義如上，并且特別是肟，=NOH；可任選取代的烷基，例如芳烷基、羧基烷基或者其酰胺衍生物；烷氧基；芳氧基；芳烷氧基；或者可任選被烷基、芳基或芳烷基取代的氨基。適合A-B鏈的特定官能團(tuán)是亞-式(Ⅵ)基團(tuán)。A-B鏈的取代基的特別實(shí)例是=NOR11基。A-B環(huán)上可以存在的取代基實(shí)例包括羧基或其烷基酯，尤其是叔丁基酯，氧代、=NOH或=NOR*，其中R*是甲基、芐基、羧基芐基、甲氧羰基芐基、3-(羧基)丙基或其酯(例如乙酯)、4-羧基丁基或其酯(如，乙酯)以及羧基甲基。R1宜是單個(gè)芳基環(huán)。R1宜是可任選取代的苯環(huán)、吡啶環(huán)、萘環(huán)、呋喃環(huán)或噻吩環(huán)。式(Ⅰ)中R1的適宜任選取代基包括除芳氧基或雜芳氧基以外的某些上面列出的R11、R12和R13的取代基，以及烷基、鏈烯基和炔基。R1取代基的實(shí)例包括三氟甲基、C1-4烷基、鹵素、三氟甲氧基、C1-4烷氧基、C1-4鏈烷?；1-4鏈烷酰氧基、硝基、羧基、氨基甲?；?、C1-4烷氧羰基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亞磺?；⒒酋０被?sulphonamido)、氨基甲酰基C1-4烷基、N-(C1-4烷基)氨基甲?；鵆1-4烷基、N-(C1-4烷基)2氨基甲?；?C1-4烷基、羥基C1-4烷基或C1-4烷氧基C1-4烷基。R1的任選取代基尤其選自鹵素、包括全鹵代烷基的鹵代烷基(如三氟甲基)、羧基、烷氧基、鹵代烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基、羥基烷氧基、烷氧基烷氧基、鏈烷?；㈡溚轷Ｑ趸?、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、磺酰氨基或S(O)mRx，其中m定義如上并且Rx是烴基。適宜的實(shí)例是三氟甲基、C1-4烷基、鹵素、三氟甲氧基、C1-4烷氧基、C1-4鏈烷酰基、C1-4鏈烷酰氧基、硝基、羧基、C1-4烷氧羰基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基亞磺?；?、C1-4烷基磺?；?、磺酰氨基、羥基C1-4烷基或C1-4烷氧基C1-4烷基。另外或此外，兩個(gè)這類取代基一起可形成與R1環(huán)上相鄰碳原子相連的式-O(CH2)1-4O-二價(jià)基團(tuán)。R1的優(yōu)選取代基是一個(gè)或多個(gè)非極性的取代基，例如鹵素。特別是，R1被一個(gè)或多個(gè)鹵素基團(tuán)，尤其是氯取代。R1基的具體實(shí)例是3，4-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-氟-4-氯苯基、3-氯-4-氟苯基或2，3-二氯吡啶-5-基。R1優(yōu)選是3，4-二氯苯基。R1不宜為SO2NH2基團(tuán)。R2的實(shí)例包括羧基；氰基；四唑-5-基；SO3H；-CONHR4，其中R4選自氰基、羥基；-SO2R9，其中R9是烷基(例如C1-4烷基)、芳基(如苯基)、雜芳基或三氟甲基；或者R4是-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)并且各個(gè)R10獨(dú)立地選自氫或烷基，如C1-4烷基；或者R2是-SO2NHR5，其中R5是可任選取代的苯基或可任選取代的5或6元雜芳基；或者COR6，其中R6是烷基(例如C1-4烷基)、芳基(如苯基)、雜芳基或三氟甲基；或者R2是式(Ⅵ)的基團(tuán)其中R7和R8獨(dú)立地選自氫或烷基，尤其是C1-4烷基。R2優(yōu)選是羧基或其可藥用鹽或酯，例如C1-4烷基酯，特別是羧基或其可藥用鹽，尤其是羧基。當(dāng)R3是可任選取代的烷基、鏈烯基或炔基時(shí)，則R3是一個(gè)包括烷基部分的基團(tuán)，適宜的任選取代基包括鹵素、全鹵代烷基(如三氟甲基)、巰基、羥基、羧基、烷氧基、雜芳氧基、鏈烯氧基、炔氧基、烷氧基烷氧基、芳氧基(其中芳基可被鹵素、硝基或羥基取代)、氰基、硝基、氨基、一或二烷基氨基、肟基(例如羥基亞氨基或烷氧基亞氨基)或S(O)mRy，其中m定義如上并且Ry是烷基。當(dāng)R3是芳基、芳烷基、芳氧基、環(huán)烷基或雜環(huán)基時(shí)，適宜的取代基包括那些上面列出的R1的取代基。適宜的R3包括氫、氟、氯、溴、碘、甲基、氰基、三氟甲基、羥甲基、羧基烷基、烷氧基烷基(如C1-4烷氧基甲基)、甲氧基、芐氧基、羧基烷氧基(如羧基甲氧基)、甲硫基、甲基亞磺?；?、甲基磺?；螋然鵆3-6環(huán)烷基、-(CHR23)r-NR24R25(其中r是0-2，優(yōu)選1或2，各個(gè)R23獨(dú)立地是氫或烷基，尤其是C1-4烷基，R24和R25獨(dú)立地選自H和C1-4烷基或者R24和R25與和它們相連的氮原子一起形成5或6元環(huán)，該環(huán)可任選地含有一個(gè)其他的選自O(shè)、N、S、S(O)或SO2的雜原子)。適宜地R24和R25一起形成雜環(huán)，例如嗎啉代或哌嗪基。其他這樣的R3基團(tuán)包括可任選取代的芳基，例如可任選取代的苯基。苯基R3的適宜取代基包括一個(gè)或多個(gè)選自氯、氟、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基或甲?；幕鶊F(tuán)。雖然R3可包含上面列出范圍內(nèi)的取代基，但其取代基優(yōu)選是氫或較小的取代基，例如C1-4烷基，尤其是甲基、鹵素或三氟甲基，最優(yōu)選是氫。適宜地X是CH2。一類優(yōu)選的式(Ⅰ)化合物是式(Ⅲ)那些化合物其中R1、R2、R3和X如式(Ⅰ)中所定義，Y是基團(tuán)(CR18R19)s，R14、R15、R16、R17及各個(gè)R18和R19獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、炔基、環(huán)炔基或官能團(tuán)，并且s是1-4的整數(shù)。R14、R15、R16、R17及各個(gè)R18和R19尤其獨(dú)立地選自氫、烷基、鏈烯基、炔基或官能團(tuán)。R14、R15、R16、R17及各個(gè)R18和R19的適宜基團(tuán)包括氫；三氟甲基；可任選被例如芳基、羧基或其酰胺衍生物取代的C1-4烷基；鹵素；羥基；C1-4烷氧基；C1-4鏈烷?；?；C1-4鏈烷酰氧基；氨基；氰基；C1-4烷基氨基；二(C1-4烷基)氨基；C1-4鏈烷酰氨基；硝基；氨基甲?；?；C1-4烷氧羰基；巰基；C1-4烷基硫基；C1-4烷基亞磺?；籆1-4烷基磺?；换酋０被?；烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、氨基甲?；鵆1-4烷基；N-(C1-4烷基)氨基甲?；鵆1-4烷基；N-(C1-4烷基)2氨基甲?；鵆1-4烷基；羥基C1-4烷基；C1-4烷氧基C1-4烷基；嗎啉代；硫代嗎啉代；氧(oxy)硫代嗎啉代；吡咯烷基；羧基C1-4烷基氨基；R20；NHR21和-OR21，其中R20和R21獨(dú)立地選自可任選取代的苯基或可任選取代的5或6元雜芳環(huán)；或者R14和R15、R16和R17，和／或R18和R19一起形成氧代基團(tuán)或者=NOR22基團(tuán)，其中R22是氫或可任選取代的烴基，例如被如官能團(tuán)取代的C1-4烷基或者芳基；條件是與同一個(gè)碳原子相連的R14和R15，或者R16和R17或R18和R19兩個(gè)不都是羥基、C1-4烷氧基、氨基、氰基、硝基或巰基。R20和R21的適宜任選的取代基包括那些上面列出的R1的取代基。這類化合物的實(shí)例是其中R16和R17是氫的那些化合物。其他實(shí)例包括R14和R15中的至少一個(gè)不是氫的化合物。優(yōu)選的實(shí)例是其中R14和R15一起形成氧代基團(tuán)的化合物。另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)例是其中R14和R15一起形成=NOH或者NOR22的化合物，其中R22定義如上面的R*。其他實(shí)例是其中基團(tuán)R18和R19不都是氫的化合物，與帶有R14和R15的碳原子相近的，例如相鄰的那個(gè)不是氫。更優(yōu)選R16、R17、R18和R19都是氫。s最優(yōu)選是1或2。式(Ⅰ)化合物的優(yōu)選亞組是式(Ⅲ)化合物或其可藥用鹽，其中R2是羧基或其體內(nèi)可水解的酯，X和R1如式(Ⅰ)中所定義，R3是氫或C1-4烷基，s如式(Ⅲ)中所定義，R14和R15選自氫、=O、=NOH、=NOR*，其中R*定義如上，并且R16、R17、R18和R19都是氫。式(Ⅰ)化合物的適宜可藥用鹽包括酸加成鹽，例如甲磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽及與磷酸和硫酸形成的鹽。另一方面，適宜的鹽是堿鹽，例如堿金屬鹽，如鈉鹽；堿土金屬鹽，如鈣或鎂鹽；有機(jī)胺鹽，例如三乙胺、嗎啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基乙基胺或氨基酸，如賴氨酸。根據(jù)荷電官能團(tuán)的數(shù)量和陽離子或陰離子的價(jià)數(shù)，可存在一個(gè)或多個(gè)陽離子或陰離子。優(yōu)選的可藥用鹽是鈉鹽。包含羧基或羥基的式(Ⅰ)化合物的體內(nèi)可水解酯是例如在人體或動(dòng)物體內(nèi)水解產(chǎn)生母體酸或醇的可藥用酯。羧基的適宜可藥用酯包括烷基酯，例如C1-6烷基酯，如乙酯；C1-4烷氧基甲酯，如甲氧基甲酯；C1-6鏈烷酰氧基甲酯，如戊酰氧基甲酯；phthalidyl酯；C3-8環(huán)烷氧基-羰氧基C1-6烷基酯，如1-環(huán)己基羰氧基乙酯；1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-onyl甲酯，如5-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-onyl甲酯；和C1-6烷氧基羰氧基乙酯，如1-甲氧基羰氧基乙酯，可在本發(fā)明化合物中的任何羧基上形成酯。式(Ⅰ)化合物的適宜可藥用酯是含羥基的式(Ⅰ)化合物體內(nèi)可水解酯，包括無機(jī)酯，例如磷酸酯和α-酰氧基烷基酯和相關(guān)化合物，酯在體內(nèi)水解斷裂的結(jié)果是得到母體羥基。α-酰氧基烷基酯的實(shí)例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。羥基的體內(nèi)可水解酯形成基團(tuán)選自鏈烷?；?、苯甲?；?、苯乙?；叭〈谋郊柞；捅揭阴；⑼檠豸驶?得到烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲?；蚇-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(得到氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙?；?。非體內(nèi)可水解的酯可用作制備式(Ⅰ)化合物的中間體，因此它們構(gòu)成了本發(fā)明的另一部分。適宜的酰胺包括，例如N-C1-6烷基酰胺和N，N-二(C1-6烷基)酰胺，如N-甲基酰胺、N-乙基酰胺、N-丙基酰胺、N，N-二甲基酰胺、N-乙基-N-甲基酰胺或N，N-二乙基酰胺。式(Ⅰ)化合物的實(shí)例示于下表Ⅰ至Ⅲ中。表Ⅰ表Ⅱ其中*表示異構(gòu)體混合物+表示Z異構(gòu)體▲表示E異構(gòu)體表Ⅲ式(Ⅰ)的某些化合物是新的，它們構(gòu)成的本發(fā)明的另一部分。因此，本發(fā)明還提供上述定義的式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，它是單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白-1的抑制劑；條件是如果A是-(CH2)3-，X是CH2，R2是羧基或其酯或酰胺，并且R3是氫，則R1不是未取代的苯基。新化合物的特別和優(yōu)選的基團(tuán)包括上面對(duì)藥物組合物所述的那些。式(Ⅰ)化合物的一些化合物可以非對(duì)映體形式存在和／或具有手性中心。應(yīng)該理解本發(fā)明包括式(Ⅰ)化合物的所有這些光學(xué)異構(gòu)體和非對(duì)映體及含有它們的藥物組合物。本發(fā)明還涉及式(Ⅰ)化合物的所有互變異構(gòu)體形式和含有它們的藥物組合物。還應(yīng)該理解的是某些式(Ⅰ)化合物可以溶劑化以及非溶劑化形式，例如水合形式存在。應(yīng)該理解，本發(fā)明還包括所有這些溶劑化形式以及含有它們的藥物組合物。式(Ⅰ)化合物適宜地通過下列方法制備將其中A、B、R2和R3如式(Ⅰ)中所定義的式(Ⅶ)化合物與其中R1和X如式(Ⅰ)中所定義并且Z是離去基團(tuán)的式(Ⅷ)化合物反應(yīng)；R1-X-ZⅧ并任選地進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下列步驟(ⅰ)將基團(tuán)R2轉(zhuǎn)化為不同的此類基團(tuán)；(ⅱ)在基團(tuán)A-B上引入取代基或改變其上的取代基；(ⅲ)將基團(tuán)R3轉(zhuǎn)化為不同的此類基團(tuán)。適宜離去基團(tuán)Z包括鹵化物，例如氯化物、溴化物或碘化物以及甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。該反應(yīng)宜在有機(jī)溶劑，如二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)或DCM中，在堿，如氫化鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀的存在下進(jìn)行。該反應(yīng)可任選在適宜相轉(zhuǎn)移催化劑的存在下進(jìn)行。正如本領(lǐng)域所理解的那樣，堿和溶劑的選自某種程度上依賴于某些溶劑與某些堿相容性。例如氫化鈉可優(yōu)選與二甲基甲酰胺或四氫呋喃一起使用，而氫氧化鈉優(yōu)選與二氯甲烷和相轉(zhuǎn)移催化劑一起使用。該反應(yīng)在中等溫度下，例如O-50℃進(jìn)行，方便地是在大約環(huán)境溫度條件下進(jìn)行。式Ⅶ化合物中R2優(yōu)選是酯基，其隨后通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)化為酸或酰胺，或者轉(zhuǎn)化為另一種酯或鹽。例如，當(dāng)X是SO2并且R2是羧基的甲酯基時(shí)，它可通過與碘化鋰在無水吡啶或DMF中反應(yīng)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羧酸。式(Ⅶ)化合物是已知化合物，或它們可通過常規(guī)方法由已知化合物制備。例如，式(Ⅶ)化合物可如下制備將式(Ⅸ)化合物其中R3如式(Ⅰ)中所定義，R28是羧基酯，例如烷基酯并且R30是在還原條件下可被除去的基團(tuán)，例如-NH(C6H5)；與式(Ⅹ)的環(huán)酮反應(yīng)其中Q形成環(huán)烷基環(huán)，例如形成5-8元碳環(huán)。該反應(yīng)宜在有機(jī)溶劑，例如有機(jī)酸如乙酸和丙酸中，在堿如乙酸鈉及還原劑如鋅的存在下進(jìn)行。式(Ⅷ)、(Ⅸ)和(Ⅹ)化合物是已知化合物，或它們可通過常規(guī)方法由已知化合物制備?；蛘?，如果式(Ⅰ)中的A和B形成六元環(huán)，則該化合物可通過氫化相應(yīng)的芳族化合物如適當(dāng)取代的吲哚來制備。這類化合物是已知的，或它們可通過常規(guī)方法獲得。氫化可例如在有機(jī)溶劑如乙酸中，在催化劑，如鉑的存在下進(jìn)行。由A-B形成的環(huán)上的取代基可在上面概括的合成反應(yīng)期間引入，或者根據(jù)所引入的特定取代基的性質(zhì)采用各種本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法引入?；蛘?，可采用常規(guī)化學(xué)方法將一個(gè)取代基轉(zhuǎn)變?yōu)椴煌娜〈＠缤ㄟ^與式H2N-OR7的肟反應(yīng)氧代取代基可被=NOR7替代?；蛘?，通過還原胺化，將氧代取代基轉(zhuǎn)化為胺。通過與例如酰鹵還原，胺可轉(zhuǎn)化為酰胺?？蛇\(yùn)用Wittig反應(yīng)引入烷基或取代的烷基取代基。對(duì)于本領(lǐng)域普通專業(yè)人員來說，其他可行的方法是顯而易見的。本文定義的某些中間體是新的，它們構(gòu)成了本發(fā)明的另一個(gè)方面。因此，另一方面，本發(fā)明提供本文所定義的式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，它們通過治療用于人類或動(dòng)物體的治療方法中。本發(fā)明的化合物尤其可用于治療炎癥的方法中。另一方面，本發(fā)明提供一種對(duì)需要拮抗MCP-1介導(dǎo)作用的溫血?jiǎng)游?，如人類進(jìn)行此種治療的方法，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物施用有效量的式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。本發(fā)明還提供作為藥物使用的如本文定義的式(Ⅰ)化合物或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯。本發(fā)明的組合物可以呈適于口服給藥形式(例如片劑、錠劑、硬膠囊或軟膠囊、水性或油性懸浮液、乳劑、可分散粉末或顆粒、糖漿或酏劑)、局部給藥形式(例如霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠、水溶液或油溶液、水懸浮液或油懸浮液)、吸入給藥形式(如細(xì)粉或液體氣霧劑)、吹入給藥形式(例如細(xì)粉)或者非胃腸給藥形式(用于靜脈、皮下、肌內(nèi)或肌內(nèi)給藥的無菌水溶液或油溶液，或者用于直腸給藥的栓劑)。本發(fā)明的組合物可通過本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法用常規(guī)藥物賦形劑獲得。因此口服使用的組合物可含有，例如一種或多種著色劑、甜味劑、芳香劑和／或防腐劑。片劑的適宜可藥用賦形劑包括，例如惰性稀釋劑，如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；制粒劑和崩解劑有，例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑，如淀粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑，如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；以及抗氧劑，如抗壞血酸。片劑可以是未包衣的或者進(jìn)行包衣以改進(jìn)其崩解性及隨后胃腸道中活性成分的吸收，或者提高它們的穩(wěn)定性或改善外觀，在任何一種情況下，都是使用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)包衣劑和方法。口服組合物可以呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑，如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或者呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油，如花生油、液體石蠟或者橄欖油混合。水懸浮液通常含有活性成分細(xì)粉與一種或多種懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃原膠和阿拉伯膠；分散劑或潤濕劑，例如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇例如十七亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycetanol)的縮合產(chǎn)物、環(huán)氧乙烷與脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇例如十七亞乙基氧基鯨蠟醇的縮合產(chǎn)物、環(huán)氧乙烷與脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯或者環(huán)氧乙烷與脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯。水懸浮液也可含有一種或多種防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯)、抗氧劑(如抗壞血酸)、著色劑、芳香劑和／或甜味劑(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。油懸浮液可通過將活性成分懸浮在植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(如液體石蠟)中進(jìn)行制備。油性懸浮液還可含有增稠劑，如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？杉尤胩鹞秳?如上述的)和芳香劑以提供適口的口服制劑。這些組合物可通過加入抗氧劑，如抗壞血酸進(jìn)行防腐。適于通過加入水制備水懸浮液的可分散粉末和顆粒通常含有與活性成分同時(shí)存在的分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或潤濕劑和懸浮劑可例舉上面已經(jīng)提及的那些。也可存在其他的賦形劑，如甜味劑、芳香劑和著色劑。本發(fā)明的藥物組合物還可呈水包油乳液形式。油相可以是植物油，如橄欖油或花生油；或者礦物油，如液體石蠟；或者它們的任意混合物。適宜的乳化劑是，例如天然存在的樹膠，如阿拉伯膠或黃原膠；天然存在的磷脂，如大豆卵磷脂；由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或部分酯(如山梨醇酐一油酸酯)和上述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯。乳液還可含有甜味劑、芳香劑和防腐劑。糖漿和酏劑可用甜味劑，如甘油、丙二醇、山梨醇、天冬甜素或蔗糖配制，它還可含有緩和劑(demulcent)、防腐劑、芳香劑和／或著色劑。藥物組合物還可呈無菌注射水懸浮液或油懸浮液形式，它們可按照已知方法，用一種或多種適當(dāng)?shù)纳厦嫣峒暗姆稚┗驖櫇駝┖蛻腋┡渲?。無菌注射劑還可以是無毒的可非胃腸用的稀釋劑或乳劑的無菌注射溶液或懸浮液，如1，3-丁二醇的溶液。栓劑可通過將活性成分與適宜的無刺激賦形劑混合制備，上述賦形劑在常溫是固體，但在直腸溫度是液體，因此可在直腸熔融并釋放藥物。適宜的賦形劑包括，例如椰子油和聚乙二醇。局部制劑，如霜?jiǎng)④浉?、凝膠以及水溶液或油溶液或者水懸浮液或油懸浮液通常可通過本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法將活性成分與常規(guī)可局部用的的載體或稀釋劑混配得到。吹入給藥的組合物可以是含有平均直徑為，例如30μ或更小的顆粒的細(xì)粉，該粉末本身僅含有活性成分或者用一種或多種可生理用載體如乳糖稀釋。吹入粉末通常存留在膠囊中，膠囊中含例如供渦輪-吸入裝置用的1-50毫克活性成分，這種吸入裝置例如用于吸入本領(lǐng)域已知的藥物色甘酸鈉(sodiumcromoglycate)。吸入給藥的組合物可以是常見的加壓氣溶膠形式，以含細(xì)粉固體或液滴的氣溶膠形式配送活性成分。可使用常用的氣溶膠拋射劑，如揮發(fā)性氟代烴或烴類，氣溶膠裝置是常規(guī)的，以配送計(jì)量量的活性成分。有關(guān)制劑的其他資料，請(qǐng)讀者參考《ComprehensiveMedicinalChemistry》，Volume5，Chapter25．2(CorwinHansch；ChairmanofEditorialBoard)，PergamonPress1990。與一種或多種賦形劑結(jié)合產(chǎn)生單劑的活性成分的量的變化取決于被治療對(duì)象和特定的給藥途徑。例如給人口服的制劑通常含有，例如O．5毫克至2克的活性物質(zhì)和適當(dāng)方便量的賦形劑，賦形劑占組合物總重的約5-98％。劑量單位形式通常含有約1毫克至約500毫克的活性成分。有關(guān)給藥途徑與劑量方案的其他資料請(qǐng)參考《ComprehensiveMedicinalChemistry》，Volume5，Chapter25．2(CorwinHansch；ChairmanofEditorialBoard)，PergamonPress1990。根據(jù)熟知的醫(yī)學(xué)規(guī)則，用于治療或預(yù)防目的的式Ⅰ化合物劑量根據(jù)適應(yīng)癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、動(dòng)物或患者的年齡和性別以及給藥途徑自然發(fā)生變化。如上所述，式Ⅰ化合物用于治療僅由于或部分由于大鼠的法呢基化(farnesylation)引起的疾病或醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥。在使用式Ⅰ化合物治療或預(yù)防時(shí)，接受的每日劑量通常在例如O．5毫克至75毫克／千克體重，如果需要可分次給藥。一般，非經(jīng)胃腸給藥時(shí)使用較低的劑量。例如，對(duì)于靜脈給藥，常用的劑量范圍在例如O．5毫克至30毫克／千克體重。同樣，對(duì)于吸入給藥，使用的劑量范圍在O．5毫克至25毫克／千克體重。但口服是優(yōu)選的。本發(fā)明通過下列實(shí)施例進(jìn)一步說明，而不是限定于在下列實(shí)施例中。其中，除非另有說明，均采用下列通用方法。N，N-二甲基甲酰胺(DMF)經(jīng)4埃分子篩干燥。無水四氫呋喃(THF)來自AldrichSURESEALTM瓶。除非另有說明，使用的其他市售試劑和溶劑沒有進(jìn)一步純化。有機(jī)溶劑提取物經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除非另有說明，如果合適，在BrukerWM200、WM250、WM300或WM400儀器上用Me2SO-d6與Me4Si或CCl3F作為內(nèi)標(biāo)記錄1H、13C和19FNMR。化學(xué)位移值以d(百萬分之一，ppm)表示，峰的多重性表示如下s，單峰；d，雙蜂；dd，雙重裂分的雙峰；t，三峰；dt，雙重裂分的三峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬峰。在VG12-12四極、VG70-250SE、VGZAB2-SE或VG改進(jìn)的AEI／KratosMS9質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜。使用Merck預(yù)鋪TLC板(硅膠60F254，d=O．25mm)進(jìn)行TLC分析。用硅膠(MerckKieselgelArt．9385)進(jìn)行快速色譜。在Koflerblock或布氏熔點(diǎn)儀上測(cè)定熔點(diǎn)，未進(jìn)行校正。所有的溫度均以攝氏度表示。制備例12，3-二氧代-4，4，4-三氟丁酸乙酯-2-苯腙在0℃，經(jīng)15分鐘將亞硝酸鈉(2．57g)分批加到苯胺(3．22g)在濃鹽酸(6．5ml)和水(10ml)的混合物中。在0℃下，將所得的溶液滴加到2，3-二氧代-4，4，4-三氟丁酸乙酯(6．31g)和乙酸鈉(6g)在水(30ml)中的混合物中，沉淀出紅色固體產(chǎn)物，過濾并真空干燥(7．15g，72％)。該腙粗產(chǎn)物無需純化即可使用。制備例23-甲基-1，4，5，6，7，8-六氫環(huán)庚三烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯在60℃下，經(jīng)30分鐘將2，3-二氧代丁酸乙酯-2-苯腙(20．9g)(T．D．Lash等，J．Org．Chem．1992，57，4809-4820)的乙酸(50ml)溶液滴加到攪拌下的乙酸鈉(10g)和環(huán)庚酮(10g)的乙酸(100ml)溶液中。添加過程中，少量多次地加入鋅粉(30g)。將該反應(yīng)在80℃再攪拌1小時(shí)，然后傾入冰水(500g)中。過濾所得固體沉淀并在乙醇中重結(jié)晶，得到白色針狀的產(chǎn)物(2．77g，14％)。NMRd(CDCl3)1．38(3H，t)，1．60-1．85(6H，m)，2．24(3H，s)，2．48(2H，t)，2．68(2H，t)，4．30(2H，q)，8．70(1H，bs)；M／z(+)222(MH+)，176．制備例33-三氟甲基-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯重復(fù)制備例2所述的方法，但用適宜的苯腙和環(huán)烷酮，以10％的產(chǎn)率得到標(biāo)題化合物。NMRd(CDCl3)1．37(3H，t)，1．7g(4H，m)，2．63(4H，m)，4．36(2H，q)，9．23(1H，bs)；M／z(-)260(M-H+)．制備例44，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯在氫氣氛和室溫下，將吲哚-2-甲酸乙酯(0．5g)和氧化鈀(Ⅳ)(0．1g)在乙酸(20ml)中攪拌16小時(shí)。然后將反應(yīng)物濾過硅藻土并加入氫氧化鈉水溶液(2N)堿化。將所得沉淀過濾并真空干燥，得到白色固體(0．17g，33％)。NMRd(CDCl3)1．35(3H，t)，1．80(4H，m)，2．50(2H，t)，2．60(2H，t)，4．30(2H，q)，6．65(1H，d)，8．70(1H，bs)；M／z(+)194(MH+)．制備例54，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸甲酯重復(fù)制備例4所述方法，但用適宜的吲哚-2-甲酸酯，以35％的產(chǎn)率得到標(biāo)題化合物。NMRd(CDCl3)1．77(4H，m)，2．50(2H，m)，2．60(2H，m)，3．80(3H，s)，6．65(1H，m)，8．70(1H，bs)；M／z(+)180(MH+)．實(shí)施例11-(3，4-二氯芐基)-1，4，5，6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(表Ⅰ的化合物1)將氫化鈉(25mg，60％)加到環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(96mg)(T．Aubertetal．，J．Chem．Soc．PerkinTrans．1，1989，1369)的溶液中并將該反應(yīng)物攪拌30分鐘。加入3，4-二氯芐基溴(154mg)并再繼續(xù)攪拌2小時(shí)。通過加入水使反應(yīng)停止并用乙醚萃取。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，殘余物經(jīng)柱色譜，用異己烷-5％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到白色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物(0．15g，83％)NMRd(DMSO)1．18(3H，t)，2．30(1H，m)，2．53(2H，m)，4．10(2H，q)，5．40(2H，s)，6．67(1H，s)，6．92(1H，dd)，7，25(1H，s)，7．57(1H，d)；M／z(+)338(M+)．實(shí)施例2用適宜的吡咯和芐基鹵化物或芳基磺酰氯重復(fù)實(shí)施例1所述的方法。得到下述的化合物。實(shí)例例2a1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯(表Ⅱ的化合物6)該化合物由3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯(T．Lashetal．，supra．)制備，產(chǎn)率為35％。NMRd(CDCl3)1．34(3H，t)，2．12(2H，m)，2．48(2H，t)，2．67(5H，s+t)，4．25(2H，q)，5．52(2H，s)，6．79(1H，dd)，7．07(1H，s)，7．38(1H，d)；M／z(+)380(M+)．實(shí)施例2b1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氫環(huán)庚三烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(表Ⅲ的化合物38)以30％產(chǎn)率制備了該化合物。NMRd(CDCl3)1．28(3H，t)，1．60(4H，m)，1．80(2H，m)，2．27(3H，s)，2．52(4H，m)，4．22(2H，q)，5．55(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．04(1H，d)，732(1H，d)；M／z(+)380(M+)，219．該化合物的酯化將產(chǎn)生式(Ⅲ)中化合物39。實(shí)施例2c1-(3，4-二氯芐基)-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯(表Ⅱ的化合物8)以63％的產(chǎn)率制備了該化合物。NMRd(CDCl3)1．25(3H，t)，1．80(4H，m)，2．42(2H，m)，2．50(2H，m)，4．20(2H，q)，5．45(2H，s)，6．80(1H，m)，6．83(1H，s)，7．08(1H，s)，7．35(1H，d)；M／z(+)352(M+)．實(shí)施例2d1-(3，4-二氯苯磺?；?-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸甲酯(表Ⅱ的化合物10)以19％產(chǎn)率制備了該化合物，M／z(+)387(M+)。實(shí)施例31-(3，4-二氯芐基)-1，4，5，6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸(表Ⅰ的化合物2)將氫氧化鈉(3N，2ml)加到攪拌著的實(shí)施例1得到的(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(0．13g)的THF(5ml)和甲醇(5ml)溶液中。在室溫持續(xù)攪拌16小時(shí)，真空濃縮，殘余物溶于水。滴加乙酸使白色固體產(chǎn)物沉淀，將產(chǎn)物過濾并干燥(70mg，59％)。NMRd(DMSO)2．30(2H，m)，2．55(4H，m)，5．44(2H，s)，6．63(1H，s)，6．96(1H，dd)，7．28(1H．d)，7．58(1H，d)；M／z(-)310(M+)，308．C15H13Cl2NO2分析結(jié)果實(shí)測(cè)值C，57．8％；H，4．1％；N，4．4％；理論值C，58．1％；H，4．2％；N，4．5％。實(shí)施例4用適宜的吡咯-2-甲酸酯重復(fù)實(shí)施例3所述的方法。得到下述的化合物。制備例4a1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物7)用實(shí)施例2a的酯以46％的產(chǎn)率得到該化合物。NMRd(DMSO)1．98(2H，m)，2．34(2H，t)，2．50(3H，s)，2．69(2H，t)，5．54(2H，s)，6．87(1H，dd)，7．30(1H，d)，7．57(1H，d)；M／z(-)352(M+)，350，308，306，159，146．制備例4b1-(3，4-二氯芐基)-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物9)由實(shí)施例2c的酯以72％的產(chǎn)率獲得該化合物。NMRd(DMSO)1．65(4H，m)，2．42(4H，m)，5．50(2H，s)，6．65(1H，s)，6．82(1H，m)，7．20(1H，s)，7．55(1H，d)，11．90(1H，bs)；M／z(-)324(M+)，322．C16H15Cl2NO2分析結(jié)果實(shí)測(cè)值C，59．1％；H，4．8％；N，4．2％；理論值C，59．3％；H，4．7％；N，4．3％。NMRd(DMSO)1．65(4H，m)，2．38(2H，m)，2．80(2H，m)，6．70(1H，s)，7．90(2H，m)，8．30(1H，s)；M／z(+)373(M-H+)．實(shí)施例61-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲腈(表Ⅱ的化合物12)將4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲腈(5．5g)(Estep，K．G．；SyntheticCommunications，1995，25，507-514)在DMF(100ml)中與3，4-二氯芐基氯(5．86g)、碘化鉀(cat．)和碳酸鉀(5．5g)攪拌過夜直至反應(yīng)完全。將該混合物傾入冰中并分配到水和二氯甲烷中。有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥并真空除去溶劑，得到淺黃色固體。用乙醚研制，得到白色固體的標(biāo)題化合物(8．71g，91％)NMRd(CDCl3)2．20(2H，dt)，2．50(2H，t)，2．78(2H，t)，5．20(2H，s)6．95(1H，dd)，7．20(2H，m)，7．45(1H，d)；M／z(+)321(MH+)，319.實(shí)施例71-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸(表Ⅱ的化合物13)將1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲腈(3．8g)在固體氫氧化鈉(12．8g)的存在下在正丁醇(40ml)中加熱回流3天。該反應(yīng)用濃鹽酸中和形成淺灰色沉淀。將沉淀物過濾、用水洗滌并真空干燥，得到淺灰色固體的標(biāo)題化合物(3．38g，84％)。NMRd(DMSO)，2．00(2H，dt)，2．35(2H，t)，2．70(2H，t)，5．60(2H，s)，6．90(1H，dd)，7．10(1H，s)，7．27(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)338(M+)，336．實(shí)施例81-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(表Ⅱ的化合物14)將1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸(1．32g)和芐基溴(0．68g)在碳酸鉀(0．48g)存在下在DMF(10ml)中攪拌18小時(shí)。真空除去DMF，殘余物溶于乙酸乙酯(50ml)。有機(jī)溶液用2M鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑，得到近白色固體的標(biāo)題化合物(1．63g，97％)。NMRd(CDCl3)2．20(2H，dt)，2．50(2H，t)，2．70(2H，t)，5．21(2H，m)，5．55(2H，s)，6．80(1H，d)，7．10(1H，s)，7．35(6H，s)，7．50(1H，s)；M／z(+)430，428(M+)．實(shí)施例91-(3，4-二氯芐基)-5-甲?；?4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(表Ⅱ的化合物15)往芐醇(1．29g)的無水THF(20ml)溶液中加入氫化鈉(0．48g)，攪拌該反應(yīng)直至氫氣不再冒出。加入1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(1．28g)的THF溶液，然后加入甲酸芐基酯(1．62g)，將該反應(yīng)再攪拌2小時(shí)。攪拌完后，將反應(yīng)物傾入2M鹽酸中，用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。減壓蒸餾殘留的芐醇得到橙色膠狀物，通過柱色譜，用20％乙酸乙酯己烷作為洗脫劑純化，得到近白色固體的標(biāo)題化合物(1．15g，84％)。NMRd(CDCl3)2．60(2H，t)，2．70(2H，t)，5．20(2H，s)，5．55(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．10(1H，s)7．20-7．40(8H，m)；M／z(-)456(M+)．實(shí)施例105-重氮基-1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(表Ⅱ的化合物16)在室溫下，將三乙胺(0．36ml)滴加到1-(3，4-二氯芐基)-5-甲?；?4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(0．5g)和對(duì)乙酰氨基苯磺酰疊氮化物(305mg)的溶液中。攪拌18小時(shí)后，得到棕色溶液。真空除去溶劑，得到棕色油。通過柱色譜，用異己烷20％乙酸乙酯作為洗脫劑純化，得到淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0．31g，62％)。NMRd(CDCl3)2．80(2H，t)，3．05(2H，t)，5．13(2H，s)，5．57(2H，s)，6．76(1H，dd)，7．05(1H，s)，7．20-7．40(7H，m)；M／z(+)456，454(M+)．實(shí)施例114-叔丁氧羰基-1-(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸芐基酯(表Ⅰ的化合物3)將5-重氮基-1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯(0．3g)和叔丁醇(1ml)在180℃在三甲基吡啶(10ml)中加熱30分鐘后，冷卻到室溫，傾入乙醚中。有機(jī)層用2M鹽酸(100ml)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到橙色油狀的標(biāo)題化合物(0．32g，97％)。NMRd(CDCl3)1．45(9H，s)，2．45-2．80(4H，m)，3．78(1H，dd)，5．20(2H，d)，5．40(2H，d)，6．80(1H，dd)，6．95(1H，s)，7．10(1H，s)，7．30(6H，m)；M／z(+)502，500(M+)．實(shí)施例124-羧基-1-(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸芐基酯(表Ⅰ的化合物4)將4-叔丁氧羰基-1-(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸芐基酯(0．7g)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入TFA(3ml)。持續(xù)攪拌24小時(shí)后，真空除去溶劑得到淺色的油。經(jīng)放置該油狀物緩慢地固化，得到標(biāo)題產(chǎn)物(0．61g，98％)。NMRd(DMSO)2．40(4H，m)，3．70(1H，t)，5．10(2H，s)，5．40(2H，ABd)，6．70(1H，s)，6．90(1H，d)，7．30(6H，m)，7．50(1H，d)；M／z(-)444，442(M-H+)．實(shí)施例131-(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2，4-二甲酸(表Ⅰ的化合物5)將4-羧基-1-(3，4-二氯芐基)環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸芐基酯(0．1g)溶于乙酸乙酯(5ml)中。加入鈀／碳(5％Pd，10mg)并使該反應(yīng)物在氫氣壓(1．1個(gè)大氣壓)下保持4小時(shí)直至反應(yīng)完全。放出氫氣，將所得溶液濾過硅藻土除去催化劑。真空濃縮反應(yīng)物，得到粗產(chǎn)物，將其溶于盡可能少量的2M氫氧化鈉中，用水稀釋(1ml)，然后加入稀鹽酸以沉淀。收集固體并干燥，得到淺乳白色固體的標(biāo)題化合物(32mg，41％)。NMRd(DMSO)2．40(4H，m)，3．70(1H，t)，5．40(2H，ABd)，6．68(1H，s)，6．95(1H，dd)，7．15(1H，s)，7．58(1H，d)；M／z(-)355，353(M-H+)．實(shí)施例141-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-甲基肟(表Ⅱ的化合物17)在室溫下，將甲氧基胺鹽酸鹽(44mg)加到1-(3，4-二-氯芐基)-3-乙基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯(0．15g)和吡啶(0．2ml)在乙醇(10ml)中的混合物中，并將該反應(yīng)物攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物分配到2N鹽酸和乙酸乙酯中。將合并的有機(jī)萃取液干燥并濃縮，得到透明膠狀產(chǎn)物(0．13g，80％)。d(CDCl3)1．25(3H，t)，1．86(2H，m)，2．5(2H，t)，2．62(3H，s)，2．7(2H，t)，3．92(3H，s)，4．24(2H，q)，5．48(2H，s)6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．32(1H，d)；M／z(+)409(M+)．實(shí)施例15用適宜的羥胺和酮重復(fù)實(shí)施例14的方法。獲得下列化合物。1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-芐基肟(表Ⅱ的化合物18)產(chǎn)率為83％，NMRd(CDCl3)1．28(3H，t)，1．85(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(3H，s)，2．75(2H，t)，4．22(2H，q)，5．15(2Hs)，5．45(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．28-7．44(6H，m)；M／z(+)485(M+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物19)NMRd(CDCl3)1．31(3H，t)，1．92(2H，m)，2．54(2H，t)，2．55(3H，s)，2．8(2H，t)，4．25(2H，q)，4．66(2H，s)，5．48(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．35(1H，d)；M／z(+)451(M+)．1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯E-肟和1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯Z-肟(表Ⅱ的化合物20)產(chǎn)率為22％(E-異構(gòu)體)，NMRd(CDCl3)2．0(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(2H，t)，5．24(2H，s)，5．5(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．06(1H，d)，7．35(6H，m)，7．91(1H，s)；M／z(-)441(M-H+)，產(chǎn)率為26％(Z-異構(gòu)體)，NMRd(CDCl3)1．92(2H，m)，2．65(2H，t)，2．74(2H，t)，5．21(2H，s)，5．51(2H，s)，6．75(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．31(7H，m)，M／z(-)441(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-肟(表Ⅱ的化合物21)產(chǎn)率為68％，NMRd(CDCl3)1．3(3H，t)，1．91(2H，m)，2．5(2H，t)，2．6(3H，s)，2．78(2H，t)，4．24(2H，q)，5．48(2H，s)，6．73(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．34(1H，d)；M／z(+)393(MH+)．1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸芐基酯E-O-芐基肟(表Ⅱ的化合物22)產(chǎn)率為58％，NMRd(CDCl3)1．91(2H，m)，2．52(2H，t)，2．72(2H，t)，5．15(2H，s)，5．25(2H，s)，5．5(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．28-7．42(11H，m)；M／z(+)533(MH+)．實(shí)施例161-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-乙氧羰基丁基肟(表Ⅱ的化合物23)將1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-肟(0．2g)的二甲基甲酰胺(2ml)溶液加到氫化鈉(0．025g，60％油分散體)的二甲基甲酰胺(1ml)懸浮液中并將該反應(yīng)物攪拌15分鐘。將5-溴代戊酸乙酯(0．15ml)加到該反應(yīng)物中并在室溫下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物傾入水中，用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)干燥，真空濃縮，殘余物經(jīng)柱色譜，用異己烷到異己烷20％乙酸乙酯作為洗脫劑進(jìn)行純化，得到透明膠狀的產(chǎn)物(0．25g，94％)。NMRd(CDCl3)1．25(3H，t)，1．3(3H，t)，1．75(4H，m)，1．88(2H，m)，2．35(2H，t)，2．5(2H，t)，2．62(3H，s)，2．71(2H，t)，4．12(4H，m)，4．25(2H，q)，5．48(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．35(1H，d)；M／z(+)523(M+)．實(shí)施例17用適宜的烷基鹵化物重復(fù)實(shí)施例16的方法。獲得下列化合物。1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-4’-甲氧羰基芐基肟(表Ⅱ的化合物24)產(chǎn)率為84％，NMRd(CDCl3)1．3(2H，t)，1．9(2H，m)，2．5(2H，t)，2．55(3H，s)，2．75(2H，t，)，3．91(3H，s)，4．25(2H，q)，5．2(2H，s)，5．48(2H，s)，6．72(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．31(1H，d)，7．48(2H，d)，8．04(2H，d)；M／z(+)543(M+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-3’-甲氧裝基芐基肟(表Ⅱ的化合物25)產(chǎn)率為41％，NMRd(CDCl3)1．28(3H，t)，1．88(2H，m)，2．5(2H，t)，2．58(3H，s)，2．72(2H，t)，3．92(3H，s)，4．22(2H，q)，5．18(2H，s)，5．45(2H，s)，6．71(1H，dd)，7．04(1H，d)，7．32(1H，d)，7．44(1H，dd)，7．62(1H，dd)，7．98(1H，dd)，8．1(1H，dd)；M／z(+)543(M+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸乙酯Z-O-乙氧羰基丙基肟(表Ⅱ的化合物26)產(chǎn)率為39％，NMRd(CDCl3)1．25(2H，t)，1．3(2H，t)，1．78(2H，m)，2．05(2H，m)，2．45(2H，t)，2．5(2H，t)，2．61(3H，s)，2．7(2H，t)，4．14(2H，q)，4．25(2H，q)5．48(2H，s)，6．74(1H，dd)，7．05(1H，d)，7．34(1H，d)；M／z(+)509(M+)．實(shí)施例18用適宜的4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸酯重復(fù)實(shí)施例3的方法。獲得下列化合物。1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-甲基肟(表Ⅱ的化合物27)產(chǎn)率為48％，NMRd(DMSO)1．75(2H，m)，2．48(3H，s)，2．51(2H，t)，2．56(2H，t)，3．76(3H，s)，5．5(2H，s)，6．84(1H，dd)，7．22(1H，d)，7．54(1H，d)；M／z(-)379M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-芐基肟(表Ⅱ的化合物28)產(chǎn)率為49％，NMRd(DMSO)1．75(2H，m)，2．48(3H，s)，2．5(2H，t)，2．61(2H，t)，5．05(2H，s)，5．5(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．14(1H，d)，7．15-7．21(5H，m)，7．52(1H，d)；M／z(-)455(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物29)產(chǎn)率為78％，NMRd(DMSO)1．72(2H，m)，2．41(3H，s)，2．43(2H，t)，2．6(2H，t)，4．41(2H，s)，5．55(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．25(1H，dd)，7．52(1H，d)；M／z(-)423(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-肟(表Ⅱ的化合物30)NMRd(DMSO)1．72(2H，m)，2．48(3H，s)，2．5(2H，t)，2．55(2H，t)，5．5(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．21(1H，d)，7．53(1H，d)；M／z(-)365(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物31)產(chǎn)率為75％，NMRd(DMSO)1．84(2H，m)，2．32(2H，t)，2．6(2H，t)，4．52(2H，s)，5．58(2H，s)，6．85(1H，dd)，7．28(1H，d)，7．55(1H，d)，7．6(1H，d)；M／z(-)409(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸E-O-羧甲基肟(表Ⅱ的化合物32)產(chǎn)率為51％，NMRd(DMSO)1．8(2H，m)，2．53(2H，t)，2．6(2H，t)，4．5(2H，s)，5．54(2H，s)，6．85(1H，dd)，6．95(1H，s)，7．28(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)409(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸E-O-芐基肟(表Ⅱ的化合物33)產(chǎn)率為21％，NMRd(DMSO)1．79(2H，m)，2．52(2H，t)，2．59(2H，t)，5．06(2H，s)，5．52(2H，s)，6．86，(1H，dd)，6．98(1H，s)，7．28(1H，d)，7．3-7．38(5H，m)，7．56(1H，d)；M／z(-)441(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-3’-羧芐基肟(表Ⅱ的化合物34)產(chǎn)率為46％，NMRd(DMSO)1．75(2H，m)，2．45(3H，s)，2．61(2H，t)，2．48(2H，t)，5．1(2H，s)，5．48(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．45(1H，dd)，7．52(1H，d)，7．62(1H，dd)，7．85(1H，dd)，7．95(1H，bs)；M／z(-)499(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-羧丙基肟(表Ⅱ的化合35)產(chǎn)率為72％，NMRd(DMSO)1．72(2H，m)，1．85(2H，m)，2．26(2H，t)，2．48(3H，s)，2．51(2H，t)，2．55(2H，t)，4．0(2H，t)，5．5(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．55(1H，d)；M／z(-)451(M-H+)．1-(3，4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-4’-羧芐基肟(表Ⅱ的化合物36)產(chǎn)率為70％，NMRd(DMSO)1．74(2H，m)，2．4(3H，s)，2．51(2H，t)，2．65(2H，t)，5．11(2H，s)，5．51(2H，s)，6．8(1H，dd)，7．24(1H，d)，7．46(2H，d)，7．51(1H，d)，7．9(2H，d)，12．56(2H，s)；M／z(-)499(M-H+)．1-(3、4-二氯芐基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫吲哚-2-甲酸Z-O-羧丁基肟(表Ⅱ的化合物37)產(chǎn)率為55％，NMRd(DMSO)1．5-1．68(4H，m)，1．75(2H，m)，2．22(2H，t)，2．48(3H，s)，2．50(2H，t)，2．58(2H，t)，4．0(2H，t)，5．5(2H，s)，6．82(1H，dd)，7．22(1H，d)，7．52(1H，d)；M／z(-)465(M-H+)．實(shí)施例19hMCP-1拮抗劑的生物試驗(yàn)a)hMCP-1受體結(jié)合試驗(yàn)ⅰ)hMCP-1受體的克隆和表達(dá)根據(jù)公開的MCP-1受體序列(Charoetal．，1994，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，91，2752)通過THP-1細(xì)胞RNA的PCR用適宜的寡核苷酸引物克隆MCP-1受體B(CCR2B)cDNA。將所得的PCR產(chǎn)物克隆到載體PCR-ⅡTM(INVitrogen，SanDiego，CA)。將無差錯(cuò)CCR2BcDNA作為HindⅢ-NotⅠ片斷亞克隆到真核生物表達(dá)載體pCDNA3(InVitrogen)上分別產(chǎn)生pCDNA3／CC-CKR2A和pCDNA3／CCR2B。將線性化pCDNA3／CCR2BDNA通過磷酸鈣沉淀法(Wigleretal．，1979，Cell，16，777)轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞。在細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，通過加入1mg／ml的硫酸遺傳霉素(G418，GibcoBRL)選擇轉(zhuǎn)染了的細(xì)胞。RNA的制備和RNA印記法按照先前所述進(jìn)行(Needhametal．，1995，Prot．Espress．Purific．，6，134)。CHO-K1純系7(CHO-CCR2B)被鑒別為最高效的MCP-1受體B表達(dá)子。ⅱ)膜片斷的制備將CHO-CCR2B細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，DMEM中補(bǔ)加有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、1x非必需氨基酸、1x次黃嘌呤和胸腺嘧啶補(bǔ)充物及青霉素-鏈霉素(以50μg鏈霉素／ml加入，GibcoBRL)。如先前所述(Sicilianoetal．，1990，J．Biol．Chem．，265，19658)，用細(xì)胞溶解／差速離心法制備膜片斷。按照制造商的說明，通過BCA蛋白分析(Pierce，Rockford，Illinois)測(cè)定蛋白濃度。ⅲ)測(cè)定結(jié)合Bolton和Hunter的方法(Boltonetal．，1973，Biochem．J．，133，529；AmershamInternationalplc)制備125IMCP-1。用Ernst等(1994，J．Immunol．，152，3541)的方法進(jìn)行平衡結(jié)合測(cè)定。概括地說，是將不同濃度的125I-標(biāo)記的MCP-1加到在100ml結(jié)合緩沖液中的10mg純化的CHO-CCR2B細(xì)胞膜中。在室溫培養(yǎng)1小時(shí)后，過濾結(jié)合反應(yīng)混合物并通過培養(yǎng)板洗滌器(PackardHarvesterFiltermateTM196)洗滌5次。將閃爍液(25μl，MicroscintTM-20，一種用于水性樣品的高效液體閃爍計(jì)數(shù)合劑)加到各個(gè)孔中，將培養(yǎng)板蓋上蓋并計(jì)數(shù)(PackardTopCountTM)。在不同濃度的未標(biāo)記MCP-1的存在下，用100pM125I-標(biāo)記的MCP-1如上進(jìn)行冷競(jìng)爭(zhēng)性研究。通過在反應(yīng)物中包含200倍摩爾過量的未標(biāo)記MCP-1測(cè)定非特異性結(jié)合。用由CHO-CCR2B細(xì)胞制備的膜片斷進(jìn)行的配體結(jié)合研究顯示出CCR2B以0．2pmoles／mg膜蛋白存在，而且選擇性地與MCP-1結(jié)合并具有高度親和性(IC50=110pM，Kd=120pM)。與這些膜的結(jié)合完全可逆并在室溫下45分鐘后達(dá)到平衡，當(dāng)使用100pM～500pM濃度的MCP-1時(shí)，MCP-1結(jié)合與CHO-CCR2B細(xì)胞膜濃度間呈線性關(guān)系。用八個(gè)劑量點(diǎn)-反應(yīng)曲線，將溶于DMSO(5μl)的一定濃度范圍(0．1-200μM)的測(cè)試化合物與100pM標(biāo)記的MCP-1進(jìn)行兩次競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)試，并計(jì)算IC50濃度。在本文描述的hMCP-1受體結(jié)合測(cè)定中，本發(fā)明測(cè)試化合物的IC50值小于5μM。例如，實(shí)施例4a化合物的IC50為0．4μM。b)在THP-1細(xì)胞中MCP-1介導(dǎo)的鈣流將人單核細(xì)胞系THP-1在人工細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640中進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基中補(bǔ)加有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和青霉素-鏈霉素(50μg鏈霉素／毫升，GibcoBRL)。將THP-1細(xì)胞在HBSS(缺乏Ca2+和Mg2+)+1mg／mlBSA中進(jìn)行洗滌并以3x106個(gè)細(xì)胞／毫升的密度再懸浮于同樣的緩沖液中。然后在37℃下，往細(xì)胞中加入1mMFURA-2／AM并保持30分鐘，在HBSS中洗滌兩次，并再以1x106個(gè)細(xì)胞／毫升的密度懸浮。將THP-1細(xì)胞懸浮液(0．9ml)加到內(nèi)有磁力攪拌棒的5毫升一次性比色杯中，該比色杯中還裝有2．1毫升預(yù)溫?zé)岬?37℃)含1mg／mlBSA、1mMMgCl2和2mMCaCl2的HBSS。將該比色杯放在熒光分光光度計(jì)(PerkinELmer，Norwalk，CT)中并在攪拌下與37℃預(yù)培養(yǎng)4分鐘。記錄70秒的熒光，在10秒鐘后通過將hMCP-1加到比色杯中刺激細(xì)胞。通過在340nm和380nm交替激發(fā)測(cè)量[Ca2+]i，隨后測(cè)定在510nm熒光發(fā)射的強(qiáng)度。計(jì)算在340nm和380nm激發(fā)后，發(fā)射熒光的強(qiáng)度比率，(R)，并根據(jù)下面的等式估測(cè)胞漿[Ca2+][Ca2+]i=Kd(R-Rmin)(Rmax-R)(Sf2/Sb2)]]>其中在37℃，F(xiàn)URA-2Ca2+復(fù)合物的Kd取為224nm。Rmax是在加入10mM離子霉素后測(cè)定的最大熒光比率，Rmin是在隨后加入含5mMEGTA的不含Ca2+溶液后測(cè)定的最小比率，Sf2／Sb2是分別在Rmim和Rmax下測(cè)定的在380nm激發(fā)下的熒光比率。hMCP-1對(duì)THP-1的刺激以特異性和劑量依賴方式引發(fā)了[Ca2+]i的快速的、暫時(shí)性升高。劑量反應(yīng)曲線表明大約的ED50值為2nm。通過在配體加入前10秒鐘將它們加到細(xì)胞懸浮液中，分析溶于DMSO(10μl)的測(cè)試化合物對(duì)鈣釋放的抑制并測(cè)定[Ca2+]i暫時(shí)性升高的降低。通過用測(cè)試化合物替代hMCP-1，還測(cè)定了它們不具有激動(dòng)作用。c)hMCP-1介導(dǎo)的趨化性和RANTES分析用人單核細(xì)胞系THP-1或混合有單核細(xì)胞的外周血進(jìn)行體外趨化性分析，所述外周血由新鮮人血液并通過紅細(xì)胞沉淀及隨后在9．6％(w／v)甲泛影酸鈉和5．6％(w／v)多糖的存在下進(jìn)行密度梯度離心純化得到的，密度為1．077g／ml(LymphoprepTMNycomed)。通過Coulter計(jì)數(shù)法直接枚數(shù)遷移通過聚碳酸酯膜的細(xì)胞或者用比色存活力分析測(cè)定通過線粒體呼吸鏈裂解的四唑鎓鹽間接地枚數(shù)遷移通過聚碳酸酯膜的細(xì)胞(ScudieroD．A．etal．，1988，CancerRes．，48，4827-4833)。按照制造商的說明，將化學(xué)引誘劑加到96孔微滴板中，所述微滴板已形成了安有無PVP的5μm孔徑聚碳酸酯粘著性框制濾膜(NeuroProbeMB系列產(chǎn)品，CabinJohn，MD20818，USA)的趨化性小室的下部孔。化學(xué)引誘劑用人工細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640(Gibco)或補(bǔ)加有2mM谷氨酰胺和0．5％BSA的相同培養(yǎng)基，或者用含Ca2+和Mg2+但不含酚紅加0．1％BSA的HBSS(Gibco)稀釋。每種稀釋液都在真空下脫氣30分鐘后，將其(400μl)放置到小室的下部孔中，將THP-1細(xì)胞(在100μlRPMI1640+0．5％BSA中的5x105個(gè)細(xì)胞)在小室的各上部孔中培養(yǎng)。為抑制趨化性，各種化學(xué)活素引誘劑(MCP-1為1nM，RANTES為2nM)在測(cè)定前應(yīng)保持在恒定的亞最高濃度，然后與溶于DMSO(DMSO的終濃度小于0．05％v／v)的不同濃度的試驗(yàn)化合物一起加到下部孔中。將小室在37℃和5％CO2下保溫2小時(shí)。從上部孔中取出培養(yǎng)基，在打開孔之前用200微升生理鹽水進(jìn)行沖洗，擦干膜表面并于600g下將96孔板離心5分鐘收獲細(xì)胞。吸出上清液(150微升)，將10微升細(xì)胞增殖試劑，WST-1，{4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑鎓基(tetrazolio)]-1，3-苯基二磺酸酯}與電子偶聯(lián)試劑(BiehringerMannheim，Cat．no．1644807)一起加回到各個(gè)孔中。將平板在37℃保溫3小時(shí)并在平板閱讀器上讀取可溶性甲瓚產(chǎn)物在450nm處的吸收。將數(shù)據(jù)輸入電子表格，校正在沒有化學(xué)引誘劑存在下的任何隨機(jī)性遷移，計(jì)算平均吸收值、均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和顯著性檢驗(yàn)。hMCP-1誘發(fā)的濃度依賴于細(xì)胞遷移和特征性兩相反應(yīng)，最大為0．5～1．0nm。在上述分析的另一種形式中，可使用熒光標(biāo)記的細(xì)胞協(xié)助終點(diǎn)的檢測(cè)。在這種情況下，通過在5mMCalceinAM(甘氨酸，N，N’-[[3’，6’-二(乙酰氧基)-3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫噸]-2’，7’-二基]二(亞甲基)二[N-[2-[(乙酰氧基)甲氧基]-2-氧代乙基]]-二[(乙酰氧基)甲基]酯；MolecularProbs)的存在下在暗處保溫45分鐘將使所用的THP-1細(xì)胞標(biāo)記上熒光。通過離心收集細(xì)胞并再懸浮于含Ca2+和Mg2+及0．1％BSA的HBSS(不含酚紅)中．將50毫升(2×105個(gè)細(xì)胞)細(xì)胞懸浮液加到上述的各孔上的濾膜上，將各孔在37℃和5％CO2下保溫2小時(shí)。保溫結(jié)束時(shí)，用磷酸緩沖鹽水洗去濾膜上表面的細(xì)胞，從板上取下濾膜，通過在485nm激發(fā)的、發(fā)射波長(zhǎng)為538nm的熒光(fmax，MolecularDevices)估測(cè)吸附在濾膜下側(cè)或下部孔中的細(xì)胞數(shù)．將數(shù)據(jù)輸入電子表格，校正在沒有化學(xué)引誘劑存在下的任何隨機(jī)性遷移，計(jì)算平均熒光值、均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差、百分抑制和測(cè)試化合物的IC50及顯著性檢驗(yàn)。在本發(fā)明試驗(yàn)化合物的有效劑量下，未觀測(cè)到生理不可接受的毒性。實(shí)施例19藥物組合物下列實(shí)施例說明本發(fā)明的人類治療或預(yù)防用的藥劑形式，但不是將其限定為本文所述的藥劑形式(活性成分被成為“化合物Ⅹ”)(a)<tablesid="table1"num="001"><table>片Ⅰ毫克／片化合物Ⅹ100乳糖Ph．Eur182．75交聯(lián)羧甲基纖維素鈉12．0玉米淀粉糊(5％w／v的糊)2．25硬脂酸鎂3．0</table></tables>(b)<tablesid="table2"num="002"><table>片Ⅱ毫克／片化合物Ⅹ50乳糖Ph．Eur223．75交聯(lián)羧甲基纖維素鈉6．0玉米淀粉15．0聚乙烯吡咯烷酮(5％w／v的糊)2．25硬脂酸鎂3．0</table></tables>(c)<tablesid="table3"num="003"><table>片Ⅲ毫克／片化合物Ⅹ1．0乳糖Ph．Eur93．25交聯(lián)羧甲基纖維素鈉4．0玉米淀粉糊(5％w／v的糊)0．75硬脂酸鎂1．0</table></tables>(d)<tablesid="table4"num="004"><table>膠囊毫克／枚化合物Ⅹ10．0乳糖Ph．Eur488．5鎂1．5</table></tables>(e)<tablesid="table5"num="005"><table>注射劑Ⅰ50毫克／毫升化合物Ⅹ5．0％w／v1M氫氧化鈉溶液15．0％v／v0．1M鹽酸調(diào)至pH7．6聚乙二醇4004．5％w／v注射用水至100％</table></tables>(f)<tablesid="table6"num="006"><table>注射劑Ⅱ(10毫克／毫升)化合物Ⅹ1．0％w／v磷酸鈉BP3．6％w／vO．1M氫氧化鈉溶液15．0％v／v注射用水至100％</table></tables>(g)<tablesid="table7"num="007"><table>注射劑Ⅲ(1毫克／毫升，緩沖到pH6)化合物Ⅹ0．1％w／v磷酸鈉BP2．26％w／v檸檬酸0．38％w／v聚乙二醇4003．5％w／v注射用水至100％</table></tables>(h)<tablesid="table8"num="008"><table>氣霧劑Ⅰ毫克／毫升化合物Ⅹ10．0山梨醇酐三油酸酯13．5三氯一氟甲烷910．0二氯二氟甲烷490．0</table></tables>(i)<tablesid="table9"num="009"><table>氣霧劑Ⅱ毫克／毫升化合物Ⅹ0．2山梨醇酐三油酸酯0．27三氯一氟甲烷70．0二氯二氟甲烷280．0二氯四氟乙烷1094．0</table></tables>(j)<tablesid="table10"num="010"><table>氣霧劑Ⅲ毫克／毫升化合物Ⅹ2．5山梨醇酐三油酸酯3．38三氯一氟甲烷67．5二氯二氟甲烷1086．0二氯四氟乙烷191．6</table></tables>(k)<tablesid="table11"num="011"><table>氣霧劑Ⅳ毫克／毫升化合物Ⅹ2．5大豆卵磷脂2．7三氯一氟甲烷67．5二氯二氟甲烷1086．0二氯四氟乙烷191．6</table></tables>(l)<tablesid="table12"num="012"><table>軟膏毫升化合物Ⅹ40mg乙醇300μl水300μl1-月桂基氮雜環(huán)庚烷-2-酮50μl丙二醇至1ml</table></tables>注上面制劑中的化合物Ⅹ可包括實(shí)施例1-18中舉例的化合物，例如實(shí)施例3、4、5、13和18的化合物．上面的制劑可通過制藥領(lǐng)域的常規(guī)方法獲得，片(a)-(c)可以通過常規(guī)手段包覆腸溶衣，例如包覆乙酸苯二甲酸纖維素．氣霧劑(h)-(k)可結(jié)合普通的計(jì)量劑量的噴霧器進(jìn)行使用，懸浮劑山梨醇酐三油酸酯和大豆卵磷脂可被其它懸浮劑替代，例如山梨醇酐一油酸酯、山梨醇酐倍半油酸酯、聚山梨醇酯80、聚甘油油酸酯或油酸。權(quán)利要求1．一種藥物組合物，它含有式(Ⅰ)化合物或其可藥用的鹽、酯或酰胺和可藥用載體，其中式(Ⅰ)化合物是單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白-1的抑制劑；其中A和B形成可任選取代的亞烷基鏈以與和它們相連的碳原子形成一個(gè)環(huán)；X是CH2或SO2；R1是可任選取代的芳基或雜芳基；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR4、-SO2NHR5、四唑-5-基、SO3H或者式(Ⅵ)的基團(tuán)其中R4選自氫、烷基、芳基、氰基、羥基、-SO2R9，其中R9是烷基、芳基、雜芳基或者鹵代烷基，或者R4是基團(tuán)-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)并且各個(gè)R10基團(tuán)獨(dú)立地選自氫或烷基；R5是氫，烷基，可任選取代的芳基例如可任選取代的苯基或可任選取代的雜芳基例如5或6元雜芳基，或者基團(tuán)COR6，其中R6是氫、烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基；R7和R8獨(dú)立地選自氫或烷基，尤其是C1-4烷基；并且R3是氫、官能團(tuán)、可任選取代的烷基、可任選取代的鏈烯基、可任選取代的炔基、可任選取代的芳基、可任選取代的雜環(huán)基、可任選取代的烷氧基、可任選取代的芳烷基、可任選取代的芳烷氧基、可任選取代的環(huán)烷基。2．根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中式(Ⅰ)的化合物是式(Ⅲ)的化合物其中R1、R2、R3和X如權(quán)利要求1中所定義，Y是基團(tuán)(CR18R19)s，R14、R15、R16、R17及各個(gè)R18和R19獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、炔基、環(huán)炔基或官能團(tuán)，并且s是1-4的整數(shù)。3．根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中式(Ⅰ)化合物中R14、R15、R16、R17及各個(gè)R18和R19獨(dú)立地選自氫；三氟甲基；可任選被芳基、羧基或其酰胺衍生物取代的C1-4烷基；鹵素；羥基；C1-4烷氧基；C1-4鏈烷?；?；C1-4鏈烷酰氧基；氨基；氰基；C1-4烷基氨基；二(C1-4烷基)氨基；C1-4鏈烷酰氨基；硝基；氨基甲酰基；C1-4烷氧羰基；巰基；C1-4烷基硫基；C1-4烷基亞磺?；?；C1-4烷基磺?；换酋０被?；烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、氨基甲酰基C1-4烷基；N-(C1-4烷基)氨基甲?；鵆1-4烷基；N-(C1-4烷基)2氨基甲?；鵆1-4烷基；羥基C1-4烷基；C1-4烷氧基C1-4烷基；嗎啉代；硫代嗎啉代；氧硫代嗎啉代；吡咯烷基；羧基C1-4烷基氨基；R20；NHR21和-OR21，其中R20和R21獨(dú)立地選自可任選取代的苯基或可任選取代的5或6元雜芳環(huán)；或者R14和R15、R16和R17，和／或R18和R19一起形成氧代基團(tuán)或者=NOR22基團(tuán)，其中R22是氫或可任選取代的烴基；條件是與同一個(gè)碳原子相連的R14和R15，或者R16和R17或R18和R19兩個(gè)不都是羥基、C1-4烷氧基、氨基、氰基、硝基或巰基。4．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的組合物，其中X是CH2。5．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的組合物，其中R1是可任選取代的苯基、萘基、呋喃基或噻吩基。6．根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的組合物，其中R2是羧基或者其可藥用鹽或酯。7．根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中的式(Ⅰ)化合物包括式(Ⅲ)的化合物，其中R2是羧基，X和R1如權(quán)利要求1中所定義，R3是氫或C1-4烷基，s如權(quán)利要求2中所定義，R14和R15選自氫、=O、=NOH、=NOR*，其中R*是甲基、芐基、羧基芐基、甲氧羰基芐基、3-(羧基)丙基或其酯例如乙酯、4-羧基丁基或其酯如乙酯以及羧甲基，并且R16、R17、R18和R19都是氫；或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯。8．用于治療炎性疾病的如權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物。9．如權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物，或者其可藥用鹽或體內(nèi)可水解酯，條件是其中A是-(CH2)3-，X是CH2，R2是羧基或其酯或酰胺，并且R3是氫，R1不是未取代的苯基。10．一種制備權(quán)利要求9的化合物的方法，該方法包括將其中A、B、R2和R3如權(quán)利要求1中所定義的式(Ⅶ)化合物與其中R1和X如權(quán)利要求1中所定義并且Z是離去基團(tuán)的式(Ⅷ)化合物反應(yīng)；R1-X-ZⅧ并任選地進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下列步驟(ⅰ)將基團(tuán)R2轉(zhuǎn)化為不同的此類基團(tuán)；(ⅱ)在基團(tuán)A-B上引入取代基或改變其上的取代基；(ⅲ)將基團(tuán)R3轉(zhuǎn)化為不同的此類基團(tuán)。全文摘要一種藥物組合物,它含有式(Ⅰ)化合物或其可藥用的鹽、酯或酰胺和可藥用載體,其中式(Ⅰ)化合物是單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白－1的抑制劑,式(Ⅰ)中A和B形成可任選取代的亞烷基鏈以與和它們相連的碳原子形成一個(gè)環(huán);X是CH文檔編號(hào)A61K31/404GK1291095SQ99803038公開日2001年4月11日申請(qǐng)日期1999年2月2日優(yōu)先權(quán)日1998年2月17日發(fā)明者A·J·巴克爾,J·G·克特勒,A·W·福爾申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡英國有限公司