專利名稱：k受體的阿片樣肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及合成的阿片樣肽，具體涉及作為高選擇性κ受體活化劑的阿片樣肽，更具體地說(shuō)涉及如下活化劑，它(a)不會(huì)穿透到腦內(nèi)，并且(b)具有長(zhǎng)期的體內(nèi)抗傷害感受活性。
背景技術(shù)：
κ阿片樣物質(zhì)受體(KOR)存在于腦，脊索，中樞和外周神經(jīng)末梢，(軀體和內(nèi)臟)一級(jí)感覺(jué)傳入神經(jīng)細(xì)胞體，以及免疫細(xì)胞。激活KOR的分子一般稱之為κ活化劑。
已知，激活腦內(nèi)KOR會(huì)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用?；谶@一發(fā)現(xiàn)，人們?cè)噲D開發(fā)腦透過(guò)性非肽類κ活化劑，用作新的鎮(zhèn)痛劑以避免作用于μ阿片樣物質(zhì)受體(MOR)的嗎啡類似物的副作用(便秘，呼吸抑制，依賴性和成癮性)。已經(jīng)在動(dòng)物和人體內(nèi)確認(rèn)這類化合物具有鎮(zhèn)痛活性而沒(méi)有“μ阿片樣物質(zhì)”的副作用。然而，全身性κ活化劑的開發(fā)卻中斷了，因?yàn)樗鼈儽伙@示也具有一定的副作用，例如多尿、嗜睡和煩躁，這些都是由腦內(nèi)κ受體介導(dǎo)的。
除脊柱上的KOR之外，外周和脊索內(nèi)的KOR也會(huì)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。然而，外周和脊索內(nèi)的KOR與全身性κ活化劑的任何副作用都不相關(guān)。所以，只要能夠產(chǎn)生不進(jìn)入腦內(nèi)的κ受體阿片樣活化劑(通過(guò)外周給予或脊髓給予)，就能夠獲得安全的新鎮(zhèn)痛劑。
在小腸和結(jié)腸中度局部炎癥所致痛覺(jué)過(guò)敏模型中，κ活化劑都具有外周抗傷害感受作用，而應(yīng)激性腸綜合征(IBS)，包括局部?jī)?nèi)臟超敏反應(yīng)(可能與炎癥相關(guān))引起的劇烈內(nèi)臟疼痛，也是外周κ活化劑的作用靶。除胃腸道之外，表現(xiàn)出涉及一級(jí)感覺(jué)傳入神經(jīng)活化和/或致敏(即局部炎癥)的病理情況的其他內(nèi)臟也被認(rèn)為是所述κ受體的阿片樣物質(zhì)適宜的作用靶。κ活化劑還通過(guò)抑制一級(jí)傳入神經(jīng)釋放物質(zhì)P抑制軀體組織內(nèi)的神經(jīng)性炎癥，而且還知道它對(duì)免疫系統(tǒng)具有作用，主要的對(duì)免疫細(xì)胞的抑制作用。
特別需要的是如下肽不進(jìn)入腦內(nèi)，與對(duì)MOR相比具有很高的KOR親和性，具有很強(qiáng)的效力和效果，在體內(nèi)具有長(zhǎng)期的持續(xù)作用。美國(guó)專利5，610，271公開了含有4個(gè)D型異構(gòu)氨基酸殘基的四肽，它們結(jié)合KOR，但這些肽并不具備所有上述優(yōu)良特性。
發(fā)明概述本發(fā)明揭示了一類肽，它們對(duì)KOR具有高度的選擇性，具有長(zhǎng)期的體內(nèi)活性，沒(méi)有任何明顯的腦透過(guò)作用。這些肽含有一段4個(gè)D型異構(gòu)氨基酸序列，其C末端是單取代或雙取代的酰胺。所述化合物的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-取代酰胺其中，Xaa1是(A)D-Phe，(CαMe)D-Phe，D-Tyr，D-Tic或D-Ala(環(huán)戊基或噻吩基)，A是H，NO2，F(xiàn)，Cl或CH3；Xaa2是(A’)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal，D-Tyr或D-Trp，A’是A或3，4Cl2；Xaa3是D-Nle，(B)D-Leu，D-Hle，D-Met，D-Val，D-Phe或D-Ala(環(huán)戊基)，B是H或CαMe；Xaa4是D-Arg，D-Har，D-nArg，D-Lys，D-Ily，D-Arg(Et2)，D-Har(Et2)，D-Amf，D-Gmf，D-Dbu，D-Orn或D-Ior。優(yōu)選的酰胺包括乙酰胺，酰嗎啉，硫代酰嗎啉，4-吡啶甲基酰胺，哌嗪(piperazide)，丙酰胺，環(huán)丙酰胺，二乙基酰胺和取代苯甲酰胺。
具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了合成的阿片樣肽酰胺或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽，它們與κ阿片樣物質(zhì)受體的親和力至少是與μ阿片樣物質(zhì)受體親和力的1，000倍，并且在體內(nèi)給予后具有長(zhǎng)期作用，所述肽的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中，Xaa1是(A)D-Phe，(CαMe)D-Phe，D-Tyr，D-Tic或D-Ala(環(huán)戊基或噻吩基)，A是H，NO2，F(xiàn)，Cl或CH3；Xaa2是(A’)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal，D-Tyr或D-Trp，A’是A或3，4Cl2；Xaa3是D-Nle，(B)D-Leu，D-Hle，D-Met，D-Val，D-Phe或D-Ala(環(huán)戊基)，B是H或CαMe；Xaa4是D-Arg，D-Har，D-nArg，D-Lys，D-Ily，D-Arg(Et2)，D-Har(Et2)，D-Amf，D-Gmf，D-Dbu，D-Orn或D-Ior。Q是NR1R2，嗎啉基，硫代嗎啉基，(C)哌啶基，哌嗪基，4-單取代或4，4-雙取代哌嗪基或ε-賴氨?；?，R1是低級(jí)烷基，取代低級(jí)烷基，芐基，取代芐基，氨基環(huán)己基，2-噻唑基，2-吡啶甲基，3-吡啶甲基，4-吡啶甲基，ω-(酰氨基)-聚亞甲基或聚(氧亞乙基)，R2是H或低級(jí)烷基；C是H，4-羥基或4-氧基。
另一方面，本發(fā)明包括上述化合物在治療內(nèi)臟疼痛之類，尿意頻數(shù)之類或IBD或自身免疫病人患者，或類似非人哺乳動(dòng)物中的用途。
優(yōu)選實(shí)施例的簡(jiǎn)要描述有關(guān)肽的命名參見Schroder ＆ Lubke，The Peptides，Academic Press，1965，其中，根據(jù)常規(guī)表示方法，N末端在左邊，C末端在右邊。如果某氨基酸殘基具有異構(gòu)體，若非另作說(shuō)明，則本發(fā)明中的氨基酸代表其L異構(gòu)型。
如上所述，本發(fā)明提供不僅具有強(qiáng)KOR親和力而且具有長(zhǎng)期體內(nèi)生物活性的KOR選擇性肽。所述κ選擇性阿片樣肽與KOR的結(jié)合親和力是與MOR的至少1，000倍，許多化合物則高出至少10，000倍，有些高出20，000倍或以上。然而，對(duì)許多適應(yīng)癥來(lái)說(shuō)，除上述高選擇性之外，κ活化劑還應(yīng)該沒(méi)有明顯的腦透過(guò)性，而且具有長(zhǎng)期體內(nèi)抗傷害感受活性。所以，除上述選擇性之外，優(yōu)選化合物沒(méi)有明顯的腦透過(guò)性，同時(shí)保持至少1小時(shí)的基本活性，較好的化合物可保持至少2小時(shí)的顯著活性，更好的化合物則表現(xiàn)出上述顯著活性至少3小時(shí)以上。
以下縮寫用于全文，意義一致。D-Nle表示D-正亮氨酸，D-Hle表示D-高亮氨酸。D-Har表示D-高精氨酸，D-nArg表示D-正精氨酸，它比D-Arg短一個(gè)碳原子。D-Nal表示丙氨酸的D異構(gòu)體，在β碳上被萘基取代。較好的是使用D-2Nal，即萘連接在環(huán)結(jié)構(gòu)的2位上；然而，也可以使用D-1Nal。D-Cpa和D-Fpa分別表示氯-D-Phe和氟-D-Phe，優(yōu)選D-4Cpa，D-2Fpa，D-3Fpa和D-4Fpa。D-Npa表示硝基-D-Phe，D-Mpa表示甲基-D-Phe。D-3，4Cpa表示3，4-二氯-D-Phe。D-Acp表示D-Ala(環(huán)戊基)。D-Orn表示D-鳥氨酸，D-Dbu表示α，γ-二氨基丁酸。CML表示Cα甲基Leu，CMP表示CαMePhe。D-4Amf表示D-4(NH2CH2)Phe，D-Gmf表示D-Amf(脒基)，即4位被CH2NHC(NH)NH2取代的的D-Phe。D-Tic表示D-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸。Ala(Thi)中，Thi表示噻吩基，它最好連接在丙氨酸的2位，雖然3-噻吩基也可以。Ily和Ior分別表示異丙基Lys和異丙基Orn，它們的側(cè)鏈氨基被異丙基烷基化。
低級(jí)烷基表示C1至C6，包括環(huán)烷基，優(yōu)選C1至C4，包括環(huán)丙基和環(huán)丁基。Me，Et，Pr，Ipr，Bu，Pn和Bzl表示甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，戊基和芐基。Cyp表示環(huán)丙基，Cyb表示環(huán)丁基。雖然最好是連接在烷基鏈的末端，但也可以連接在鏈的其他位置，例如3-戊基也可以稱為乙基丙基。Ahx表示6-氨基-己基，即(CH2)6-NH2。4Acx表示4-氨基環(huán)己基，hEt表示羥乙基，即-CH2-CH2OH。取代芐基包括4Nbz和4Abz，分別表示4-硝基芐基和4-氨基芐基，Aeb表示4-(2-氨基-2-羧基乙基)芐基，即 2-，3-和4-吡啶甲基(2Pic，3Pic和4Pic)表示通過(guò)2-，3-或4-位亞甲基連接的甲基吡啶基團(tuán)。Mor表示嗎啉基，即 ，Tmo表示硫代嗎啉基， Pip表示哌啶基，4-HyP和4-OxP表示4-羥基哌啶-1-基和4-氧基哌啶-1-基。Ppz表示哌嗪基。Ecp表示4-乙基氨基甲?；?哌嗪-1-基；Pcp表示4-苯基氨基甲?；?哌嗪-1-基。也可使用季銨，例如4，4-二甲基哌嗪-1-基(Dmp)或其他二-低級(jí)烷基取代。
2Tzl表示2-噻唑基，即 Ely表示ε賴氨?；碙-賴氨酸的側(cè)鏈氨基通過(guò)酰胺鍵與C末端連接。
如上所述，R1可以是ω(酰氨基)聚亞甲基或聚(氧亞乙基)，例如Aao，Aoo，Hoh，Ghx或Gao。Aao表示8-(乙酰氨基)-3，6-二氧辛-1-基，即CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-Ac。Aoo表示8-氨基-3，6-二氧辛-1-基，即CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH2。Hoh表示6-(L-氫乳清酰氨基)己-1-基，即(CH2)6-NH-(氫乳清酰基)；L-氫乳清酸是C4N2H5(O)2-COOH。Ghx表示6-(D-葡糖酰氨基)己-1-基，即(CH2)6-NH-CO-(CHOH)4-CH2OH。Gao表示6-(D-葡糖酰氨基)-3，6-二氧辛-1-基，即CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-CO-(CHOH)4-CH2OH。
D-Phe或取代D-Phe最好位于1位。苯環(huán)可在2，3和/或4位被取代，一般優(yōu)選2或4位的氯代或氟代。還可以甲基化α碳原子。也可以使用與D-Phe類似的等價(jià)殘基，包括D-Ala(噻吩基)，D-Ala(環(huán)戊基)，D-Tyr和D-Tic。2位殘基最好是D-Phe或取代D-Phe，該取代優(yōu)選苯環(huán)4位碳上的取代或3位和4位上的取代?；蛘撸梢允褂幂粱〈腄-丙氨酸，以及D-Trp和D-Try。3位最好是D-Nle，D-Leu，D-CML，D-Hle，D-Met或D-Val；然而，也可以使用D-Ala(環(huán)戊基)或D-Phe。4位一般優(yōu)選D-Arg(可被二乙基取代)和D-Orn(可在δ氨基位置被例如異丙基烷基化)；然而，也可以是D-nArg和其他等價(jià)殘基，例如D-Lys(也可以在ε氨基位置被烷基化)和D-Har(可以被二乙基取代)。而且，還可以使用D-Gmf，D-Dbu，D-4Amf和D-His。
雖然預(yù)計(jì)采用4D氨基酸序列將獲得持久的生物作用，但出人意料的是，非取代酰胺的作用持續(xù)時(shí)間很短，只有在C末端加入一個(gè)取代酰胺才獲得了持久的作用。單取代的形式可以是甲基，乙基，丙基，環(huán)丙基或吡啶甲基，以及羥乙基、噻唑基、氨基環(huán)己基、芐基和取代芐基等其他相當(dāng)?shù)臍埢Ｍǔ?，單取代酰胺?yōu)選低級(jí)烷基或吡啶甲基。除單取代酰胺之外，還可以是二烷基取代，例如二乙基氨基；然而，所述取代C末端是嗎啉基，硫代嗎啉基或哌啶基，后者可以是非取代的，或被4-羥基或4-氧基所取代。也可以使用哌嗪基或4-單取代或4，4-二取代哌嗪基，例如ε-賴氨酰基。
我們發(fā)現(xiàn)，結(jié)合通常是因?yàn)樗碾牡陌被嵝蛄?，較好的是，選擇性κ受體阿片樣肽與κ受體結(jié)合親和力的Ki等于或低于2nM。被認(rèn)為主要為連接C末端的酰胺結(jié)構(gòu)所致作用持久性可用前文所述抗傷害感受試驗(yàn)來(lái)測(cè)試，最好的肽其基本生物活性可持續(xù)2或3小時(shí)，同時(shí)對(duì)腦沒(méi)有明顯的影響。
上述阿片樣肽的一個(gè)優(yōu)選亞類具有如下通式H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe(非取代或被CαMe，2F，4F或4Cl取代)，或D-Ala(環(huán)戊基或噻吩基)；Xaa2是(A’)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A’是H，4F，4Cl，4NO2或3，4Cl2；Xaa3是D-Nle，D-Leu，D-CML，D-Met或D-Acp；Xaa4是D-Arg，D-Arg(Et2)，D-Lys，D-Ily，D-Har，D-Har(Et2)，D-nArg，D-Orn，D-Ior，D-Dbu，D-Amf和D-Gmf。Q是NR1R2，Mor，Tmo，Pip，4-Hyp，Oxp或Ppz，R1是Me，Et，Pr，Bu，hEt，Cyp，Bzl或4-吡啶甲基，R2是H或Et。
上述κ阿片樣肽另一個(gè)優(yōu)選亞類具有如下通式H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe，D-4Fpa，D-2Fpa，D-4Cpa，D-Acp或D-Ala(Thi)；Xaa2是D-Phe，D-4Fpa，D-4Cpa，D-3，4Cpa，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp；Xaa3是D-Nle，D-Met，D-CML或D-Leu；Xaa4是D-Arg，D-Lys，D-Har，D-nArg或D-Orn；Q是NR1R2，Mor，Tmo，Pip，4-Hyp或Ppz，，R1是Et，Pr，Bu，Cyp，hEt，Bzl或4-Pic，R2是H或Et。
上述阿片樣肽另一個(gè)優(yōu)選亞類具有如下通式H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe，D-4Fpa，D-2Fpa，D-Acp或D-Ala(2Thi)；Xaa2是(A)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A是4F或4Cl；Xaa3是D-Nle，D-Met或D-Leu；Xaa4是D-Arg，D-Har，D-nArg，D-Lys，D-Orn或D-Gmf；Q是NHR1，Mor，Tmo，Pip或Ppz，，R1是Et，Pr或4-Pic。
上述阿片樣肽另一個(gè)優(yōu)選亞類具有如下通式H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe，D-4Fpa，D-2Fpa或D-Ala(2Thi)；Xaa2是(A)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A是3，4Cl2或4Cl；Xaa3是D-Nle或D-Leu；Xaa3是D-Arg，D-Orn或D-Gmf；Q是NHR1，Mor，Tmo，Pcp，Ppz或N(Et)2，R1是Et，Pr，Cyp，4-Pic，Aeb或Hoh。
已經(jīng)證明，以上阿片樣肽類及其亞類因?yàn)?位氨基酸殘基的C末端具有取代酰胺，其體內(nèi)抗傷害感受活性得以延長(zhǎng)。這一出人意料的特征使得這些肽特別有價(jià)值，因?yàn)槠渲心承┑捏w內(nèi)活性可持續(xù)3小時(shí)以上。某些具有以上序列但只有單一C末端酰胺的四肽也表現(xiàn)出對(duì)KOR選擇性高于對(duì)MOR；然而，它們一般只有短期作用。完全可以預(yù)計(jì)，上述肽如果在合成時(shí)使其C末端具有取代酰胺例如酰嗎啉，則將表現(xiàn)出延長(zhǎng)的作用期。與此一致的發(fā)現(xiàn)是，當(dāng)四肽伯酰胺表現(xiàn)出與KOR的高親和力選擇性結(jié)合時(shí)，合成時(shí)被相應(yīng)取代的酰胺例如乙基酰胺和酰嗎啉，表現(xiàn)出以小時(shí)計(jì)的抗傷害感受活性延長(zhǎng)，即至少1小時(shí)，但不明顯進(jìn)入腦內(nèi)。
雖然以上以通式形式給出了優(yōu)選的氨基酸序列，但是肽化學(xué)領(lǐng)域一般技術(shù)人員都知道，其中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸可以被保守氨基酸所取代，例如，堿性氨基酸之間相互取代，或疏水性氨基酸之間相互取代，例如，D-Ile取代D-Leu，各種殘基還可以如本領(lǐng)域所知進(jìn)行修飾；例如，可如下修飾D-Phe(前文所述)在3位或4位或這兩個(gè)位置引入鹵原子或硝基，或者在α碳上甲基化?？烧J(rèn)為上述修飾將產(chǎn)生等效的κ受體阿片樣肽。
肽可用各種合適的方法合成，例如完全固相技術(shù)，或經(jīng)典溶液加成，或部分固相技術(shù)，或片段縮合技術(shù)。例如，完全固相肽合成技術(shù)(SPPS)可參見教科書Stewart ＆ Young，Solid-Phase Peptide Synthesis，第2版，PierceChemical Company，Rockford，Illinois，1984，其實(shí)例參見美國(guó)專利4，105，603。片段縮合技術(shù)的實(shí)例是美國(guó)專利3，972，859，其他合成方法的實(shí)例則有美國(guó)專利3，842，067和3，862，925。經(jīng)典溶液加成技術(shù)的詳細(xì)描述可參見Bodanzsky等，Peptide Synthesis，第2版，John Wiley＆Sons，New York，1976。
與偶聯(lián)型肽化學(xué)合成一樣的是需保護(hù)待偶聯(lián)氨基酸的所有不穩(wěn)定側(cè)鏈，而且通常還需保護(hù)α氨基，這樣，加成就發(fā)生在加入的單個(gè)氨基酸或二肽或三肽的羧基。這樣的保護(hù)基是本領(lǐng)域所熟悉的，常用叔丁基氧基羰基(Boc)，芐基氧基羰基(Z)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)作為SPPS或經(jīng)典溶液合成法中的優(yōu)選α氨基保護(hù)基，雖然也可使用許多其他α氨基保護(hù)基。
采用SPPS時(shí)，C末端氨基酸殘基與固相樹脂支持體例如O-CH2-聚苯乙烯支持體，0-CH2-芐基-聚酰胺樹脂支持體，-NH-二苯甲基胺(BHA)樹脂支持體，或-NH-對(duì)甲基二苯甲基胺(MBHA)樹脂支持體偶聯(lián)。在需要非取代酰胺時(shí)，一般優(yōu)選BHA或MBHA，因?yàn)榧羟泻髮⒅苯拥玫紺末端酰胺。在需要N-甲基酰胺時(shí)，可用N-甲基BHA樹脂獲得。其他單取代酰胺的合成方法參見W.Kornreich等，Int.J.Peptide Protein Res.，25414-420，1985，和美國(guó)專利4，701，499。C末端為二取代酰胺的肽，例如N-嗎啉基或N-哌啶基，宜通過(guò)經(jīng)典溶液合成法或溶液內(nèi)的片段縮合來(lái)制備。
合成后，上述四肽易于用本領(lǐng)域熟悉的用于純化短肽的方法來(lái)純化，例如反相高效液相層析(RP-HPLC)或其他適合的方法。這樣的純化方法參見J.Rivier等，J.Chromatography，288303-328，1984，和C.Miller和J.Rivier，Peptide Science，Biopolymers，40265-317(1996)，固相合成或其他方法合成后的純化實(shí)例參見美國(guó)專利5，098，995。
可用許多試驗(yàn)來(lái)測(cè)試四肽是否具有高KOR選擇性，強(qiáng)抗傷害感受活性，持久的體內(nèi)生物活性，而且不滲透入腦。受體試驗(yàn)是本領(lǐng)域所熟悉的，目前已經(jīng)克隆了小鼠、大鼠、豚鼠和人的KOR。除gpKOR之外，克隆KOR十分相似，都含約380個(gè)氨基酸。hKOR的氨基酸序列與rKOR和mKOR的同源性分別為93.9％和93.4％。相比之下，hKOR與hMOR和人δ阿片樣物質(zhì)受體(hDOR)則明顯不同，氨基酸序列一致性分別是60.2％和59.1％。KOR及其他阿片樣物質(zhì)受體是經(jīng)典的、7-跨膜區(qū)、G蛋白結(jié)合受體(Gi)。這些克隆受體方便了對(duì)特定侯選肽的篩選；例如，為了確定選擇性，可用KOR和MOR進(jìn)行篩選。人KOR，MOR和DOR已可在海馬神經(jīng)母細(xì)胞瘤衍生的小鼠癌細(xì)胞系(HN.9.10)中穩(wěn)定表達(dá)，并可得到和用于體外篩選。還有許多被廣泛認(rèn)可的體內(nèi)試驗(yàn)已成為普遍的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，用于測(cè)定某阿片樣化合物的抗傷害感受活性。這些試驗(yàn)通常使用小鼠，包括擺尾試驗(yàn)，夾抓試驗(yàn)，乙酸扭體試驗(yàn)，夾尾試驗(yàn)和浸尾試驗(yàn)。Vonvoigtlander，P.F.等，J.Pharm.Exper.Therapeutics，2247-12(1983)描述了許多用于阿片樣化合物的這類試驗(yàn)。
結(jié)合親和力指配體與受體之間的相互作用力。為了測(cè)定與阿片樣物質(zhì)受體的結(jié)合親和力，采用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的肽。上述試驗(yàn)是用穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞系(HN9.10，衍生自小鼠的海馬神經(jīng)母細(xì)胞瘤)中表達(dá)的克隆人κ(hKOR)和μ(hMOR)阿片樣物質(zhì)受體進(jìn)行的。在這些研究中，不斷提高測(cè)試化合物的濃度，取代放射性標(biāo)記的、對(duì)所研究受體具有高度親和力和選擇性的配體的特異性結(jié)合。3H-U-69，593和3H-DAMGO分別在hKOR和hMOR研究中用做配體。這兩種受體都有市售(HEN-Dupont)。DAMGO是[D-Ala2，MePhe4，Gly-ol5]-腦啡肽的首字母縮寫。放射性配體的親和力定義為飽和實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生最大特異性結(jié)合值半數(shù)時(shí)的放射性陪體濃度(KD)。3H-U-69，593對(duì)hKOR的KD和3H-DAMGO對(duì)hMOR的KD分別是0.3nM和3.OnM。被測(cè)化合物(非標(biāo)記即冷配體)的親和力在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)中根據(jù)以下公式計(jì)算抑制常數(shù)Ki來(lái)測(cè)定Ki=IC501+(F/KD)]]>其中，IC50=對(duì)放射性配體的特異性結(jié)合產(chǎn)生50％抑制的非標(biāo)記配體濃度F=游離放射性配體濃度KD=飽和實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的放射性配體的親和力。
在低濃度受體，特定條件下進(jìn)行上述試驗(yàn)時(shí)，被測(cè)化合物的算得Ki與其解離常數(shù)KD十分接近，代表了占據(jù)50％結(jié)合位點(diǎn)所需的配體濃度。在阿片樣物質(zhì)中，納摩爾或亞納摩爾級(jí)的低Ki值被認(rèn)為說(shuō)明是高親和力配體。優(yōu)選類似物具有約2納摩爾(nM)或更低的對(duì)KOR的Ki，Ki等于或低于1nM則更好。因?yàn)镵OR受體在體內(nèi)廣泛存在，κ受體的阿片樣肽將在許多外周活動(dòng)調(diào)節(jié)中具有重要作用，如果它們具有高度的KOR選擇性，它們的副作用將極小，因而在生理學(xué)上將是優(yōu)良的藥物。
上述適用KOR和MOR的結(jié)合試驗(yàn)實(shí)施簡(jiǎn)便，可方便地用已初步鑒定或合成的肽進(jìn)行，以確定它們是否具有KOR選擇性和高親和力。所述結(jié)合試驗(yàn)可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的多種方式進(jìn)行，以上常用類型試驗(yàn)的一個(gè)詳細(xì)例子參見Perrin，M.等，Endocrinology，1181171-1179。
以下實(shí)施例將進(jìn)一步描述本發(fā)明。然而，不應(yīng)將這些實(shí)施例理解成是對(duì)本發(fā)明構(gòu)思或范圍的限定，本發(fā)明的構(gòu)思和范圍由權(quán)利要求書來(lái)限定。
實(shí)施例1以熟悉的肽合成法正確合成以下通式的肽H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHEt。例如，先用經(jīng)典溶液化學(xué)法合成三肽(α-氨基保護(hù)基)-D-Phe-D-Phe-D-Nle(羧基保護(hù)基)。例如，可如下制備該三肽。將H-D-Nle-Ome溶于DMF，加入N-乙基嗎啉(NEM)之類調(diào)節(jié)pH。然后，該溶液與含NEM的Boc-保護(hù)的D-Phe-OH的DMF溶液混合。向該反應(yīng)混合物中加入活化劑或偶聯(lián)劑，例如六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧-三(二甲基氨基)-鏻(BOP)或N，N’-二異丙基碳二酰亞胺(DIC)和N-羥基苯并三唑(HOBt)的混合物。該反應(yīng)完成后，將介質(zhì)蒸干，然后適當(dāng)純化產(chǎn)物并重結(jié)晶。然后用三氟乙酸(TFA)去除Boc保護(hù)基，將二肽重新溶于DMF。加入含NEM的Boc保護(hù)D-Phe的DMF溶液。用BOP重復(fù)以上反應(yīng)，生成三肽，蒸干溶液后純化并重結(jié)晶。所得產(chǎn)物為Boc-D-Phe-D-Phe-D-Nle-OCH3。然后用合適的方法將甲基酯轉(zhuǎn)化為游離酸，例如通過(guò)將其溶解在二噁烷或DMSO與水的混合物中并加入氫氧化鈉。反應(yīng)完全后，分離，純化和重結(jié)晶，得到三肽Boc-D-Phe-D-Phe-D-Nle-OH。
將該三肽溶于含NEM的DMF，與D-Arg(Tos)-NHEt反應(yīng)，仍以BOP作為偶聯(lián)劑。或者，如果需要，用80％的水合肼溶液處理以生成酰肼，如此將三肽甲基酯轉(zhuǎn)化為疊氮化合物，然后分離，并用亞硝酸鈉和無(wú)機(jī)酸的DMF溶液處理。疊氮化合物立即在含三乙胺的DMF溶液中與D-Arg(Tos)-NHEt反應(yīng)。反應(yīng)完成后，將混合物蒸干，然后適當(dāng)純化和重結(jié)晶。然后D-Arg的N末端和側(cè)鏈去保護(hù)，再次純化和重結(jié)晶，生成所需的四肽乙基酰胺(肽No.1)。
使用兩種移動(dòng)相含0.1％三氟乙酸水中的乙腈梯度和pH7的三乙胺磷酸鹽緩沖液中的乙腈梯度，進(jìn)行反相HPLC，和用pH2.5磷酸鹽緩沖液的毛細(xì)電泳，判斷該肽是否均一。據(jù)估計(jì)，所述方法所得肽的純度高于98％。電噴射離子化質(zhì)譜和離子阱分析顯示，假分子離子[MH]+的m/z為609.4，與該四肽算得m/z質(zhì)量609.5一致。假分子離子的片段分析顯示一系列離子的m/z比例與所制備結(jié)構(gòu)的預(yù)計(jì)氨基酸序列一致。
如前所述用表達(dá)人KOR和MOR的細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)。如前所述，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性取代hKOR的3H-U-69，593和hMOR的3H-DAMGO測(cè)定被測(cè)化合物與在小鼠海馬神經(jīng)母細(xì)胞瘤(HN．9．10)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)的hKOR和hMOR的親和力。匯總至少3次實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，用合適的程序，例如Munson和Rodbard的LIGAND程序(Anal．Biochem，107220—230，1980)，計(jì)算抑制解離常數(shù)(Ki)(95％置信限)。根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性置換結(jié)合放射性配體測(cè)得，克隆KOR以高親和力結(jié)合肽No．1，測(cè)得的Ki約為0．05±0．02nM。與表達(dá)人MOR的相同穩(wěn)定轉(zhuǎn)化癌細(xì)胞相比，親和力差異顯著，后者的Ki為1890±990nM。因此，肽No．1結(jié)合hKOR比結(jié)合hMOR強(qiáng)38，000倍。
在小鼠乙酸扭體實(shí)驗(yàn)(見后文)中測(cè)試所述肽顯示ED50約O．09mg／kg，而且，該肽在3小時(shí)后仍持續(xù)表現(xiàn)出50％以上的抗傷害感受作用。因此認(rèn)為肽N0．1具有持久的作用期。
實(shí)施例2如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-D-Phe-D-Nle-D-Arg-Q，見表A。
肽2至15被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例3
如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3Xaa4-Q，見表B。
肽16至39被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例4如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q，見表C。
肽40至53被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例5如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q，見表D。
肽54至58被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例6如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-D-Arg-Q，見表E。
肽59至65被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例7如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q，見表F。
表F中的阿片樣肽被認(rèn)為，與MOR相比，具有高度的KOR選擇性，并具有體內(nèi)抗傷害感受活性。
實(shí)施例8如實(shí)施例1所述合成并測(cè)試以下通式的阿片樣肽H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q，見表G。
肽88至104被認(rèn)為具有持久的抗傷害感受活性。
實(shí)施例9選擇表A-G中已鑒定的肽特別接受進(jìn)一步的體內(nèi)試驗(yàn)以確定起阿片樣物質(zhì)作用的持續(xù)期，試驗(yàn)結(jié)果見后文表H。為了引用方便，沿用了前文諸表中的肽編號(hào)和K／u比數(shù)據(jù)。體內(nèi)試驗(yàn)采用小鼠扭體試驗(yàn)(WT)，該試驗(yàn)非常適合測(cè)定抗傷害感受活性的持續(xù)時(shí)間。該試驗(yàn)的詳細(xì)描述參見G．A．Bentley等，Br．J．Pharmac.，73∶325-332，1981，它選用購(gòu)自Harlan的清醒的雄性ICR小鼠，體重在20-30g之間。實(shí)驗(yàn)前，給小鼠禁食12-16小時(shí)。通過(guò)腹膜內(nèi)注射(i.p.)乙酸稀釋液誘導(dǎo)傷害感受行為，即扭體，進(jìn)行監(jiān)測(cè)。每kg體重用10ml 0.6％乙酸水溶液。評(píng)估給予乙酸后15分鐘內(nèi)的扭體情況。第一步，3至4次增量給藥測(cè)試化合物，在統(tǒng)一的預(yù)處理時(shí)間(注射乙酸前5分鐘)通過(guò)靜脈途徑給予。通過(guò)這一步測(cè)定強(qiáng)度(WT-ED50)和次最大有效劑量(約80-90％抗傷害感受作用)。第二步，在不同的預(yù)處理時(shí)間(注射乙酸前5分鐘，60分鐘，120分鐘和180分鐘)給予各肽的次最大有效劑量，用于測(cè)定作用的持續(xù)期。整個(gè)試驗(yàn)中，將只給予載體而不給予侯選肽的小鼠作為對(duì)照。計(jì)數(shù)注射乙酸起15分鐘內(nèi)的扭體次數(shù)，并如下計(jì)算，以百分比表示生物活性即抗傷害感受作用 因?yàn)楦骰衔锏淖畲笥行┝亢芸赡懿煌圆荒苤苯颖容^，因此，如本領(lǐng)域所知，對(duì)結(jié)果進(jìn)行了數(shù)學(xué)校正，得到表H中的可比數(shù)值。表H中，1，2和3小時(shí)后保留的抗傷害感受活性表示為注射前5分鐘該活性的百分比。數(shù)值高于100％說(shuō)明抗傷害感受活性比實(shí)驗(yàn)開始時(shí)更高。感覺(jué)上，阿片樣肽應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)緩解扭體至少25％，才可被認(rèn)為具有持久的體內(nèi)活性。
除用該試驗(yàn)測(cè)定抗傷害感受活性持續(xù)時(shí)間之外，它還被用來(lái)測(cè)定肽的(短期)體內(nèi)生物效力。該數(shù)值列于WT-ED50欄，單位為mg/kg體重。該值反映小鼠15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)減少50％(與對(duì)照相比)所需的劑量。
阿片樣肽作為鎮(zhèn)痛劑或被用于治療其他與KOR系統(tǒng)相關(guān)的疾病。它們優(yōu)于具有副作用(例如便秘、呼吸抑制和瘙癢)的嗎啡等μ活化劑。特別好的是，這些阿片樣肽基本上不透過(guò)血腦屏障，因而避免了可能產(chǎn)生的副作用。所述化合物在腦透過(guò)方面的安全性通過(guò)比較它們激發(fā)外周效應(yīng)的能力和激發(fā)中樞效應(yīng)的能力來(lái)評(píng)估。用前文所述小鼠扭體試驗(yàn)(WT)來(lái)測(cè)定外周效應(yīng)。用擺尾試驗(yàn)(TF)測(cè)定作用于腦內(nèi)κ受體而產(chǎn)生的中樞效應(yīng)。
擺尾試驗(yàn)測(cè)定急性軀體痛感，用于評(píng)估中樞作用性鎮(zhèn)痛劑的作用強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。將尾巴浸入52℃水中產(chǎn)生的傷害感受造成尾巴的迅速回撤，又稱擺尾。中樞作用性鎮(zhèn)痛化合物將以劑量相關(guān)方式延長(zhǎng)尾巴回撤的滯后期。有關(guān)該試驗(yàn)參見Vanderah，T.W.等，J.Pharm.Exper.Therapeutics，262190-197，1992。
用腦透過(guò)指數(shù)(BPI)來(lái)評(píng)價(jià)安全性BPI=TF-ED50WT-ED50]]>其中ED50分別是靜脈給藥時(shí)，在小鼠扭體試驗(yàn)(WT-ED50)和小鼠擺尾試驗(yàn)(FT-ED50)中產(chǎn)生最大效果半值的劑量。BPI越高，腦透過(guò)越低，化合物用于本申請(qǐng)前述用途時(shí)的安全限度愈寬(沒(méi)有腦副作用)。優(yōu)選阿片樣肽的BPI等于或高于100，更好的高于300。全身性非肽類κ活化劑(例如Enadolin和U-69，593)的BPI低于5，說(shuō)明發(fā)生了明顯的腦透過(guò)，臨床使用時(shí)產(chǎn)生的副作用(多尿、嗜睡和煩躁)也證明了這一點(diǎn)。以下表I中的是一些代表性阿片樣肽的BPI
因?yàn)檫@些肽與KOR牢固結(jié)合，它們還可以在體外試驗(yàn)中用于研究受體和檢測(cè)特定組織樣品中存在何種受體。因此，就此而言，它們可以用于診斷，并有可能用于體內(nèi)診斷。
通常，這些阿片樣肽可用于治療內(nèi)臟痛，獲得抗傷害感受作用，也可以用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。它們尤其適用于治療腹部術(shù)后癥狀，例如消化紊亂和疼痛。它們還被認(rèn)為可有效治療IBS，尿意頻數(shù)，失禁，以及局部炎癥造成腸或其他內(nèi)臟疼痛等其他適應(yīng)癥，例如炎性腸病(IBD)和痛經(jīng)。阿片樣肽減輕免疫應(yīng)答的能力可能有利于抵抗IBD及其他適應(yīng)癥，例如自身免疫病。在急性和慢性炎癥情況下，給予所述肽將產(chǎn)生局部鎮(zhèn)痛活性。它們可用于治療具有疼痛相關(guān)性腹脹、噁心或暫時(shí)性腸抑制等癥狀的消化梗阻，例如可能由痙攣性收縮引起的腸梗阻。阿片樣肽還能夠產(chǎn)生外周鎮(zhèn)痛作用，并可定向緩解術(shù)后疼痛和諸如胃腸道及內(nèi)臟組織炎癥等引起的慢性疼痛，還可緩解戒除藥癮期間的疼痛。
本發(fā)明化合物可以藥學(xué)上認(rèn)可的無(wú)毒鹽的形式給予，例如本領(lǐng)域熟悉的加酸鹽。所述加酸鹽例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，延胡索酸鹽，葡糖酸鹽，鞣酸鹽，雙羥水楊酸鹽，馬來(lái)酸鹽，乙酸鹽，檸檬酸鹽，苯甲酸鹽，琥珀酸鹽，藻酸鹽，蘋果酸鹽，山梨酸鹽，酒石酸鹽等。如果要以片劑形式給予活性成分，該片劑可含藥學(xué)上認(rèn)可的無(wú)毒稀釋劑，這包括黏合劑，例如西黃蓍膠，玉米淀粉或明膠。等滲鹽溶液、磷酸鹽緩沖液、甘露醇或葡萄糖溶液形式的靜脈注射也有效。
藥物組合物一般含有效量的肽和藥學(xué)上認(rèn)可的常規(guī)載體或稀釋劑。通常，組合物含抗傷害感受量，即有效抑制痛感的量。靜脈給藥時(shí)，劑量一般為1-10mg肽/kg體重。組合物可在需要時(shí)給予；例如，可每隔3-6小時(shí)重復(fù)給予一次。本發(fā)明化合物的性質(zhì)允許口服生效，然而，口服劑量可能較高。如果需要長(zhǎng)期傳遞所述阿片樣肽，例如一次給藥后1周或更長(zhǎng)時(shí)間，可采用緩釋、貯庫(kù)或植入體劑型。例如美國(guó)專利3，773，919所述，一種適合的緩釋貯庫(kù)型注射制劑含分散于或包含于降解緩慢、無(wú)毒或非抗原性聚合物(例如聚乳酸/聚乙醇酸聚合物)中的所述肽或其鹽。還已知，可通過(guò)硅膠植入體實(shí)現(xiàn)緩釋給藥。
以上化合物可通過(guò)靜脈、皮下、肌內(nèi)、透皮、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、口服、局部、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或脊髓給藥給予包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物，以獲得抗傷害感受作用，例如逆轉(zhuǎn)腹膜刺激引起的暫時(shí)性胃腸抑制。它們可用于緩解術(shù)后疼痛。有效劑量隨給予形式和所治哺乳動(dòng)物具體種類而異。一例典型劑型是pH3-8，例如pH6的含肽抑菌水溶液，連續(xù)胃腸外給予該溶液，使劑量約在每日每公斤體重0.3μg至3mg之間。以上化合物被認(rèn)為具有良好的體內(nèi)耐受性，它們尤其適合以抑菌水溶液等形式通過(guò)皮下注射來(lái)給予。
雖然，以上描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，顯然，本領(lǐng)域一般技術(shù)人員可在權(quán)利要求所界定的范圍內(nèi)進(jìn)行多種修改。例如，在本發(fā)明肽中可采用不顯著減損肽效果的、本領(lǐng)域已知的其他取代。2位可采用其他取代的D-Phe，例如(4Br)D-Phe或(2，4-Cl2)D-Phe。D-Ily(Bu)和D-Lys(Et2)都是D-Ily和D-Arg(Et2)的等價(jià)物。如果需要，可將四肽N末端預(yù)先甲基化?？捎枚被衔镒鳛榻宇^形成2個(gè)四肽酰胺的二聚體。已被成功應(yīng)用的接頭有1，6-二氨基己烷，1，5-二氨基-3-噁戊烷和1，8-二氨基-3，6-二氧辛環(huán)。所得二聚體被認(rèn)為與對(duì)應(yīng)單體等效。
權(quán)利要求
1．一種合成阿片樣肽酰胺或其藥學(xué)上認(rèn)可的鹽，它與κ阿片樣物質(zhì)受體的親和力是與μ阿片樣物質(zhì)受體親和力的至少1，000倍，并在體內(nèi)給予后具有持久的作用，所述肽的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中，Xaa1是(A)D-Phe，(CαMe)D-Phe，D-Tyr，D-Tic或D-Ala(環(huán)戊基或噻吩基)，A是H，NO2，F(xiàn)，Cl或CH3；Xaa2是(A’)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal，D-Tyr或D-Trp，A’是A或3，4Cl2；Xaa3是D-Nle，(B)D-Leu，D-Hle，D-Met，D-Val，D-Phe或D-Ala(環(huán)戊基)，B是H或CαMe；Xaa4是D-Arg，D-Har，D-nArg，D-Lys，D-Ily，D-Arg(Et2)，D-Har(Et2)，D-Amf，D-Gmf，D-Dbu，D-Orn或D-Ior；Q是NR1R2，嗎啉基，硫代嗎啉基，(C)哌啶基，哌嗪基，4-單取代或4，4-雙取代哌嗪基或ε-賴氨?；琑1是低級(jí)烷基，取代低級(jí)烷基，芐基，取代芐基，氨基環(huán)己基，2-噻唑基，2-吡啶甲基，3-吡啶甲基，4-吡啶甲基，ω-(酰氨基)-聚亞甲基或聚(氧亞乙基)，R2是H或低級(jí)烷基；C是H，4-羥基或4-氧基。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述合成肽，其中Xaa2是D-Phe，Xaa3是D-Leu或D-Nle，Xaa4是D-Arg或D-Orn。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述合成肽，其中Q是NHR1，R1是乙基，丙基，丁基，環(huán)丙基或環(huán)丁基。
4．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述合成肽，其中Q是嗎啉基或硫代嗎啉基。
5．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述合成肽，其中Q是NHR1，R1是4-吡啶甲基。
6．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述合成肽，其中Q是N(Et)2，NH(Aeb)，Ppz或Pcp。
7．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述合成肽，其中Q是NHR1，R1是Aao，Aoo，Hoh，Ghx或Gao。
8．根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述合成肽，其中的Xaa1是D-Phe，D-Ala(2-噻吩基)或D-4Fpa。
9．根據(jù)權(quán)利要求1所述合成肽，其中Xaa4是D-Gmf。
10．根據(jù)權(quán)利要求1所述合成肽，其中Xaa2是D-4Cpa或D-3，4Cpa。
11．一種藥物組合物，含抗傷害感受量的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的合成肽和藥學(xué)上認(rèn)可的液體或固體載體。
12．一種治療方法，包括給予一定量的權(quán)利要求11所述藥物組合物，所述量的組合物能夠(a)在發(fā)生內(nèi)臟痛、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腹部術(shù)后癥狀或急慢性疼痛時(shí)獲得抗傷害感受作用，或(b)抵抗尿意頻數(shù)、失禁或消化道梗阻，或(c)抵抗IBD或自身免疫病。
13．根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成阿片樣肽，具有等于或低于0.5mg/kg的WT-ED50，所述肽的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe(非取代或被CαMe，2F，4F或4Cl取代)，或D-Ala(環(huán)戊基或噻吩基)；Xaa2是(A’)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A’是H，4F，4Cl，4NO2或3，4Cl2；Xaa3是D-Nle，D-Leu，D-CML，D-Met或D-Acp；Xaa4是D-Arg，D-Arg(Et2)，D-Lys，D-Ily，D-Har，D-Har(Et2)，D-nArg，D-Orn，D-Ior，D-Dbu，D-Amf和D-Gmf；Q是NR1R2，Mor，Tmo，Pip，4-Hyp，Oxp或Ppz，，R1是Me，Et，Pr，Bu，hEt，Cyp，Bzl或4-吡啶甲基，R2是H或Et。
14．根據(jù)權(quán)利要求13所述合成肽，其中Xaa2是D-Phe，D-4Cpa或D-3，4Cpa，Xaa3是D-Leu或是D-Nle，Xaa4是D-Arg，D-Orn或D-Gmf。
15．根據(jù)權(quán)利要求13或14所述合成肽，其中Q是NHR1，R1是Et，hEt。Pr或4-吡啶甲基。
16．根據(jù)權(quán)利要求13或14所述合成肽，其中Q是N(Et2)或NH(Aeb)。
17．根據(jù)權(quán)利要求13或14所述合成肽，其中Q是嗎啉基或硫代嗎啉基。
18．根據(jù)權(quán)利要求13或14所述合成肽，其中Q是NHR1，R1是乙基或4-吡啶甲基。
19．根據(jù)權(quán)利要求13或14所述合成肽，其中Q是Ppz，Pcp或NH(Hoh)。
20．根據(jù)權(quán)利要求13-19中任一項(xiàng)所述合成肽，其中的Xaa1是D-Phe，D-Ala(2-噻吩基)或D-Fpa。
21．根據(jù)權(quán)利要求1所述合成肽，具有通式之一H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHEt，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-嗎啉基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-吡啶甲基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHPr，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-硫代嗎啉基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NEt2，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHMe，H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn-嗎啉基，H-D-4Fpa-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-吡啶甲基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-環(huán)丙基，H-D-Ala(2Thi)-D-3，4Cpa-D-Leu-D-Arg-嗎啉基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Gmf-嗎啉基，H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn-NH(Aeb)，H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-嗎啉基，H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-哌嗪基，和H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH(Hoh)。
22．根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成阿片樣肽，具有等于或低于0.5mg/kg的ED50，所述肽的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe，D-4Fpa，D-2Fpa，D-Acp或D-Ala(2Thi)；Xaa2是(A)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A是4F或4Cl；Xaa3是D-Nle，D-Met或D-Leu；Xaa4是D-Arg，D-Har，D-nArg，D-Lys，D-Orn或D-Gmf；Q是NHR1，Mor，Tmo，Pip或Ppz，R1是Et，Pr或4-Pic。
23．根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成阿片樣肽，具有等于或低于0.5mg/kg的ED50，所述肽的通式為H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q其中Xaa1是D-Phe，D-4Fpa，D-2Fpa或D-Ala(2Thi)；Xaa2是(A)D-Phe，D-1Nal，D-2Nal或D-Trp，A是3，4Cl2或4Cl；Xaa3是D-Nle或D-Leu；Xaa4是D-Arg，D-Orn或D-Gmf；Q是NHR1，Mor，Tmo，Pcp，Ppz或N(Et)2，R1是Et，Pr，Cyp，4Pic，Aeb或Hoh。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類對(duì)κ阿片樣物質(zhì)受體(KOR)具有高選擇性,具有持久的外周作用,而且基本上不進(jìn)入腦內(nèi)的肽,它具有4個(gè)D型氨基酸殘基構(gòu)成的序列,其C末端是單取代或二取代的酰胺。代表性化合物與KOR的親和力是與μ阿片樣物質(zhì)受體(MOR)親和力的至少1000倍,ED
文檔編號(hào)A61P1/04GK1283201SQ98812582
公開日2001年2月7日 申請(qǐng)日期1998年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月23日
發(fā)明者J·L·朱尼英, P·J·M·里弗, C·D·施泰英阿特, J·S·迪亞斯, J·A·特羅內(nèi)爾, T·W·范德阿 申請(qǐng)人:凡林有限公司