專利名稱：用作mmp抑制劑的雙磺酰胺異羥肟酸類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的雙磺酰胺異羥肟酸類化合物、含有它們的藥物組合物以及這些化合物的應(yīng)用方法。具體而言，本發(fā)明所述化合物是參與組織降解的基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑。
背景技術(shù)：
在許多疾病過程中結(jié)締組織喪失其完整性，所述疾病包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)減少癥(例如骨質(zhì)疏松癥)、瘤轉(zhuǎn)移(侵襲和生長)、牙周炎、齒齦炎、角膜潰瘍、皮膚潰瘍、胃潰瘍以及其它與結(jié)締組織降解有關(guān)的疾病。盡管上述疾病在發(fā)達國家中的發(fā)生率很高，但還沒有預(yù)防出現(xiàn)組織損傷的治療方法。一系列重要的科學(xué)證據(jù)表明上述損傷歸咎于結(jié)締基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP類)活性的失控，并且后果是，對此類酶的抑制成為了治療性干預(yù)活動的目的(參見Matrisian，L.M.，基質(zhì)(Bases)，14卷，445-463頁，(1992)；Emonard，H等人，細胞和分子生物學(xué)，36卷，131-153頁(1990)；Docherty，A.J.P.等人，類風(fēng)濕學(xué)年報，49卷，469-479，(1990))。
異羥肟酸衍生物是一類已知的具有治療活性的MMP抑制劑，并且在許多參考文獻中公開了多種異羥肟酸衍生物。例如，歐洲專利申請0,606,046 A1公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的芳基磺酰氨基取代的異羥肟酸類化合物。國際專利申請公開WO95/35275和WO95/35276公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的磺酰胺異羥肟酸和羧酸的衍生物。這些參考文獻均涉及單-磺酰胺異羥肟酸類化合物。本發(fā)明所述化合物是新的與其它磺酰胺異羥肟酸類化合物皆不同的雙磺酰胺異羥肟酸類化合物。
本發(fā)明所述化合物對抑制多種來自基質(zhì)金屬蛋白酶系的酶(例如膠原酶、基質(zhì)溶素和明膠酶)具有意料外的優(yōu)異活性，并由此適用于治療基質(zhì)金屬內(nèi)切蛋白酶疾病，例如骨質(zhì)疏松癥、瘤轉(zhuǎn)移(侵襲和生長)、牙周炎、齒齦炎、角膜潰瘍、皮膚潰瘍、胃潰瘍、炎癥，以及其它與結(jié)締組織降解有關(guān)的疾病。
公開的信息下列專利申請公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的磺酰胺異羥肟酸類化合物。
歐洲專利申請0,606,046A1公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的芳基磺酰氨基取代的異羥肟酸類化合物。
國際專利申請WO95/35275和WO95/35276公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的異羥肟酸及羧酸的衍生物。
美國專利申請60/029,585公開了用作基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的α-氨基磺?；惲u肟酸。
發(fā)明概述本發(fā)明提供一種式I的化合物
或其可藥用鹽，其中R1和R2相同或不同并且表示a)C1-10烷基，b)苯基c)雜芳基，或d)由C1-4烷基、OR3、NHR3、CONHR3、NHCOR3、SO2NHR3或鹵素取代的苯基；R3為
a)H，或b)C1-4烷基；并且n為1、2、3、4、5或6。
本發(fā)明所述化合物能夠抑制多種來自基質(zhì)金屬蛋白酶系的酶，例如膠原酶、基質(zhì)溶素和明膠酶，所以適于治療基質(zhì)金屬內(nèi)蛋白酶疾病。
發(fā)明詳述為了達到本發(fā)明的目的，不同含烴部分中的碳含量是通過標(biāo)明含烴部分內(nèi)碳原子的最小和最大數(shù)目的前綴來表示，即，前綴Ci-j規(guī)定了含有從整數(shù)“i”至整數(shù)“j”的碳原子數(shù)。
因此，術(shù)語“C1-10烷基”和“C1-4烷基”分別是指1至10個碳原子或1至4個碳原子，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等，以及它們的異構(gòu)體，R1和R2的烷基優(yōu)選含有1至4個碳原子，R3的烷基優(yōu)選含有1至2個碳原子。
術(shù)語“雜芳基”是指含有一個或多個選自氧、氮和硫的原子的5至10元不飽和雜環(huán)部分，例如吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、喹啉基、喹唑啉基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、吲哚基、異氮雜茚基、呋喃基、噻吩基、吡咯基和嘌呤基。
術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟。
適當(dāng)時，可以采用常規(guī)方法將本發(fā)明所述化合物轉(zhuǎn)化成為其鹽。
術(shù)語“可藥用鹽”是指適合本發(fā)明化合物給藥的酸加成鹽，其中包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、丙酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、富馬酸鹽等。這些鹽可以為水合物形式。本發(fā)明所述化合物中的一些可以形成金屬鹽，例如形成鈉、鉀、鈣和鎂的鹽，而這些鹽均屬于術(shù)語“可藥用鹽”。
本發(fā)明的式I化合物在異羥肟酸的α-位含有手性中心，所以它存在兩種對映異構(gòu)體或二者的外消旋混合物。本發(fā)明涉及這兩種對映異構(gòu)體以及含有這兩種異構(gòu)體的混合物。此外，由于存在取代基，在任一R1和R2基團中還可以含有另外的手性中心以及其它異構(gòu)體，而且本發(fā)明包括該系列中所有可能的立體異構(gòu)體以及幾何異構(gòu)體。
R1和R2優(yōu)選是苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基。
下列化合物是本發(fā)明的優(yōu)選化合物a.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，b.(R)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，c.(S)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，d.N-羥基-2，3-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丙酰胺，e.N-羥基-2，4-雙-[[4-氟苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，f.(S)-N-羥基-2，4-雙-[[苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，g.N-羥基-2，5-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]戊酰胺，h.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲氧基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，i.N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)]丁酰胺，j.N-羥基-4-[(4-甲氧基苯基磺?；被?-2-(4-甲基苯基磺?；被?]丁酰胺，k.N-羥基-4-[(4-氟苯基磺酰基氨基)-2-(4-甲基苯基磺?；被?]丁酰胺，l.N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺?；被?]丁酰胺，和m.N-羥基-4-[(4-氟苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)]丁酰胺，可以按照下列兩種制備方法中的任意一種制備本發(fā)明所述化合物。當(dāng)兩個磺酰胺基團相同時，采用方案A所列的步驟。當(dāng)磺酰胺基團不同時，則采用方案B中所列的步驟。
如方案A所示，從氨基酸1通過美國化學(xué)學(xué)會會志，第59卷第1116頁(1937)所述方法可以制備得到雙磺胺2。簡單而言，在1N氫氧化鈉的存在下，將氨基酸1暴露在預(yù)定的至少2當(dāng)量的磺酰氯下得到雙磺胺2。起始反應(yīng)物氨基酸1既可以是市售產(chǎn)品，也可以根據(jù)化學(xué)會志(英)，第1564(1939)公開的方法便利地制得。雙磺胺2與肽偶聯(lián)劑在鄰-芐基鹽酸羥胺、4-甲基嗎啉和一種催化劑的存在下反應(yīng)生成被保護的異羥肟酸鹽，所述肽偶聯(lián)劑可例如是1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或1，1’-羰基二咪唑(CDI)，所述催化劑可例如是1-羥基苯并三唑(HOBT)。有時候可以分離出作為副產(chǎn)物的環(huán)狀磺胺4。在此反應(yīng)中，一般將DMF或DMF/CH2Cl2用作溶劑。通過與鄰芐基羥胺和乙腈一起回流很容易將環(huán)狀磺胺4轉(zhuǎn)化為被保護異羥肟酸鹽3。在甲醇或乙醇中用Pearlman氏催化劑將保護的異羥肟酸鹽3氫化，得到所需的雙-磺酰胺異羥肟酸鹽5。
當(dāng)需要磺酰胺基團不相同時，采用方案B所示的步驟。按照化學(xué)通訊，第21卷，第770頁(1956)所述的方法，將2，4-二氨基丁酸二鹽酸鹽與碳酸銅(II)加熱，以銅配合物形式保護二氨基酸1。利用存在于丙酮中的碳酸氫鈉，將深藍色的銅配合物溶液與R1SO2Cl反應(yīng)，得到4-磺?；被难苌?。隨后，將這種銅配合物在2N鹽酸中的溶液用硫化氫脫保護，制得單-4-R1SO2NH-2-氨基酸6，(參見累積化學(xué)通訊，第24卷，第3449頁(1959)和生物化學(xué)雜志，第220卷，第265頁(1956)，)，將該化合物與方案A中所示的R2SO2Cl反應(yīng)，得到所需的化合物10。
方案A
方案B
本發(fā)明所述藥物組合物的制備可通過標(biāo)準(zhǔn)和常規(guī)技術(shù)將本發(fā)明式I化合物與固態(tài)或液態(tài)的可藥用載體以及任選的可藥用輔料和賦形劑混合而成。固體形式的組合物包括粉劑、片劑、可分散顆粒劑、膠囊和栓劑。固態(tài)載體可以是至少一種還可用作稀釋劑、矯味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、片劑崩解劑和成膠囊劑的物質(zhì)。惰性固態(tài)載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、蔗糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、纖維素材料、低熔點蠟、可可脂等。液體形式的組合物包括溶液、懸浮液和乳液。譬如，可以是將本發(fā)明化合物溶解在水、水-丙二醇和水-聚乙二醇體系中的所述溶液，該溶液中還任選地含有常規(guī)著色劑、矯味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑。
藥物組合物是以常規(guī)技術(shù)獲得。優(yōu)選所述組合物是含有有效量活性組分，即本發(fā)明所述式I化合物的單位劑型。
活性組分，即本發(fā)明的式I化合物，在所述藥物組合物和單位劑型中的含量可以根據(jù)特定的給藥方法、化合物的具體功效以及所需濃度進行廣泛地改變或調(diào)整。通常，活性組分的含量范圍應(yīng)是組合物重量的0.5％至90％。
在對于患者的治療應(yīng)用中，所述患者患有或易患那些與結(jié)締組織降解或與抑制多種基質(zhì)金屬蛋白酶系的酶(包括膠原酶、基質(zhì)溶素和明膠酶)有關(guān)的疾病。應(yīng)將本發(fā)明所述化合物或其藥物組合物以能夠在患者體內(nèi)達到并維持一定濃度也就是一定量的活性成分或血藥濃度的劑量經(jīng)口服、非腸道和/或局部給藥，從而通過有效抑制上述酶來進行治療。通常，活性化合物的有效量應(yīng)在約0.1至約100mg/kg的范圍內(nèi)。應(yīng)理解，所述劑量將隨患者的需求、待治療結(jié)締組織降解的嚴(yán)重程度以及所用的特定化合物而改變。而且應(yīng)理解的是，初始給藥劑量可以在上限水平以上有所增加，目的在于迅速達到預(yù)期的血藥濃度；初始劑量也可以低于最佳值，同時可在治療期間根據(jù)具體的情況逐漸增加所用的日劑量。如果需要，也可以將日劑量分為多劑量給藥，例如每天2至4次。
本發(fā)明化合物抑制多種基質(zhì)金屬蛋白酶系的酶，其中包括膠原酶、基質(zhì)溶素和明膠酶，并由此適于治療基質(zhì)金屬內(nèi)切蛋白酶疾病，例如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)減少癥(例如骨質(zhì)疏松癥)、瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲和生長、牙周炎、齒齦炎、角膜表皮潰瘍、胃潰瘍以及其它與結(jié)締組織降解有關(guān)的疾病。這些疾病和癥狀是具有普通技術(shù)的內(nèi)科醫(yī)生熟知和易于診斷的。
用于非腸道給藥的本發(fā)明所述藥物組合物一般含有可藥用量的、作為可溶性鹽(酸加成鹽或堿式鹽)溶于可藥用液態(tài)載體中的本發(fā)明式I化合物；所述可藥用液態(tài)載體可例如是pH約為3.5-6的注射用水和適當(dāng)?shù)木彌_等滲溶液。適用的緩沖劑包括例如，正磷酸三鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉、N-甲基葡糖胺、L(+)-賴氨酸、L(+)-精氨酸等。式I化合物一般是以足夠提供藥用注射濃度在1mg/ml至約400mg/ml范圍內(nèi)的量溶解在載體內(nèi)，所得液態(tài)藥物組合物的給藥將獲得藥劑的上述抑制有效量。本發(fā)明式I化合物便于以固體和液體劑型口服給藥。
通過下列有關(guān)實施例可以更好地理解本發(fā)明所述化合物及其制劑，其中所述的實施例的目的是說明本發(fā)明但不限定本發(fā)明的保護范圍。實施例1 N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺的制備
步驟1. 2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酸的制備在室溫下，向5.00g(26.2mmol)2，4-二氨基丁酸二鹽酸鹽和130ml(130mmol)1N氫氧化鈉的溶液中一次性加入11.0g(57.6mmol)在130ml乙醚中的對甲苯磺酰氯溶液。在室溫下將兩層溶液攪拌16小時。分出乙醚層，將水層酸化至pH 2。收集固體，用水洗滌，風(fēng)干并在50℃和高真空下干燥。產(chǎn)物自異丙醇/戊烷中結(jié)晶，得到4.33g本標(biāo)題化合物(熔點187-188℃)。IR(cm-1)2924，1168，1335，2754，2855，3299，1092，2869，1712；1H NMR(DMSO)1.64，1.71，2.34，2.37，2.62，3.66，7.30，7.36，7.51，7.58，7.98.步驟2. 1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(4-甲基苯基)磺酰胺]-2-吡咯烷酮的制備室溫下，將1.00g(2.35mmol)2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酸和0.500g(3.09mmol)1，1’-羰基二咪唑在15ml無水丙酮中的混合物攪拌16小時。蒸發(fā)丙酮，加入水，收集固體并風(fēng)干。該固體自乙酸乙酯/甲醇/戊烷中結(jié)晶，得到0.90g本標(biāo)題化合物(熔點193-194℃)。IR(cm-1)2924，1165，2954，2855，1742，659，1357，1141，1086，1124；1H NMR(CDCl3)2.03，2.42，2.44，2.55，3.65，3.75，3.90，5.09，7.32，7.72，7.89.步驟3. N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺的制備將0.500g(1.22mmol)1-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-4-[(4-甲基苯基)磺酰胺]-2-吡咯烷酮和1.00g(8.13mmol)鄰-芐基羥胺在10ml乙腈中的混合物加熱回流2天。將溶劑蒸發(fā)，使殘余物在乙酸乙酯和10％鹽酸之間分配。用鹽水、飽和碳酸氫鈉及鹽水提取該乙酸乙酯層。將乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。產(chǎn)物通過制備性TLC提純得到鄰-芐基異羥肟酸中間體。
將鄰-芐基異羥肟酸中間體(0.50g，0.94mmol)和0.10gPearlman氏催化劑在75ml甲醇中及5psi的條件下氫化2.5小時?；旌衔锝?jīng)硅藻土過濾，蒸發(fā)濾液，將產(chǎn)物在真空下干燥得到0.395g本標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)1.88，2.32，2.35，4.01，7.21，7.7；MS m/z[MH+]442.實施例2.(R)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以(R)-2，4-二氨基丁酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物(熔點152-153℃)。[α]D＝-8°(DMSO)；1H NMR(DMSO)1.54，2.35，2.37，3.3，7.28-7.36，7.57；MS[MH+]m/z 442.
實施例3.(S)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以(S)-2，4-二氨基丁酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。1H NMR(DMSO)2.6，2.8，2.35，2.37，7.31，7.39，7.58；MS[MH+]m/z 442.
實施例4. N-羥基-2，3-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丙酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作嚴(yán)格改動，但以2，3-二氨基丙酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。IR(cm-1)2924，1162，2954，2855，3257，3276，2868，1642，1330，3292，1458；1H NMR(DMSO)2.36，2.71，3.71，7.32，7.48，7.62，7.9，8.92，11.0；MS[MH+]m/z 428.實施例5. N-羥基-2，4-雙-[[4-氟苯基磺酰基]氨基]丁酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以2，4-二氨基丁酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。IR(cm-1)1153，1168，1495，1659，1092，1592，1330，840，1293，1239；1H NMR(DMSO)1.55，3.53，7.3-7.45，7.84；MS[MH+]m/z 450.
實施例6. (S)-N-羥基-2，4-雙-[[苯基磺酰基]氨基]丁酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以(S)-2，4-二氨基丁酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。IR(cm-1)2924，2955，2855，1158，3257，2868，1323，1451，1328，1643；1H NMR(DMSO)1.55，2.57，3.51，7.47-7.80；MS[MH+]m/z 414.
實施例7. N-羥基-2，5-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]戊酰胺的制備
按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以鳥氨酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。IR(cm-1)2924，1159，2955，2855，3266，2869，1329，1653，1314，1307；1H NMR(DMSO)1.26，2.36，3.45，7.32，7.62，7.68；MS[MH+]m/z 456.
實施例8. N-羥基-2，4-雙-[[4-甲氧基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺的制備
按照實施例1和2的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以2，4-二氨基丁酸為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。
IR(cm-1)2926，1155，2954，2855，2869，1262，1597，1499，1094，1462，1324，1302；1H NMR(DMSO)1.54，3.48，3.81，3.82，7.01，7.07，7.33，7.62，8.83；MS[MH+]m/z 474.實施例9. N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)]丁酰胺的制備
步驟1. 2-(4-甲氧基苯基磺?；被?-4-(4-甲基苯基磺?；被?丁酸將5.0g(26mmol)2，4-二氨基丁酸二鹽酸鹽、10g碳酸銅(II)和2.2g(36mmol)碳酸氫鈉在100ml水中的混合物攪拌回流2小時。將反應(yīng)混合物過濾，固體用水洗滌。將濾液的體積調(diào)至125ml。將25ml藍色銅配合物溶液與0.44g(5.2mmol)碳酸氫鈉和0.60g(3.1mmol)對甲苯磺酰氯在15ml丙酮中反應(yīng)。該反應(yīng)攪拌過夜，收集固體，用熱水、乙醇、乙醚洗滌并風(fēng)干，得到1.05g藍色固體。在2N鹽酸溶液中，將該固體用硫化氫處理，形成硫化銅和2-氨基-4-(4-甲基苯基磺酰基氨基)丁酸。在5℃下，將該溶液調(diào)至pH6，得到0.5g所述的丁酸化合物，該化合物自乙酸乙酯/甲醇結(jié)晶，得到本標(biāo)題化合物(熔點128-129℃)。對于其他化合物，濃縮該2N鹽酸溶液，得到游離的2-氨基酸鹽酸鹽。1H NMR(DMSO)1.67，1.77，2.36，2.83)，3.06，7.36，7.64；MS m/z[MH+]272.325.
將0.50g(1.8mmol)上述丁酸、4ml(4mmol)1N氫氧化鈉和0.43(2.0ml)4-甲氧基苯基磺酰氯在10ml乙醚中的混合物攪拌1至2天。分離乙醚層，用12N鹽酸將水層酸化至pH 1-2，得到產(chǎn)物，將其過濾、用水洗滌并風(fēng)干。自乙酸乙酯/甲醇/己烷中結(jié)晶，得到本標(biāo)題化合物，該化合物為固體(熔點187℃)。1H NMR(DMSO)1.65，2.36，2.63，3.59，3.80，7.0，7.35，7.62.MS m/z[MH+]442.51.步驟2. N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)]丁酰胺的制備按照實施例1的常規(guī)方法并且不作重要改動，但以實施例9步驟1的產(chǎn)物為起始反應(yīng)物制備本標(biāo)題化合物。實施例10 生物活性試驗利用顆粒濃度熒光分析法評估對一種或多種MMP酶(基質(zhì)溶素、明膠酶和膠原酶)的體外抑制活性。將抑制劑與MMP類的酶結(jié)合以防止底物被基質(zhì)溶素、明膠酶或膠原酶降解。所述底物上業(yè)已連接有熒光素和生物素基團。隨后，將完整的底物通過生物素基團結(jié)合在被抗生物素蛋白包被的顆粒上。顆粒一經(jīng)洗滌和干燥后，連接在顆粒上的熒光素基團將產(chǎn)生熒光信號。當(dāng)抑制劑不存在時，底物被MMP類的酶降解并脫去熒光素基團，因此檢測不到熒光信號。將試驗化合物溶解在DMSO中達到所要求的濃度，進而用MMP緩沖劑(50mM Tris-HCl，pH 7.5；150mM NaCl；0.02％NaN3)將該溶液稀釋至1∶5。制備出每種化合物的連續(xù)兩倍稀釋液。將濃縮且活化的酶溶液轉(zhuǎn)移到試驗化合物的各個平板內(nèi)，并且將混合物在室溫下保溫15分鐘。此后，將融化的MMP底物加入到所有平板內(nèi)，并將平板在室溫下避光保溫1-3小時。此時，將底物混合物與0.1％抗生物素蛋白包被的聚苯乙烯顆粒混合。15分鐘后，在將珠粒過濾和洗滌后測定其熒光值。隨后計算其Ki值。本發(fā)明化合物抑制作用的數(shù)據(jù)列于表1中。具有較低Ki值的化合物被認(rèn)為是更有效的MMP抑制劑。對于基質(zhì)溶素的Ki值在15μM以下的化合物將在結(jié)締組織疾病中顯示出治療功效。
表1本發(fā)明化合物的MMP抑制常數(shù)(Ki，μM)
權(quán)利要求
1.式I化合物
或其可藥用鹽，其中R1和R2相同或不同并且表示a)C1-10烷基，b)苯基c)雜芳基，或d)由C1-4烷基、OR3、NHR3、CONHR3、NHCOR3、SO2NHR3或鹵素取代的苯基；R3為a)H，或b)C1-4烷基；并且n為1、2、3、4、5或6。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2選自基團苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其為a.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，b.(R)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，c.(S)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，d.N-羥基-2，3-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丙酰胺，e.N-羥基-2，4-雙-[[4-氟苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，f.(S)-N-羥基-2，4-雙-[[苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，g.N-羥基-2，5-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]戊酰胺，h.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲氧基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，i.N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)]丁酰胺，j.N-羥基-4-[(4-甲氧基苯基磺酰基氨基)-2-(4-甲基苯基磺?；被?]丁酰胺，k.N-羥基-4-[(4-氟苯基磺?；被?-2-(4-甲基苯基磺?；被?]丁酰胺，l.N-羥基-4-[(4-甲基苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺?；被?]丁酰胺，或m.N-羥基-4-[(4-氟苯基磺?；被?-2-(4-甲氧基苯基磺?；被?]丁酰胺。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其為a.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺?；鵠氨基]丁酰胺，b.(R)-N-羥基-2，4-雙-[[4-甲基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，或c.N-羥基-2，4-雙-[[4-甲氧基苯基磺酰基]氨基]丁酰胺，
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中n為2。
6.一種抑制過量基質(zhì)金屬蛋白酶的方法，其中包括給需治療患者施用有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中基質(zhì)金屬蛋白酶包括基質(zhì)溶素、膠原酶和明膠酶。
8.一種治療患有或易患與結(jié)締組織降解有關(guān)疾病的患者的方法，該方法包括給需治療患者施用有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
9.權(quán)利要求6所述方法，其中所述與結(jié)締組織降解有關(guān)的疾病為骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎；骨質(zhì)減少癥，例如骨質(zhì)疏松癥；瘤轉(zhuǎn)移(侵襲和生長)、牙周炎、齒齦炎、角膜潰瘍、胃潰瘍以及其它與結(jié)締組織降解有關(guān)的疾病。
10.權(quán)利要求6所述的方法，其中將有效量的權(quán)利要求1所述化合物以藥物組合物形式經(jīng)口服、非腸道或局部給藥。
11.權(quán)利要求8所述的方法，其中將有效量的權(quán)利要求1所述化合物以藥物組合物形式經(jīng)口服、非腸道或局部給藥。
12.權(quán)利要求6或8所述的方法，其中所述化合物的給藥量是從大約0.1至大約100mg/kg體重/天。
13.一種藥物組合物，該組合物含有一定量的有效抑制過量基質(zhì)金屬蛋白酶的權(quán)利要求1所述化合物以及可藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明提供一種式Ⅰ化合物或其可藥用鹽,其中R
文檔編號A61P17/02GK1243507SQ98801768
公開日2000年2月2日 申請日期1998年1月9日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月17日
發(fā)明者E·J·加科森, L·L·斯卡勒策凱 申請人:法瑪西雅厄普約翰美國公司