專利名稱：禽霍亂油乳劑滅活苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有抗原或抗體的醫(yī)用制品，具體講是預(yù)防禽霍亂發(fā)生的疫苗及其制備方法。
禽霍亂是雞最常見的傳染病。它發(fā)病率高、死亡率高、往往造成家禽全群覆沒、使養(yǎng)禽業(yè)遭受重大經(jīng)濟(jì)損失。由于禽群一旦感染，病菌就在禽群中長期存在，一旦停藥又會再次發(fā)病，造成死亡率增高，藥費(fèi)增加，降低了經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明的目的在于提供一種禽霍亂油乳油劑滅活苗，給家禽注射以保護(hù)家禽免受強(qiáng)毒株的攻擊，增強(qiáng)免疫效果。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種禽霍亂油乳劑滅活苗，該疫苗是將多殺性巴氏桿菌經(jīng)雞接種，回收雞胚尿囊液和胚體，用其菌液經(jīng)滅活作成水相與礦物油混合成油包水滅活苗。
上述疫苗是通過以下方法制備的取禽源的多殺性巴氏桿菌接種血瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢驗(yàn)純正，作為種子使用；以適量的種子培養(yǎng)物接種12日齡雞胚經(jīng)37℃孵化18～24小時，將致死雞胚尿囊液和胚體回收，取樣純檢，并計(jì)活菌數(shù)，用福爾馬林滅活制得水相；將上述水相與礦物油按1∶3比例經(jīng)膠體磨充分混合后制成油乳劑滅活苗。
將多殺性巴氏桿菌經(jīng)雞胚接種，回收雞胚尿囊液和胚體，其中的細(xì)菌含量可達(dá)100億／ml，用其水相與礦物油制成疫苗，這樣，可大大降低培養(yǎng)細(xì)菌的費(fèi)用，還可提高細(xì)菌數(shù)量(濃度)，增強(qiáng)免疫效果；疫苗的制備方法具有操作簡單、快速、成本低等特點(diǎn)。從而為禽霍亂疫苗的制備開辟了一條新途徑。
以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
實(shí)施例禽霍亂油乳劑滅活苗，它是油包水結(jié)構(gòu)的滅活苗，采用多殺性巴氏桿菌高濃度菌液經(jīng)福爾馬林滅活制成，其油包水結(jié)構(gòu)的載體為復(fù)方10#白油。
本發(fā)明的疫苗是通過以下具體步驟制備的。
步驟一制造禽霍亂油乳劑滅活苗所用的禽源多殺巴氏桿菌系從禽霍亂發(fā)病死亡雞的肝臟分離而得，經(jīng)鑒定其血清型為A型。菌種毒力用含0．1％裂解血及4％健康動物血清的馬丁瓊脂37℃24小時培養(yǎng)的菌液1～5個菌，肌肉注射，可致死4～6月齡的敏感雞。
步驟二取上述細(xì)菌接種血瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢驗(yàn)純正，作為種子使用。
步驟三制備制苗菌液，取上述種子培養(yǎng)物適量給12日齡健康雞胚接種，置37℃孵化18～24小時后照蛋，經(jīng)細(xì)菌致死的雞胚用于回收菌液，收集尿囊液和胚體，將回收的菌液純檢和活菌計(jì)數(shù)，取樣后加入福爾馬林，一般用4％甲醛滅活，隨加隨搖，使甲醛最終濃度為0．1％，37℃滅活24小時，該菌液每100份加入4份吐溫--80制成水相。
其它一些制劑也可以進(jìn)行滅活，具體方法aβ--丙內(nèi)脂滅活，在菌液中加入10％的β--丙內(nèi)脂，使其最終濃度為1／1500；b乙酰苯乙烯亞胺(Acety lethy lenimine--AEI)滅活，在菌液中加入10％的AEI，使最終濃度為0．1％，置30℃溫箱中滅活8小時取出，加入20％Na2SO3·5H2O溶液，使最后含量為0．5％以中和AEI。
另外，吐溫--80(TWeen--80)屬免疫增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑，其化學(xué)名為聚山梨醇脂--80，同類品有吐溫--20。
步驟四將94份的礦物油(10#白油)加入6份司本--80混合后每100ml再加入2克硬脂酸鋁制成油相。
上述司本--80(Span--80)的化學(xué)名為失水山梨醇單油酸脂，用作乳化劑和增溶劑，同類品有Span--60，Span--40，Span--20。
硬脂酸鋁的用途是油質(zhì)注射劑的助懸劑。
步驟五將上述水相與油相按1∶3的比例經(jīng)膠體磨充分混合制成油包水結(jié)構(gòu)的滅活苗。
取上述油乳劑滅活苗1ml給2～8月齡健康敏感雞5只注射，于14天后連同對照雞2只攻擊致死量的A型多殺性巴氏桿菌強(qiáng)毒株，觀察14天，免疫雞應(yīng)保護(hù)4／5以上，對照雞2／2死亡。
由此可見，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)在于用種子菌液接種雞胚回收尿囊液和胚體，經(jīng)滅活后制成水相(抗原)再與復(fù)方礦物油(10#白油)充分混合制成油包水乳劑而制得疫苗，本疫苗可保護(hù)家禽免受強(qiáng)毒株的功擊致死。
權(quán)利要求
1．一種禽霍亂油乳劑滅活苗，其特征在于該疫苗是將多殺性巴氏桿菌經(jīng)雞接種，并回收雞胚尿囊液和胚體，用其菌液經(jīng)滅活作成水相與礦物油混合成油包水滅活苗。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽霍亂油乳劑滅活苗，其特征在于滅活苗的油包水結(jié)構(gòu)的載體為復(fù)方10#白油。
3．一種用于制備權(quán)利要求1所述的禽霍亂油乳劑滅活苗的方法，其特征在于取禽源的多殺性巴氏桿菌接種血瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢驗(yàn)純正，作為種子使用；以適量的種子培養(yǎng)物接種12日齡雞胚，經(jīng)37℃孵化18～24小時，將致死雞胚尿囊液和胚體回收，取樣純檢，并計(jì)活菌數(shù)，用福爾馬林滅活制得水相；將上述水相與礦物油按1∶3比例經(jīng)膠體磨充分混合后制成油乳劑滅活苗。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于將回收的菌液純檢和活菌計(jì)數(shù)后，取樣加入甲醛溶液，使其含甲醛的最終濃度為0．1％，37℃滅活24小時，該菌液100份加入4份的吐溫--80制成水相。
5．根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于將94份的礦物油(10#白油)加入6份的司本--80混合后每100ml再加入2克硬脂酸鋁制成油相，以該油相與所述的水相按1∶3的比例充分混合制成油包水滅活苗。
全文摘要
本發(fā)明提供一種禽霍亂油乳劑滅活苗及其制備方法,該疫苗用于預(yù)防禽霍亂的發(fā)生,本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容是取禽源的多殺性巴氏桿菌接種血瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)24小時,檢驗(yàn)純正,作為種子菌液接種雞胚回收尿囊液和胚體,經(jīng)滅活后制成水相(抗原)再與復(fù)方礦物油(10＃白油)充分混合制成油包水乳劑而得,本發(fā)明提供的疫苗可有效保護(hù)家禽免受強(qiáng)毒株的攻擊致死。
文檔編號A61K39/02GK1205897SQ9811655
公開日1999年1月27日 申請日期1998年8月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月5日
發(fā)明者曾明華, 魏建忠, 蔡文波 申請人:曾明華, 魏建忠, 蔡文波