專利名稱：鈣離子通道拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩化合物是血管組織鈣離子通道拮抗劑的發(fā)現(xiàn)。
一般來(lái)說(shuō)，雌激素替代治療對(duì)絕經(jīng)婦女心血管系統(tǒng)起有利作用是已知的。見(jiàn)Knopt，Obstet.Gynecol.，72，23s-30s(1988)。對(duì)于接受雌激素治療的絕經(jīng)婦女，心血管死亡率降低了約30％至約50％，腦血管死亡率降低了約50％。見(jiàn)Stampfer等，N.Engl.J.Med.，325，756-762(1991)。雖然這些心血管的有利作用可能與脂類特性改變有關(guān)，但是最近數(shù)據(jù)表明雌激素也可能對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的冠狀動(dòng)脈的血管反應(yīng)具有有利作用。見(jiàn)Gisclard等，J.Pharmacol.and ExperimentalTherapeutics，244，19-22(1988)；Williams等，Circulation，81，1680-1687(1990)；Gangar等，Lancet，388，839-842(1991)及Williams等，JACC，20，452-457(1992)。血管組織對(duì)雌激素的非內(nèi)皮依賴性及內(nèi)皮依賴性作用已有描述。見(jiàn)Jiang等，Br.J.Pharmacol.，104，1033-1037(1991)；Jiang等，American Journal of Physiology，32，H271-H275(1992)；Cheng和Gruetter，Euopean Journal of Pharmacol.，215，171-176(1992)；Mugge等，Cardiovas.Res.，27，1939-1942(1993)；Salas等，European Journal of Pharmacol.，258，47-55(1994)；Williams等，Circulation，81，1680-1687(1990)；Cheng等，Life Sciences，10，187-191(1994)；Gilligan等，Circulation，89，2545-2551(1994)及Ries等，Circulation，89，52-60(1994)。一些報(bào)告也提出雌二醇的血管擴(kuò)張作用和/或其降低收縮反應(yīng)的能力可以通過(guò)抑制經(jīng)電壓依賴性鈣離子通道的鈣離子流來(lái)調(diào)節(jié)。見(jiàn)Jiang等，Br.J.Pharmacol.，104，1033-1037(1991)；Jiang等，American Journal of Physiology，32，H271-H275(1992)；Collins等，Lancet，341，1264(1993)；Muck等，Med.Sci.Res.，22，19(1994)及Salas等，European Journal of Pharmacol.，258，47-55(1994)。其它人推斷雌二醇可能提高環(huán)AMP和環(huán)GMP的濃度，或增加ATP敏感的鉀離子通道。見(jiàn)Mugge等，Cardiovas.Res.，27，1939-1942(1993)。
用于本發(fā)明方法的2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩化合物首先由Jones和Suaretz開(kāi)發(fā)用作節(jié)育劑。見(jiàn)美國(guó)專利4133814(1979年1月9日公布)。這些化合物一般用來(lái)抑制哺乳動(dòng)物腫瘤的生長(zhǎng)。后來(lái)，Jones發(fā)現(xiàn)這些化合物特別適用于抗雌激素和抗雄激素治療，特別是治療乳腺和前列腺腫瘤。見(jiàn)美國(guó)專利4418068(1983年11月29日公布)。在這些化合物中，對(duì)6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]噻吩進(jìn)行了治療乳腺癌的臨床試驗(yàn)。此化合物被稱為雷洛昔芬，以前被稱為keoxifene。
本發(fā)明提供了拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的方法，包括給需要治療的溫血?jiǎng)游镉行Я康南率交衔锘蚱渌幱名}
其中R1和R3獨(dú)立地為氫原子、C1-C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)、-CH2Ar或-CO-Ar，其中Ar是苯基或取代的苯基；R2選擇吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基及哌啶子基。本發(fā)明也提供了式I化合物或其可藥用鹽在制備拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的藥物中的用途。


圖1存在及不存在內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈環(huán)對(duì)去甲腎上腺素(上)、5-羥色胺(中)及U46619(下)的收縮反應(yīng)。如方法中指出的那樣，用乙酰膽堿刺激來(lái)測(cè)量?jī)?nèi)皮完整性。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖2在內(nèi)皮完整的鼠主動(dòng)脈中，16對(duì)去甲腎上腺素(上)、5-羥色胺(中)和U46619引起的收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖3在內(nèi)皮不完整的鼠主動(dòng)脈環(huán)中，16對(duì)去甲腎上腺素(上)、5-羥色胺(中)和U46619引起的收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖4在有(上)和無(wú)(下)完整內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈中，14對(duì)5-羥色胺引起收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖5在有(上)和無(wú)(下)完整內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈中，14對(duì)去甲腎上腺素引起收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖6在具有完整內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈中，β-雌二醇(上)和16(下)對(duì)BayK8644引起收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖7在不具有完整內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈中，β-雌二醇(上)和16(下)對(duì)BayK8644引起收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖8在無(wú)完整內(nèi)皮的鼠主動(dòng)脈中，14(10-6和10-7M)對(duì)BayK8644引起的收縮反應(yīng)的作用。點(diǎn)是平均值，豎直條表示括號(hào)內(nèi)指出的環(huán)數(shù)平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤。
本發(fā)明涉及所選擇的一組2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩(苯并[b]噻吩)，即式I化合物，是鈣離子通道拮抗劑的發(fā)現(xiàn)。因此，本發(fā)明提供了拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是治療心臟紊亂的方法，心臟紊亂包括但不限于變異型心絞痛、勞累型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、心肌局部缺血-再灌注損傷及心律不齊。本發(fā)明的另一方面是治療腦血管紊亂的方法，腦血管紊亂包括但不限于因動(dòng)脈破裂引起的腦血管痙攣、休克和偏頭痛。本發(fā)明的第三個(gè)方面是通過(guò)增加腎血流從而增加腎廓清率來(lái)治療腎紊亂的方法。本發(fā)明的第四個(gè)方面是治療胃腸紊亂的方法，胃腸紊亂包括但不限于與腹瀉有關(guān)的疾病，如腸易激性綜合征(IBS)和炎癥性腸病(IBD)、痢疾。本發(fā)明的第五個(gè)方面是治療高血壓的方法。本發(fā)明提供的治療方法通過(guò)給予需要治療的溫血?jiǎng)游锼幬镉行Я康氖絀化合物或其藥用鹽來(lái)實(shí)施。
在上式中，術(shù)語(yǔ)“C1-C6烷基”表示含1至6個(gè)碳原子的直鏈、環(huán)或支鏈烷基。典型的C1-C6烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)“C1-C4烷基”指含1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。典型的C1-C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。
術(shù)語(yǔ)“Ar”表示如苯基和取代的苯基的基團(tuán)。本文中術(shù)語(yǔ)“取代的苯基”表示被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的苯基，取代基選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、乙?；?、甲酰基、三氯甲基或三氟甲基。取代的苯基的例子包括4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基、4-羥基苯基、3-羥基苯基、2，4-二羥基苯基、3-硝基苯基、4-硝基苯基、4-氰基苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-丙基苯基、4-正丁基苯基、4-叔丁基苯基、3-氟-2-甲基苯基、2，3-二氟苯基，2，6-二氟苯基、2，6-二甲基苯基、2-氟-5-甲基苯基、2，4，6-三氟苯基、2-三氟甲基苯基、2-氯-5-三氟甲基苯基、3，5-二(三氟甲基)苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-羥基-3-甲基苯基、3，5-二甲基-4-羥基苯基、2-甲基-4-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、2，4-二硝基苯基等。術(shù)語(yǔ)“C1-C4烷氧基”表示如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“鹵素”表示氟、氯、溴和碘。
術(shù)語(yǔ)“阻斷”或“拮抗”指式I化合物結(jié)合在血管組織的鈣離子通道上并因此抑制鈣離子流。
本文中術(shù)語(yǔ)“藥物有效量”表示能拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的式I化合物的量。當(dāng)然，式I化合物特定的量應(yīng)由發(fā)病部位周圍特定的環(huán)境決定，包括使用的化合物、給藥途徑、治療的特定疾病，凡此種種。
本文中術(shù)語(yǔ)“溫血?jiǎng)游铩卑ㄈ祟?、寵物如狗和貓、以及家畜和家禽如馬、牛、羊、鵝、山羊和雞。優(yōu)選溫血?jiǎng)游锸侨嘶驅(qū)櫸?。更?yōu)選溫血?jiǎng)游锸侨恕?br> 雖然所有式I化合物都可用于拮抗或阻斷血管組織中的鈣離子通道，但是其中一些化合物是優(yōu)選的。優(yōu)選R1和R3獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)或芐基，而R2是哌啶子基或吡咯烷子基。優(yōu)選化合物中的代表性化合物包括6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩、6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩、6-乙酰氧基-2-(4-乙酰氧基苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩及6-芐氧基-2-(4-芐氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲酰基]-苯并[b]噻吩。
更優(yōu)選R1和R3獨(dú)立地為氫或C1-C4烷基，而R2是哌啶子基或吡咯烷子基。此更優(yōu)選化合物的代表性化合物包括6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩、6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩、6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩和6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠-苯并[b]噻吩。最優(yōu)選R1和R3是氫而R2是吡咯烷子基。最優(yōu)選的化合物是6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲酰基]-苯并[b]噻吩。
用于本發(fā)明方法中的式I化合物可以按照已知方法制備，如按照美國(guó)專利4133814、4418068和4380635所述的方法，將所有這些文獻(xiàn)引入本文中供參考?？傊?，此方法起始于6-羥基-2-(4-羥苯基)苯并[b]噻吩。該起始化合物被保護(hù)，C-3位用4-(2-氨基乙氧基)苯甲?；；⑷芜x脫保護(hù)而形成式I化合物。上述美國(guó)專利也提供了制備這些化合物的實(shí)施例。
用于本發(fā)明方法中的化合物可以與很多有機(jī)及無(wú)機(jī)酸及堿形成藥用酸加成鹽和(其中R1和/或R3是氫)藥用堿加成鹽，包括藥物化學(xué)中常見(jiàn)的生理可接受的鹽。用于形成這些鹽的典型的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、次磷酸等。也可以使用由有機(jī)酸衍生的鹽，這樣的有機(jī)酸如脂族一元及二元羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸及羥基鏈烷雙酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸。于是這些藥用鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、氫溴酸鹽、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、b-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、鹽酸鹽、肉桂酸鹽、枸櫞酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、甘醇酸鹽、庚酸鹽、癸酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、羥基馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對(duì)苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙烯酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。最優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
一般通過(guò)式I化合物與等摩爾量或過(guò)量的酸反應(yīng)形成藥用酸加成鹽。反應(yīng)物一般在有機(jī)溶劑如甲醇、乙醚或苯中混合。在大約1小時(shí)至10天內(nèi)此鹽通常由溶液中沉淀并可通過(guò)過(guò)濾分離，或者通過(guò)常規(guī)方法將溶劑除去。
一般用于形成鹽的堿包括氫氧化銨、堿金屬和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽及脂族的伯、仲、叔胺，以及脂族二胺。特別適用于制備加成鹽的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、乙二胺及環(huán)己胺。一般通過(guò)式I化合物(其中R1和/或R3為氫)與上述一種堿在有機(jī)溶劑如甲醇、乙醚或苯中反應(yīng)來(lái)制備這些鹽。按照上段中的描述將所得鹽分離。
一般來(lái)說(shuō)，這些藥用鹽比原來(lái)化合物的溶解度有所提高，于是常易于制成液體或乳劑制劑。
優(yōu)選在給藥前將式I化合物配制成含式I化合物及藥用載體、稀釋劑或賦形劑的藥物制劑。這些藥物制劑可以通過(guò)熟知的方法并用容易得到的組份來(lái)制備。制備這些組合物時(shí)，通常將活性成分與載體混合，用載體稀釋或用載體包封成膠囊、小藥囊、紙囊或其它包封物的形式。當(dāng)載體用作稀釋劑時(shí)，它可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，它可作為活性成分的載體、賦形劑或基質(zhì)。本發(fā)明的組合物可以是含例如不超過(guò)10％(重量)活性化合物的片劑、丸劑、散劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑、膏劑、軟和硬明膠膠囊、皮膚貼劑、栓劑、滅菌注射液及滅菌包裝的粉劑。
適宜的載體、賦形劑和稀釋劑的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、樹(shù)膠、阿拉伯樹(shù)膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、纖維素及其衍生物、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。此外，制劑可以含有潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑(如表面活性劑)、乳化劑和懸浮劑、崩解劑、防腐劑、甜味劑或矯味劑。通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法，本發(fā)明的組合物可制成給患者使用后速釋、緩釋或延遲釋放活性成分的形式。
按照本發(fā)明，拮抗或阻斷血管組織鈣離子通道的式I化合物的特定劑量取決于疾病的嚴(yán)重程度、給藥途徑及主治醫(yī)師決定的相關(guān)因素。一般來(lái)說(shuō)，有效日劑量為約0.1約1000mg/天，更典型的是約50至約250mg/天。這樣的劑量每天給需要的患者使用一次至約三次，或者根據(jù)疾病或癥狀增加使用頻率以得到有效的治療。
通常優(yōu)選以酸加成鹽的形式使用式I化合物，正如通常帶有堿性基團(tuán)(如哌啶子基基團(tuán))的藥物的給藥那樣。為此，提供下面的口服劑型。
下面的制劑中，“活性成分”指式I化合物。
制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊制備如下成分 量(mg/膠囊)活性成分 0.1-1000淀粉，NF 0-650可流動(dòng)淀粉 0-650硅酮流體，350厘泊0-15將各組份混合，用45號(hào)美國(guó)篩過(guò)篩，并填充入硬明膠膠囊。
已制備的雷洛昔芬特定的膠囊制劑的例子包括如下制劑2雷洛昔芬膠囊成分 量(mg/膠囊)鹽酸雷洛昔芬 1淀粉，NF 112可流動(dòng)淀粉 225.3硅酮流體，350厘泊1.7制劑3雷洛昔芬膠囊成分 量(mg/膠囊)鹽酸雷洛昔芬 5
淀粉，NF 108可流動(dòng)淀粉225.3硅酮流體，350厘泊 1.7制劑4雷洛昔芬膠囊成分 量(mg/膠囊)鹽酸雷洛昔芬 10淀粉，NF 103可流動(dòng)淀粉225.3硅酮流體，350厘泊 1.7制劑5雷洛昔芬膠囊成分 量(mg/膠囊)鹽酸雷洛昔芬 50淀粉，NF 150可流動(dòng)淀粉397硅酮流體，350厘泊 3.0上述特定的制劑可以根據(jù)依從因素作合理的變化。
用下列成分制備片劑制劑制劑6片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000微晶纖維素0-650二氧化硅，烘制0-650硬脂酸0-15將這些成分混合并壓成片劑。
或者，如下制備每片含0.1-1000mg活性成分的片劑制劑7片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000淀粉 45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶 4液)
羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1將活性成分、淀粉和纖維素過(guò)美國(guó)45號(hào)篩并徹底混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后過(guò)美國(guó)14號(hào)篩。這樣制備的顆粒在50-60℃干燥并過(guò)美國(guó)18號(hào)篩。然后將已用美國(guó)60號(hào)篩過(guò)篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石加到顆粒中，混合后在制片機(jī)上壓成片劑。
每5ml含0.1-1000mg活性成分的懸浮劑制備如下制劑8懸浮劑成分 量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml矯味劑 適量著色劑 適量純水 5ml將活性成分經(jīng)美國(guó)45號(hào)篩過(guò)篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合成潤(rùn)滑的糊。加入用一定量水稀釋的苯甲酸溶液、矯味劑和著色劑并攪拌。然后加入足夠的水到所需的量。
可用于本發(fā)明方法的化合物的例子見(jiàn)表1。表1
式I化合物的實(shí)用性通過(guò)在下面至少一個(gè)試驗(yàn)中的陽(yáng)性結(jié)果來(lái)舉例說(shuō)明。
方法雄性Wistar鼠(250-350g；Charles River實(shí)驗(yàn)室，Portage，MI)被拉斷頸椎處死。分出主動(dòng)脈并將無(wú)關(guān)的組織清除，切成環(huán)狀部分，每個(gè)長(zhǎng)約4-5mm。對(duì)一些組織，通過(guò)將環(huán)狀部分繞鑷子尖轉(zhuǎn)10次去掉內(nèi)皮。用去甲腎上腺素(10-7M)收縮后對(duì)乙酰膽堿(10-6M)組織缺乏舒張是去掉內(nèi)皮的證據(jù)。具有完整內(nèi)皮的組織對(duì)乙酰膽堿有88.5±1.6％(n＝11)的舒張。
將環(huán)狀部分放在兩個(gè)不銹鋼鉤之間并放在含10ml改良的Kreb’s碳酸氫鹽緩沖液的分離器官浴中，緩沖液的組成(mM)為NaCl，118.2；Kcl，4.6；CaCl2·2H2O，1.6；KH2PO4，1.2；MgSO4，1.2；葡萄糖，10和NaHCO3，24.8。器官浴溶液用95％O2/5％CO2通氣并保持在37℃。將組織置于4g適當(dāng)?shù)淖饔昧ο虏⒚扛?5分鐘洗滌一次以保持平衡。通過(guò)使用Sensotec(MBL5514-02型)傳導(dǎo)器(Sensotec Inc.Columbus，OH)的Biopac MP100(世界精密儀器，Sarasota，F(xiàn)L)數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)記錄并分析力的變化。
所有組織開(kāi)始用KCl(67mM)刺激以建立生存性。以積分形式產(chǎn)生濃度-反應(yīng)曲線并以每個(gè)組織中產(chǎn)生的相對(duì)于起始KCl收縮(67mM)的百分?jǐn)?shù)報(bào)告結(jié)果。在濃度-反應(yīng)曲線對(duì)激動(dòng)劑開(kāi)始反應(yīng)前60分鐘加入載體、β-雌二醇、14或16。在這些用BayK8644進(jìn)行的試驗(yàn)中，在BayK8644的濃度反應(yīng)曲線開(kāi)始前組織接觸10mM KCl。每個(gè)組織只產(chǎn)生一個(gè)激動(dòng)劑濃度反應(yīng)曲線。所有結(jié)果表示為平均值±SE，其中n表示試驗(yàn)環(huán)狀部分的數(shù)目。
化學(xué)藥品5-HT、乙酰膽堿、去甲腎上腺素、U46619及β-雌二醇購(gòu)自Sigma Chemical Co.(St.Louis，MO)。BayK8644購(gòu)自ResearchBiochemicals Inc.(Wayland，MA)。地爾硫卓、硝苯地平、尼群地平及化合物14和16(下文稱為14和16)在Lilly Research Laboratories(Indianapolis，IN)合成。
結(jié)果鼠主動(dòng)脈對(duì)去甲腎上腺素、5-羥色胺和血栓烷類似物，U46619的收縮反應(yīng)明顯依賴內(nèi)皮(圖1)。對(duì)每個(gè)激動(dòng)劑，在無(wú)內(nèi)皮的情況下收縮反應(yīng)較大，這說(shuō)明收縮反應(yīng)是由內(nèi)皮釋放的舒張劑激動(dòng)劑(一種或多種)調(diào)節(jié)的。
非甾類苯并噻吩衍生物16(10-6和10-5M)強(qiáng)力抑制了鼠主動(dòng)脈對(duì)去甲腎上腺素、5-羥色胺和U46619的收縮反應(yīng)，且對(duì)收縮反應(yīng)的抑制似乎不依賴于內(nèi)皮(圖2和3)。正如以前在β-雌二醇中所見(jiàn)的，16抑制對(duì)5-羥色胺的收縮反應(yīng)比去甲腎上腺素和U46619更強(qiáng)。
如16一樣，14也抑制對(duì)5-羥色胺的反應(yīng)(圖4)，此抑制比去甲腎上腺素(圖5)更強(qiáng)；其作用不依賴于完整的內(nèi)皮。
已知5-羥色胺引起的收縮能通過(guò)電壓依賴性鈣離子通道來(lái)利用細(xì)胞間鈣離子，而對(duì)去甲腎上腺素引起的血管收縮更大程度上依賴于磷酸肌醇流動(dòng)的激活和對(duì)細(xì)胞間存儲(chǔ)的鈣離子的利用。因此，鈣離子通道拮抗劑抑制對(duì)5-羥色胺的收縮比對(duì)去甲腎上腺素的收縮更敏感。見(jiàn)Cohen和Berkowitz，Blood Vessels，13，139-154(1976)及Gouw等，Naunyn-Schmiedeberg’s Arch.Pharmacol.，339，533-539(1989)。因?yàn)?4和16似乎對(duì)抑制5-羥色胺引起的收縮反應(yīng)表現(xiàn)得最有效，因此14和16可以用作鈣離子通道拮抗劑。為此，檢測(cè)了14和16抑制鈣離子激動(dòng)劑BayK8644引起的收縮反應(yīng)的效果。見(jiàn)Brown等，Nature，311，570-572(1984)。
在不存在完整內(nèi)皮的情況下，14和16對(duì)BayK8644的收縮產(chǎn)生了抑制(圖7和8)。BayK8644的這些數(shù)據(jù)說(shuō)明了14和16都能抑制此鈣離子激動(dòng)劑引起的收縮反應(yīng)。
討論當(dāng)作為絕經(jīng)婦女的替代治療時(shí)，雌激素阻斷鈣離子通道的能力是雌激素的有利作用。已知雌激素有鈣離子通道拮抗劑活性，這一結(jié)果是在兔和豬的冠狀動(dòng)脈中觀察到的。
最近，一些研究小組致力于尋找化合物，這些化合物用于替代治療時(shí)可模擬雌激素有利的血流動(dòng)力學(xué)作用同時(shí)又最大限度地減少其向子宮的或不需要的作用。為此，已描述了一系列苯并噻吩結(jié)構(gòu)的部分激動(dòng)劑化合物，其中包括14和16。雖然14和16對(duì)雌激素受體的親和力與羥基β-雌二醇相似，但對(duì)其對(duì)血管的作用幾乎一無(wú)所知。見(jiàn)Uchiumi等，Intl.J.Cancer，47，80-85(1991)。我們證明14和16可以拮抗鈣離子激動(dòng)劑BayK8644引起的血管收縮反應(yīng)，具鈣離子通道拮抗活性。就此而言，16比14作用更強(qiáng)，可以得出結(jié)論它們具有抑制由鈣離子激動(dòng)劑BayK8644引起收縮的能力和明顯抑制去甲腎上腺素、5-羥色胺和U46619引起的收縮反應(yīng)的作用。
14和16的鈣離子通道拮抗劑活性可能與它們因某些原因而結(jié)合雌激素受體的能力無(wú)關(guān)。首先，兩種化合物對(duì)雌激素受體有相似的親和力(Uchiumi等，1991)而且相對(duì)14而言，16卻是更強(qiáng)的鈣離子通道拮抗劑。其次，在這些試驗(yàn)中，抑制收縮反應(yīng)的能力發(fā)生得很快，說(shuō)明不需要核參與。
因此，通過(guò)使用鼠主動(dòng)脈來(lái)顯示對(duì)BayK8644引起收縮的抑制，本試驗(yàn)確定了14和16對(duì)血管組織鈣離子通道的快速的體外抑制作用，此作用不依賴于內(nèi)皮。與17β-雌二醇結(jié)合雌激素受體的親和力相類似的苯并噻吩衍生物16，是比雌激素更強(qiáng)的血管組織鈣離子通道拮抗劑。此外，這些比較研究提供了額外的數(shù)據(jù)支持14和16對(duì)鈣離子通道的阻斷與這些試劑結(jié)合雌激素受體的能力無(wú)關(guān)的論點(diǎn)。如果鈣離子通道抑制對(duì)雌激素的臨床作用有利，那么作為對(duì)絕經(jīng)婦女的替代治療，14和16可能比雌激素有一些更重要的優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的方法，包括給予需要的溫血?jiǎng)游锼幬镉行Я康南率交衔锛捌渌幱名}
其中R1和R3獨(dú)立地為氫原子、C1-C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)、-CH2Ar或-CO-Ar，其中Ar是苯基或取代的苯基；R2選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基及哌啶子基。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中R1和R3獨(dú)立地為氫原子、C1-C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)或芐基；而R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中R1和R3獨(dú)立地為氫原子或C1-C4烷基，而R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中R1和R3獨(dú)立地為氫原子，而R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中R2是哌啶子基。
6.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥用鹽是鹽酸鹽。
7.權(quán)利要求4所述的方法，其中R2是吡咯烷子基。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中所述藥用鹽是鹽酸鹽。
9.權(quán)利要求1所述的方法，用來(lái)治療心臟紊亂。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其中心臟紊亂是變異型心絞痛、勞累型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、心肌局部缺血-再灌注損傷及心律不齊。
11.權(quán)利要求1所述的方法，用來(lái)治療腦血管紊亂。
12.權(quán)利要求11所述的方法，其中腦血管紊亂是因動(dòng)脈破裂引起的腦血管痙攣、休克和偏頭痛。
13.權(quán)利要求1所述的方法，用來(lái)治療腎紊亂。
14.權(quán)利要求1所述的方法，用來(lái)治療胃腸紊亂。
15.權(quán)利要求1所述的方法，用來(lái)治療高血壓。
全文摘要
拮抗或阻斷血管組織中鈣離子通道的方法,其中包括給予需要的溫血?jiǎng)游锼幬镉行Я康氖?Ⅰ)化合物及其可藥用鹽,其中R
文檔編號(hào)A61K31/453GK1193274SQ96195976
公開(kāi)日1998年9月16日 申請(qǐng)日期1996年6月4日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月7日
發(fā)明者M·L·科恨 申請(qǐng)人:伊萊利利公司