專(zhuān)利名稱(chēng)：：用于治療免疫性疾病的基于膠原的方法和制劑的制作方法1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于用膠原和/或其衍生物治療自身免疫疾病和其它免疫性疾病(immunesystem-mediateddisease)的領(lǐng)域。2.相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)是1995年1月10日提交的美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)08/370,388的部分繼續(xù)。3.發(fā)明背景盡管免疫系統(tǒng)對(duì)于抗感染是必需的，但它對(duì)感染(外來(lái)抗原)和機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的分子(自身抗原)的免疫應(yīng)答可導(dǎo)致許多疾病，即免疫性疾病。免疫性疾病既可由B細(xì)胞介導(dǎo)(即抗體介導(dǎo))，也可由T細(xì)胞介導(dǎo)。此外，免疫性疾病可由抗體和抗原(外來(lái)的或自身的)間形成的免疫復(fù)合物引起，許多免疫性疾病涉及到不需要的炎癥應(yīng)答，包括例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肝炎、節(jié)段性回腸炎、銀屑病、脈管炎等疾病?，F(xiàn)有的治療免疫性疾病，尤其是導(dǎo)致不需要的炎癥應(yīng)答的免疫性疾病(如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的療法還存在不足，大多數(shù)免疫性疾病是慢性病，需要長(zhǎng)時(shí)間施用藥物。因此，應(yīng)用相對(duì)非毒性藥物是重要的。但許多用于治療自身免疫疾病的化合物，如甾類(lèi)化合物和非甾類(lèi)抗炎性化合物在長(zhǎng)期應(yīng)用后出現(xiàn)明顯的毒副作用。另外，免疫抑制藥物也已被用于治療自身免疫應(yīng)答，這些免疫抑制藥物，如環(huán)孢菌素A和硫唑嘌呤是相對(duì)非特異性的，有弱化整個(gè)免疫系統(tǒng)的不良作用，因此使患者易患感染性疾病。攝入的化合物及結(jié)構(gòu)上與攝入的化合物相關(guān)的化合物的口服施用可誘導(dǎo)免疫耐受。這表明通過(guò)口服誘導(dǎo)耐受的現(xiàn)象可適于作為治療自身免疫疾病的方法。PCT出版物WO95/10301中描述了應(yīng)用口服攝入的霍亂毒素連接物降低小鼠模型的遲發(fā)超敏反應(yīng)并控制實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎?？紤]到用于治療慢性免疫性疾病的現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，為治療免疫性疾病提供新方法和組合物是很有意義的。本文所描述的方法中應(yīng)用一種或多種膠原和/或膠原衍生物以減弱或消除在某一免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理中很重要的免疫應(yīng)答。設(shè)計(jì)了一些方法和制劑以誘導(dǎo)針對(duì)與疾病過(guò)程有關(guān)的抗原的耐受。4.發(fā)明概述本發(fā)明為治療包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的免疫性疾病提供了新的方法和組合物。該組合物包括一種或多種不同類(lèi)型的膠原或膠原衍生物。特異性的膠原和/或膠原衍生物的組合可用于治療特異性的免疫性疾病。本組合物中所應(yīng)用的膠原和/或膠原衍生物既可從天然來(lái)源中獲得也可用重組基因工程技術(shù)制備。另一方面，本發(fā)明通過(guò)施用有效量的所述含膠原組合物，為治療免疫性疾病提供了一種方法，本發(fā)明的方法包括腸內(nèi)施用含膠原和/或膠原衍生物的組合物以誘導(dǎo)免疫耐受，即口服施用。另一方面，本發(fā)明提供施用給患者的含膠原和/或膠原衍生物的組合物。本發(fā)明的優(yōu)選制劑被設(shè)計(jì)為在腸內(nèi)釋放膠原和/或膠原衍生物，從而與腸內(nèi)淋巴樣組織接觸。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，主題組合物為口服施用的制劑。另一方面，本發(fā)明提供這樣一些膠原衍生物，它們包含至少一種耐受誘導(dǎo)表位，優(yōu)選包含許多耐受誘導(dǎo)表位。這樣的膠原衍生物可包含許多不同膠原衍生的耐受誘導(dǎo)表位，在本文中稱(chēng)作耐受性表位多肽。耐受性表位多肽也可包括非膠原蛋白衍生的氨基酸分解序列。另一方面，本發(fā)明為治療免疫性疾病提供粘膜粘合膠原連接物(mucosabindingcollagenconjugate)。本發(fā)明的粘膜粘合膠原連接物包括一種或多種與粘合粘膜的分子相連的膠原分子。各種不同的膠原和/或膠原衍生物可用作本發(fā)明粘膜粘合膠原連接物中的膠原組分。各種粘膜粘合分子可用作本發(fā)明粘膜粘合膠原連接物中的粘膜粘合分子組分。合適的粘膜粘合組分包括從細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物外源凝集素衍生而來(lái)的粘膜粘合結(jié)構(gòu)。特別優(yōu)選的粘膜粘合組分是霍亂毒素的β亞基和大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。另一方面，通過(guò)施用有效量的粘膜粘合膠原連接物，本發(fā)明提供了治療免疫性疾病的方法。另外還有一方面，本發(fā)明提供用于治療免疫性疾病的制劑，該制劑包含本發(fā)明的粘膜粘合膠原連接物。優(yōu)選地，制劑適于口服施用。5.具體實(shí)施方案的說(shuō)明本發(fā)明涉及一種或多種不同膠原和/或膠原衍生物的應(yīng)用，以在特異性的免疫細(xì)胞群中誘導(dǎo)口服耐受，從而為治療免疫性疾病提供一種方法，本文提供了用各種膠原和/或膠原衍生物治療免疫性疾病的方法及在這些方法中應(yīng)用的組合物。本發(fā)明的方法包含口服施用在特定組織中發(fā)現(xiàn)的一種(或多種)膠原，從而誘導(dǎo)對(duì)發(fā)現(xiàn)該膠原天然存在于這一種(或多種)組織的炎癥抑制作用(免疫耐受)。具體的膠原類(lèi)型和它的(例如組織型)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系可在不同的技術(shù)參考中找到，包括Fukai等，酶學(xué)方法2453-28(1994)。見(jiàn)提供了在這些方法中應(yīng)用的含膠原(和膠原衍生物)的組合物。本發(fā)明還提供了許多不同類(lèi)型的粘膜粘合膠原連接物及其在治療免疫性疾病時(shí)的應(yīng)用方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是應(yīng)用次要膠原，即與主要膠原天然相關(guān)的，較為稀少的膠原，以誘導(dǎo)免疫耐受，從而減低不需要的免疫應(yīng)答的嚴(yán)重程度，由此提供了關(guān)節(jié)炎和相關(guān)免疫性疾病的治療基礎(chǔ)；然而，本發(fā)明還提供了主要膠原誘導(dǎo)免疫耐受的應(yīng)用。軟骨包含不同種類(lèi)的膠原，它們?yōu)橹車(chē)慕M織提供了主要的細(xì)胞外支架。有關(guān)資料表明，II型膠原(一種主要膠原)具有抑制軟骨內(nèi)炎癥的能力。本發(fā)明部分基于這樣一種認(rèn)識(shí)，即天然地與主要膠原一起存在的次要膠原在用于治療免疫性疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎時(shí)，對(duì)于誘導(dǎo)免疫耐受很重要。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是單獨(dú)或與主要膠原一起應(yīng)用次要膠原以誘導(dǎo)免疫耐受，從而改善一些免疫性疾病的疾病過(guò)程。本發(fā)明提供了不同的含膠原和膠原衍生物的組合物。多種不同類(lèi)型的膠原是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟悉的。目前為止已發(fā)現(xiàn)了19種不同類(lèi)型的膠原。在其它地方可找到關(guān)于這19種不同類(lèi)型天然存在的膠原的結(jié)構(gòu)和生物功能的詳細(xì)論述。Ayad等，TheExtracellularMatrixFactsBook，學(xué)術(shù)出版社出版，SanDiego，CA；Burgeson，R.E.和Nimmi，“膠原類(lèi)型分子結(jié)構(gòu)和組織分布”，臨床矯形外科學(xué)，282250-272(1992)；Kielty，C.M.等，“膠原家族在細(xì)胞外基質(zhì)中的結(jié)構(gòu)、裝配和組織”，結(jié)締組織和其遺傳性疾病，分子遺傳和醫(yī)學(xué)方面，Royce，P.M.和SteinmannB.，Eds.，Wiley-Liss，NY，pp103-147(1993)。I型膠原是骨和皮膚的主要纖維膠原，I型膠原是包含2條α1(I)鏈和1條α2(I)鏈的異三聚體分子。除其他地方外，制備純化的I型膠原的詳述可見(jiàn)Miller.E.J.和Rhodes，R.K.，酶學(xué)方法8233-64(1982)，學(xué)術(shù)出版社。II型膠原是包含3條相同的α1(II)鏈的同三聚體。除其他地方外，制備純化的II型膠原的方法可見(jiàn)Miller，E.J.和Rhodes，R.K.，酶學(xué)方法8233-64(1982)，學(xué)術(shù)出版社。III型膠原是在皮膚和血管組織中發(fā)現(xiàn)的主要纖維膠原。III型膠原是包含3條相同α1(III)鏈的同三聚體膠原。除其他地方外，制備III型膠原的方法可見(jiàn)Byers等，生化135243-5248(1974)和Miller，E.J.和Miller，R.K.，酶學(xué)方法8233-64(1982)，學(xué)術(shù)出版社。IV型膠原是在基底膜中發(fā)現(xiàn)的以片狀而非纖維狀形式存在的膠原。IV型膠原分子由來(lái)源于六個(gè)不同基因的3條不同的α鏈組成，即IV型膠原包括3個(gè)α1(IV)、α2(IV)、α3(IV)、α4(IV)、α5(IV)和α6(IV)鏈。該物質(zhì)以組織特異的方式表達(dá)。除其他地方外，純化IV型膠原的方法可見(jiàn)Furuto等，D.K.和Miller，E.J.，酶學(xué)方法14441-61(1987)，學(xué)術(shù)出版社。V型膠原是在骨骼、肌腱、角膜、皮膚和血管中發(fā)現(xiàn)的纖維膠原。V型膠原以同三聚體和異三聚體2種方式存在。一種V型膠原是兩條α1(V)鏈和α2(V)的異三聚體，V型膠原的另一類(lèi)型是α1(V)、α2(V)和α3(V)的異三聚體。還有一種V型膠原是α1(V)的同三聚體。除其他地方外，V型膠原的純化方法可見(jiàn)Elstrow，S.F.和Weiss，J.B.，與膠原相關(guān)的研究，3181-193(1983)和Abedin等，Biosci.Rep.，2493-502(1982)。VI型膠原有一小的三股螺旋區(qū)域和一大的非膠原殘余部分。在許多結(jié)締組織中可找到VI型膠原，VI型膠原是包含α1(VI)、α2(VI)和α3(VI)鏈的異三聚體。除其他地方外，純化VI型膠原的方法可見(jiàn)Wu等，生化雜志，248373-381(1987)和Kielty等，細(xì)胞科學(xué)雜志，99797-807。VII型膠原是在特殊的上皮組織中找到的纖維膠原。VII型膠原是3條α1(VII)鏈的同三聚體分子。除其他地方外，純化VII型膠原的方法可見(jiàn)Lundstrom等，生化雜志，2619042-9048(1986)，和Bentz等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，803168-3172(1983)。VIII型膠原可在角膜后彈性膜中找到，它是包括2條α1(VIII)鏈和1條α2(VIII)鏈的異三聚體。除其他地方外，純化VIII型膠原的方法可見(jiàn)Benya和Badilla，生化雜志，2614160-4169(1986)，Kapoor等，生化，253930-3937(1986)。IX型膠原是可在軟骨及玻璃體中找到的纖維相關(guān)膠原。它是包括α1(IX)、α2(IX)和α3(IX)鏈的異三聚體分子。除其他地方外，純化IX型膠原的方法可見(jiàn)Duance等，生化雜志，221885-889(1984)，Ayad等，生化雜志，262753-761(1986)，Grant等，組織損傷的控制，Glauert，A.M.，Ed.，ElSevier，Amsterdam，pp.3-28(1988)。X型膠原是XI(x)鏈同三聚體的化合物。除其他組織外，它可以從生長(zhǎng)平板的肥大軟骨中分離而來(lái)的。XI型膠原可在與II型和IX型膠原相聯(lián)系的軟骨組織及身體的其它部位找到。它是包括α1(XI)、α2(XI)和α3(XI)鏈的異三聚體分子。除其他地方外，其純化方法可見(jiàn)Grant等，組織損傷的控制，Glauert，A.M.，Ed.，ElSevier，Amsterdam，pp.3-28(1988)。XII型膠原是主要與I型膠原相聯(lián)系的纖維相關(guān)膠原，它是包括三條α1(XII)鏈的同三聚體分子。除其他地方外，XII型膠原及其變異體的純化方法可見(jiàn)Dublet等，生化雜志，26413150-13156(1989)，Lundstrum等，生化雜志，26720087-20092(1992)，Watt等，生化雜志，26720093-20099(1992)。XIII型膠原是在皮膚、腸、骨骼、軟骨和橫紋肌中發(fā)現(xiàn)的非纖維膠原。除其他地方外，其詳細(xì)論述可見(jiàn)Juvonen等，生化雜志，26724700-24707(1992)。XIV型是纖維相關(guān)膠原。它是包含三條α1(XIV)鏈的同三聚體分子。除其他地方外，其分離方法可見(jiàn)Aubert-Foucher等，生化雜志，26619759-19764(1992)和Watt等，生化雜志，26720093-20099(1992)。XV型膠原與XVIII型膠原在結(jié)構(gòu)上是同源的。除其他地方外，XV型膠原的結(jié)構(gòu)及分離的有關(guān)資料可見(jiàn)Myers等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，8910144-10148(1992)，Huebner等，基因組，14220-224(1992)，Kivirikko等，生化雜志，2694773-4779(1994)，和Muragaki，生化雜志，2644042-4046(1994)。XVII型膠原是在皮膚、肺成纖維細(xì)胞、角化細(xì)胞和其它地方發(fā)現(xiàn)的纖維相關(guān)膠原。除其他地方外，關(guān)于XVI型膠原結(jié)構(gòu)及其編碼基因的資料可見(jiàn)Pan等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，19896565-6569(1992)，和Yamaguchi等，生化雜志，112856-863(1992)。XVIII型膠原與XV型膠原在結(jié)構(gòu)上相類(lèi)似，可從肝中分離到。除其他地方外，關(guān)于其結(jié)構(gòu)和分離的說(shuō)明可見(jiàn)Rehn等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，914234-4238(1994)，Oh等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，914229-4233(1994)，Rehn等，生化雜志，26913924-13935(1994)，和Oh等，基因組，19994-999(1994)。也可按美國(guó)專(zhuān)利5,405,752號(hào)，PCT公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)WO93/07889和WO94/16570及相關(guān)的專(zhuān)利和申請(qǐng)中所一般性描述的方法，通過(guò)重組表達(dá)技術(shù)獲得上面的膠原類(lèi)型。本發(fā)明的另一方面是提供粘膜粘合膠原連接物。該粘膜粘合膠原連接物包括膠原組分和粘膜粘合組分。這兩種組分可直接連接在一起或通過(guò)一種或多種中間連接分子而連接在一起。粘膜粘合膠原連接物可用于治療各種免疫性疾病。治療是通過(guò)對(duì)粘膜粘合膠原連接物的膠原組分上的一種或多種表位誘導(dǎo)免疫耐受而起效的。該粘膜粘合膠原連接物的膠原組分可包括一種或多種膠原或膠原衍生物分子。粘膜粘合膠原連接物的膠原組分中的膠原分子可彼此相同或不同。膠原組分中的膠原/膠原衍生物分子可直接也可通過(guò)中間連接物而連接在一起，另外，膠原組分中的膠原/膠原衍生物沒(méi)必要彼此相聯(lián)，它們可直接與粘膜粘合膠原連接物中的粘膜粘合組分相連。粘膜粘合組分包括一種或多種能與所治療患者的粘膜細(xì)胞特異結(jié)合的分子。各種不同的分子可充當(dāng)粘膜粘合組分粘膜結(jié)合分子可從細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物血凝素的粘膜粘合結(jié)構(gòu)衍生而來(lái)。優(yōu)選應(yīng)用從細(xì)菌毒素而來(lái)的粘膜粘合結(jié)構(gòu)，尤其優(yōu)選的是霍亂毒素的β亞基和大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。霍亂毒素的β亞基和大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基具有與粘膜細(xì)胞中的神經(jīng)節(jié)苷脂GM特異性結(jié)合的特性。當(dāng)毒素用作粘膜粘合結(jié)構(gòu)時(shí)，優(yōu)選修飾毒素以明顯地去除破壞毒素的細(xì)胞毒特性，細(xì)胞毒特性的失活可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的一些方法進(jìn)行，這些方法包括例如變性、突變等等。其它與神經(jīng)節(jié)苷脂特異性結(jié)合的分子也可用作本發(fā)明中粘膜粘合膠原連接物的粘膜粘合組分。粘膜粘合分子既可以直接又可以以中間連接分子的方式間接地共價(jià)結(jié)合在一起，另外，構(gòu)成粘膜粘合組分的粘膜粘合分子也以分子間吸引力的方式彼此聯(lián)系。例如，霍亂毒素的β亞基形成5分子可聯(lián)合的“環(huán)”結(jié)構(gòu)。合適的毒素分子的實(shí)例包括百日咳桿菌毒素的S2、S3、S4和/或S5亞基、白喉毒素、白喉毒素的β片段、志賀毒素、類(lèi)志賀毒素、志賀毒素的β亞基、類(lèi)志賀毒素β亞基、霍亂毒素、大腸桿菌的不耐熱毒素。合適的細(xì)菌菌毛的實(shí)例包括大腸桿菌K88、K99、987P、F41、CFA/I、CFA/II、(CS1、CS2和/或CS3)、CFA/IV(CS4、CS5和/或CS6)、P菌毛、霍亂弧菌共調(diào)節(jié)毛(TCP)、粘液敏感血凝素(MSHA)、巖藻糖敏感血凝素(FSITH)、百日咳桿菌絲狀血凝素等等。適宜的病毒附著蛋白的實(shí)例包括流感血凝素、仙臺(tái)病毒血凝素。適宜的外源凝集素實(shí)例包括植物的和動(dòng)物的外源凝集素，可溶性結(jié)合乳糖的植物外源凝集素、選擇素、收集素、螺旋pomatin血凝素、伴刀豆蛋白A、小麥胚凝集素、植物血凝素、金精蓖麻子蛋白。對(duì)粘膜細(xì)胞抗原特異的免疫球蛋白也可用作粘膜粘合組分。分離的膠原組分和粘膜粘合組分可通過(guò)不同方式連接在一起。這兩種組分可用化學(xué)交聯(lián)劑連接在一起，所述化學(xué)交聯(lián)劑如N-琥珀酰亞氨基(3-(2-吡啶基-二硫代)丙酸酯、3，3’-二硫代雙丙亞氨酸二甲酯、2-亞氨基硫雜戊環(huán)、N-琥珀酰亞氨基-(4-疊氮苯基)-1，3-二硫代丙酸酯、4-疊氮苯基-1，4-二硫代丁亞氨酸酯、丙二亞氨酸二乙酯、2-亞氨基硫雜戊環(huán)、N，N’-對(duì)-苯二馬來(lái)亞氨酸酯等等。另外，本發(fā)明的粘膜粘合膠原連接物可以是單體多肽，這種多肽是膠原組分和粘膜粘合分子組分間形成的融合蛋白。這些融合蛋白可用傳統(tǒng)的體外基因工程技術(shù)制備。本發(fā)明的另一方面是提供編碼粘膜粘合膠原連接物融合蛋白的多核苷酸序列。本發(fā)明另一方面還提供用重組技術(shù)制備粘膜粘合膠原連接物融合蛋白時(shí)的宿主細(xì)胞。粘膜粘合分子組分可通過(guò)從它們天然存在的源有機(jī)體純化而獲得。另外，粘膜粘合分子組分也可用重組DNA技術(shù)制備。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知純化粘膜粘合分子或可任選地，用重組技術(shù)制備適于本發(fā)明應(yīng)用的這些分子的方法。例如，Sanchez和Holmgren，在美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，86481-485(1989)中已描述了霍亂毒素β亞基的重組制備，Hirst等在美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，817752-7756(1984)中已描述了大腸桿菌不耐熱腸毒素β亞基的制備。本發(fā)明的組合物包含一種或多種純化的膠原和/或膠原衍生物。也提供了包括膠原和/或膠原衍生物特異組合的組合物，表1給出了可用于治療特殊疾病的膠原類(lèi)型(以阿拉伯?dāng)?shù)字表示而非羅馬數(shù)字)。列出的每一膠原類(lèi)型用于治療特異的疾病，既可單獨(dú)應(yīng)用又可與一種或多種適于治療所關(guān)心疾病的膠原分子聯(lián)合應(yīng)用，例如，參照表1可以看到，可用包括I型、II型、III型、V型、VI型、IX型、X型、XI型、XII型和XIV型膠原的組合物，或其任何一種包括有2種或多種適于治療特殊病癥的膠原的組合來(lái)治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此參照表1可看出本發(fā)明為治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供了組合物，該組合物至少包含一種選自I型、II型、III型、V型、VI型、IX型、X型、XI型、XII型和IV型膠原的化合物。與一定的膠原類(lèi)型相對(duì)應(yīng)的膠原衍生物可用于補(bǔ)充或替代表1組合物中所顯示的特殊膠原類(lèi)型，例如，如表1所示用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的組合物可包括II型膠原、II型膠原衍生物、多種不同的II型膠原衍生物或II型膠原和II型膠原衍生物的混合物。在本發(fā)明治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物包含IX型膠原和/或IX型膠原衍生物，有或沒(méi)有II型膠原和/或其衍生物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的組合物包含XI型膠原和/或其衍生物，有或沒(méi)有II型膠原和/或其衍生物。在本發(fā)明治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明由包括IX型和/或其衍生物和XI型膠原，有或沒(méi)有II型膠原和/或其衍生物的組合物組成。在本發(fā)明治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物包含II型膠原衍生物。表1膠原類(lèi)型和應(yīng)用指征表<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="1100">指征膠原類(lèi)型01020304050607080910111213141516171819關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎和其他脊椎關(guān)節(jié)病XXXXXXX自身免疫性聽(tīng)力病XXXX自身免疫性肝病XXX皮膚的水皰性疾病XX大皰型類(lèi)天皰瘡X皮膚的大皰性疾病(如天皰瘡)XX粘液囊炎XXXXXXX由細(xì)菌或病毒疾病引起的軟骨炎(如Lyme病)XXX局限性硬化XXXXXXX</table></tables><tablesid="table3"num="003"><tablewidth="1100">指征膠原類(lèi)型01020304050607080910111213141516171819全身性纖維化疾病(例硬皮病)XXXXXXX子宮疾病(例纖維瘤)XXXXXX脈管炎XX</table></tables>與本發(fā)明的含膠原和膠原衍生物的組合物相似，本發(fā)明的粘膜粘合膠原連接物可適于治療特殊的免疫性疾病?？勺駨谋?的資料通過(guò)選擇粘膜粘合膠原連接物的膠原組分而使粘膜粘合膠原連接物適于應(yīng)用。本發(fā)明的方法和組合物中所應(yīng)用的純化膠原可從動(dòng)物或人的組織中分離得到；可是當(dāng)治療的對(duì)象是人時(shí)，組合物和方法中優(yōu)選應(yīng)用人的膠原。本方法和組合物中所應(yīng)用的膠原除可從天然來(lái)源獲得外，也可用重組DNA技術(shù)制備。如何用重組DNA技術(shù)制備II型膠原的描述可在其它的地方找到，PCT公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO93/07889和WO94/16570在此引入作為參考。PCT申請(qǐng)中描述的重組制備技術(shù)可容易地適于用重組DNA技術(shù)制備人或其它動(dòng)物的許多不同類(lèi)型的膠原。本發(fā)明的組合物中優(yōu)選應(yīng)用重組DNA技術(shù)制備的人類(lèi)膠原。重組DNA技術(shù)避免了與獲得足量人類(lèi)組織對(duì)相關(guān)的倫理道德和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題。除應(yīng)用直接從天然來(lái)源獲得的膠原外，本發(fā)明的方法和組合物可包括許多不同類(lèi)型的膠原衍生物。在幾個(gè)方面，膠原衍生物不同于自然產(chǎn)生的膠原。與自然產(chǎn)生的膠原不同，膠原衍生物可以是非糖基化的或是糖基化的。所需的糖基化模式可由不同的方法制備。這些方法包括直接化學(xué)修飾和酶催化的糖基化和糖基化反應(yīng)，所需的糖基化模式可通過(guò)抑制或去除酶制備，而這種酶對(duì)制備膠原的自然產(chǎn)生糖基化模式是必需的。膠原衍生物所具有的糖基化模式不同于相應(yīng)的自然產(chǎn)生的膠原，但在結(jié)構(gòu)上基本相同(除羥化的脯氨酸和/或賴氨酸數(shù)量外)，在這里稱(chēng)作“變異地糖基化膠原”。膠原衍生物也包括自然產(chǎn)生膠原的不同片段。這些膠原片段可通過(guò)化學(xué)或酶分裂一或多個(gè)肽鍵而制備的。膠原衍生物也包含有一或多種氨基酸殘基，它不同于自然產(chǎn)生膠原中相應(yīng)位置的氨基酸殘基。含有這種氨基酸殘基替代物的膠原衍生物可由包括基因工程技術(shù)和體外肽合成在內(nèi)的各種方法制備。其它的膠原衍生物可這樣制備，改變一定分子中羥化賴氨酸和/或羥化脯氨酸的量，改變賴氨酸羥化酶和/或脯氨酸羥化酶的表達(dá)，其中羥化酶基因(重組或其它的)在表達(dá)重組膠原或其衍生物的宿主細(xì)胞中也表達(dá)，當(dāng)本發(fā)明的組合物和方法中應(yīng)用的膠原衍生物單獨(dú)或作為本發(fā)明中包括許多膠原和/或膠原衍生物的組合物的一部分施用給病人的時(shí)候，它有降低所關(guān)心免疫性疾病中不需要的免疫反應(yīng)的能力。本發(fā)明用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法和組合物中適合應(yīng)用的膠原衍生物也通過(guò)應(yīng)用從類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者而來(lái)的T細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)而確定，其中如果給定的膠原衍生物可刺激抑制性T細(xì)胞誘導(dǎo)克隆無(wú)反應(yīng)性或誘導(dǎo)其它的免疫耐受，該實(shí)驗(yàn)即可確定。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟知測(cè)定誘導(dǎo)抗原耐受的方法，例如，在Paul，W.E.，編輯的基礎(chǔ)免疫學(xué)第2版，Raven出版紐約，(1994)中可找到這種方法。同樣，通過(guò)應(yīng)用從相關(guān)疾病患者分離別的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，可確定適于治療給定免疫性疾病的用于治療其它免疫性疾病的膠原衍生物。適合本發(fā)明的方法中應(yīng)用的膠原分子，膠原衍生物或粘膜粘合膠原連接物至少包括一種耐受誘導(dǎo)表位，這里應(yīng)用的“耐受誘導(dǎo)表位”一詞指具有這樣特征的膠原上的表位，它能對(duì)免疫性疾病中的致病性免疫應(yīng)答誘導(dǎo)耐受，且不依賴于分離出這一“耐受誘導(dǎo)表位”的膠原分子的其它部位。各自的膠原分子可包括一或多種耐受誘導(dǎo)表位。此外，耐受誘導(dǎo)表位或一定膠原分子上的表位可依膠原治療的特異性免疫性疾病的不同而改變。本發(fā)明還提供膠原衍生物，它由包括一或多種膠原耐受誘導(dǎo)表位的氨基酸殘基序列；這里所指的新型多肽稱(chēng)為“耐受表位多肽”耐受表位多肽可包括許多一致的耐受誘導(dǎo)表位。本發(fā)明的耐受表位多肽也可包括一或多種從相同或不同膠原分子衍生來(lái)的非一致性耐受誘導(dǎo)多肽。該耐受誘導(dǎo)表位的實(shí)施方案包括不同表位以有規(guī)律重復(fù)方式排列的多肽和不同耐受誘導(dǎo)表位自由排列的多肽。耐受表位多肽包括許多耐受誘導(dǎo)表位；然而耐受表位多肽是實(shí)質(zhì)性的且有大小，所以本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到在合成和應(yīng)用很大多肽時(shí)出現(xiàn)的某些技術(shù)問(wèn)題，如溶解度、穩(wěn)定性等。因此，本發(fā)明的耐受表位多肽優(yōu)選包括500耐受誘導(dǎo)表位，更優(yōu)選的范圍為250耐受誘導(dǎo)表位，還更優(yōu)選的范圍是50-100耐受誘導(dǎo)表位。耐受誘導(dǎo)表位可以糖基化或非糖基化，取決于碳水化合物基質(zhì)是否作為耐受誘導(dǎo)表位的一部分?？捎脗鹘y(tǒng)的基因工程技術(shù)制備耐受表位多肽。如Goeddel基因表達(dá)技術(shù)，酶學(xué)方法185卷，學(xué)術(shù)出版社(1991)中所描述的。此外，耐受表位多肽可包括一或多種非膠原來(lái)源的氨基酸殘基序列，由耐受表位多肽中的膠原來(lái)源的耐受誘導(dǎo)表位區(qū)可作為非膠原來(lái)源的氨基酸序列的載體，于是也可對(duì)非膠原來(lái)源的氨基酸殘基序列誘導(dǎo)免疫耐受。換言之，耐受表位多肽的一些實(shí)施方案中，多肽為誘導(dǎo)對(duì)非膠原蛋白產(chǎn)生免疫耐受而充當(dāng)“載體”，而這種非膠原蛋白參予免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理。例如，本發(fā)明提供包括髓鞘堿性蛋白的耐受表位多肽在多發(fā)性硬化病理性免疫應(yīng)答的發(fā)展過(guò)程中和多種耐受誘導(dǎo)表位中顯示出重要作用。編碼耐受表位多肽的多核苷酸序列可通過(guò)體外合成多核苷酸和控制前分離的編碼膠原的多核苷酸而進(jìn)行制備。遵照表1提供的資料可為治療特異的免疫性疾病設(shè)計(jì)耐受表位多肽。耐受表位多肽可包括從膠原或在特殊的組織中發(fā)現(xiàn)的膠原而來(lái)的耐受誘導(dǎo)表位，從而能對(duì)發(fā)現(xiàn)自然產(chǎn)生該膠原的組織誘導(dǎo)炎癥抑制(免疫耐受)。因此，包括II型、IX型、XI型膠原的耐受誘導(dǎo)表位的耐受表位多肽可代替(或補(bǔ)充)II型、IX型和XI型膠原的混合物。免疫學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可容易地確定特定膠原和特定免疫性疾病的耐受誘導(dǎo)表位。例如，患有(或好象要產(chǎn)生)特異的免疫性疾病的人的某種淋巴細(xì)胞亞群中有可與耐受誘導(dǎo)選擇區(qū)結(jié)合的受體。其中可在有關(guān)的膠原分子中制造系統(tǒng)性缺失而推斷耐受誘導(dǎo)表位。本發(fā)明的另一個(gè)方面是為治療免疫性疾病提供方法。這里所應(yīng)用的“治療”一詞指對(duì)疾病的預(yù)防和去除已在個(gè)體中存在的癥狀。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，對(duì)于阻止疾病的發(fā)生或減輕與疾病相關(guān)的癥狀治療不必完全有效。任何癥狀程度的減弱，癥狀發(fā)生的延遲，或延緩癥狀嚴(yán)重度的進(jìn)展，對(duì)病人來(lái)講都是很希望的?；谌魏我环N暗示可能發(fā)生免疫性疾病的變化因素如，家族史、遺傳標(biāo)記、早期癥狀等，對(duì)有患特定免疫性疾病的人可進(jìn)行預(yù)防性治療。能被本發(fā)明的方法治療的免疫性疾病包括表1中所列出的疾病，但不僅限于此。本發(fā)明的方法包括施用有效量的本發(fā)明的組合物這一步，如應(yīng)用膠原，膠原衍生物，或粘膜粘合膠原連接物，如前部分所述，治療特異的免疫性疾病所優(yōu)選應(yīng)用的組合物列在表1中。本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，給受試對(duì)象施用的組合物包括可變地糖基化膠原或粘膜粘合膠原連接物，其中膠原組分包括可變地糖基化的膠原分子。施用本發(fā)明方法中施用的組合物使活性組分，即膠原和/或膠原衍生物與腸的淋巴樣組織，如集合淋巴結(jié)或其它類(lèi)似部分相接觸。從而誘導(dǎo)免疫耐受。在許多可能的方法中，這種施用可通過(guò)應(yīng)用包括為口服施用設(shè)計(jì)的組合物的制劑而起效，即活性組分在與合適的腸道淋巴組織接觸之前在口腔，胃或消化系統(tǒng)的其它部位不被破壞或滅活。本發(fā)明的治療方法還包括施用其它的治療免疫性疾病的藥性化合物，如用抗炎藥物等等。所施用組合物的劑量可在較大范圍內(nèi)變動(dòng)，這依賴于各種因素，如炎癥的嚴(yán)重度，患者的年齡等，并且必須做個(gè)體調(diào)整。每天可施用的膠原和/或膠原衍生物量的可能范圍是0.001mg-200mg左右。優(yōu)選低量施用膠原和/或膠原衍生物，這樣可以抑制而非克隆無(wú)反應(yīng)性的方式促進(jìn)誘導(dǎo)免疫耐受?？砂押z原和/或膠原衍生物的藥性組合物制成合適的制劑，使它所含劑量無(wú)論作為單一劑量單位或多元?jiǎng)┝繂挝痪谶@些劑量范圍內(nèi)。本發(fā)明的方法中應(yīng)用的耐受誘導(dǎo)組合物的合適劑量將遵照一些因素而有所變化。這里所應(yīng)用的“劑量”和“量”除其它說(shuō)明外，不僅可指一次施用組合物，也可用于指選擇的一段時(shí)間內(nèi)施用的多個(gè)個(gè)體施用特定藥性組合物時(shí)的總量。影響最佳劑量的因素包括施用給患者的膠原分子或分子(和/或膠原衍生物)的選擇，所選擇的特殊的粘膜粘合分子，患者的年齡、疾病的嚴(yán)重程度、患者患的其它疾病、制劑中的惰性成分、佐劑等等。對(duì)治療特定免疫疾病有效的劑量范圍可有相當(dāng)大的變化。相同藥性組合物的不同劑量可通過(guò)不同的機(jī)制誘導(dǎo)所希望的耐受。盡管本發(fā)明的作用不依賴特殊的作用機(jī)制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道由口服耐受的介導(dǎo)有2個(gè)主要機(jī)制，所以它們會(huì)較好地理解本發(fā)明并提供其它的實(shí)施方案?？诜褪芸捎苫钚约?xì)胞抑制所介導(dǎo)。其調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制對(duì)耐受性抗原特異的淋巴細(xì)胞的活性和增殖，誘導(dǎo)口服耐受的另一個(gè)機(jī)制是克隆無(wú)反應(yīng)性，其中有適當(dāng)受體的T淋巴細(xì)胞變得無(wú)反應(yīng)性，通?；钚砸种颇褪苡伞暗汀眲┝康哪褪苄钥乖С郑寺o(wú)反應(yīng)性由相對(duì)“高”劑量的相同耐受性抗原誘導(dǎo)?？诜褪苷T導(dǎo)原理及技術(shù)的綜述可于Weiner等，免疫學(xué)綜述年刊1994，809-835，年刊綜述，中找到。本組合物可以藥性組合物的形式制劑，以適于粘膜表面施用時(shí)的某些類(lèi)型，如口服，局部用和吸入?？诜┯玫膬?yōu)選制劑是以組合物中的膠原和/或膠原衍生物與腸內(nèi)的淋巴組織如集合淋巴結(jié)相接觸的形式。本發(fā)明的組合物可以藥物組合物的形式以局部用、口服、鼻內(nèi)、注射或吸入的方式施用，該藥物組合物包括膠原和/或膠原衍生物，它們以原化合物的形式或其藥學(xué)上的與固體、半固體或液體稀釋劑或可攝入膠囊這樣藥學(xué)上的載體相聯(lián)系的鹽形式存在，這些制劑包括了本發(fā)明的另一個(gè)方面。膠原和/或膠原衍生物和粘膜粘合膠原連接物也可與載體物一起應(yīng)用。藥性制劑的實(shí)例可是片劑，如滴鼻用的滴劑，表面應(yīng)用的制劑如軟膏、凝膠劑、乳油和懸液、吸入的氣霧劑、鼻噴劑、脂質(zhì)體等。通常膠原和/或膠原衍生物包含制劑重量的0.05-99％，或0.1-99％，例如用于注射時(shí)占制劑的0.5-20％，用于口服時(shí)為制劑的0.1-50％。為了以這種劑量單元的形式制備含本發(fā)明化合物，口服應(yīng)用的藥物制品，活性成分可與固體、粉狀載體混合，例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉如土豆淀粉、玉蜀黍淀粉、支鏈淀粉、昆蟲(chóng)多糖粉或柑桔果肉粉、纖維素的衍生物或明膠，也可包括潤(rùn)滑劑如鎂或鈣的硬脂酸鹽或碳蠟或其它的聚乙二醇蠟，經(jīng)壓可形成片劑或作為糖衣丸的核心。如果需要糖衣丸，可給核心包衣，例如用濃縮的糖濃液，其中可包含阿拉伯膠，滑石粉和/或二氧化鈦，或用溶于易揮發(fā)有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑混合物中的薄膜形成試劑。這些包衣中可加入著色劑，例如用于區(qū)分活性物質(zhì)的不同含量。制備由明膠和比如甘油做為增塑劑所組成的軟明膠膠囊或相似的密封膠囊時(shí)，活性物質(zhì)可與碳蠟混合或與適當(dāng)?shù)挠腿缰ヂ橛汀㈤蠙煊突蚧ㄉ突旌?。硬明膠膠囊可含有活性物質(zhì)與固體，粉狀載體形成的顆粒，載體有，如乳糖、蔗糖、甘梨醇、甘露醇、淀粉(例如)土豆淀粉，玉蜀黍淀粉或支鏈淀粉，纖維素衍生物或明膠，也可包括硬脂酸鎂或硬脂酸作潤(rùn)滑劑?？蓪?duì)本發(fā)明的組合物進(jìn)行配制以提供持久的釋放。用緩慢溶解的包衣把活性藥物分成幾層，由此可得到持久釋放的片劑。另一制備持久釋放片劑的方法是用不同厚度的包衣把活性藥物的劑量分成顆粒，然后把顆粒和載體物質(zhì)一起壓成片劑。膠原和/或膠原衍生物和粘膜粘合膠原連接物可合并在緩溶片劑中，片劑可由例如脂肪和蠟形成，或平均分布在不溶物如無(wú)生理活性的成形物的片劑中。為了得到口服制劑(片劑、膠囊等)的劑量單位，設(shè)計(jì)這些制劑以阻止活性物質(zhì)在胃液中釋放和分解的可能，片劑、糖衣丸等可制成腸溶衣的，這樣就提供了一層胃液抵抗性腸或具有這種特性的包衣，在胃液酸性pH的情況下不溶解。因此，活性物質(zhì)在制劑到達(dá)腸道之前不被釋放，這種已知腸溶衣的實(shí)例有醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，如市售商標(biāo)名為HP55，HP50，EdragitL和EudragitS的?？砂芽诜?yīng)用的液體制劑制成酏劑，糖漿或懸液的形式，例如含活性物質(zhì)的重量為0.1-20％糖和混合物或乙醇，水甘油，丙二醇和選擇香味；甜味和/或羧甲基纖維素作分散劑的溶液。提到膠原時(shí)應(yīng)用的“純化”一詞表示所指出的分子在其它的生物大分子如多核苷酸，蛋白質(zhì)等，基本上不存在的情況下存在。這里所應(yīng)用的“純化”一詞優(yōu)指至少存在所指生物大分子重量的95％，更優(yōu)選的是至少存在99.8％(但水，緩沖液或其它小分子，尤其是分子量小于100道爾頓的分子可存在)。這里所應(yīng)用的“分離的”一詞指蛋白質(zhì)分子不僅從以天然來(lái)源的蛋白質(zhì)存在的其它蛋白質(zhì)中分離，而且從其它的蛋白質(zhì)分離，優(yōu)指僅在溶劑、緩沖液、離子或其它存在于相同溶液的組分中找到的蛋白質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“分離的”和“純化的”不包括存在于天然來(lái)源的蛋白質(zhì)。6.實(shí)施例下列實(shí)施例的目的是為了說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。6.1用膠原免疫后針對(duì)抗膠原抗體發(fā)生的動(dòng)物體內(nèi)研究用人類(lèi)II型膠原(CII)，哺乳類(lèi)細(xì)胞來(lái)源的重組II型膠原(rCII+)或源于昆蟲(chóng)細(xì)胞的重組II型膠原(rCII-)免疫每組10只的DBA/l小鼠，每一次免疫之前，膠原溶于0.01M的醋酸，然后以1∶1的比例與完全福氏佐劑進(jìn)行乳化。給每只小鼠尾部皮下注射100μg的蛋白質(zhì)。2組接受2劑100μg的rCII-或rCII-，因此總共接受200μg的rCII+或rCII-。在施用總共劑量為200μg的情況時(shí)，按上述方法施用第1劑100μg的蛋白質(zhì)，在施用第1劑3周后，第2劑100μg的蛋白質(zhì)與不完全福氏佐劑進(jìn)行乳化后施用。六周時(shí)(免疫后)計(jì)算了關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率，表2闡明了其結(jié)果。表2如表2列出的數(shù)據(jù)所顯示的，抗體代表免疫后四周收集的每組血清中對(duì)天然人類(lèi)II型膠原產(chǎn)生的抗體的均值(以單位表示)。6.2靜脈內(nèi)施用膠原之后針對(duì)抗膠原抗體發(fā)生的動(dòng)物體內(nèi)研究把卵白蛋白，人類(lèi)II型膠原(CII)，源于哺乳類(lèi)細(xì)胞的重組II型膠原(rCII+)或源于昆蟲(chóng)細(xì)胞的重組II型膠原(rCII-)靜脈內(nèi)施用給每組10只的DBA/1小鼠。施用前，把膠原(CII，rCII+，rCII-)溶于0.01M的醋酸，用PBS進(jìn)行透析。每天施用33μg或33μg的蛋白質(zhì)，應(yīng)用3天，于是給每只試驗(yàn)小鼠施用的總量為100μg或1000μg蛋白質(zhì)。施用最后一劑4天后，用CII給小鼠進(jìn)行免疫。免疫后6周時(shí)關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率在表3中顯示。表3應(yīng)用免疫后4周收集的血清，抗體代表了每組中針對(duì)天然人類(lèi)II型膠原所產(chǎn)生抗體的均值(以單位表示)。統(tǒng)計(jì)學(xué)用Student’sT檢驗(yàn)。6.3口服施用膠原后針對(duì)抗膠原抗體發(fā)生的動(dòng)物體內(nèi)研究給每組10-12只的DBA/1小鼠口服施用卵白蛋白，人類(lèi)II型膠原(CII)，源于哺乳類(lèi)細(xì)胞的重組II型膠原(rCII+)或源于昆蟲(chóng)細(xì)胞的重組II型膠原(rCII-)。膠原溶于0.01M的醋酸中，每周施用4次，施用2周共8劑。每天施用10μg或100μg以使小鼠接受的總量為80μg或800μg蛋白質(zhì)。接受最后一劑后3天，用CII給免疫小鼠。表4給出了免疫后5周時(shí)的關(guān)節(jié)炎發(fā)病率。表4</tables>統(tǒng)計(jì)學(xué)差異用Fisher’sExact檢驗(yàn)計(jì)算，抗體代表免疫后4周收集的每組血清中針對(duì)天然人類(lèi)II型膠原所產(chǎn)生抗體的均值(以單位表位)，統(tǒng)計(jì)學(xué)用Student’sT檢驗(yàn)。6.4人類(lèi)血小板凝集試驗(yàn)在四個(gè)供者提供的血液樣品中對(duì)III型重組膠原和人類(lèi)的I型、III型膠原進(jìn)行了測(cè)驗(yàn)，測(cè)驗(yàn)應(yīng)用了常規(guī)的血小板凝集試驗(yàn)。所有的膠原顯示了血小板凝集活性。更具體而言，10μg重組III型膠原的凝集率與0.3μgIII型膠原或0.6μgI型膠原的凝集素相等同。引入?yún)⒖妓械膶?zhuān)利，專(zhuān)利申請(qǐng)，和公開(kāi)引證在此引入作為參考。等同認(rèn)為前面寫(xiě)的說(shuō)明足以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員執(zhí)行本發(fā)明。事實(shí)上，上面描述的，為執(zhí)行本發(fā)明所設(shè)計(jì)的各種實(shí)施方案，對(duì)免疫學(xué)，生化領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的，或相關(guān)的領(lǐng)域在下面的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。19條修改的聲明申請(qǐng)人修改了權(quán)利要求1，由此實(shí)質(zhì)上也修改了從屬權(quán)利要求2-14，從而將未決權(quán)利要求的范圍限定為重組技術(shù)來(lái)源的化合物和應(yīng)用這些化合物的方法。本發(fā)明的重組分子在形式和活性上不同于國(guó)際檢索報(bào)告中引用的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中描述的蛋白質(zhì)，因此所引用的文獻(xiàn)不能表明本要求保護(hù)的發(fā)明因缺少創(chuàng)造性而為不可專(zhuān)利的。首先，與所引用的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)不同，本權(quán)利要求限于包含與粘膜結(jié)合分子相連的重組膠原分子。在所引用的文獻(xiàn)的任何地方都沒(méi)有描述這兩種組分的連接。其次，本要求保護(hù)的發(fā)明中的膠原組分不同于所引用的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中描述的膠原化合物。例如，本申請(qǐng)的膠原組分指部分糖基化的人類(lèi)膠原分子及其應(yīng)用，而非指“整個(gè)”雞蛋白質(zhì)。因此，要求保護(hù)的化合物在結(jié)構(gòu)上不同于現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)的完全糖基化的蛋白質(zhì)。第三，與現(xiàn)有技術(shù)不一致的是，要求保護(hù)的化合物比現(xiàn)有技術(shù)中描述的蛋白質(zhì)誘發(fā)較少的抗原性應(yīng)答，因此具有與那些蛋白質(zhì)不同的活性分布。最后，與所引用的文獻(xiàn)不同，本申請(qǐng)利用來(lái)源于重組技術(shù)的包含人類(lèi)膠原蛋白及其片段的化合物治療廣泛的自身免疫疾病，而現(xiàn)有文獻(xiàn)在其公開(kāi)內(nèi)容中為單一的疾病，即類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此，國(guó)際檢索報(bào)告中引用的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)不能告知本申請(qǐng)的權(quán)利要求的這些限定。權(quán)利要求書(shū)1.一種治療自身免疫疾病的化合物，該化合物包含與粘膜粘合分子組分相連接的重組的人類(lèi)膠原分子組分。2.權(quán)利要求1的化合物，其中膠原分子選自II型膠原、IX型膠原和XI型膠原。3.權(quán)利要求2的化合物，其中膠原分子是II型膠原的衍生物。4.權(quán)利要求3的化合物，其中膠原衍生物是可變地糖基化的。5.權(quán)利要求1的化合物，其中粘膜粘合分子選自來(lái)源于細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物外源凝集素的粘膜粘合結(jié)構(gòu)的粘膜粘合分子。6.權(quán)利要求5的化合物，其中粘膜粘合蛋白可與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合。7.權(quán)利要求5的化合物，其中結(jié)合片段是霍亂毒素或大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。8.一種治療免疫性疾病的方法，該方法包括施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。9.權(quán)利要求8的方法，其中膠原分子選自II型膠原、IX型膠原和XI型膠原。10.權(quán)利要求9的方法，其中的膠原分子是II型膠原的衍生物。11.權(quán)利要求11的方法，其中膠原衍生物是可變地糖基化的。12.權(quán)利要求8的方法，其中粘膜粘合分子選自來(lái)源于細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物外源凝集素的粘膜粘合結(jié)構(gòu)的粘膜粘合分子。13.權(quán)利要求12的方法，其中粘膜粘合蛋白可與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合。14.權(quán)利要求12的方法，其中的結(jié)合片段是霍亂毒素或大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。權(quán)利要求1.一種治療自身免疫疾病的化合物，該化合物包含與粘膜粘合分子組分相連接的膠原分子組分。2.權(quán)利要求1的化合物，其中膠原分子選自II型膠原、IX型膠原和XI型膠原。3.權(quán)利要求2的化合物，其中膠原分子是II型膠原的衍生物。4.權(quán)利要求3的化合物，其中膠原衍生物是可變地糖基化的。5.權(quán)利要求1的化合物，其中粘膜粘合分子選自來(lái)源于細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物外源凝集素的粘膜粘合結(jié)構(gòu)的粘膜粘合分子。6.權(quán)利要求5的化合物，其中粘膜粘合蛋白可與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合。7.權(quán)利要求5的化合物，其中結(jié)合片段是霍亂毒素或大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。8.一種治療免疫性疾病的方法，該方法包括施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。9.權(quán)利要求8的方法，其中膠原分子選自II型膠原、IX型膠原和XI型膠原。10.權(quán)利要求9的方法，其中的膠原分子是II型膠原的衍生物。11.權(quán)利要求11的方法，其中膠原衍生物是可變地糖基化的。12.權(quán)利要求8的方法，其中粘膜粘合分子選自來(lái)源于細(xì)菌毒素、細(xì)菌菌毛、病毒附著蛋白和植物外源凝集素的粘膜粘合結(jié)構(gòu)的粘膜粘合分子。13.權(quán)利要求12的方法，其中粘膜粘合蛋白可與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合。14.權(quán)利要求12的方法，其中的結(jié)合片段是霍亂毒素或大腸桿菌不耐熱腸毒素的β亞基。全文摘要本發(fā)明為治療包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的免疫性疾病提供了新的方法和組合物。該組合物包含一種或多種不同類(lèi)型的膠原或膠原衍生物和一種粘膜粘合結(jié)構(gòu)。膠原和/或膠原衍生物的特異組合可用于治療特異的免疫性疾病,本組合物中應(yīng)用的膠原和/或膠原衍生物可從天然來(lái)源獲得,或用重組基因工程技術(shù)和/或化學(xué)修飾方法制備。本發(fā)明的另一方面是通過(guò)施用有效量的含膠原的組合物而為治療免疫性疾病提供方法。本發(fā)明的方法包含口服施用在特異組織中找到的膠原,以誘導(dǎo)對(duì)天然存在該膠原的組織產(chǎn)生炎癥抑制(免疫耐受),本發(fā)明的方法包括把含膠原和/或膠原衍生物的組合物施用到腸內(nèi),例如口服施用,從而誘導(dǎo)免疫耐受。文檔編號(hào)A61K38/17GK1178470SQ96192487公開(kāi)日1998年4月8日申請(qǐng)日期1996年1月11日優(yōu)先權(quán)日1996年1月11日發(fā)明者T·B·內(nèi)夫,G·R·馬爾丁,K·A·皮茨,T·A·皮拉雅尼米,K·I·基維里科申請(qǐng)人:菲布洛根有限公司,芬蘭研究院