專(zhuān)利名稱：抑制環(huán)境雌激素的方法
雌激素是內(nèi)源激素，它在人生理上具有各種顯著的功能。該激素主要影響雄性和雌性的生殖系統(tǒng)。例如在成年雌性，雌激素在懷孕和哺乳階段是不可缺少的。它也降低心臟病發(fā)作和骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)。另外，出生前和出生后的早期階段的雌激素與雄激素的比例調(diào)節(jié)性分化和適當(dāng)?shù)纳称鞴俚恼_形成。雌激素也與乳腺和子宮細(xì)胞生長(zhǎng)的增加，即癌癥相關(guān)。雄性中，雌激素調(diào)節(jié)精子產(chǎn)生，不正常的高濃度導(dǎo)致精子數(shù)目的下降。
近幾年，對(duì)人類(lèi)和野生種群暴露在其作用是模仿內(nèi)源雌激素的人造或天然產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)的關(guān)注增加。這些物質(zhì)有各種來(lái)源，包括農(nóng)藥，動(dòng)物健康產(chǎn)品，塑料，燃燒副產(chǎn)物，以及植物(植物雌激素)。具體的例子包括玉米赤霉醇(zeranol)，染料木素，香豆雌醇，o，p-DDT，開(kāi)篷，甲氧氯，玉米赤霉烯酮，dioxin，對(duì)辛基苯酚，和雙酚A?？偟膩?lái)說(shuō)，這類(lèi)化合物已稱為環(huán)境雌激素，并與許多疾病相關(guān)，包括男子女性型乳房(DiRaimondo等，N.Engl.J.Med.301，1089，(1980))，早熟青春期(Comas，Lancet，1299，(1982))，精子數(shù)低(R.M.Sharpe等，Lancet，341，1392(1993))，子宮內(nèi)膜異位(S.E.Rier等，F(xiàn)undam.Appl.Toxicol.，31，423，(1993))，和乳腺癌(M.S.Wolff等，J.Natl.Cancer Inst.，85，648，(1993))。
本發(fā)明提供了抑制環(huán)境雌激素作用的方法，包括給需要此種治療的人或其它動(dòng)物施用有效量的式I化合物，及其可藥用鹽，和其溶劑化物
其中R1和R3單獨(dú)為氫，-CH3，
或
，其中Ar任選自取代苯基；R2選自吡咯烷基，六亞甲基亞胺，和哌啶子基；現(xiàn)發(fā)明涉及式I的2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(苯并噻吩)對(duì)抑制環(huán)境雌激素作用是有用的這一發(fā)現(xiàn)。特別地，本發(fā)明的方法包含抑制環(huán)境雌激素的生殖影響。
本發(fā)明提供的方法，通過(guò)給需要此種處理的人或其它動(dòng)物服用式I化合物或其藥用鹽或溶劑化物而實(shí)施，它對(duì)抑制環(huán)境雌激素的影響有效。術(shù)語(yǔ)“抑制”包括其通常所承認(rèn)的意思，包括阻止，妨礙，限制，以及減慢，停止或逆轉(zhuǎn)。照此，本方法包括以適當(dāng)?shù)姆绞浇o與藥物治療和/或預(yù)防。
Raloxifene，本發(fā)明的化合物，它是式I化合物的鹽酸鹽，R1和R3是氫，R2是1-哌啶基，是核調(diào)節(jié)分子。已知Raloxifene結(jié)合到雌激素受體，原認(rèn)為其功能和藥理學(xué)是抗雌激素的，它阻斷雌激素激活子宮組織的能力和雌激素依賴的乳腺癌。事實(shí)上，Raloxifene確實(shí)阻斷了雌激素在某些細(xì)胞內(nèi)的作用；然而在另外一些類(lèi)型的細(xì)胞，Raloxifene象雌激素那樣活化相同的基因并顯示相同的藥理學(xué)，如骨質(zhì)疏松，高脂血癥。因此，Raloxifene已被稱為具有混合激動(dòng)劑-拮抗劑性質(zhì)的抗雌激素。Raloxifene所顯示并區(qū)別于雌激素的獨(dú)特性質(zhì)現(xiàn)在被認(rèn)為相對(duì)于雌激素-雌激素受體復(fù)合物對(duì)基因的活化和/或抑制作用歸因于Raloxifene-雌激素受體復(fù)合物對(duì)各種基因功能獨(dú)特的活化和/或抑制作用。因此，雖然Raloxifene和雌激素利用并競(jìng)爭(zhēng)相同的受體，但不易預(yù)料兩者通過(guò)基因調(diào)控的藥理學(xué)結(jié)果，而且對(duì)兩者中每一個(gè)都是獨(dú)特的。
一般地，該化合物用普通的賦形劑，稀釋劑或載體配制，并壓成片劑，或配制成酏劑或溶液以方便口服，或經(jīng)肌內(nèi)或靜脈途徑給藥。該化合物可以經(jīng)皮給藥，并可以配制成緩釋制劑形式等等。
在現(xiàn)發(fā)明的方法中使用的化合物可以根據(jù)已建立的步驟制造，如在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,133,814,4,418,068，和4,380,635中詳述的，所有這些在此引入作為參考?？偟膩?lái)說(shuō)，該過(guò)程從具有6-羥基和2-(4-羥基苯基)基團(tuán)的苯并噻吩開(kāi)始。該起始物被保護(hù)，乙?；?，并脫保護(hù)形成式I化合物。制備此化合物的實(shí)施例由上面描述的美國(guó)專(zhuān)利提供。任選的取代苯基包括苯基和被C1-C6烷基，C1-C4烷氧基，羥基，硝基，氯，氟，或三(氯或氟)甲基取代一次或兩次的苯基。
在本發(fā)明的方法中使用的化合物用各種有機(jī)和無(wú)機(jī)酸和堿形成藥用酸和堿加合鹽，包括在藥物化學(xué)常用的生理上可接受的鹽。此種鹽也是本發(fā)明的部分。典型的用于形成此鹽的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，連二磷酸等等。也可以使用從有機(jī)酸形成的鹽，如脂族單和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸，羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸，芳香酸，脂族和芳香族磺酸。于是此藥用鹽包括乙酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸鹽，氯代苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，鄰乙酸基苯甲酸鹽，萘-2-苯甲酸鹽，溴化物，異丁酸鹽，苯基丁酸鹽，β-羥基丁酸鹽，丁炔-1，4-dioate，己炔-1，4-dioate，癸酸鹽，辛酸鹽，氯化物，肉桂酸鹽，檸檬酸鹽，甲酸鹽，反式丁烯二酸鹽，乙醇酸鹽，庚酸鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋(píng)果酸鹽，順丁烯二酸鹽，羥基順丁烯二酸鹽，丙二酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，異煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，teraphthalate，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，丙炔酸鹽，丙酸鹽，苯基丙酸鹽，水楊酸鹽，癸二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，對(duì)溴苯基磺酸鹽，氯苯基磺酸鹽，乙磺酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，酒石酸鹽，等等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
藥用酸加合鹽典型地通過(guò)式I化合物與等摩爾或過(guò)量的酸反應(yīng)形成。反應(yīng)物一般在相容溶劑如乙醚或苯中結(jié)合。正常地鹽在約1小時(shí)到10天內(nèi)從溶液中沉淀出來(lái)，并經(jīng)過(guò)濾分離或用常規(guī)方法除去溶劑。
通常用于形成鹽的堿包括氫氧化銨及堿金屬和堿土金屬氫氧化物，碳酸鹽，以及脂肪族和伯，仲和叔胺，脂肪族二胺。制備加合鹽特別有用的堿包括氫氧化銨，碳酸鉀，甲胺，二乙胺，乙二胺和環(huán)己胺。
與其來(lái)源的化合物相比，藥用鹽通常具有提高的溶解性，所以常常更易于配制成液體或乳劑。
藥物的配制可以采用技術(shù)上已知的步驟。例如，化合物可以用普通的賦形劑，稀釋劑，或載體配制，并制成片劑，膠囊，混懸劑，散劑等等。適合于此配制的賦形劑，稀釋劑和載體包括如下填料和填充劑如淀粉，糖，甘露醇和硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，硅酸鹽，明膠，及聚乙烯吡咯烷酮；濕潤(rùn)劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；用于阻滯溶解的試劑如石蠟；吸收加速劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇，單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤(rùn)土；以及潤(rùn)滑劑如滑石硬脂酸鈣和鎂，和固體聚乙二醇。
化合物也可以配制成酏劑或方便口服給藥的溶液或作為適于腸胃外給藥的溶液，例如經(jīng)肌內(nèi)，皮下或靜脈途徑。另外，化合物很適合配制成緩釋劑形式等。該制劑可配制成僅在或優(yōu)選在腸道的特殊部分，可能在一段時(shí)間內(nèi)釋放活性成分。可以用如聚合物或蠟制成涂層，包皮和保護(hù)層。
根據(jù)本發(fā)明抑制環(huán)境雌激素的作用所需的適宜化合物的具體劑量依賴于條件的嚴(yán)重性，給藥途徑和由出診醫(yī)生決定的相關(guān)因素。一般地，每日可接受的有效劑量為約0.1-1000mg/日，更典型地為約50-200mg/日。這些劑量每日1-3次給與需要此種治療的受治療者，更經(jīng)常的用于有效治療綜合癥或至少其中一種癥狀。
通常優(yōu)選以酸加合鹽的形式給與式I化合物，正如通常服用含堿性基團(tuán)如哌啶子基環(huán)的藥物那樣。通過(guò)口服施用此化合物也是有利的。為此可使用下列口服劑量形式。
下列配方中，“活性成分”指式I化合物制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊用下列方式制備成分 量(mg/膠囊)活性成分 0.1-1000淀粉，NF 0-650可流動(dòng)淀粉粉末0-650硅酮流體350厘沲 0-15
成分混合，過(guò)No.45目美國(guó)細(xì)篩，填進(jìn)硬明膠膠囊中。
已制備的Raloxifene特殊膠囊配制的實(shí)施例包括如下所示的成分制劑2Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 1淀粉，NF 112可流動(dòng)淀粉粉末225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑3Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 5淀粉，NF 108可流動(dòng)淀粉粉末225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑4Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 10淀粉，NF 103可流動(dòng)淀粉粉末225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑5Raloxifene膠囊成分量(mg/膠囊)Raloxifene50淀粉，NF 150可流動(dòng)淀粉粉末397硅酮流體350厘沲 3.0上面具體的配制可以按照所提供的的合理變化而改變。片劑配制用如下成分制備制劑6片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000纖維素，微晶 0-650煅制二氧化硅 0-650硬脂酸0-15組分混合后壓成片劑。另外，每片含0.1-1000mg活性成分的片劑制備如下制劑7片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000淀粉 45纖維素，微晶 35聚乙烯吡咯烷酮4(10％水溶液)羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1
活性成分，淀粉和纖維素過(guò)No.45目美國(guó)細(xì)篩并徹底混合。聚乙烯吡咯烷酮的溶液與總粉末混合，然后過(guò)No.14目美國(guó)細(xì)篩。如此形成的顆粒在50°-60℃干燥并國(guó)No.18美國(guó)細(xì)篩。然后已過(guò)No.60美國(guó)細(xì)篩的羧甲基纖維素鈉，硬脂酸鎂，及滑石加入到顆粒中，混合后，在壓片機(jī)上壓成片劑。
每劑5mi含0.1-1000mg藥劑的混懸液制備如下制劑8混懸液成分 量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液0.10ml調(diào)味劑q.v.顏色 q.v.加純水至 5ml藥劑過(guò)No.45目美國(guó)細(xì)篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成調(diào)勻的漿。攪拌下加入用水稀釋的苯甲酸溶液，調(diào)味劑，顏色。然后加入足量的水至需要體積。
測(cè)試步驟試驗(yàn)1在解釋方法的實(shí)施例中，絕經(jīng)后模型用于測(cè)定不同的治療對(duì)循環(huán)脂質(zhì)的作用。
75天齡雌性Sprague Dawley大鼠(體重200-225g)從CharlesRiver實(shí)驗(yàn)室(Portage，MI)獲得。動(dòng)物在Charles River實(shí)驗(yàn)室被雙側(cè)卵巢切除(OVX)并于一周后送來(lái)。到達(dá)時(shí)它們被以每籠3-4只關(guān)在金屬籠中，并隨意攝食(鈣含量約0.5％)和水一周。室溫保持在22.2±1.7℃，最小相對(duì)濕度為40％。室內(nèi)光周期為12小時(shí)照明12小時(shí)黑暗。
劑量服法組織收集 一周適應(yīng)期后(即OVX后兩周)，開(kāi)始每日給與被試化合物Raloxifene。玉米赤霉醇和被試化合物在20％環(huán)糊精賦形劑中口服給與。動(dòng)物每日口服，連續(xù)4天。服用后動(dòng)物稱重并用ketamine賽拉嗪(2∶1，V∶V)混合物麻醉并通過(guò)心臟穿刺收集血樣。動(dòng)物然后通過(guò)用二氧化碳窒息處死，中線切開(kāi)取出子宮并測(cè)量子宮濕重。
膽固醇分析 血樣在室溫凝固2小時(shí)，3000rpm離心10分鐘后得到血清。用Boehringer Mannheim診斷高效膽固醇測(cè)定法測(cè)定血清膽固醇。簡(jiǎn)要地，膽固醇被氧化成膽甾-4-烯-3-酮和過(guò)氧化氫。然后過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的存在下與酚和4-氨基安替匹林反應(yīng)產(chǎn)生對(duì)苯醌亞胺染料，在500nm分光光度計(jì)讀數(shù)。膽固醇濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。整個(gè)實(shí)驗(yàn)用Biomek自動(dòng)化工作站自動(dòng)進(jìn)行。
子宮嗜曙紅細(xì)胞過(guò)氧化物酶(EPO)試驗(yàn)子宮保存在4℃直到酶分析。子宮然后用50體積的含0.005％Triton X-100的50mMTris緩沖液(pH8.0)勻漿。加入0.01％過(guò)氧化氫和Tris緩沖液中10mM的鄰苯二胺(終濃度)后，在450nm監(jiān)測(cè)吸光度1分鐘。子宮中嗜曙紅細(xì)胞的存在是化合物雌激素活性的指示，測(cè)定開(kāi)始的反應(yīng)曲線線性部分15秒間隔最大速率。
數(shù)據(jù)歸納如表1所示玉米赤霉醇作為環(huán)境雌激素的實(shí)例使子宮濕重增加3倍，并導(dǎo)致子宮嗜曙紅細(xì)胞顯著增加(相對(duì)于OVX對(duì)照組EPO最大速率為4mOD/min)和血清膽固醇的減少。這些活性與在此試驗(yàn)系統(tǒng)中雌激素藥物(即17α-乙炔基雌二醇)所產(chǎn)生的性質(zhì)上相似。
被試化合物與玉米赤霉醇組合使用時(shí)減緩子宮刺激和環(huán)境雌激素的降膽固醇活性。在10mg/kg劑量水平被試化合物導(dǎo)致對(duì)玉米赤霉醇誘導(dǎo)的子宮重量刺激，子宮EPO升高和血清膽固醇下降的明顯衰減。
表1子宮重量 子宮血清膽固(相對(duì)于 EPO醇OVX對(duì)照的升 (Vm (相對(duì)于高百分比) ax) OVX對(duì)的下降百分?jǐn)?shù)照)玉米赤霉醇 200.5 403.8 82.8(10mg/kg)玉米赤霉醇 189.2 429.6 77.710mg/kg+測(cè)試化合物(0.1mg/kg)玉米赤霉醇 202.2 360.3 66.210mg/kg+測(cè)試化合物(1mg/kg)玉米赤霉醇 91.2 177.9 52.410mg/kg+測(cè)試化合物(10mg/kg)17α-乙炔雌二109.2 177.9 86.4醇(0.1mg/kg)試驗(yàn)2采用了5至40個(gè)已知受環(huán)境雌二醇處理并顯示出癥狀的(即癌癥，男子女性型乳房，精子量低)個(gè)體。這些個(gè)體用式I的化合物治療4至12個(gè)月，在此期間環(huán)境雌二醇的影響被測(cè)定回歸。
在這些研究之一中，這種化合物的實(shí)用性為其對(duì)于環(huán)境雌二醇的影響的作用而證明。
權(quán)利要求
1.抑制環(huán)境雌激素影響的方法，包括給需要此種治療的人或其它動(dòng)物施用有效量的式
的化合物，或其溶劑化物的藥用鹽，其中R1和R3單獨(dú)為氫，-CH3，
或
，其中Ar選自任選取代的苯基；R2選自吡咯烷基，六亞甲基亞胺，和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是
或其鹽酸鹽。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的影響涉及生殖系統(tǒng)。
全文摘要
抑制環(huán)境雌激素作用的方法，包括給與需要的人或其它動(dòng)物有效量的式(I)化合物或者其溶劑化物的藥用鹽，其中R
文檔編號(hào)A61K31/445GK1169116SQ9619159
公開(kāi)日1997年12月31日 申請(qǐng)日期1996年1月22日 優(yōu)先權(quán)日1995年1月25日
發(fā)明者H·U·布賴恩特, J·A·道杰 申請(qǐng)人:伊萊利利公司