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從中藥黃精中提取黃精多糖的方法

文檔序號(hào):838104閱讀:6074來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:從中藥黃精中提取黃精多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于從中草藥中提取多糖藥物的技術(shù)領(lǐng)域。
多糖具有多種生理功能,因而多糖藥物研究近年來(lái)發(fā)展迅速。目前,從天然產(chǎn)物或發(fā)酵產(chǎn)物中分離制備多糖,國(guó)內(nèi)外多采用物理、化學(xué)方法。一般將原藥粉碎、脫脂后,用水、稀酸或稀堿抽提,抽提液濃縮后,先用三氯乙酸或氯仿-正丁醇法去除雜蛋白,然后透析去除小分子雜質(zhì),濃縮后凍干或用有機(jī)溶劑沉淀即獲得多糖產(chǎn)物。多糖的精制多采用離子交換和凝膠過(guò)濾方法。上述多糖制備方法存在以下不足①多糖中含有酚型化合物,因而具有較深的黃色、棕色。這些顏色用活性炭無(wú)法脫色,用氧化劑則容易使多糖降解;②提取程序復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、成本高,向規(guī)?;a(chǎn)業(yè)化轉(zhuǎn)化難度大;③精制多糖時(shí)用的離子交換介質(zhì)多為纖維素和葡聚糖凝膠衍生物,本身就多糖,當(dāng)受到微生物或某些化學(xué)因素作用時(shí),多糖制品容易受到介質(zhì)降解產(chǎn)物的污染。一句話,上述方法,不易獲得高純度的多糖。
建立一種新的以生藥黃精為原料,提取工藝簡(jiǎn)單,可靠,既使收率高,成本低,又能得到高純度的黃精多糖的方法是本發(fā)明的目的。
為達(dá)上述目的,本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有提取技術(shù)存在的問(wèn)題,在技術(shù)上,著重解決了以下幾個(gè)問(wèn)題1.在原藥干片加工過(guò)程中,采用蒸煮后的通風(fēng)干燥,避免了制片過(guò)程中酚類物質(zhì)氧化,解決了藥材顏色發(fā)黃問(wèn)題。
2.抽提液不用稀酸、稀堿,而用低級(jí)醇,并在室溫下浸提。此步驟可使蛋白質(zhì)、淀粉等雜質(zhì)保留在固相中,使抽提物純度大為提高。
3.在多糖精制過(guò)程中,離子交換介質(zhì)采用大孔弱堿陰離子交換樹(shù)脂,凝膠過(guò)濾介質(zhì)選用聚丙烯酰胺凝膠系列,避免了多糖的污染。
具體的方法為,生黃精去須根、洗凈蒸煮一段時(shí)間后,切成2-5mm厚的片,在60°±10℃溫度下通風(fēng)烘干,粉碎過(guò)篩后,細(xì)粉用低級(jí)醇進(jìn)行二次抽提,使用的低級(jí)醇濃度第一次為80%-95%,第二次為40-60%,低級(jí)醇與黃精粉末的浸泡比第一次為3-5∶1;第二次為7-15∶1。經(jīng)第二次抽提過(guò)濾后的濾液加入2-4倍有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀、過(guò)濾、烘干,得黃精多糖粗品。用本發(fā)明所得的黃精多糖粗品用緩沖液和水進(jìn)行三次上柱層析,第一次,用20mMOL/L的Tris-Hcl緩沖液,PH為6.8~7.5,上樣量為0.4-2倍柱床體積,離子交換柱用弱堿陰離子交換樹(shù)脂;第二次溶解和洗滌仍用Tris-Hcl緩沖液,凝膠層析介質(zhì)用聚丙烯酰胺凝膠系列,上樣量為1~2%柱床體積;第三次溶劑和洗滌劑為蒸餾水,凝膠層析介質(zhì)仍為聚丙烯酰胺凝膠系列,上樣量為1-2%柱床體積,經(jīng)三次層析后的溶液,經(jīng)收集、濃縮、凍干即得黃精多糖精制品。上述方法中,所述的低級(jí)醇類為甲醇、乙醇、丙醇;所述的可與水互溶的有機(jī)溶劑為丙酮,二甲亞砜,二甲基甲酰胺及低級(jí)醇類。
用本發(fā)明的方法獲得的黃精多糖粗品為白色粉末狀,含糖量為95%左右,精制品為白色疏松狀固體,含糖量為100%。黃精多糖精制品的比旋度為負(fù)值,紅外顯示果糖特征吸收峰,水解產(chǎn)物簿層分析為含果糖和少量葡萄糖。精制品HPLC分析和凝膠電泳顯示為單一組份,分子量為4000左右。
藥理試驗(yàn)表明黃精多糖具有體外抗單皰病毒(HSV)I型和II型的作用。動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)表明,0.2%的黃精多糖滴眼液治療家兔眼實(shí)驗(yàn)性單皰病毒角膜炎,效果優(yōu)于對(duì)照藥物0.1%無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷眼液,臨床治療單皰病毒性角膜炎104例112眼,結(jié)果表明0.2%黃精多糖滴眼液治療效果優(yōu)于0.1%無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷眼液。對(duì)其急毒、長(zhǎng)毒及一般藥理試驗(yàn)證明,本發(fā)明所制備的黃精多糖制品是安全,有效的。
實(shí)施例1黃精多糖粗品的制備75kg黃精生藥,經(jīng)洗凈、蒸、切片、烘干、粉碎后得12.9kg粉料,此步收率為17.2%。
取粉料200g加入1200ml 85%乙醇,回流后200目尼龍布過(guò)濾。固形物中加45%乙醇,浸提、過(guò)濾得1.6L,清液中加3.2L乙醇后有大量白色沉淀產(chǎn)生,減壓抽濾后,60℃通風(fēng)干燥磨碎得白色粉狀固體30.58g。從粉料到得粗黃精多糖,收率為15.3%,化學(xué)成份分析,含糖為94.8%,蛋白0.45%,水份5.42%。
實(shí)施例2黃精多糖的精制將40g粗多糖溶于PH7.2,20mMOL/LTris-HCL緩沖液500ml中作為上柱樣品。離子交換柱規(guī)格為2.6×30cm,介質(zhì)為CGB685樹(shù)脂,預(yù)先用Tris緩沖劑平衡,柱體積為80ml。每次上樣品40ml左右,UV206nm監(jiān)測(cè),Tris緩沖劑洗脫,收集洗脫第一峰,合并多次收集組份減壓濃縮至8.4%,作為凝膠層析樣品,凝膠層析柱為2.6×160cm,介質(zhì)為Bio-Gel P6.柱體積800ml(先用Tris緩沖劑平衡),每次上樣12-15ml(Tris緩沖液洗脫)收集主要糖峰,合并多次收集組份,減壓濃縮至8%濃度,作第二次凝膠層析樣品。同上P6層析柱預(yù)先用蒸餾水平衡,每次上樣10ml左右(蒸餾水洗脫),收集糖峰。合并多次收集液減壓濃縮至10%濃度,冷凍干燥成白色疏松狀固體9.0g。從粗黃精多糖到精黃精多糖收率為22.5%。紫外分光光度計(jì)檢測(cè)精制多糖280nm無(wú)吸收,即不含蛋白。用酚-硫酸法測(cè)定其含糖量為100%。
權(quán)利要求
一、從中藥黃精中提取黃精多糖的方法,其特征是先用通風(fēng)干燥將生黃精制成黃精粉,再將黃精粉以低級(jí)醇為溶劑進(jìn)行二次抽提,濾液濃縮、有機(jī)溶劑沉淀,干燥,得粗黃精多糖。將粗黃精多糖溶于20mMOL/L Tris-Hcl緩沖液上柱層析二次,再用蒸餾水進(jìn)行第三次上柱層析、濃縮、冷凍干燥得黃精多糖精制品。
二、根據(jù)權(quán)利要求1所述的從黃精中提取黃精多糖的方法,其特征是在提取黃精多糖粗品過(guò)程中,所使用的低級(jí)醇的濃度第一次為80-95%,第二次為40-60%,在第一次抽提時(shí),低級(jí)醇與黃精粉的浸泡比為3~5∶1;第二次抽提時(shí),低級(jí)醇與黃精粉固形物的體積比為7-15∶1;有機(jī)溶劑與樣品液的體積比為2-4∶1。
三、根據(jù)權(quán)利要求2所述的從黃精中提取黃精多糖的方法,其特征是所述的低級(jí)醇為甲醇、乙醇、丙醇,所述的可與水互溶的有機(jī)溶劑為丙酮,二甲亞砜、二甲基酰胺及低級(jí)醇類。
四、根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的從黃精中提取黃精多糖的方法,其特征是精制黃精多糖的過(guò)程中,第一次抽提上柱的過(guò)濾介質(zhì)為弱堿陰離子交換樹(shù)脂,上樣量為0.4~2倍柱床體積,第二次、第三次抽提上柱的過(guò)濾介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠系列,上樣量均為1-2%柱床體積。
全文摘要
本發(fā)明是從中藥黃精中提取黃精多糖的方法,該產(chǎn)品不含蛋白質(zhì),含糖量達(dá)100%,比旋光度為負(fù)值,水解產(chǎn)物主要為果糖,少量為葡萄糖,HPLC和凝膠電泳顯示單一組分,分子量為4000左右。藥理試驗(yàn)證明,黃精多糖制品對(duì)單皰病毒(HSV)Ⅰ型Ⅱ型有較高的活性,急毒、長(zhǎng)毒及一般藥理都安全有效。臨床試驗(yàn)0.2%的黃精滴眼液治療角膜炎比0.1%的無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷眼效果好。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1178799SQ9611773
公開(kāi)日1998年4月15日 申請(qǐng)日期1996年10月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月8日
發(fā)明者蒙義文 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所
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