專利名稱：用水蛭素和乙酰水楊酸治療未溶栓的急性心肌梗塞病人的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療劑和藥物的聯(lián)合使用，它是利用血小板滅活藥物乙酰水楊酸和直接的凝血酶抑制劑水蛭素來(lái)治療未溶栓的急性心肌梗塞病人。
1.急性血管性疾病和血凝塊的形成急性血管性疾病，例如心肌梗塞，中風(fēng)，肺栓塞，深部靜脈血栓形成，外周動(dòng)脈栓塞及其它血液系統(tǒng)栓塞對(duì)健康構(gòu)成嚴(yán)重的危險(xiǎn)。尤其是急性心肌梗塞(AMI)的死亡率約為35％，其中半數(shù)死亡的病人在到達(dá)醫(yī)院之前發(fā)生死亡，另外的15％-20％的幸存者死于心肌梗塞后的最初幾年(Pasternak，R.C.，et al.，Chapter 190 inHarrison’s Principles of Internal Medicine，11th ed.，Braunwald etal.，Eds.，McGraw-Hill Book Co，New York(1987)，Pages 982-993)。血凝塊引起的部分或全部血管栓塞引起或加重急性血管性疾病，其中血凝塊通常是由纖維蛋白和/或聚集的血小板組成的。
在正常止血中血小板發(fā)揮重要的作用。它們不但有明顯的止血功能，而且有促進(jìn)凝血的功能。在受到外傷的最初幾秒內(nèi)，當(dāng)血小板粘附于損害邊緣時(shí)止血即開(kāi)始了。血小板最初的粘附可以由暴露于血管壁外傷部位的膠原蛋白或新產(chǎn)生的凝血酶來(lái)介導(dǎo)。一旦與膠原蛋白或凝血酶接觸，血小板經(jīng)過(guò)激活(釋放反應(yīng))過(guò)程釋放各種化學(xué)物質(zhì)，包括ADP和血栓素A2。釋放出的ADP和血栓素A2引起流出血液中的其它血小板聚集到那些已經(jīng)粘附在血管壁上的血小板上。新粘附的血小板也要進(jìn)行釋放反應(yīng)過(guò)程并且該過(guò)程連續(xù)進(jìn)行直到形成止血的血小板栓子為止。除了釋放ADP和血栓素A2之外，血小板還暴露出血小板因子3，它能促進(jìn)血凝塊連鎖反應(yīng)，最后導(dǎo)致產(chǎn)生凝血酶和在受傷部位纖維蛋白沉積。凝血酶也結(jié)合到血小板膜的受體上并進(jìn)一步引起血小板聚集和釋放。最終的結(jié)果是形成一個(gè)包含聚集的血小板和聚合纖維蛋白的血凝塊復(fù)合物(Handin，R.I.，Chapter 154 in Harrison’s Principles of Internal Medicine，11thed.，Braunwald et al.，Eds.，McGraw-Hill Book Co.，New York(1987)，pages 266-272)。
雖然對(duì)于正常止血來(lái)說(shuō)血凝塊形成是必需的，但是現(xiàn)在認(rèn)為血小板聚集和釋放反應(yīng)引起的血凝塊形成也可以引起各種威脅生命的血管性疾病，例如心肌梗塞、中風(fēng)、外周動(dòng)脈栓塞以及其它血液系統(tǒng)栓塞。對(duì)于患有上述疾病的病人來(lái)說(shuō)，血凝塊的形成是件令人不快的事，并且抑制或控制血凝塊形成可以起預(yù)防或治療作用。
2.乙酰水楊酸乙酰水楊酸(ASA)一般被稱為阿司匹林，它常用作止痛藥(如見(jiàn)，The Merek Index，11th Ed.，第16頁(yè)，Budavari et al.，eds.，Merck and Co.，Rahway，NJ(1989))。然而近來(lái)，通過(guò)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林已經(jīng)用于抗凝血治療，盡管ASA治療特定心血管疾病的治療價(jià)值仍然有爭(zhēng)議(Pasternak，R.C.，et al.，Chapter 190 inHarrison’s Principles of Internal Medicine，11th ed.，Braunwald etal.，Eds.，McGraw-Hill Book Co.，New York(1987)，第987頁(yè)，Aldhous，P.，Science 26324(1994))。ASA是通過(guò)已知的方法合成的(例如，德國(guó)專利236,196(1908))。
3.肝素肝素是一個(gè)復(fù)雜的60到100千道爾頓的線性多糖，由于一系列不完全的修飾反應(yīng)，肝素包含各種各樣的寡糖結(jié)構(gòu)。水溶性的肝素可用于預(yù)防從機(jī)體內(nèi)取出的血液在體外凝固，由此提示我們，肝素在體內(nèi)可用于治療靜脈血栓栓塞，其中凝血酶活性對(duì)血栓的形成和擴(kuò)大有影響(Majerus，P.W.，et al.，Chpater 55 in Goodman andGilman′s The pharmacological Basis of Therapentics，8th Ed.，Perga-mon Press，NY(1990))。
肝素是間接的凝血酶抑制劑，它至少增加抗凝血酶III抑制凝血酶速度的一千倍，抗凝血酶III是絲氨酸蛋白酶抑制劑“Serpin”家族的一員(Olson，S.T.，J.Biol Chem.2631698-1708(1988)；Tollefsen，D.M.，pages 257-273 in HeparinChemical and Biologi-cal properties，clinical Applications，Lane，D.A.，et al.，eds.，Ed-ward Arnold pablishers，Ltd.，London(1989))。近來(lái)，越來(lái)越清楚地表明，肝素在體內(nèi)還有其它活性，它包括但不限于(1)提高HCI(肝素輔助因子I)(即絲氨酸蛋白酶抑制劑“Serpin”家族的另一個(gè)成員)抑制凝血酶的速度；(2)促進(jìn)凝血酶和纖維蛋白聚合物的結(jié)合(Derechin，V.M.，et al.，J.Biol.Chem.2655623-5628(1990)；Hogg，P.J.，et al.，J.Biol Chem.265241-247(1990)。
未分級(jí)的(unfractionated)肝素作為輔助的抗血栓形成治療廣泛地用于AMI病人。由于肝素的作用方式，它僅用于預(yù)防凝血酶介導(dǎo)的血小板聚集，然而，甚至在上述的應(yīng)用中，肝素總的功效也是可疑的。此外，用肝素治療，還受幾種因素所限制，它包括但并不限于以下因素首先，肝素產(chǎn)生許多不需要的副作用，包括出血、肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥、肝功能異常、骨質(zhì)疏松癥、高鉀血癥等等(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55 in Goodman and Gilman’s The Pharmaco-logical Basis of Therapeutics，8th Ed.，Pergamon Press，NY(1990))。
第二，許多血液蛋白質(zhì)，包括由激活的血小板分泌的血小板因子4，由激動(dòng)的中性粒細(xì)胞分泌的乳酰肝褐質(zhì)都能滅活肝素。富含組氨酸的糖蛋白和S-蛋白(玻連蛋白)也競(jìng)爭(zhēng)性地抑制抗凝血酶和肝素結(jié)合(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55 in Goodman andGilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，8th Ed.，Perga-mon Press，NY(1990))。由于蛋白結(jié)合程度和肝素滅活程度是可變的，肝素劑量必須針對(duì)每個(gè)病人進(jìn)行個(gè)體化調(diào)整，而且，在治療期間必須密切地監(jiān)測(cè)病人的凝血時(shí)間(即激活部分促凝血酶原激酶時(shí)間(aPTT))(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55 in Goodman andGilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，8th Ed.，Perga-mon Press，NY(1990))。
第三，免疫反應(yīng)限制了肝素在一些病人中的應(yīng)用。大約5％到10％病人用肝素靜脈治療超過(guò)5天便誘導(dǎo)產(chǎn)生了抗體。大約0.2到0.5％病人用未分級(jí)的肝素治療后，肝素誘導(dǎo)的抗體導(dǎo)致血小板減小癥和嚴(yán)重的血栓栓塞并發(fā)癥。對(duì)于患有肝素誘導(dǎo)的血小板減小癥的患者，免疫介導(dǎo)的血小板減少癥可能產(chǎn)生可怕的血栓形成后果，因?yàn)楦嗡卮_實(shí)加速血小板聚集，但結(jié)果常常是致命的。
因此，在本發(fā)明之前就存在這樣一個(gè)迫切的需要，即利用凝血酶抑制劑輔助抗血栓形成治療AMI而不存在肝素上述不需要的特性。
4.水蛭素及其變異體水蛭素是一族關(guān)聯(lián)多肽，每條肽鏈長(zhǎng)約65個(gè)氨基酸，最初的水蛭素是從水蛭Hirudo medicinalis中分離得到的(Markwardt，F(xiàn).，Methools Enzymol.19924-932(1970))。至少兩種不同形式的同種(cisospecific)水蛭素HV-1和HV-2的順序已經(jīng)確定，且已證實(shí)它們?cè)诎被犴樞蛏嫌休p微差別(Harvey，R.P.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)831084-1088(1986))。HV-1和HV-2都是含有65個(gè)氨基酸的單鏈多肽蛋白，其中氨基酸的氨基端主要含疏水性氨基酸，并且典型地羧基端含極性氨基酸。天然存在形式的水蛭素的序列分析表明大約80％是同源的，六個(gè)半胱氨酸殘基通過(guò)三個(gè)二硫鍵連接，Cys6-Cys14，Cys16-Cys28，及Cys22-Cys39(Dodt，J.，et al.，Biol.Chem.Hoppe-Seyler 366379-385(1985)；Mao，S.J.T.，et al.，Anal.Biochem.161514-518(1987)；Harvey，R.P.，et al.，Proc.Natl.Acod Sci.(USA)831084-1088(1986))。所有水蛭素的特征都是N-末端的區(qū)域(第1-39個(gè)殘基)是通過(guò)三個(gè)二硫鍵來(lái)穩(wěn)定，并且高酸性的C-未端片斷(殘基40-65)的特征是在氨基酸的63位含色氨酸硫酸鹽殘基。水蛭素在溶液中的三維結(jié)構(gòu)已經(jīng)確定。(Clore，G.M.，et al.，EMBOJ.6529-537(1987)；Haruyam et al.，Biochemistry 284301-4312(1989))。
水蛭素是直接的凝血酶抑制劑，它對(duì)人類(lèi)凝血酶有很高親和力(Stone，S.R.，et al.，Biochemistry 254622-4628(1986))，除此之外，對(duì)其它哺乳動(dòng)物的凝血酶也是如此(Dodt，J.，et al.，F(xiàn)EBSLett.2 2987-90(1988))。一分子的水蛭素結(jié)合一分子的凝血酶形成牢固的、非共價(jià)的復(fù)合物，因此，滅活的凝血酶基本上是不可逆的，即纖維蛋白原向纖維蛋白的轉(zhuǎn)化以及凝血酶介導(dǎo)的血小板的激活被阻斷。與肝素相反，水蛭素也使結(jié)合在血凝塊上的凝血酶滅活(Weitz et al.，J.Clin.Invest.86385-391(1990))。對(duì)凝血酶的滅活來(lái)說(shuō)，不需要抗凝血酶III或任何其它輔助因子。水蛭素不被血小板因子4所滅活，而且不誘導(dǎo)產(chǎn)生血小板減小癥或其它嚴(yán)重的血栓栓塞并發(fā)癥(Markwardt，F(xiàn).，et al.，Thromb.Haemostasis 52160-163(1984)；Talbot，M.，Semin.Thromb.Hemost.15293-301(1989)；Prager，N.A.，et al；J.Am.Coll.Cardiol.22296-301(1993))。動(dòng)物研究表明，水蛭素是低素性的，很少或幾乎沒(méi)有抗原性且很快從循環(huán)中清除(Markwardt，F(xiàn).，et al.，Thromb.Haemostasis 47226-229(1982)；Heras，M.，et al；Circalation 79657-665(1989))。
和肝素相比，水蛭素的血漿水平更加穩(wěn)定并且可再現(xiàn)，這是因?yàn)樗牡鞍捉Y(jié)合是很低的；因此，和肝素不同，用水蛭素治療個(gè)體差異很小(Badimon，L.，et al.，Trends Carcliovasc Med.1261-267(1991))。在一些溶栓AMI病人的試驗(yàn)性研究中，用和ASA相結(jié)合的重組水蛭素治療已經(jīng)顯示了可喜的結(jié)果(Neuhaus et al.，J.Am.Coll.Cardio 21418A(1993)；Von Essen et al.，Ann.Hema-tol.68(Suppl.II)A43(1994)；Cannon et al.，J.Am.Coll.Car-dio 23993-1003(1994))。也考查了用和ASA相聯(lián)合的水蛭素重組體治療不穩(wěn)定型心絞痛患者(Topol，E.J.，et al.，Circulation 891557-1566(1994))。
各種天然形式的水蛭素及其許多變異體(a.k.a.“Hirulogs”)的制備方法和生物、生化評(píng)估已被描述過(guò)。人們嘗試通過(guò)DNA重組體工藝產(chǎn)生多肽來(lái)努力提供更多的水蛭素。天然水蛭素O-硫酸化色氨酸殘基存在及微生物不能進(jìn)行相似的蛋白修飾，使得用重組體產(chǎn)生生物活性的水蛭素的希望停留在理論上。然而脫硫的水蛭素和它們的硫酸化的重組體幾乎有同樣的活性(美國(guó)專利4,654,302(1987)和4,801,576(1989))，而且重組體(即脫硫的)水蛭素已經(jīng)在希桿菌屬大腸桿菌中(歐洲專利申請(qǐng)158,564(1985)，168,342(1986)，171,024(1986)，448,093(1991)和506,883(1994)和酵母(歐洲專利申請(qǐng)200,655(1986)和252,854(1988))中產(chǎn)生。此外，在本領(lǐng)域中，體外對(duì)水蛭素重組體進(jìn)行O-硫酸化或類(lèi)似的修飾的方法都是已知的。(美國(guó)專利225,633(1987)，4,745,177(1988)，和5,256,559(1993))。
已經(jīng)努力著手鑒別各種水蛭素變異體，包括能有效地抑制血凝的水蛭素肽段。例如，水蛭素-PA和它的衍生物和水蛭素的結(jié)構(gòu)非常相似；然而，在蛋白質(zhì)鏈上的幾個(gè)重要的位置上，水蛭素-PA和它的衍生物同水蛭素的順序有特征上的不同。在水蛭素-PA上第64位上的色氨酸的酚羥基上的強(qiáng)酸性硫酸的單酯(在水蛭素是63位)是很明顯的例子(美國(guó)專利4,767,742(1988))。在本領(lǐng)域中，已經(jīng)知道了具有抗凝和血小板抑制效果的寡肽和水蛭素衍生的模仿肽以及水蛭素的變異形式(美國(guó)專利5,256,559(1993)，4,654,302(1987)，和4,668,662(1987)；歐洲專利申請(qǐng)575,792(1994)；國(guó)際專利申請(qǐng)WO 86/03517，WO 92/08736(1992)，和WO 94/080034(1994))。此外，在本領(lǐng)域中，制備可溶性的、生物相容性的含水蛭素組合物的方法是已知的(美國(guó)專利5112,615(1992))。
參考文獻(xiàn)說(shuō)明上文和下文所引用的所有公開(kāi)文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容均引入本文供參考。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對(duì)未經(jīng)過(guò)溶栓劑治療的病人聯(lián)合應(yīng)用水蛭素和ASA，它可抑制和/或預(yù)防所治療病人心肌或心血管疾病的發(fā)生。心肌或心血管疾病包括但并不限于不同程度的心肌梗塞、中風(fēng)、冠狀動(dòng)脈及心血管死亡。尤其是我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了聯(lián)合給予病人水蛭素和ASA能有效地預(yù)防急性心肌梗塞(AMI)的再發(fā)生。
本發(fā)明也涉及不含任何溶栓劑的而含有水蛭素和ASA協(xié)同物的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物在本發(fā)明的治療和預(yù)防方法上是非常有用的。
本發(fā)明的優(yōu)選方法包括聯(lián)合給予病人ASA和水蛭素以便抑制和/或預(yù)防心肌或心血管疾病的發(fā)生，其中這些病人未經(jīng)過(guò)任何溶栓劑處理。“心肌或心血管疾病”一詞包括但并不限于各種嚴(yán)重程度不同的心肌梗塞、中風(fēng)、冠狀動(dòng)脈和心血管死亡?！耙种坪?或預(yù)防”一詞指預(yù)防、改善或二者兼有的情況。因此，本發(fā)明包括治療和預(yù)防的用藥方式。
本發(fā)明也包括含有ASA和水蛭素以及藥用可接受的載體的藥物組合物。由于本發(fā)明的組合物是用于治療未經(jīng)過(guò)任何溶栓劑治療的病人，所以本發(fā)明組合物將這些溶栓劑排除在外?！叭芩▌币辉~包括鏈激酶、尿激酶、組織纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA或是經(jīng)過(guò)DNA重組技術(shù)產(chǎn)生的rt-PA)，茴香?；难w維蛋白溶酶原鏈激酶激活物復(fù)合物(APSAC)等等(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55in Goodman and Gilman’s The pharmacological Basis of Therapeutics，8th Ed.，pergamon Press，NY(1990))。
“ASA”一詞是指也被稱之為阿司匹林，2-(乙酰氧)苯甲酸-2-羧基苯基酯，2-羥基苯甲酸乙酸酯-2-羧基苯基酯，水楊基乙酸和乙酸displasol(Displosal)酯的乙酰水楊酸，它還包括具有ASA生物活性的衍生物。
ASA的劑量依據(jù)本發(fā)明的不同實(shí)施方案、以及病人的年齡、體形、病人的病情而變。因而，一種實(shí)施方案是在整個(gè)治療期間ASA的劑量保持約50-500mg/天，尤其是80-300mg/天，最好是80-100mg/天。另一種實(shí)施方案是AMI后最初1-5天ASA劑量約為160-325mg/天，以后保持每天80-160mg。在所有實(shí)施方案中，ASA最優(yōu)選方法是口服給藥，用藥方式最好是一旦確診為AMI便立即服用，連續(xù)服用3-6個(gè)月。
水蛭素系指從其天然物中分離得到的水蛭素；重組體水蛭素，即通過(guò)分離編碼的水蛭素蛋白基因并將基因?qū)氲竭m當(dāng)?shù)漠a(chǎn)生水蛭素的媒介物/宿主系統(tǒng)中來(lái)生產(chǎn)；由具有水蛭素抗凝活性的水蛭素衍生得到的合成的寡肽鏈和模擬肽。本領(lǐng)域中有許多已知的測(cè)定特定水蛭素抗凝活性的體內(nèi)體體外方法。例如體外實(shí)驗(yàn)包括，(1)制定凝血酶誘導(dǎo)的或者是水蛭素變異株引起的血小板聚集的抑制率(通常是測(cè)定激活部分凝血酶原時(shí)間或aPTT)，(2)測(cè)定凝血酶誘導(dǎo)的5-羥色胺的釋放和/或血栓素A2的產(chǎn)生，和/或(3)測(cè)定諸如chromozym TH的染色體基因底物上的凝血酶的酶活性的抑制率(美國(guó)專利5,256,559(1993)，5,246,715(1993)，5,242,810(1993)，5,227,469(1993)，4,832,849(1989)和4,801,576(1989))?！八嗡亍卑ǖ幌抻谒嗡豀V1，脫硫酸(desulfato)水蛭素，(Ile12)脫硫酸水蛭素HV1，(Gly1)脫硫酸水蛭素HV1，(Glr57，58，61，62)脫硫酸水蛭素HV1，(Pro66)-脫硫酸水蛭素HV1，(Gln27，Arg47)-脫硫酸水蛭素HV1，(Met0，Gln27，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(Gln27，Gln36，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(des-Val1，Thr2)脫硫酸水蛭素HV1，(Leu1，Thr2)-脫硫羧水蛭素HV1，水蛭素HV2，(LYS47)-水蛭素HV2，及水蛭素PA。
水蛭素的劑量，及它的給藥方法，根據(jù)本發(fā)明的不同實(shí)施方案以及病人的年齡、體形、及病人病情而變化。因而，一種實(shí)施方案是，在治療期間水蛭素用量不變，約0.05-0.4mg/kg體重/天，優(yōu)選0.1-0.15mg/kg體重/天且靜脈給藥。另一相關(guān)實(shí)施方案是治療期間水蛭素劑量不變，為0.25-1.0mg/kg體重/12小時(shí)，優(yōu)選是約0.5mg/kg體重/12小時(shí)，且皮下給藥。另一實(shí)施方案是，水蛭素的初始劑量是0.2-0.4mg/kg體重，靜脈藥丸給藥，接下來(lái)以0.05-0.2mg/kg體重/天劑量輸注。綜合所有實(shí)施方案，水蛭素優(yōu)選口服給藥，在用藥方式上，一旦確診為AMI即開(kāi)始服用，維持3-6個(gè)月。
“未經(jīng)過(guò)溶栓治療的病人”是指那些患有AMI，但由于一種或幾種醫(yī)療禁忌癥或其它原因而導(dǎo)致不能用溶栓方法治療的病人。溶栓療法的臨床禁忌證包括但不限于以下情形，(1)外科手術(shù)10天之內(nèi)(例如，器官活組檢查、非壓力血管穿刺，嚴(yán)重的外傷或心肺復(fù)蘇術(shù))，(2)3個(gè)月之內(nèi)發(fā)生過(guò)嚴(yán)重胃腸出血，(3)有高血壓史，(4)有出血活性或出血疾病者，(5)曾有過(guò)腦血管意外或自發(fā)顱內(nèi)過(guò)程(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55 in Goodman and Gilman’s ThePharmacological Basis of Therapentics，8th Ed.，Pergamon Press，NY(1990))。另外，病人可能因?yàn)樽诮袒蚱渌鼈€(gè)人原因未從事溶栓治療?！叭芩ㄖ委煛笔侵敢蚱湫枰o病人服用一種或幾種血栓溶解劑。溶栓劑包括但不限于鏈激酶、尿激酶、組織纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA，或DNA重組技術(shù)產(chǎn)生的rt-PA)，茴香?；难w維蛋白溶酶原-鏈激酶激活劑復(fù)合物(APSAC)，等等(Majerus，P.W.，et al.，Chapter 55 in Good man and Gilman’s The Pharmacologi-col Basis of Therapelltics，8th Ed.，Pergamon Press，NY(1990))。乙酰水楊酸在急性心肌梗塞病人中的應(yīng)用大量的雙盲、隨機(jī)、安慰劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明，應(yīng)用乙酰水楊酸(ASA)減少了急性心肌梗塞(AMI)病人的死亡率、梗塞的再發(fā)生、及中風(fēng)。例如在第二次國(guó)際梗塞幸存者研究(ISIS-2)中，17187例AMI病人在癥狀初始的24小時(shí)之內(nèi)，每天用162.5mg ASA治療35天的死亡率減少23％(ISIS-2 Collaborative Group，Lancet ii349-360(1988))。另外，未致命的梗塞復(fù)發(fā)減少了49％，未致命的中風(fēng)減少46％。嚴(yán)重的出血沒(méi)有增加(定義為需要輸液的出血)(即ASA為31％而安慰劑為33％)，只有不嚴(yán)重的出血有少量增加(0.6％)(ISIS-2 Collaborative Group，Lancet ii 349-360(1988))。觀察了ASA在治療經(jīng)過(guò)溶栓的及未接受溶栓的AMI病人中的有益效果。肝素和ASA用于治療AMI病人盡管事實(shí)上肝素廣泛用于AMI，但是它在接受適量的ASA治療的病人中的純好處的證據(jù)還是很少的。在ISIS-2實(shí)驗(yàn)中，血栓溶解劑(鏈激酶單獨(dú)或與ASA聯(lián)合應(yīng)用)和單獨(dú)應(yīng)用ASA的作用在2×2階乘實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中與安慰劑進(jìn)行了比較。此實(shí)驗(yàn)提供了用鏈激酶溶栓治療及用ASA抗凝治療的良好效果的確切證據(jù)(ISIS-2 Col-laborative Group，Lancet ii349-360(1988))。此外，亞群分析中，對(duì)除ASA外也接受肝素的病人和只用ASA治療的病人做了探索性比較。不能證明因加用肝素而增加臨床益處。
其它研究也表明，肝素和ASA聯(lián)合應(yīng)用有可能產(chǎn)生負(fù)性的結(jié)果。在ISIS-3(ISIS-3 Collaborative Study Group，Lancet 339753-770(1992))，41299例病人接受ASA、血栓溶解藥物(即鏈激酶、重組體組織纖維蛋白溶酶原激活劑(rt-PA)，或茴香酰血纖維蛋白溶酶原鏈激酶激活劑復(fù)合物(ApSAC)和(1)隨機(jī)抽樣后4小時(shí)皮下給予肝素，或者(2)不用肝素的治療。ASA的劑量是162.5mg/天。用肝素治療組35天死亡率(10.3％)和不用肝素治療組的死亡率(10.6％)相似。但是用肝素組大腦出血可能性或者說(shuō)大腦出血發(fā)病率明顯增高。GISSI-2(Groppo Italiano perlo Studio della Sopraviven-za Nell’Infarto Micardico，Lancet 8365-71(1990))研究顯示了相似的結(jié)果。總的說(shuō)來(lái)，就死亡率而言沒(méi)有明顯的益處，但腦出血的危險(xiǎn)卻增加2‰。
全球應(yīng)用鏈激酶和組織纖維蛋白溶酶原激活劑來(lái)治療閉合動(dòng)脈(GUSTO-1)實(shí)驗(yàn)(The GUSTO Investigators，N.Engl.J.Med.329673-682(1993))比較了不同的血栓溶解劑(即鏈激酶和rt-PA)和在接受鏈激酶的病人中用肝素立即靜脈或延遲皮下輔助治療的差別。所有病人全都接受了足夠量的ASA。當(dāng)對(duì)鏈激酶進(jìn)行輔助治療時(shí)兩種給藥方式(即，靜脈(I.V.)和皮下(S.C.))沒(méi)有效果上的差異。靜脈給藥組(I.V.)30天死亡率(7.4％)類(lèi)似于皮下治療組(S.C.)死亡率(7.2％)。此外，沒(méi)有跡象表明靜脈用肝素能減少梗塞復(fù)發(fā)、中風(fēng)及出血。
總的說(shuō)來(lái)，就接受ASA治療的AMI病人用肝素后的臨床好處而言是不確定的(Ridker et al.，Lancet 3411574-1577(1993)；Fibrinolytic Therapies Trialists Collaborative Group，Lancet 343311-322(1994))，無(wú)論病人是否接受溶栓治療，結(jié)果都是如此。水蛭素在未溶栓的AMI病人中的應(yīng)用本發(fā)明涉及在未經(jīng)溶栓的AMI病人中聯(lián)合使用水蛭素和ASA。通常在美國(guó)超過(guò)50％AMI病人，在歐洲變化比例的AMI病人(在英國(guó)30％，在法國(guó)60-70％)未經(jīng)過(guò)溶栓治療。原因可能是例如，癥狀開(kāi)始后長(zhǎng)時(shí)間延緩了治療、非特征性的ECG，老齡、未控制的高血壓，新近的中風(fēng)、胃十二指腸潰瘍。已經(jīng)顯示出，這些病人的死亡率，梗塞復(fù)發(fā)、其它臨床并發(fā)癥比經(jīng)過(guò)血栓溶解治療的病人高。
目前，確定了ASA使病人血小板部分失活而在臨床上是有益的。期望另外使用滅活凝血酶的水蛭素能導(dǎo)致另外的有益的臨床療效，即死亡率，梗塞復(fù)發(fā)及其它臨床并發(fā)癥的減少。
從一些實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，不同作用方式的抗血栓形成藥重組體水蛭素和ASA的聯(lián)合應(yīng)用似乎優(yōu)于肝素和ASA的聯(lián)合應(yīng)用或者ASA的單獨(dú)應(yīng)用。近來(lái)，已經(jīng)證實(shí)除用rt-PA或鏈激酶外，用重組體水蛭素輔助抗栓治療，可以使冠狀動(dòng)脈梗塞較早，完全、持久地開(kāi)通。另一項(xiàng)臨床研究證實(shí)，冠狀動(dòng)脈梗塞較早及完全地開(kāi)通減少了死亡率(Neuhans et al.，J.Am.Coll.Cardiol.21418A(1993)；von Essen et al.，Ann.Hematol.68(Suppl.II)A43(1994)；Can-non et al.，J.Am.Coll.Cardiol.23993-1003(1994))。另外也證實(shí)開(kāi)通血管對(duì)于未經(jīng)溶栓治療的AMI病人也非常重要(GUSTO An-giographic Investigators，N.Engl.J.Med.3291615-1622(1993)；Vogt et al.，J.Am.Coll.Cardiol.211391-1395(1993))。
目前，對(duì)于不能經(jīng)過(guò)溶栓治療的AMI病人改進(jìn)治療的需要還沒(méi)有在臨床前的模型中進(jìn)行過(guò)具體論述，而它僅著眼于再梗塞。臨床研究還沒(méi)有論述如何對(duì)伴隨Q-波的未經(jīng)溶栓的MI病人改進(jìn)治療的問(wèn)題。正在進(jìn)行中的GUSTO-2b研究評(píng)價(jià)了對(duì)伴有急性冠脈綜合征的非-Q-波的心肌梗塞的治療。此項(xiàng)研究沒(méi)有確切地回答未經(jīng)血栓溶解治療的AMI病人最好治療的問(wèn)題，它只是對(duì)這些病人中的一個(gè)亞群做了評(píng)價(jià)。
從以上研究我們推論出將水蛭素和ASA聯(lián)合用于治療不適合溶栓的AMI病人可以提高冠脈血管開(kāi)通率。另外，應(yīng)用水蛭素將提高內(nèi)源性血栓溶解系統(tǒng)的自發(fā)反復(fù)灌注。這種創(chuàng)新的和原始的、血小板抑制劑和直接的凝血酶抑制劑的結(jié)合提高了未經(jīng)溶栓的AMI病人的臨床療效。
權(quán)利要求
1.一種治療或預(yù)防病人急性心肌梗塞的方法，該方法包括給予乙酰水楊酸和水蛭素。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的乙酰水楊酸和水蛭素是獨(dú)立的單位劑量形式。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的乙酰水楊酸和水蛭素是一起使用的單位劑量形式。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)病人是未經(jīng)溶栓劑治療的。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)水蛭素選自(a)具有下式的水蛭素變異體HV1Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser GlyGln Asn Leu Cys Leu Cys Glu Gly Ser AsnVal Cys Gly Gln Gly Asn Lys Cys Ile LeuGly Ser Asp Gly Glu Lys Asn Gln Cys ValThr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro Gln SerHis Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro 其中“W”代表色氨酸的酚羥基(脫硫酸水蛭素HV1)或者是-O-SO3H基團(tuán)(水蛭素HV1)，(b)具有下式的水蛭素變異體HV2Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu CysLeu Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys CysIle Leu Gly Ser Asn Gly Lys Gly Asn Gln Cys Val Thr GlyGlu Gly Thr Pro Asn Pro Glu Ser His Asn Asn Gly Asp PheGlu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gln和(c)具有下式的水蛭素變異體PAIle Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gln Asn Leu CysLeu Cys Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys CysIle Leu Gly Ser Gln Gly Lys Asp Asn Gln Cys Val Thr GlyGlu Gly Thr Pro Lys Pro Gln Ser His Asn Gln Gly Asp PheGlu Pro Ile Pro Glu Asp Ala Tyr Asp Glu
6.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的水蛭素選自(Ile1，2)脫硫酸水蛭素HV1，(Gly1)-脫硫酸水蛭素HV1，(Gln57，58，61，62)-脫硫酸水蛭素HV1，(Pro66)-脫硫酸水蛭素HV1，(Gln27，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(Met0，Gln27，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，Gln27，Gln36，Arg47脫硫酸水蛭素HV1，(des-Val1，Thr2)脫硫酸水蛭素HV1和(Lys47)水蛭素HV2。
7.權(quán)利要求1的方法，其中被治療的是人或動(dòng)物。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的乙酰水楊酸被口服給藥。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的水蛭素被靜脈或皮下給藥。
10.含有乙酰水楊酸和水蛭素的藥物組合物。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，它另外還含有一種或多種可藥用載體。
12.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物不含有任何血栓溶解劑。
13.權(quán)利要求10的組合物，其中所說(shuō)的水蛭素選自水蛭素HV1，脫硫酸水蛭素，(Ile1，2)-脫硫酸水蛭素HV1，(Gly1)脫硫酸水蛭素HV1，(Gln57，58，61，62)脫硫酸水蛭素HV1，(Pro66)脫硫酸水蛭素HV1，(Gln27，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(Met0，Gln27，Gln36，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(Gln27，Gln36，Arg47)脫硫酸水蛭素HV1，(des-Val1，Thr2)-脫硫酸水蛭素HV1，水蛭素HV2，(Lys47)水蛭素HV2及水蛭素PA。
全文摘要
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將水蛭素和乙酰水楊酸(ASA)組合物給予未經(jīng)任何溶栓劑治療的病人，抑制或預(yù)防心肌或心血管疾病。本發(fā)明進(jìn)一步涉及到血小板失活的藥物乙酰水楊酸和直接的凝血酶抑制劑水蛭素用于治療未經(jīng)溶栓治療的急性心肌梗塞病人的藥物組合物。一種含有水蛭素和ASA協(xié)同物而不含任何溶栓劑的藥物組合物在本發(fā)明的治療和預(yù)防方法中是特別有用的。
文檔編號(hào)A61K31/60GK1141809SQ9610199
公開(kāi)日1997年2月5日 申請(qǐng)日期1996年3月14日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月15日
發(fā)明者H·海因里希斯, C·H·亨尼肯斯 申請(qǐng)人:柏林魏克股份公司, 布里格姆婦女醫(yī)院