專(zhuān)利名稱(chēng)：一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可減少在手術(shù)和內(nèi)科治療中的大量出血，并能夠加速內(nèi)科治療和手術(shù)痊愈速度的蛋白質(zhì)粒子，尤指一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
眾所周知，人體血液充足是健康之本，許多手術(shù)及內(nèi)科治療、例如癌癥手術(shù)，均會(huì)引起失血。然而輸血又是一個(gè)很復(fù)雜的過(guò)程，可能會(huì)引起艾滋病和引入肝炎病毒；另外，尤其對(duì)于血小板缺乏的病人，失血過(guò)多則更是危險(xiǎn)甚大。因而，在臨床上急需一種對(duì)凝血有幫助的物質(zhì)來(lái)解決上述這些問(wèn)題。
由于此類(lèi)物質(zhì)其功效如同血小板，可減少開(kāi)刀和手術(shù)病人及血小板缺乏的病人的失血量，因而在將其注射入人體后，對(duì)其性質(zhì)要一定的要求。其一人體微血管的直徑為7微米，那么此類(lèi)物質(zhì)微粒直徑必須小于7微米；其二此物質(zhì)微粒本身不應(yīng)在血流中凝聚，但能在傷口處凝聚，此物質(zhì)微粒不會(huì)引起血細(xì)胞在血管中凝聚，但會(huì)參與或促進(jìn)血細(xì)胞在傷口處凝聚。
此類(lèi)物質(zhì)微粒有助于血液凝聚，那么這些微粒必須具有能夠允許它們參與血液凝固的表面分子，例如纖維蛋白原。
現(xiàn)在技術(shù)中，如K.J.Widder等人在《藥理及化學(xué)治療法的發(fā)展》，Vol.16，213-271中的“抗癌試劑生物物理示蹤中的磁活性微球體及其他載體”一文所涉及的，用蛋白質(zhì)水溶液和油通過(guò)加熱或聚合得到的乳化液合成蛋白質(zhì)微球體。然而由于蛋白質(zhì)在此過(guò)程中極易變質(zhì)而使此微粒其半衰期很短。因而在實(shí)際治療中需要其能夠在血管中保存至少一天以上不會(huì)變質(zhì)的粒子。
Oppenhein等人在美國(guó)專(zhuān)利US4,107,288，“注射組合物中有效的極微粒子及其生產(chǎn)方法”中提出另一種方法，其中通過(guò)使用一種相反的增溶劑來(lái)調(diào)節(jié)去溶劑試劑的濃度而使蛋白質(zhì)溶液達(dá)到一個(gè)去溶劑極限。這種方法存在的問(wèn)題是在反應(yīng)開(kāi)始時(shí)條件極不穩(wěn)定，在反應(yīng)過(guò)程中間伴隨著導(dǎo)致球體生成的大量的聚合，并伴隨超過(guò)血凝程度的聚合現(xiàn)象出現(xiàn)。血凝球體直徑大于7微米，超過(guò)了血管直徑，這就會(huì)造成血管阻塞并引起危險(xiǎn)。因而在實(shí)際治療中需要其不會(huì)凝聚且其直徑比7微米小得多的微粒。
本發(fā)明的目的在于提供一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子及其生產(chǎn)方法和用途，此粒子在懸浮液中不凝聚，其直徑比1微米小，在其表面連有纖維蛋白原時(shí)可起到良好的凝血效果。
本發(fā)明的此種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子是由人體白蛋白經(jīng)以下方式制成1、首先制造蛋白質(zhì)粒子懸浮液，其中a、在滲透壓適當(dāng)?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液。
即刻，出現(xiàn)一混濁的蛋白質(zhì)球體懸浮液，此懸浮液適于靜脈注射并且不會(huì)阻塞血管。
本發(fā)明中，所述的蛋白質(zhì)溶液是人體白蛋白溶液。
本發(fā)明中，所述的表面活性劑是洗滌劑。
本發(fā)明中，所述的表面活性劑可以選自四癸基硫酸鈉(Sodiumtetradecylsulfate)、Tween-80 TritonX-151中的一種本發(fā)明中，所述的交聯(lián)劑分子是包括戊二醛(glutaraldahyde)的共價(jià)小分子。
本發(fā)明中，所述緩沖溶液PH值范圍為4-8。
本發(fā)明中，所述的滲透壓范圍為14-680mOsm。
2、對(duì)上述的人體白蛋白的球體懸浮液再處理成粉末，包括進(jìn)行稀釋、過(guò)濾、滲析、再過(guò)濾、離心分離、電泳分離和色譜柱分離，再通過(guò)真空冷凍干燥及冷凍后的粉末重構(gòu)化。其中在此過(guò)程中需加入緩沖液或改變緩沖液及加入防腐劑等生物相溶體，這些試劑的種類(lèi)和用量是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
這樣，就制成本發(fā)明的適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
本發(fā)明的蛋白質(zhì)粒子其用途在于如果在人體白蛋白球體懸浮液混濁出現(xiàn)后，將表面蛋白質(zhì)加到懸浮液中的球體中，這樣，球體上末反應(yīng)的交聯(lián)部分將通過(guò)共價(jià)健將表面蛋白原連到人體白蛋白球體表面上；其中，本發(fā)明中的表面蛋白可以是纖維蛋白原。那么此蛋白質(zhì)粒子懸浮液組合物適合于靜脈注射，這種組合物其微粒直徑小于7微米，且此微粒本身在血管中不凝聚，但能在傷口處凝聚，此微粒不會(huì)引起血細(xì)胞在血管中凝聚，但會(huì)參與或促進(jìn)血細(xì)胞在傷口處凝聚。
下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，盡管以下實(shí)施例是使用人體白蛋白，但是人體其它蛋白質(zhì)、如免疫蛋白、肌紅蛋白、膠原和明膠同樣也可使用并能夠形成球體。
實(shí)施例1沒(méi)有纖維蛋白原形成微粒的方法將人體白蛋白粉末放入0.9％的氯化鈉溶液中，并加入濃度在0.05mg/ml-15mg/ml的表面活性劑，如四癸基硫酸鈉、tween-80或TritonX-151，形成濃度在5-20％。(重量體積比)的蛋白質(zhì)溶液。然后向含有不同濃度的表面活性劑的含2ml上述蛋白質(zhì)溶液的系列試管中加入2ml以氯化鈉溶液稀釋過(guò)的，其濃度范圍為0.01-3.0％的戊二醛。10分鐘以后，再加入10ml的乙醇(用水稀釋到80％(體積比))，這時(shí)溶液立刻出現(xiàn)混濁。再過(guò)10分鐘，以5倍體積的氯化鈉溶液稀釋來(lái)觀(guān)察此懸浮液是否澄清，結(jié)果為否定的。此后以1000倍的的顯微鏡觀(guān)察此懸浮液，發(fā)現(xiàn)此懸浮液中粒子的直徑小于1微米。
同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，用濃度為1-2.5mg/ml的TritonX-151和濃度為100-200mg/ml的白蛋白制面的合劑效果最好。另外也發(fā)現(xiàn)用濃度為1--12mg/ml的四癸基硫酸鈉制成的合劑其微粒直徑的變異系數(shù)最小。
權(quán)利要求
1.一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子，其中此粒子是按以下方式制備的a、在滲透壓適當(dāng)?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中，加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中，加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液。
2.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的蛋白質(zhì)溶液是人體白蛋白溶液。
3.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的表面活性劑是洗滌劑。
4.按照權(quán)利要求3所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的表面活性劑是選自四癸基硫酸鈉、Triton X-151或Tween 80的中的一種。
5.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的交聯(lián)劑分子是包括戊二醛的共價(jià)小分子。
6.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的緩沖溶液范圍為PH＝4～8。
7.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的滲透范圍為14-680mOsm。
8.按照權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，所述的醇溶液為乙醇溶液。
9.按照權(quán)利求1-8中任意一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，其制備過(guò)程還包括將此蛋白質(zhì)粒子懸浮液制成粉末。
10.按照權(quán)利要求9所述的蛋白質(zhì)粒子的生產(chǎn)方法，其中該方法包括以下步驟及分離、干燥、重構(gòu)過(guò)程。a、在滲透壓適當(dāng)?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；b、向a中所述的蛋白質(zhì)溶液中，加入表面活性劑；c、向b中所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中，加入交聯(lián)劑；d、向c中所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液的懸浮液。
11.按照權(quán)利要求9所述的蛋白質(zhì)粒子，其中，該粒子可用于靜脈注射。
全文摘要
本發(fā)明涉及可減少在手術(shù)和內(nèi)科治療中的大量出血，并能夠加速內(nèi)科治療和手術(shù)痊愈速度的蛋白質(zhì)粒子，尤指一種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。本發(fā)明的此種適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子是由人體白蛋白經(jīng)以下方式制成首先制造蛋白質(zhì)粒子懸浮液，其中在滲透壓適當(dāng)?shù)木彌_液中，溶解蛋白質(zhì)粉末；向所述的蛋白質(zhì)溶液中加入表面活性劑；然后再向所述的蛋白質(zhì)和表面活性劑混合液中加入交聯(lián)劑；最后再向所述的蛋白質(zhì)、表面活性劑和交聯(lián)劑中加入醇溶液，就制成了本發(fā)明的適合靜脈注射的蛋白質(zhì)粒子。
文檔編號(hào)A61P7/08GK1150047SQ9511794
公開(kāi)日1997年5月21日 申請(qǐng)日期1995年11月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月6日
發(fā)明者徐家祥 申請(qǐng)人:徐家祥