專利名稱：免疫強化劑及其生理上可接受的鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類作為免疫強化劑的化合物的用途、含這些化合物的組合物及其制造方法、這些化合物與抗腫瘤藥或抗感染藥的合劑以及這些合劑在治療或預(yù)防與腫瘤或傳染病有關(guān)疾病中的用途。
免疫系統(tǒng)的主要保護功能涉及對病原體(包括病毒、立克次氏體、支原體、細菌、真菌和各種寄生蟲)侵襲的抵抗力。因此，免疫應(yīng)答的改進，尤其是當(dāng)免疫應(yīng)答被抑制時，將增加對上述病原體傳染或侵染的抵抗力。
免疫系統(tǒng)的第二個保護功能是阻止外源組織(無論是天然的還是母嬰相關(guān)的或是如由移植手術(shù)來源的非天然的)的移入。
免疫系統(tǒng)的另一個保護功能，據(jù)認(rèn)為在于對像癌癥中那種惡性細胞發(fā)展的抵抗力，在癌癥中使用免疫強化劑會提高腫瘤抑制作用或抑制其它形式治療后腫瘤的復(fù)發(fā)。
還有一個保護功能涉及通過正性抑制基因機制(positivesuppressormechanisms)維持對自身的無反應(yīng)性。在自身免疫和有關(guān)的疾病中，直接針對自身抗原的或過度的和提高的應(yīng)答的免疫活性是明顯的而且是自身破壞性的。
免疫系統(tǒng)的每種保護功能，均可以單獨用免疫強化劑或者將其與用于改進對侵襲病原體的抵抗力或殺死侵襲病原體的其它藥劑合用的非特異性治療加以改進。此外，與作為疫苗的抗原(如病毒、腫瘤細胞等等)結(jié)合使用的免疫強化劑的使用能夠提高特異性抵抗力。這種用法可以誘發(fā)特異性免疫或耐受性。使用抗原治療變態(tài)反應(yīng)病或自身免疫疾病是后者的實例。免疫強化劑可以是預(yù)防性或治療性的;預(yù)防性免疫強化劑特別用于長期感染的自身免疫中，而且更普遍的是用于癌中。投藥時間和路線是決定應(yīng)答結(jié)果呈陽性或陰性的關(guān)健。增大免疫應(yīng)答的任何藥劑都可以依據(jù)時間和劑量來抑制它;因此，在某些情況下，可以使用免疫強化劑作為免疫抑制劑用在變態(tài)反應(yīng)、自身免疫和移植之中。
“免疫強化劑”指能夠恢復(fù)受抑制的免疫功能和/或提高正常免疫功能的一種藥劑。但是，由于免疫系統(tǒng)的某些因素，免疫強化劑也可以具有免疫抑制作用。
免疫應(yīng)答由其立體有擇受體由被結(jié)合到存在于細胞上的抗原表面上的分化的分子(MHC)上之抗原碎片所觸發(fā)的那些T-淋巴細胞配合。除了T細胞受體和抗原-MHC復(fù)合物之間的特異性互相作用之外，T細胞需要由存在于細胞上的抗原提供的助刺激信號(costimulatorysignals)。存在在細胞上的抗原和T細胞之間的相互作用涉及一些輔助的粘連分子，其中一些與所說的T細胞抗原-MHC互相作用有關(guān)，而另一些與此作用無關(guān)。這些粘連分子中一部分提供助刺激信號。此外，體外研究確定細胞表面配體之間的瞬間共價反應(yīng)在T細胞的抗原-特異性活化作用中是必不可少的(Rhodes，J.(1989)，J.Immunol.，143，1482;Gao，X.M.&Rhodes.J.(1990)，J.Immunol.，144，2883;Rhodes，J.(1990)，J.Immunol.，145，463)。它們采取在APC和T細胞表面上基團之間的羰基-氨基縮合(席夫堿形成)的形式。
WO9203164專利說明書中披露出一種新佐藥NAGO，它以酶催增加形成配體的席夫堿的表現(xiàn)度的方式起作用。DE3508875專利說明書中披露出一種在被皰疹PSR病毒感染的兔體內(nèi)使用的作為免疫強化劑的肉桂醛。EP54924專利說明書中披露出一些本發(fā)明的化合物及其合成長氧離解曲線之“左移”性質(zhì)。上面指出的這些文獻一并作為參考。
免疫強化藥的治療對象包括慢性病毒傳染病如病毒性肝炎和人體免疫缺陷病毒。癌癥也是一個治療對象。累積的證據(jù)表明慢性病毒傳染病和惡性腫瘤以各種方式躲過免疫系統(tǒng)。因此，雖產(chǎn)生對抗異常細胞(無論是被病毒感染的還是惡性的)的細胞毒性的T細胞和抗體，但是免疫系統(tǒng)不能制止此致病過程?？赡艽嬖诘囊环N躲過方式是病毒和腫瘤利用那種維持對自身無應(yīng)答性的機制。在胎兒發(fā)育期間通過在無助刺激信號下綁扎(ligation)T細胞受體(TCR)來消除自身反應(yīng)T細胞。細果，這樣的T細胞經(jīng)歷有規(guī)律的細胞死亡過程。周圍的自身反應(yīng)性T細胞通過在無助刺激下綁扎TCR也維持在非應(yīng)答狀態(tài)下。這叫作無反應(yīng)性。躲過免疫系統(tǒng)的現(xiàn)象可以存在于助刺激信號被破壞的致病過程之中。結(jié)果是對疾病應(yīng)答的T細胞變成無反應(yīng)性的或者經(jīng)歷有規(guī)律的死亡的過程。在愛滋病中有關(guān)后者的證據(jù)日益增加。形成席夫堿的免疫強化劑(Schiffbase-formingimmunopotentiators)應(yīng)能有效的防止此逃逸機制，因為其作用是向T細胞提供助刺激。形成席夫堿免疫強化劑可以按此方式明顯地修正使病毒感染持續(xù)和某些惡性腫瘤發(fā)展的免疫損害。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，參予羰基-氨基縮合反應(yīng)的某些小分子出乎意料地可用作免疫強化劑。
本發(fā)明涉及使用與T細胞表面的羰基或氨基形成席夫堿或腙的化合物或其生理可接受鹽(肉桂醛除外)在制造強化免疫應(yīng)答的藥物上的應(yīng)用。此后，將所說的化合物或其生理上可接受的鹽叫作“本發(fā)明的化合物”。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物或其生理上可接受鹽的用途
式中R是氫，被一個取代的苯基或二個C1-4烷基和一個羥基取代或未取代的甲基;R1是CH2COR2基或其互變異構(gòu)體，其中R2是被基團CO(CH2)xCO2H(X為1-7)基取代或未取代的甲基;或者R1是A-ph基，其中A是0、CH2、CH(CH3)、CO或單鍵，而且ph是任意取代的苯基;或者R連接到R1上形成一個其中一個環(huán)是苯環(huán)的九元或十元任意取代的雙環(huán)。
由式(Ⅱ)所代表的化合物或其生理上可接受的鹽構(gòu)成處于式(Ⅰ)范圍內(nèi)的一小類優(yōu)選化合物
式中A和ph定義如上，而且R3是H、C1-4烷基或CH2(C6H4)R4(R4是羥基)或C1-4烷氧基。
又一小類屬于式(Ⅰ)范圍的更優(yōu)選的化合物是由式(Ⅲ)表示的化合物或其生理上可接受的鹽
式中，R7是基團CH2COR2，而R2定義如上。
還有一小類屬于式(Ⅰ)范圍的更優(yōu)選的化合物的雙環(huán)體系具有式(Ⅳ)結(jié)構(gòu)
式中，R8是羥基或烷氧基;A1是O，CO或CH2;
代表被苯酚基取代或未取代的C2-3亞烷基。
本發(fā)明更具體涉及式(Ⅴ)化合物或其生理上可接受鹽在制造用于強化免疫應(yīng)答的藥物上的用途。
其中Z為0或1，n為0或1，B為氫或C1-4烷基，B1為氫或被任意取代的苯基，B2是氫、甲基或可被可不被基團CO(CH2)xCOOH(其中X為1-7)取代的甲基;或者當(dāng)B1為苯基時B2可以通過一個氧或可含可不含一個氧的烴鏈連接到B1上形成含8-10個原子(其中一個可以是氧，其余是碳)的任意取代的雙環(huán)體系;當(dāng)Z＝0時，B1不能是氫且B2必須是氫。
當(dāng)B1是任意取代的苯基時，優(yōu)選的取代基是在下式(Ⅳ)中規(guī)定的Y1、Y2、Y3、Y4、Y5和Y6。式(Ⅰ)的一組優(yōu)選的化合物是由式(Ⅵ)所代表的那些化合物或其生理可接受的鹽
其中Y1選自氫、羥基、C1-4烷氨基和在烷基部分有1-4個碳原子的鏈烷酰氨基;
Y2、Y3和Y4各自選自氫、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代烷基、羥基和芐氧基，Y5是羥基或基團Q1，其中Q1是
式中Q2和Q3各自選自氫和C1-4烷基;
X選自氰基、羧基或其官能性羧酸衍生物、5-四唑基和烷基部分有1-6個碳原子的烷基磺酰氨基甲?；?而且n為0-6Y6是-(CpC2p)CHO，其中P＝0-5;
當(dāng)p＞1時，基團Y6中的甲?；?-CHO)可以處在任一碳原子上而且亞烷基(CpH2p)可以是直鏈或支鏈;或者Y6是(CH2CO)g-X1或(COCH2)g-X1其中g(shù)為1-3，而且X1是甲氧苯基或C1-4烷基。
構(gòu)成式(Ⅵ)范圍內(nèi)一小類優(yōu)選化合物是這樣一些化合物，其中X選自氰基、5-四唑基、其烷基部分有1-6個碳原子的烷基磺酰氨基甲酰基和基團-COY，式中Y是-OR9，且R9是氫、C1-4烷基或芐基;
或者Y是-NR10R11，這里R10和R11各自為氫或有1-4個碳原子的烷基。
符合式(Ⅵ)其中X為羧酸衍生物的化合物包括藥學(xué)可接受的酯類，其中包括脂族和芳族烴的酯，例如這樣一些烷基和芳烷基酯，例如烷基是有1-12(優(yōu)選1-4)個碳原子(特別是甲基、乙基、異丙基和叔丁基)的烷基以及芳烷基是芐基的酯，以及氨基酸(如L-異戊氨?；騆-異亮氨酰)酯;藥學(xué)可接受的酰胺類，其中包括未取代的酰胺、N-取代的酰胺和N，N-二取代的酰胺(包括環(huán)狀和雜環(huán)酰胺)，其中的一或多個取代基是例如脂烴基，如烷基，尤其是C1-4烷基(如甲基、乙基、異丙基和叔丁基)。
其中Y1是烷氨基的式(Ⅵ)的化合物可以形成酸加成鹽，盡管在用作醫(yī)藥時是受者生理上可接受的，但這樣的鹽中酸的特性不太重要。適用的酸在本領(lǐng)域中是公知的，例如鹽酸和乙酸。
作為式(Ⅴ)范圍內(nèi)可以提及用途的一小類，是其中B1和B2形成這樣一種雙環(huán)體系的化合物及其生理可接受的鹽，所說的雙環(huán)體系選自香豆素、四氫萘酮、氧茚酮或不多于四個取代基取代的萘酮，所說的取代基選自氫、C1-4烷氧基、羥基或苯酚基。
本發(fā)明的化合物，包括表2中命名的化合物和下列化合物5-(2-甲?；?3-羥苯氧基)戊酰胺，N，N-二乙基5-(2-甲?；?3-羥苯氧基)戊酰胺，N-異丙基5-(2-甲?；?3-羥苯氧基)戊酰胺，5-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)戊酸乙酯，5-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)戊腈，(±)-5-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)-2-甲基戊酸及其鹽，5-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)-2，2-二甲基戊酸及其鹽，3-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)甲基苯甲酸甲酯，3-(2-甲?；?3-羥苯氧基)甲基苯甲酸及其鹽，5-(2-甲?；?3-羥苯氧基)戊酸芐酯，
5-[4-(2-甲?；?3-羥苯氧基)-N-丁基]四唑及其鹽，7-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)庚酸及其鹽，5-(2-甲酰基-3-羥基-4-正丙氧苯氧基)戊酸及其鹽，5-(4，6-二氯-2-甲?；?3-羥苯氧基)戊酸及其鹽，5-(2-甲酰基-3-羥苯氧基)-N-甲基磺?；祯０罚?-(2-甲?；?3-羥苯氧基甲基)苯甲酸乙酯，5-(4-氯-2-甲酰基-3-羥苯氧基)戊酸及其鹽，5-(3-乙酰氨基-2-甲?；窖趸?戊酸及其鹽，氨基胍4-(2-甲?；?3-羥苯氧基)丁酸及其鹽，6-(2-甲?；?3-羥苯氧基)己酸及其鹽，4-(3-乙酰氨基-2-甲?；窖趸?苯甲酸乙酯，4-(3-乙酰氨基-2-甲?；窖趸?苯甲酸及其鹽，2-(2-甲?；?3-羥苯氧甲基)苯甲酸及其鹽，5-[4-(2-甲?；?3-羥苯氧甲基)苯基]四唑及其鹽，5-(2-甲?；?3-羥-4-甲氧苯氧基)戊酸及其鹽，3-(2-甲?；?3-羥苯氧基)丙腈。
特別優(yōu)選的化合物是
化學(xué)上叫作4-(2-甲酰基-3-羥基苯氧甲基)苯甲酸(Ⅰa)及其鹽。此式(Ⅰa)化合物已披露在DP00549724B之中。
因此，本發(fā)明的化合物或其生理上可接受的鹽可以用于治療免疫系統(tǒng)存在缺陷和/或宿主免疫防預(yù)機制無效的疾病或者用于把免疫系統(tǒng)的活性提高到正常水平之上。
另一方面，式(Ⅰ)化合物或其生理上可接受的鹽可以用于治療免疫系統(tǒng)中存在缺陷和/或宿主免疫防預(yù)機制無效的疾病或者用于把免疫系統(tǒng)的活性提高到正常水平之上。
本發(fā)明的化合物或其生理上可接受的鹽可以單獨或與其它治療劑(如其它抗病毒劑或與其它抗癌劑)結(jié)合投藥以治療或預(yù)防免疫缺陷的哺乳動物。
免疫應(yīng)答的強化作用，指被壓抑免疫功能的恢復(fù)和/或正常免疫功能的增強。免疫功能，指體液(抗體-介導(dǎo))免疫力、細胞(T細胞-介導(dǎo))免疫力或巨噬細胞和粒細胞介導(dǎo)抵抗力的發(fā)展和表現(xiàn)。
本說明書中所用術(shù)語“免疫缺陷病人”，將用來說明具有缺陷或缺損免疫系統(tǒng)的病人。免疫缺陷的病人，可以借助于T淋巴細胞增殖試驗辨別。使用此試驗時，免疫缺陷病人的特征是T細胞對有絲分裂原或回憶應(yīng)答抗原刺激的應(yīng)答的能力減小。在此試驗中普通使用的有絲分裂原和回憶應(yīng)答抗原分別是植物血凝素(PHA)和破傷風(fēng)類毒素。
Adler等人在＜癌＞(1980)45，2062-2063頁上，借助于使用PHA的T淋巴細胞增殖試驗法評價了乳房癌病人的免疫功能。淋巴細胞對PHA應(yīng)答的定量評估是基于刺激指數(shù)(SI)。在上面提到的文獻中，SI值低于14被視為免疫缺陷。因此本申請中，我們也認(rèn)為對PHA應(yīng)答的SI值低于14的癌癥病人是免疫缺陷病人。
據(jù)認(rèn)為免疫缺陷和免疫抑制存在于許多臨床處境下，此時對淋巴細胞，尤其是對配合免疫應(yīng)答的T細胞的信號傳輸作用中存在損害。T細胞需要兩種信號來引發(fā)有效的免疫應(yīng)答，它們是(ⅰ)抗原特異性T細胞受體的占有，和(ⅱ)通過助刺激受體的刺激。
不存在信號(ⅱ)時，不僅T細胞不應(yīng)答，而且T細胞還可以變成慢性麻痹的或無反應(yīng)性的。持久病毒和細菌感染以及腫瘤形成的疾病，由于以各種方式干擾第二種信號的傳輸而能夠造成T細胞的低反應(yīng)能力，并以這種方式逃過免疫應(yīng)答。式(Ⅰ)化合物似乎通過取代或被償T細胞的缺損的助刺激信號而起作用。
免疫系統(tǒng)可能是缺陷或缺損的情況有多種。因此，例如免疫系統(tǒng)缺陷在不成熟兒或早產(chǎn)兒(新生兒)中很普遍。免疫系統(tǒng)缺陷也可能是由于某些藥物例如可以設(shè)想例如以癌化療的副作用而造成的抑制作用而造成的。免疫系統(tǒng)的一或多個組成部分的病態(tài)增長，例如以某種癌的形式增長，也可以導(dǎo)致免疫缺陷。免疫缺陷還可以因病毒，其中包括人免疫缺陷病毒(HIV)的感染而引起。
“有效量”指將免疫功能恢復(fù)到接近正常水平或者使免疫功能增加到正常水平之上以上以便控制或降低感染所需的本發(fā)明化合物數(shù)量。
本發(fā)明的又一方面提供了一種治療免疫缺陷病人用方法，其中包括給哺乳動物(包括人)使用有效量的本發(fā)明化合物或其生理上可接受的鹽。
按照本發(fā)明的另一方面提供了本發(fā)明化合物或其生理可接受鹽在治療和(或)預(yù)防急性和慢性病毒感染上的用途。
可以使用本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽(優(yōu)選與抗病毒劑合用)作免疫強化治療的急性病毒的實例有皰疹病毒、流感病毒、腺病毒、柯薩奇病毒、細小核糖核酸病毒、rotavirus、肝炎病毒、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、痘病毒、呼吸道合成胞體病毒、乳頭狀病病毒、以及腸病毒、沙粒病毒、鼻病毒、脊隨灰質(zhì)巖病毒、新城雞瘟病毒、狂犬病毒、蟲媒病毒。
可以使用本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽作免疫強化治療所針對的慢性病毒感染實例是持續(xù)皰疹病毒感染、EB病毒感染、持續(xù)風(fēng)疹病毒感染、Pavovirus感染、肝炎病毒感染和人體免疫缺乏病毒感染。
本發(fā)明可以用于治療各種類型的病毒性肝炎，現(xiàn)在知道的五種類型的肝炎分別是肝炎A、B、C、D和E。
在DNA病毒中，皰疹病毒是人類最普通病毒病的根源。這組病毒包括1和2型單純性皰疹病毒(HSV)、水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、細胞巨化病毒(CMV)，EB病毒(EBV)、6型人皰疹病毒(HHV-6)和7型人皰疹病毒。HSV1和HSV2是人的一些最普通的感染因子。這些病毒大部分能夠持續(xù)存在于宿主的神經(jīng)細胞中;一旦被感染，個體病人就處于能夠造成身體和心理上痛苦的感染的復(fù)發(fā)性臨床表現(xiàn)的危險之中。
HSV感染經(jīng)常以皮膚、口和/或生殖器的大面積致虛弱的損傷為特征。初步感染可能臨床癥狀不明顯，但是與過去曾曝露于該病毒中病人的感染相比往往較重。HSV的眼感染能夠?qū)е陆悄ぱ谆虬變?nèi)障，危及宿主的視力。在新生兒以及免疫損害病人(包括愛滋病人)中的感染或侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染能致命。
此病毒的傳播是宿主和受體的直接身體接觸;因此，HSV傳染病的擴展被認(rèn)為是一個極為重要的社會問題，尤其是在尚無有效疫苗可獲得時更是如此。
水痘帶狀皰疹病毒(VZV)是一種產(chǎn)生水痘和帶狀皰疹的皰疹病毒。水痘是無免疫的宿主和年幼的孩子身上患的主要疾病，通常是以痘狀疹和發(fā)燒為特征的溫和病。帶狀皰疹是過去曾感染上水痘帶狀皰疹病毒的成人身上存在的這種疾病的復(fù)發(fā)病。帶狀皰疹臨床表現(xiàn)的特點是神經(jīng)病和分布在單側(cè)皮膚上的泡狀皮疹。炎癥擴展導(dǎo)致麻痹或驚厥。若腦膜受感染，則可以發(fā)生昏迷。在免疫缺陷病人中，VZV可以傳播引起嚴(yán)重或甚致致命的疾病。VZV與為轉(zhuǎn)植目的或為治療惡性癌形成而接受免疫抑制藥的病人有密切關(guān)系，而且由于其損害免疫系統(tǒng)而使愛滋病病人產(chǎn)生嚴(yán)重的并發(fā)癥。
CMV與其它皰疹病毒共同感染會使病毒和宿主畢生結(jié)合在一起，而且在首次感染之后病毒可能散發(fā)數(shù)年。在母親妊娠期間感染后給胎兒造成的先天性感染，可以導(dǎo)致死亡或格羅斯氏病(小頭、肝脾大、黃疸、精神發(fā)展遲緩)、致盲的視網(wǎng)膜炎、或者在不嚴(yán)重的形式下不能健壯成長和易引起胸和耳感染等臨床結(jié)果。CMV在例如因惡性腫瘤的后果、在移植后用免疫抑制藥處理或感染免疫缺陷病毒的免疫損害病人中的感染可以造成視網(wǎng)膜炎、肺炎、胃腸疾病和神經(jīng)疾病。愛滋病病人感染CMV是主要病因，發(fā)病率占成年人口的50-80%，它以潛伏形式存在而且能在免疫損害的病人身上復(fù)活。
EB病毒(EBV)造成傳染性單核細胞增多癥和白毛病，而且也被視為人類癌癥(例如鼻咽癌、免疫母細胞淋巴瘤和Burkitt瘤)的致因。
HBV是世界上非常重要的一種病毒病原體。此病毒在病原學(xué)上與主要的肝細胞癌有關(guān)，據(jù)認(rèn)為是世界上肝癌的80%致因。在美國，每年有一萬多患HBV病的人被送入醫(yī)院治療，而且因暴發(fā)病死亡數(shù)平均為250人。在美國現(xiàn)在估計有50萬致100萬傳染性攜帶者。慢性活動性肝炎一般在25%以上的攜帶者中發(fā)展形成，而且常常演化到肝硬化。感染上HBV的臨床癥狀是頭痛、發(fā)燒、不適、惡心、嘔吐、厭食和腹痛。此病毒的復(fù)制一般被免疫應(yīng)答所控制，人體的康復(fù)期延續(xù)數(shù)周或數(shù)月，但是感染可能更嚴(yán)重地造成上述的那種持續(xù)的慢性肝疾病。
一組RNA病毒，即逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovivuses)特別重要。逆轉(zhuǎn)錄病毒形成一小類RNA病毒，為了復(fù)制，這種病毒必須首先將其基因組的RNA逆向轉(zhuǎn)錄于DNA中(“轉(zhuǎn)錄”通常描述的是由DNA合成RNA)。一旦以DNA形成，此病毒的基因組便可以滲入到宿主細胞基因組中，使之可以利用宿主細胞的轉(zhuǎn)錄/轉(zhuǎn)譯機制達到復(fù)制的目的。一旦滲入進來，此病毒DNA就最終可以與宿主的DNA相區(qū)別，并且在此狀態(tài)下所說的病毒可以保持該細胞存活。
在由HIV造成免疫抑制的情況下，由于診斷出對HIV呈血清陽性，即對HIV有抗體和具有PGL(漸進性全身性淋巴結(jié)病)或ARC(愛滋病綜合征)的病人，以及患愛滋病的病人或者身患類似于愛滋病的免疫缺陷病但卻檢測不出HIV感染而且也需要利用對任何具體病毒無特異性的方式使免疫恢復(fù)的病人，可能需要預(yù)防性治療。
本發(fā)明化合物可以單獨使用，或者與其它治療劑合用來治療上述感染和病癥。本發(fā)明的合用療法，包括給予至少一種本發(fā)明化合物或其生理上的功能性衍生物以及至少一種其它藥用活性成分。所說的活性成分和藥用活性劑可以一起或分別投藥，而且當(dāng)分別投藥時既可以同時又可以以任何順序依次投藥。應(yīng)當(dāng)選擇所說的活性成分和藥用活性劑的數(shù)量，以便獲得所需的合用治療效果。所說的合用治療，優(yōu)選的包括給予一種本發(fā)明化合物或其生理的功能性衍生物和一種下面提到的藥劑。
這種其它的治療用藥劑實例包括能有效治療HIV感染或相關(guān)病癥的那些藥劑，例如3′-疊氮-3′-脫氧胸苷(Zidovudine);其它的2′，3′-雙脫氧核苷，例如2′，3′-二脫氧肌苷、2′，3′-二脫氧腺苷和2′，3′-二脫氧肌苷;Cabovir，無環(huán)核苷(如無環(huán)鳥苷)，2′，3′-二脫氧胸苷;蛋白酶抑制劑，如N-叔丁基-dechydro-2-[-2-(R)-羥基-4-苯基-3(S)-[(N-2-喹啉基-羰基)-L-天冬酰胺基]丁基]-(4aS，8aS)-異喹啉-3-(S)-甲酰胺(Ro 31-8959);噁噻蘭(Oxathiolan)核苷類似物，如順式-1-(2-羥甲基)-1，3-噁噻蘭-5-基)胞嘧啶或順式-1-(2-羥甲基)-1，3-噁噻蘭-5-基)-5-氟胞嘧啶，3′-脫氧-3′-氟胸苷，2′，3′-二脫氧-5-乙炔基-3′-氟尿苷，5-氯-2′，3′-二脫氧-3′-氟尿苷，三唑核苷，9-[4-羥基-2-(羥甲基)丁-1-基]鳥嘌呤(H2G);TAT抑制劑，如7-氯-5-(2-吡咯基)-3H-1，4-苯并二氮雜
-(2H)-酮(Ro 5-3335)或7-氯1，3-二氫-5-(1H-吡咯-2-基)-3H-1，4-苯并二氮雜
-2-胺(Ro 24-7429);干擾素，如α-干擾素;腎分泌抑制劑，如羧苯磺胺;核苷輸送抑制劑，如潘生丁，己酮可可堿，痰易凈，Procysteine，α-trichosanthin，甲膦酸，以及immunodulator(如interleukin Ⅱ)，巨噬粒細胞菌落刺激因子，促紅素，可溶性CD4及其遺傳工程衍生物。有效治療HBV感染用的這種其它治療劑實例，包括carbovir、噁噻蘭核苷類似物，例如順式-1-(2-羥甲基)-1，3-噁噻蘭-5-基)胞嘧啶或順式-1-(2-羥甲基)-1，3-噁噻蘭-5-基-5-基-5-氟胞嘧啶，2′，3′-二脫氧-5-乙炔基-3′-氟尿苷，5-氯-2′，3′-二脫氧-3′-氟尿苷，1-(β-D阿糖)-5-丙炔基尿嘧啶，無環(huán)鳥苷和干擾素(如α-干擾素)。
據(jù)報導(dǎo)(Hughes，W.T.在1987年＜ParasitologyToday＞3(11)，332-335上以題為“卡氏肺囊蟲肺炎的治療和預(yù)防”的文章中)，至少有60%的免疫缺陷綜合征病人(愛滋病人)患此卡氏肺囊蟲肺炎。不加治療的情況下，這種病幾乎總是使免疫損害的宿主死亡。對此病的治療最廣泛使用的是甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲基異噁唑(復(fù)方新諾明)和戊烷脒。但是，據(jù)報導(dǎo)這兩種治療，對愛滋病病人的有效率僅僅為50-70%左右，而且產(chǎn)生比不利反應(yīng)的通常發(fā)生率(約50%)高得多的不利反應(yīng)(參見Wofsy，C.B.＜AntimicrobialAgentsAnnual＞，1986，1，377-400頁)。因此需要新藥，尤其是預(yù)防卡氏肺囊蟲肺炎的新藥。
另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物或其生理上可接受的鹽在制造治療和/或預(yù)防哺乳動物(包括人)卡氏肺囊蟲感染用醫(yī)藥上的用途。
又一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽在治療因相應(yīng)的T細胞缺陷而導(dǎo)致的疾病(如DiGerge綜合征、真菌感染、支原菌屬感染、結(jié)核病、麻風(fēng)和全身性紅斑狼瘡)上的用途。
還有一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽在制造治療和/或預(yù)防哺乳動物(包括人)癌癥用醫(yī)藥上的用途。
本發(fā)明的的另一方面提供了本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽在制造治療和/或預(yù)防癌癥的非放射療法用醫(yī)藥上的用途。
本發(fā)明的化合物或其生理上可接受的鹽，也可以在比EP54924中公開的劑量低得多的日劑量和更長期間內(nèi)用于治療和預(yù)防癌癥。使用本發(fā)明化合物治療和預(yù)防癌劑量耐受期，與放射性敏化或其它形式下腫瘤氧合作用所需的相比更長。
特別適于用本發(fā)明化合物治療的癌的具體實施是黑瘤、頸癌、乳房癌、結(jié)胸癌、頭頸癌、胃癌、腎癌、喉癌、直腸癌和non-Hoagkin淋巴瘤。在正常細胞中表達腫瘤特異性抗原或極少表達或以極低密度表達的抗原的癌，可以作為治療靶標(biāo)。包含無反應(yīng)性或不起作用的腫瘤特異性細胞毒性T細胞的癌，也可以是治療靶標(biāo)。細胞切除的腫瘤存在復(fù)發(fā)的高度危險時，也適于用本發(fā)明化合物治療。此外，病情輕或局部患病的早期癌癥病人也適于治療。
據(jù)推測，本發(fā)明化合物通過向體外克隆(部分)活化的T細胞提供助刺激信號而起作用，因而最大限度地使T細胞活化。
本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的化合物或其生理上可接受鹽作為疫苗佐劑的用途。因此用抗原成分和本發(fā)明化合物配制的方法可以制備疫苗。
本發(fā)明化合物可以用選自口服、非腸道(包括皮下、真皮內(nèi)、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))、直腸和吸入的方式給人受體投藥。化合物有效劑量的大小，取決于許多因素，其中包括受體的特性、所涉及的免疫強化類型、待處理病情的嚴(yán)重程度和投藥路線，因此應(yīng)由值班醫(yī)生最后確定。
對于上述病況來說，這樣的有效劑量一般為每天0.5-50mg/kg人受體體重，優(yōu)選值為每天0.1-20mg/kg體重，最優(yōu)選值為每天1-10mg/kg體重，最佳值為3mg/kg體重/天。上述劑量為人用劑量。
所需的此日劑量，可以在一天中按適當(dāng)間隔分為2-4個分劑給藥。因此，采用三個分劑時，每個分劑一般為0.03-33mg，優(yōu)選為0.16-16.6mg，最優(yōu)選為0.3-6.6mg，最佳值為1.0mg(酸)/kg體重體重50kg數(shù)量級人的日劑量，一般為5mg-5g，優(yōu)選25mg-2.5g，最優(yōu)選50mg-1g(酸)，最佳的人用日劑量為150mg(酸)。此所需的日劑量至少給藥5天，最優(yōu)選至少給藥28天。
雖然本發(fā)明化合物可以以此原始化合物形式投藥，但是優(yōu)選以藥物組合物制劑形式投藥之。本發(fā)明的組合物含有如上規(guī)定的本發(fā)明化合物，而且還同時含有一或多種可接受的載體以及其它任選的治療成分。所說的載體，在與所說組合物其它成分可配伍的意義上必須是“可接受的”，而且對其受體無害。
所說的制劑包括適于口服、非腸道(包括皮下、真皮內(nèi)、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))給藥和直腸給藥的那些劑型，但是最適宜的投藥路線取決于例如受者的病情。此組合物可以方便地以劑量單位式提供，而且可以按藥學(xué)領(lǐng)域任何公知方法制備。各方法均包括使本發(fā)明化合物(活性成分)和構(gòu)成一個或多個輔助成分的載體結(jié)合的步驟。一般來說，通過使活性成分與液體載體和/或粉碎得很細的固體載體均勻充分混合，然后必要時將此產(chǎn)品成形為所需劑型的方法，制備此組合物。
適于口服的本發(fā)明制劑，可以制成離散的單位，例如膠囊、扁膠囊或片劑，其中每單位含預(yù)定量活性成分;也可以制成粉劑或粒劑，或者制成在水液或非水液中的溶液或懸浮液，或者制成水包油型或油包水型液體乳劑?；钚猿煞忠部梢灾瞥纱笸鑴?、藥糖劑或糊劑。
片劑可以用壓片或模壓法制造，其中可以可含可不含一種或多種輔助成分。處于粉末或丸粒等自由流動狀態(tài)下的活性成分任意地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑劑、表面活性劑或分散劑混合后，用適當(dāng)壓片機壓制，可以制備加壓片劑。模壓片劑，可以用適當(dāng)模壓由粉末狀被惰性液體稀釋劑濕化的化合物的方法制造。片劑可以也可以不包衣或刻線，并且可以制成緩釋或受控釋放其中活性成分的片劑。
非腸道給藥的制劑包括其中可以含抗氧化劑、緩沖劑、制菌劑和溶質(zhì)(使制劑與預(yù)期的受體血液為等滲性的溶質(zhì))的滅菌水和非水注射溶液，和可以含懸浮劑和增稠劑的水和非水滅菌懸浮液。此制劑可以置于單劑或多劑容器(如封口的安瓿和小瓶)中，而且可以貯存在冷凍干燥條件下，其中只需要在注射前才加入滅菌的液體載體，例如注射用水。用滅菌的粉末、粒和上述種類的片劑可以制備臨時配制的注射液和懸浮液劑。
直腸給藥的制劑，可以制成含可可脂之類通常載體的栓劑。
EP54924中，既未指出利用鼻或肺路線投藥式(Ia)化合物，也未暗示所說的化合物以這種方式投藥時能治療其中指出的疾病;此文中也未說明適于經(jīng)鼻或肺路線給藥的任何劑型。
適于經(jīng)口腔前庭投藥的制劑是含有活性成分的最好直徑為0.5-7微米的粒劑，投藥時將其輸送給受體的支氣管網(wǎng)。
一種可能是，這種制劑是粉碎很細的粉，可以將其按通常方式制成適于吸入裝置用的一粒粒膠囊，如明膠膠囊;也可以是自噴霧制劑，其中含活性成分，適當(dāng)?shù)囊后w推進劑(propellint)和其它可有可無的成分(如表面活性劑和/或固體稀釋劑)。也可以使用其中活性成分被分散成溶液或懸浮液微滴的自噴霧制劑。
這種自噴霧制劑與本領(lǐng)域中已知的相似，并且可以用已知方法制備。將其裝入備有可手工操作或自動功能的并具有所需噴霧特性閥的容器中，而所說的閥最好是具有輸送固定容積之計量型閥，例如在其每次操作時輸送50-100μl的閥。
另一種可能性是，所說的活性成分也可以是供氣化器或噴霧器用的溶液，以便利用加速的空氣流或超聲攪動產(chǎn)生吸入用的微小合劑滴。
適于經(jīng)鼻給藥的制劑包括大體與上述肺給藥用制劑相同的制劑。分散后，這種制劑理想的應(yīng)當(dāng)是具有10-200微米直徑的顆粒，以便能夠在鼻腔中滯留;必要時使用適當(dāng)粒度的粉末并且選用合適的閥可以達到此目的。其它適用的制劑包括粒徑為20-500微米的粗粉(由向上靠近鼻孔的容器排出后經(jīng)鼻通道快速吸入給藥)和包括0.2-5%(W/V)的活性成分水液或油溶液的鼻用液滴。
優(yōu)選的單劑制劑是其中含上面提到的活性成分的有效劑量或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的那些。
下列實施例在于詳細說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)看作以任何方式對本發(fā)明的限制。全部溫度均指攝氏溫度。
藥物制劑噴霧用溶液本發(fā)明化合物1.0mg注射用水至10.0ml溶解式(Ⅰ)化合物于注射用水中，使之通過0.2μm孔徑的濾膜將溶液滅菌，在無菌容器中收集濾液。無菌條件下裝入無菌的玻璃安瓿中，燒熔玻璃使每只安瓿密封，10ml/安瓿。
自噴霧制劑經(jīng)微?；谋景l(fā)明化合物1.0mg推進劑至5.0ml將經(jīng)微?；氖?Ⅰ)化合物懸浮在推進劑中，加壓下將此懸浮液經(jīng)閥孔充入帶閥的完備氣霧劑鋼瓶中，5ml/瓶。
所說的推進劑是購得的三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷和二氯四氟乙烷的混合物。
吸入用粉劑經(jīng)微?；谋景l(fā)明化合物1.0mg乳糖29.0mg將經(jīng)微?；谋景l(fā)明式(Ⅰ)化合物與乳糖一起研制混合，將此粉末混合物裝入硬質(zhì)明膠膠囊殼中，30mg/囊;也可以將此經(jīng)微?；氖?Ⅰ)化合物壓入柱塞或者能夠用來向氣流中輸送少量式(Ⅰ)化合物的裝置中。
鼻用滴劑本發(fā)明化合物100mg對羥基苯甲酸甲酯10mg注射用水至10ml
將式(Ⅰ)化合物和對羥基苯甲酸甲酯溶于注射用水中，將此溶液灌入適當(dāng)?shù)纹恐校?0ml/瓶，用瓶蓋將瓶口蓋緊。
片劑本發(fā)明化合物100mg乳糖100mg淀粉50mg聚乙烯基吡咯烷酮5mg硬脂酸鎂5mg260mg使所說化合物、乳糖和淀粉共同混合后，用聚乙烯基吡咯烷酮水溶液制粒，干燥后混合硬脂酸鎂并壓成平均片重為260mg的片劑。
膠囊劑本發(fā)明化合物100mg磷酸氫二鈣二水合物100mg淀粉羥基乙酸鈉16mg甲基纖維素(400cps)5mg硬脂酸4mg滑石粉5mg230mg將所說化合物、二水合磷酸氫二鈣和淀粉羥基乙酸鈉共同混合后，用甲基纖維素水溶液制粒;干燥后，將粒狀物與硬脂酸和滑石粉混合，此混合物在230mg/囊平均充填量下裝入明膠膠囊中。
栓劑本發(fā)明化合物100mg栓劑基質(zhì)(飽和脂肪酸等油酯的混合物)1700mg1800mg將所說化合物研磨至粒度小于150μ，在38-40℃下加入栓劑基質(zhì)，混合成均勻分散液，注入栓劑模中使之冷卻。
靜脈注射劑(單劑)本發(fā)明化合物100mg氫氧化鈉水溶液(30%)適量注射用水至5ml在少量注射用水中懸浮所說化合物，加入氫氧化鈉水溶液使PH被調(diào)節(jié)到10-10.5，再加入適量水達到所需的最后容積;校核PH值后，使之通過孔徑為0.22μ的滅菌濾膜加以滅菌，在無菌條件下裝入無菌小瓶中并冷凍干燥。
肌內(nèi)注射劑(多劑)本發(fā)明化合物(無菌的)1000mg多乙氧基醚203mg聚乙烯基吡咯烷酮1000mg氯甲酚60mg氯化鈉，對等滲性來說適量注射用水至30ml在注射用水中溶解多乙氧基醚20、聚乙烯基吡咯烷酮、氯化鈉和氯甲酚，用0.22μ的膜無菌過濾;研磨此無菌的化合物至粒度小于20μ，將其加入過濾的以上溶液中;混合成均勻分散液，充入無菌的玻璃小瓶中。
延遲釋放的片劑本發(fā)明化合物200mg酪蛋白195mg氫化的蓖麻油400mg硬脂酸鎂5mg800mg使氫化的蓖麻油熔化后加入本發(fā)明化合物(粒度已研磨到小于150μ)，加入酪蛋白后混勻。使之冷卻并磨成粒狀，與硬脂酸鎂混合后壓成平均重量為1200mg的片劑。
優(yōu)選的單位劑量制劑，是含上述日劑量或單位日分劑的本發(fā)明化合物或其生理上可接受鹽或其適當(dāng)份數(shù)的那些。
應(yīng)當(dāng)知道，除了上面具體提到的成分之外，本發(fā)明的制劑還可以包括與所說制劑有關(guān)的本領(lǐng)域慣常的其它成分，例如適于口服的成分可以包括調(diào)味劑。
本發(fā)明的化合物或其生理上可接受鹽，也可以以本領(lǐng)域已知的那種貯存制劑形式提供，一旦將其放入受體體內(nèi)，就能從中長時間釋放出活性成分。
為了更詳細說明本發(fā)明的效果，在下列實施例中將說明使用本發(fā)明化合物的試驗結(jié)果。
實施例1給試驗鼠皮下注射處于劑量范圍中位數(shù)劑量的抗原、抗原+習(xí)用的佐劑或抗原+試驗化合物。然后按規(guī)定于四天之內(nèi)在相同注射部位再注射額外的試驗化合物。七天之后，切除局部(腹股溝部)的淋巴結(jié)，只用抗原再刺激此淋巴結(jié)細胞。再經(jīng)過四天后，利用3H-胸腺嘧啶攝入DNA的標(biāo)準(zhǔn)方法和液體閃爍分光法測量淋巴細胞的抗原特異性增殖作用。體液免疫試驗，是用按同樣方式給予抗原和試驗化合物的方法完成的。1-2周后，用靜脈穿刺法取出血樣，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法分析血清抗體。
試驗結(jié)果

圖1中數(shù)據(jù)說明tucaresol對與抗原(陰孔
血清蛋白)接觸的T淋巴細胞的影響。BIOS鼠或者單獨接受50μg抗原(■)，或者還同時接受了習(xí)用佐劑明礬(◇)或100μg Tucaresol(◆)。
圖2中數(shù)據(jù)表明形成席夫堿的小分子化合物對羥基苯基乙醛(pHPA)(化合物1)在B10S鼠中對接觸流感病毒之重組核蛋白(NP)的T細胞的影響。在第0天，試驗鼠或者單獨接受了1μg Np(
)或者同時還接受了1mg pHPA(
)。在第1和2天，此pHPA組還接受了1mg pHPA的進一步注射(總共三次注射)。七天后，除去局部淋巴結(jié)，用A/Okuda流感病毒再次刺激此淋巴結(jié)細胞。再經(jīng)四天后，按上述方法測量抗原特異性增殖作用。
圖3中的數(shù)據(jù)說明，形成席夫堿的酮類二氧庚酸(DHA)(化合物12)和3-羥基-1-(4-甲氧苯基)-3-甲基-9-丁酮(HMMB)(化合18)對BIOS鼠中陰孔
血清蛋白(KLH)應(yīng)答的影響。在第0天注射一次KLH(10μg)，并且在第0、1、2和3天時于同一位點給予試驗化合物。7天后，切除局部淋巴結(jié)，用抗原再次刺激淋巴結(jié)細胞，按標(biāo)準(zhǔn)方法測量T細胞的激活狀況。試驗化合物與習(xí)用佐劑氫氧化鋁(100μg與抗原混合物)比較如下只有抗原(
)，抗原+明礬(□)，抗原+1mg DHA(◆)，抗原+2mg HMMB(◇)。
圖4中的數(shù)據(jù)說明，氨基胍對T細胞應(yīng)答能力的影響。此化合物是容易與細胞羰基反應(yīng)形成羰-氨基縮合物(形成的是與席夫堿相似的腙，但更穩(wěn)定)的一種親核的肼。試驗鼠接受了一次注射，注射物是KLH(50μg)(
)，或者還經(jīng)弗氏完全佐劑乳化過(◇)，或者還含有2mg氨基胍(
)。用標(biāo)準(zhǔn)方法評定局部淋巴結(jié)中T細胞的激活狀況。
圖5中數(shù)據(jù)說明，形成所說腙分子的吡啶鎓氯化物酰肼對T細胞應(yīng)答能力的影響。試驗接受了一次注射，注射物是僅有抗原(50μg卵清蛋白)(
)，或者還有100μg明礬(◇)，或者還有10mg<p>其中Z為0或1，n為0或1，B為氫或C1-4烷基，B1為氫或被任意取代的苯基，B2是氫、甲基或可被可不被基團CO(CH2)xCOOH(其中X為1-7)取代的甲基;或者當(dāng)B1為苯基時B2可以通過一個氧或可含可不含一個氧的烴鏈連接到B1上形成含8-10個原子(其中一個可以是氧，其余是碳)的任意取代的雙環(huán)體系;當(dāng)Z＝0時，B1不能是氫且B2必須是氫。
當(dāng)B1是任意取代的苯基時，優(yōu)選的取代基是在下式(Ⅳ)中規(guī)定的Y1、Y2、Y3、Y4、Y5和Y6。式(Ⅰ)的一組優(yōu)選的化合物是由式(Ⅵ)所代表的那些化合物或其生理可接受的鹽
其中Y1選自氫、羥基、C1-4烷氨基和在烷基部分有1-4個碳原子的鏈烷酰氨基;
Y2、Y3和Y4各自選自氫、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代烷基、羥基和芐氧基，Y5是羥基或基團Q1，其中Q1是均值和中位值與對照組中的比較。
Tucaresol在PBS中的溶解方法是滴加1MKOH至PH10.0，然后滴加濃HCL使PH返至中性。
為了將給藥期從七天延長到14天，采用了每隔一天給藥的投藥的做法。用此投藥法時，腫瘤曝露藥環(huán)境下的時間，從十三天延長到二十五天，即實驗結(jié)束之前兩天。試驗結(jié)果列于表1之中。
腫瘤生長的方式(彌散顆粒)造成體積的測徑器測量無意義，因而這些數(shù)據(jù)未寫入表中。
表1腫瘤植入后第24天，腫瘤的重量(克)A組(對照)B組(1.0mg/只)C組(0.2mg/只)1.2070.7400.8021.1300.6950.2720.7720.3580.2300.7280.3030.1970.6360.2980.1810.5750.0900.1260.3350.0790.1260.2760.0380.0850.0600.0220.029N.TN.T.0.0190.006平均值0.6350.2910.188標(biāo)準(zhǔn)偏差0.3790.2720.222平均值(%)red.54.270.4中位數(shù)0.6360.2980.126中位數(shù)(%)red.53.1580.19注N.T.指未取腫瘤。這些鼠未包括在上述導(dǎo)出值中。
Tucaresol抑制了同系的CS7BL/6鼠中皮下植入的MCA38的生長。
實施例3表2中結(jié)果的試驗方法利用靜脈穿刺，從最近五年用破傷風(fēng)類病毒免疫過的健康供血者體內(nèi)取血。在Ficoll triosil(Lymphoprep，Nycomed AS Oslo，Norway)上用密度梯度離心法制備單株細胞部分。細胞經(jīng)洗滌后，重新懸浮在RPMI 1640組織培養(yǎng)介質(zhì)(Flow Laboratories，Ayrshire，Scotland)中，此介質(zhì)中含10%自身血清和加有抗菌素。將細胞調(diào)整到106/ml，在96孔組織培養(yǎng)微滴定板(Titertek，F(xiàn)low Labs)的每孔(U形孔)中放入100μl此液。向每個孔中加入10μl試驗化合物，并于此階段也加入適當(dāng)?shù)膶φ杖軇＜尤胗H合純化的，最終濃度為10μg/ml的破傷風(fēng)類病毒。37℃下在含5%CO2的潮濕空氣中培養(yǎng)細胞五天，在培養(yǎng)的最后18小時存在3H胸腺嘧啶(1μCi/孔)。用半自動系統(tǒng)(SKatroo)將細胞收獲在玻璃微纖維紙上，用液體閃爍分光法測定結(jié)合到DNA中的胸腺嘧啶。與標(biāo)準(zhǔn)化合物對-羥基苯基乙醛比較，確定IC50比值。
席夫堿形成化合物對免疫應(yīng)答產(chǎn)生陽性或陰性影響的機理，與化合物和淋巴細胞及抗原提供細胞(APC)表面上氨基的反應(yīng)機理相同。它們以這種方式對T細胞產(chǎn)生助刺激，通過在細胞表面上配體之間形成生理席夫堿使助刺激放大。但是，在高濃度下所說的化合物優(yōu)先于細胞配體間的反應(yīng)而反應(yīng)，這除了提供助刺激之外，對于有效的將APC結(jié)合到T細胞上來說似乎是必須的。在低濃度和中等濃度下增進免疫應(yīng)答，而高濃度下將是抑制性的。所說的抑制作用更容易存在于試管中(因為經(jīng)處理的APC表面上的抗原是一種限制性因素)而且為反映出體內(nèi)免疫強化能力的席夫堿形成能力提供出一種度量。席夫堿形成、異構(gòu)化以及質(zhì)子化和去質(zhì)子化作用循環(huán)的可逆性，在免疫強化作用中也是重要因素，它造成與試管中免疫抑作用和體內(nèi)免疫強化作用間簡單對等的偏差。在體內(nèi)的能力也受化合物的半衰期、溶解度和藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)的影響。
實施例4化合物與細胞表面ε-氨基形成席夫堿的競爭試驗為了測量在淋巴細胞表面的氨基上形成的席夫堿，采用了下列在細胞表面胺上形成席夫堿的競爭試驗使磺基-NHS-生物素與蛋白質(zhì)上的游離氨基反應(yīng)，形成酰胺鍵。用含F(xiàn)ITC(異硫氰酸熒光素)-卵白素-生物素的磺基-NHS-生物素，使親合標(biāo)記體系細胞表面氨基染色，用熒光激活的細胞分類(FACS)分析法測定。形成席夫堿的醛和酮競相抑制磺基-NHS-生物素與細胞表面反應(yīng)。試驗如下準(zhǔn)備外周血單核細胞并調(diào)節(jié)到每ml磷酸鹽緩沖的生理鹽水中含5×106個細胞。向一個樣品中加入5mM濃度的試驗化合物，37℃下培養(yǎng)細胞30分鐘。對照樣品用PBS培養(yǎng)。室溫下加入10mM的NaCNBH3(調(diào)至中性pH)1小時。在PBS中洗滌細胞兩次。加入于4℃下貯存30鐘的市售品FITC-卵白素的1∶50稀液30分鐘。在冷PBS中洗滌細胞三次，用1%多聚甲醛固定。完成FACS分析。
權(quán)利要求
1.除肉桂醛外與T細胞表面羰基或氨基形成席夫堿或腙的化合物或其生理上可接受的鹽在制造用于免疫應(yīng)答強化的醫(yī)藥上的用途。
2.式(Ⅰ)的化合物或其生理上可接受的鹽按照權(quán)利要求1的用途
其中R是氫，被一個取代的苯基或兩個C1-4烷基和一個羥基取代或未取代的甲基;R1是基團CH2COR2基或其互變異構(gòu)體，其中R2是被基團CO(CH2)xCO2H(X為1-7)基取代或未取代的甲基;或者R1是A-ph基，其中A是O、CH2、CH(CH3)、CO或單鍵，而且ph是任意取代的苯基;或者R連接到R1上形成一個九元或十元任意取代的雙環(huán)系統(tǒng)，其中一個環(huán)是苯。
3.按照權(quán)利要求1或2的用途，其中式(Ⅰ)的一小類化合物是由式(Ⅱ)所表示的化合物或其生理上可接受的鹽
其中A和ph定義如上，R3是H、C1-4烷基或CH2(C6H4)R4，而R4是羥基或C1-4烷氧基。
4.按照權(quán)利要求1-3中任何一項的用途，其中式(Ⅰ)的一小類化合物是由式(Ⅲ)代表的化合物或其生理上可接受的鹽
其中R7是基團CH2COR2，而R2定義如上。
5.按照權(quán)利要求1-4中任何一項的用途，其中所說的化合物或其生理上可接受的鹽具有式(Ⅳ)所表示的雙環(huán)系統(tǒng)
式中R8是羥基或C1-4烷氧基;A1是O，CO或CH2;
表示可被可不被苯酚基取代的C2-3亞烷基。
6.式(Ⅴ)化合物或其生理上可接受的鹽在強化免疫應(yīng)答中的用途，
式中Z為0或1，n為0或1，B為氫或C1-4烷基，B1為氫或被任意取代的苯基，B2是氫、甲基或可被可不被基團CO(CH2)xCOOH取代的甲基其中X為1-7;或者當(dāng)B1為苯基時，B2是氧或是可含有可不含有一個連接到B1上的氧的C2-3亞烷基，以形成含有9或10個原子(一個可以是氧，其余是碳)的任意取代的雙環(huán)體系;當(dāng)Z為O時，B1不能是氫且B2必須是氫。
7.按照權(quán)利要求1-3和6中任何一項的用途，其中使用由式(Ⅵ)代表的一組優(yōu)選化合物或其生理上可接受的鹽
式中Y1選自氫、羥基、C1-4烷氨基和其烷基部分有1-4個碳原子的鏈烷酰氨基;Y2、Y3和Y4分別選自氫、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代烷基、羥基和芐氧基，Y5是羥基或基團Q1，其中Q1是
其中Q2和Q3分別選自氫和C1-4烷基;X選自氰基、羧基或其官能性羧酸衍生物、5-四唑基和烷基部分有1-6個碳原子的烷基磺酰氨基甲?；?而且n為0-6;Y6是-(CpH2p)CHO，其中P＝0-5;當(dāng)P＝0-5;當(dāng)P＞1時，基團Y6中的甲?；?-CHO)可以處在任何碳原子上而且亞烷基(CpH2p)可以是直鏈或支鏈;或者Y6是(CH2CO)g-X1或(COCH2)g-X1其中g(shù)為1-3而且X1是甲氧苯基或C1-4烷基。
8.按照權(quán)利要求7所述的用途，其中使用的化合物或其生理可接受的鹽中，X選自氰基、5-四唑基、其烷基部分有1-6個碳原子的烷基磺酰氨基甲?；突鶊F-CoY，而且Y是-OR9，而R9是氫、1-4個碳原子的烷基或芐基;或者Y是-NR10R11，這里R10和R11分別為氫或C1-4個烷基。
9.按照權(quán)利要求6-8中任何一項的用途，其中使用X是羧基的化合物及其生理上可接受的鹽。
10.按照權(quán)利要求6中的用途，其中使用B1和B2形成雙環(huán)系的化合物或其生理上可接受的鹽，所說的雙環(huán)系選自被不多于四個取代基取代的香豆素、四氫萘酮、苯并呋喃酮或萘醌;所說的取代基選自氫、C1-4烷氧基、羥基或被羥基取代的苯基。
11.4-(2-甲?；?3-羥苯氧甲基)苯甲酸或其生理上可接受鹽在制造強化免疫應(yīng)答用醫(yī)藥上的用途。
12.按照權(quán)利要求1-11中任何一項所述化合物或其生理上可接受鹽在制造治療和/或預(yù)防病毒感染用藥上的用途。
13.按照權(quán)利要求12的用途，其中所說的病毒感染是人體免疫缺陷病毒(HIV)感染。
14.按照權(quán)利要求12的用途，其中所說的病毒感染是乙型肝炎病毒感染。
15.按照權(quán)利要求12的用途，其中所說的病毒感染是丙型肝炎病毒感染。
16.按照權(quán)利要求1-11中任何一項所述化合物或其生理上可接受鹽在制造治療和/或預(yù)防癌癥用藥上的用途。
17.按照權(quán)利要求16的用途，其中所說的癌癥是結(jié)腸癌。
18.按照權(quán)利要求1-17中任何一項所述化合物或其生理上可接受鹽的用途，還包含其它化療劑和/或其它免疫治療劑。
19.按照權(quán)利要求1-18所述化合物或其生理上可接受鹽的用途，適于經(jīng)鼻或經(jīng)肺給藥。
20.一種治療免疫缺陷的哺乳動物用方法，包括給所說的哺乳動物使用有效量的與T細胞表面羰基或氨基形成席夫堿或腙的化合物(不包括化合物肉桂醛)，或其生理上可接受的鹽，以強化免疫應(yīng)答作用。
21.一種治療免疫缺陷的哺乳動物的方法，包括給所說的哺乳動物給予有效免疫強化量的4-(2-甲酰基-3-羥基苯氧甲基)苯甲酸或其生理可接受的鹽，以強化免疫應(yīng)答。
22.按照權(quán)利要求21的方法，其中以有效免疫強化量的4-(2-甲酰基-3-羥基苯氧甲基)苯甲酸或其生理上可接受的鹽為日劑量至少給藥五天。
23.一種治療免疫系統(tǒng)受到抑制的哺乳動物病毒感染的方法，包括給需要治療的哺乳動物使用治療有效量的4-(2-甲?；?3-羥基苯氧甲基)苯甲酸或其生理上可接受的鹽。
24.按照權(quán)利要求23的方法，其中所說的病毒感染是人體免疫缺陷病毒(HIV)感染。
25.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中所說的病毒感染是乙型肝炎病毒感染。
26.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中所說的病毒感染是丙型肝炎病毒感染。
27.一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括給需要治療的哺乳動物使用治療有效量的4-(2-甲?；?3-羥基苯氧甲基)苯甲酸或其生理上可接受的鹽。
28.按照權(quán)利要求27所述的方法，其中所說的癌癥是結(jié)腸癌。
29.按照權(quán)利要求27所述的方法，其中所說的癌癥是惡性黑瘤。
30.按照權(quán)利要求27所述的方法，其中所說的癌癥是腎癌。
31.按照權(quán)利要求20-30中任何一項所述的方法，其中所說的有效量為50-200mg/天。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類作為免疫強化劑的化合物的用途，含此類化合物的組合物及其制造方法、這些化合物與抗腫瘤或抗感染藥的合劑，以及使用這些合劑在預(yù)防和/或治療由腫瘤或感染所引起的疾病中的用途。
文檔編號A61K31/365GK1091005SQ9311444
公開日1994年8月24日 申請日期1993年9月30日 優(yōu)先權(quán)日1992年10月1日
發(fā)明者J·R·羅德斯 申請人:惠爾康基金會集團公司