專利名稱：表鬼臼毒吡喃葡糖甙的?；苌锏闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及表鬼臼毒(epipodophyllotoxin)的衍生物，它們作為抗腫瘤藥劑的應(yīng)用以及含有它們的藥物組合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的新化合物是4′-脫甲基表鬼臼毒葡糖甙的?；苌?。
表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Etoposide)和表鬼臼毒噻吩糖甙(Teniposide)是從天然存在的木酚素，鬼臼毒衍生的臨床有效的抗腫瘤藥劑。當(dāng)前，表鬼臼毒吡喃葡糖甙在美國(guó)是以“Vepesid”的商標(biāo)作為治療小細(xì)胞肺腫瘤和睪丸腫瘤的藥在市場(chǎng)上銷售。表鬼臼毒吡喃葡糖甙和表鬼臼毒噻吩糖甙的優(yōu)良的藥理學(xué)性質(zhì)激勵(lì)著人們非常積極地去研究其他同類的活性類似物。
在文獻(xiàn)中曾經(jīng)作為中間體報(bào)導(dǎo)了其中糖部分的羥基被?；?′-O-去甲基表鬼臼毒葡糖甙，用以制備相應(yīng)的4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙，然而，這些化合物的酚基也是被保護(hù)了的。
加拿大專利號(hào)956939公開了式(Ⅰ)的化合物
其中，R1為C1-C5烷基;R2為乙?；蚣柞；?R3為苯基或取代苯基;所指出可能的取代的苯基為對(duì)-硝基笨基和對(duì)-甲氧苯基，但沒有實(shí)例說(shuō)明。
美國(guó)專利456675公開了式(Ⅱ)的化合物
其中，R為-C(O)CH2X，X為鹵原子。
歐洲專利申請(qǐng)162701公開了式(Ⅲ)的化合物
其中R1和R2可相或不同，并各自表示-C(O)CHX2或-C(O)CX3，其中X為鹵素。
日本公開58/225096(德溫特摘要號(hào)84-034268/06)和58/219196(德溫特摘要號(hào)84-027495/05)分別公開了式(Ⅳ)和式(Ⅴ)的化合物
其中A代表-CO2-CH2-C(H)m(X)n，此處X為鹵素原子，m為0-2，n為1-3，而m+n＝3，AC為酰基。
歐洲專利申請(qǐng)226202公開了具有式(Ⅵ)結(jié)構(gòu)的合成表鬼臼毒吡喃葡糖甙的中間體
其中A表示乙酰基。
在J.Pharm.Biomed.Anal.，1987，5(1)∶11-20中公開了具有式(Ⅶ)的表鬼臼毒吡喃葡糖甙的單-半琥珀酸酯衍生物
其中，R1與R2中的一個(gè)為氫，而另一個(gè)為-CO(CH2)2CO2H。這些化合物用作使表鬼臼毒吡喃葡糖甙與牛血清白蛋白結(jié)合的手段。
日本公開63/192793公開了表鬼臼毒吡喃葡糖甙的4′-磷酸酯及其二鈉鹽。
表鬼臼毒吡喃葡糖甙磷酸酯本發(fā)明提供式(Ⅷ)的化合物
其中，R2為氫，R1為選自下列基團(tuán)(C1-10)烷基、(C2-10)鏈烯基、(C5-6)環(huán)烷基、2-呋喃基、2-噻吩基、(C6-10)芳基、(C7-14)芳烷基;或R1和R2各自為(C1-10)烷基;或R1、R2和與它們相連的碳原子聯(lián)結(jié)在一起表示(C5-6)環(huán)烷基;R3與R4中的一個(gè)為氫，而另一個(gè)為選自(C1-5)烷酰基和苯甲?；幕鶊F(tuán);或R3與R4是相同的并為選自(C1-5)烷酰基和苯甲?；幕鶊F(tuán);R5為氫或磷?；?phosphate group)。
本發(fā)明的另一方面提供了含有抗腫瘤有效量的式(Ⅷ)化合物和藥物可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明還有一個(gè)方面，提供了對(duì)一個(gè)患有腫瘤的哺乳類宿主抑制其腫瘤生長(zhǎng)的方法，該方法包括對(duì)所說(shuō)的宿主給予抗腫瘤有效量的式(Ⅷ)化合物。
式(Ⅷ)的化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例含有這樣一些化合物，其中R為氫，R選自甲基、2-噻吩基和苯基，而甲基是最優(yōu)選的取代基。
一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施例提供了其中R3和R4各為(C1-5)烷?；氖?Ⅷ)的化合物;而最優(yōu)選的實(shí)施例是R3和R4各為甲?；氖?Ⅷ)的化合物。
一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施例還提供了R3和R4中，一個(gè)是氫，而另一個(gè)是(C1-5)烷?；虮郊柞；氖?Ⅷ)化合物。
在這里所用的術(shù)語(yǔ)“Phosphate”包括H2PO3-基團(tuán)及其醫(yī)藥可接受的鹽類。醫(yī)藥上可接受的鹽類包括一元的和二元的鹽類，其中的陽(yáng)離子包括(但不限于)堿金屬，例如鈉、鉀和鋰;堿土金屬，例如鎂、鈣和鋇;有機(jī)胺鹽，如銨。
本發(fā)明的新化合物可以通過(guò)使式(Ⅸa)的4′-酚基被保護(hù)的4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙與所需要的羧酸或其?；葍r(jià)物反應(yīng)，再除去酚基上的保護(hù)基團(tuán)。
ⅨaY＝保護(hù)基團(tuán)ⅨbY＝H對(duì)于酚基保護(hù)基團(tuán)沒有特別的限制，對(duì)分子的其他部分幾乎沒有或沒有不利影響的任何能被導(dǎo)入而又易于除去的基團(tuán)都可以。特別是，酚基保護(hù)基必須能以不影響其最終產(chǎn)物的糖部分的酰氧基官能度的方法除去。保護(hù)酚基的方法是本領(lǐng)域中公知的，作為酚基保護(hù)基團(tuán)的一般類型的例子，可以提及如醚、縮醚、酯和碳酸酯。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，我們發(fā)現(xiàn)芐氧羰基對(duì)這樣的應(yīng)用很方便。這樣，在低溫下，如-150℃，在惰性有機(jī)溶劑如二氯甲烷中和在叔有機(jī)堿如吡啶的存在下，使式(Ⅸb)的4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙與氯甲酸芐酯反應(yīng)可以得到相應(yīng)的4′-O-芐氧羰基-4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙。美國(guó)專利3524844公開了式(Ⅸb)的化合物及其合成方法。
使用所需要的羧酸或從其衍生的?；瘎┛梢詫?shí)現(xiàn)式(Ⅸa)化合物的糖羥基的?；磻?yīng)，例如?；u如酰氯、從N-羥基琥珀酰亞胺或1-羥基三唑衍生的活性酯和對(duì)稱的或混合的酸酐。當(dāng)使用羧酸作為酰化劑時(shí)，最好同時(shí)使用縮合劑，例如碳化二亞胺(如二環(huán)己基碳化二亞胺)。如上所述，?；瘎┦荂1-5鏈烷酸和苯甲酸及其酰化等價(jià)物。鏈烷酸包括(但不限于)甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和支鏈鏈烷酸如2-甲基丙酸和3-甲基丁酸。
可以在惰性有機(jī)溶劑如吡啶中進(jìn)行?；磻?yīng)，當(dāng)副產(chǎn)物是酸時(shí)，最好在反應(yīng)混合物中包括一種酸接受劑;適宜的酸接受劑是例如吡啶、三乙胺、二異丙基乙胺及其他的叔胺堿類或是如碳酸鈉和碳酸鉀等無(wú)機(jī)堿。該反應(yīng)可在有利于生成所需產(chǎn)物的溫度進(jìn)行，如從約-15-50℃;可能要進(jìn)行幾分鐘至幾天才能使反應(yīng)完全，這取決于反應(yīng)物的性質(zhì)和對(duì)如溫度等反應(yīng)條件的選擇。
酰化反應(yīng)并不是區(qū)域選擇性的，它可得到2″-單?；a(chǎn)物、3″-單?；a(chǎn)物和2″，3″-雙?；a(chǎn)物的混合物。然而，當(dāng)相對(duì)表鬼臼毒反應(yīng)物至少使用2個(gè)當(dāng)量的?；瘎r(shí)，主要生成雙酰化衍生物。按照本技術(shù)領(lǐng)域的實(shí)踐的普通原理，通過(guò)控制反應(yīng)參數(shù)可以將單?；a(chǎn)物和雙?；a(chǎn)物的比例控制到某種程度，例如改變反應(yīng)物的相對(duì)量或改變?nèi)鐪囟群头磻?yīng)時(shí)間等反應(yīng)條件。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)使用等摩爾的反應(yīng)物時(shí)，降低反應(yīng)溫度和縮短反應(yīng)時(shí)間會(huì)使生成的單?；a(chǎn)物的量增加，另一種辦法是通過(guò)先將4′-酚基被保護(hù)的表鬼臼毒葡糖甙原料的一個(gè)糖羥基保護(hù)起來(lái)，可得到單?；a(chǎn)物。為了減少兩羥基都被衍生化的程度，糖羥基的保護(hù)基優(yōu)選的是體積大的取代基，如叔丁基二甲基甲硅烷基。再者，糖羥基的保護(hù)不是區(qū)域選擇性的，然而，如果需要，2″-位保護(hù)的或3″-位保護(hù)的化合物可以很容易用色譜法分開。我們?cè)?jīng)進(jìn)行了表鬼臼毒吡喃葡糖的甲?；磻?yīng)，可是我們并沒有成功地分離期望得到的任一個(gè)表鬼臼毒吡喃葡糖甙單甲?；苌铩?br> 應(yīng)用常規(guī)的分離技術(shù)，如柱層析，可以將含有酚羥基保護(hù)了的?；苌锏漠a(chǎn)物混合物分離為單獨(dú)的成份。酚羥基的去保護(hù)，如果需要，加上糖羥基的去保護(hù)，就提供了本發(fā)明的化合物?？梢栽趩为?dú)成分的分離之前或以后進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng);次序是不嚴(yán)格的。通過(guò)使用對(duì)于所選擇的保護(hù)基合適的方法除去保護(hù)基團(tuán)，這些方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的。例如，當(dāng)保護(hù)基團(tuán)為芐氧羰基時(shí)，可在常壓下，用Pd-C作為催化劑，通過(guò)催化氫化脫去;通過(guò)在醇的水溶液中加熱或用氟陰離子或醋酸水溶液處理;可以脫去叔丁基二甲基甲硅烷基。
在脫去酚的保護(hù)基團(tuán)之后，4′-位酚羥基可進(jìn)一步衍生化以得到式(Ⅷ)的4′-位磷酸酯。使用常規(guī)的方法可以進(jìn)行4′-位酚基的磷酸化反應(yīng)。例如，一個(gè)其中R5為氫的式(Ⅷ)的化合物可以與如三氯氧化磷磷?；瘎┓磻?yīng);磷酰氯中間體就地水解得到4′-位磷酸酯。在堿(如碳酸氫鈉)的存在下，水解得到相應(yīng)的鹽。美國(guó)專利申請(qǐng)GB 2207664公開了這個(gè)步驟和其他可有效應(yīng)用的磷酸化方法，該專利申請(qǐng)引入本文作為參考。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物的合成并不限于上述概略指出的步驟和試劑。還可包括可以酰化4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙的糖部分的羥基的其他方法。反應(yīng)條件當(dāng)然將隨著起始物的選擇而變化，但可以由本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員確定而不需過(guò)多的試驗(yàn)。
測(cè)定過(guò)本發(fā)明的代表性的化合物對(duì)鼠的可移植的P388白血病的抗腫瘤活性。以0.4毫升含有106淋巴白血病P388細(xì)胞的稀釋腹水液體對(duì)雌性CDF小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)培育。在第1天以單劑量腹膜內(nèi)施用試驗(yàn)化合物并觀察動(dòng)物50天。測(cè)定處理動(dòng)物的平均存活時(shí)間(MST)超過(guò)未處理的對(duì)照動(dòng)物平均存活時(shí)間的百分?jǐn)?shù)增加，并以%T/C形式報(bào)告。顯示%T/C值為125或更大的化合物被認(rèn)為有顯著的抗腫瘤活性。表Ⅰ介紹了體內(nèi)評(píng)價(jià)所得的結(jié)果，僅報(bào)告了最大的%T/C值和給出最大效應(yīng)的劑量。
表Ⅰ對(duì)P388白血病的抗腫瘤活性化合物劑量(毫克/公斤/天)%T/CMST實(shí)施例130165實(shí)施例330240實(shí)施例430210Etoposide30182實(shí)施例6120＞500(3/4)＊實(shí)施例8120145實(shí)施例960420(1/4)實(shí)施例10120125Etoposide120＞390(6/12)＊50天時(shí)的存活數(shù)/試驗(yàn)數(shù)離體測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)B16-F10鼠黑色素瘤和莫塞爾(Moser)人結(jié)腸癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性。收集和計(jì)數(shù)指數(shù)生長(zhǎng)的B16-F10和莫塞爾細(xì)胞，并分別以1.5×104和3×104細(xì)胞/毫升的濃度懸浮于培養(yǎng)介質(zhì)中。在細(xì)胞懸浮液(180mcl)植入一個(gè)96井的微量滴定板的井中24小時(shí)后，將試驗(yàn)材料(20mcl)加入井中并將板培育72小時(shí)。在用中性紅溶液對(duì)生存的活細(xì)胞染色后，在540nm以比色分析法測(cè)定對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性。結(jié)果總結(jié)于表Ⅱ。
表Ⅱ?qū)κ蠛腿四[瘤細(xì)胞的離體的細(xì)胞毒性
IC50(mcg/ml)化合物B16-F10Moser實(shí)施例31.61.1實(shí)施例41.4未測(cè)定實(shí)施例11.3＜0.8實(shí)施例80.92未測(cè)定實(shí)施例90.170.83實(shí)施例104.4未測(cè)定實(shí)施例62.00.84Etoposide0.45未測(cè)定因此，本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，該方法包括對(duì)患有腫瘤的宿主給予有效的腫瘤抑制劑量的一種式(Ⅷ)的抗腫瘤化合物。為此目的，可以通過(guò)常規(guī)途徑，包括(但不局限于此)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、瘤內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、淋巴內(nèi)和口服給藥。
本發(fā)明另一方面提供了一種藥物組合物，它包括式(Ⅷ)的化合物和藥物可接受的載體?？蓪⒖鼓[瘤組合物制成任何適合于所需給藥途徑的藥劑形式。這種組合物的例子包括口服的固體組合物，如片劑，膠囊、丸劑、粉劑和顆粒;口服的液體組合物，如溶液、懸浮液、糖漿或劑和腸胃外給藥的制劑，如無(wú)菌溶液、懸浮液或乳劑。它們也可以制成消毒的固體組合物的形式，在使用前可立即將其溶解于無(wú)菌的水、生理鹽水或某些其他無(wú)菌的可注射的介質(zhì)中。
對(duì)于一個(gè)給定的哺乳動(dòng)物的宿主，本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員很容易確定最佳的劑量和方式。當(dāng)然，應(yīng)該使所使用的實(shí)際的劑量隨著配制的特定組合物、使用的特定化合物、應(yīng)用的方式和待治療的特定部位、宿主以及病癥而變化。應(yīng)該考慮到能影響藥物作用的許多因素，包括年嶺、體重、性別、食物、服藥的時(shí)間、給藥的途徑、排泄的速度、病人的狀態(tài)、配合使用的藥物、反應(yīng)的敏感性和病癥的嚴(yán)重程度等。
以下的實(shí)施例僅僅是為了說(shuō)明本發(fā)明，不能認(rèn)為是限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由附加于說(shuō)明書的權(quán)利要求限定。4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的制備(4′-CBZ-etoposide)。
保持在-15℃，將氯甲酸芐酯(1.98毫升，15毫摩爾)在30分鐘內(nèi)加到etoposide(5.88克，10毫摩爾)和吡啶(10毫升)于二氯甲烷(100毫升)中的混合物中。混合物在-15℃再攪拌1小時(shí)。依次用5%鹽酸碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸去溶劑得到8.05克粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化(5%甲醇-二氯甲烷)得到6.93克(96%)無(wú)色的半固體的4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，熔點(diǎn)152-155℃。
IRνmax(Nujol)cm-13200-3600(OH)，1760(丙酮和4′-O-芐氧羰基)，1600(芳香)1H NMR(60MHz，CDCl3)δ7.36(5H，s，OCO2CH2Ph)，6.81(1H，s，5-H)，6.50(1H，s，8-H)，6.25(2H，s，2′-and 6′-H)，5.94(2H，br.s，O-CH2-O)，5.23(2H，s，-OCO2CH2Ph)，4.89(1H，d，J＝4Hz，4-H)，3.66(6H，s，3′，5′-OCH3)，2.8-3.0(2H，m，2″，3″-OH，D2O exchanged)，1.38(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
實(shí)施例12″，3″-二-O-乙?；砉砭识具拎咸沁?Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝R4＝CH3CO-)的制備(a)4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二-O-乙酸酯的制備將乙酸酐(1毫升)加到4′-CBZ-etoposide(500毫克，0.69毫摩爾)的吡啶(10毫升)溶液中，混合物于室溫下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物以甲醇(2毫升)驟冷，以二氯甲烷稀釋，然后依次用水、5%鹽酸和水洗滌。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥、過(guò)濾，并將濾液減壓濃縮，得到無(wú)色固體(551毫克，99%)。粗固體在甲醇中重結(jié)晶，得到無(wú)色晶體4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二-O-乙酸酯(第一次395毫克，第二次60毫克)，熔點(diǎn)236-238℃。
IRνmax(KPr)cm-13500(br)，1770，1610.
UVλmax(MeOH)nm(ε)290(3950).
元素分析C41H42O17計(jì)算值C，61.04;H，5.25實(shí)測(cè)值C，60.64;H，5.36(b)2″，3″-二-O-乙?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙的制備在1大氣壓下，(a)步產(chǎn)物(405毫克，0.5毫摩爾)溶于乙醇-丙酮(4∶1，15毫升)的攪拌著的溶液，在10%Pd-C(400毫克)存在下，氫化1.5小時(shí)，然后濾除催化劑。將濾液減壓濃縮，得到無(wú)色固體(360毫克，約100%)，在乙酸乙酯-甲醇中重結(jié)晶，得到無(wú)色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(204毫克)，測(cè)定純度90%(HPLC)，熔點(diǎn)287-289℃IRνmax(KBr)cm-13500(br)，1760，1610.
UVλmax(MeOH)nm(ε)240(sh，12780)，285(4060).
元素分析C33H36O15
計(jì)算值C，58.93;H，5.39實(shí)測(cè)值C，58.56;H，5.41實(shí)施例24′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-O-乙酸酯與3″-O-乙酸酯的制備保持在-10℃，將乙酸酐(20微升，0.18毫摩爾)和4-二甲氨基吡啶(5毫克)加到4′-CBZ etoposide(142毫克，0.2毫摩爾)溶于吡啶(8毫升)的溶液中?；旌衔镌?10℃攪拌30分鐘，再加入附加的乙酸酐(20微升，0.18毫摩爾)。反應(yīng)混合物在-10℃再攪拌30分鐘，然后以二氯甲烷稀釋，依次用水、5%鹽酸、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。用Na2SO4干燥有機(jī)相，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到含有四個(gè)組份的無(wú)色粉末(117毫克)(硅膠TLC，Rf值0.56、0.46、0.34和0.24;己烷/丙酮＝1/1)?；旌衔镆怨枘z柱層析分離(2.5%甲醇-二氯甲烷)。合并Rf值為0.56的洗脫部分并減壓蒸干，得到1毫克(1%)2″，3″-二-O-乙酰基-4，-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(4)。與此類似，從Rf值為0.46、0.34和0.24的洗脫液部份分別得到3″-O-乙酰基-4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(3)、2″-O-乙?；?4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(2)和無(wú)色粉狀的4″-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(1，60毫克，42%)。從各個(gè)洗脫液餾份之間的相接部分可以得到3和4(18毫克)、2和3(15毫克)以及1和2(6毫克)的混合物。
2″-O-乙?；?4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，熔點(diǎn)224-227℃。
IRνmax(KBr)cm-13400(br)，1740，1600.
UVλmax(MeOH)nm(ε)291(4200).
元素分析C39H40O16·1/2H2O計(jì)算值C，61.25;H，5.27實(shí)測(cè)值C，60.84;H，5.253″-O-乙?；?4′-O-芐氧羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，熔點(diǎn)139-145℃IRνmax(KBr)cm-13500(br)，1770，1600.
UVλmax(MeOH)nm(ε)291(3920).
元素分析C39H40O16·1/2H2O計(jì)算值C，60.54;H，5.34實(shí)測(cè)值C，60.27;H，5.26實(shí)施例32″-O-乙?；砉砭识具拎咸沁?Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝CH3CO-，R4＝H)的制備用2″-O-乙?；?4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(25毫克，0.03毫摩爾)按照實(shí)施例1步(b)描述的步驟，得到無(wú)色粉狀的標(biāo)題化合物(21毫克，約100%)。測(cè)得的純度為90%(HPLC法)。熔點(diǎn)144-147℃。
IRνmax(KBr)cm-13450(br)，1770，1740，1610.
UVλmax(MeOH)nm(ε)240(sh 12900)，284(4030).
元素分析C31H34O14計(jì)算值C，59.04;H，5.43實(shí)測(cè)值C，58.65;H，5.46實(shí)施例43″-O-乙?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝H，R4＝CH3CO)的制備用3″-O-乙?；?4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(10毫克，0.01毫摩爾)按照實(shí)施例1步(b)描述的步驟，得到無(wú)色粉末的標(biāo)題化合物(9毫克，約100%)。測(cè)得的純度為85%(HPLC法)。
熔點(diǎn)226-228℃IRνmax(KBr)cm-13450(br)，1760，1610.
UVλmax(MeOH)nm(ε)240(sh，12610)，285(3960).
元素分析C31H34O14·1/2H2O計(jì)算值C，58.21;H，5.52實(shí)測(cè)值C，58.22;H，5.42實(shí)施例5從2和3的混合物制備2″-O-乙酰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙和3″-O-乙?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙在1大氣壓下，在10%Pd-C(30毫克)存在下，攪拌并氫化2和3的混合物(60毫克，0.08毫摩爾)于乙醇-丙酮(4∶1，5毫升)的溶液，氫化結(jié)束后濾除催化劑。濃縮濾液，得到區(qū)域異構(gòu)體混合物(50毫克，約100%)，以硅膠柱層析分離此混合物，得到無(wú)色粉狀的2″-O-乙?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙(10毫克，20%)、3″-O-乙酰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(4毫克，8%)和它們的混合物(30毫克，61%)。
實(shí)施例6制備2″，3″-二-O-甲?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅷ;R1＝CH3，R2＝H，R3＝R4＝HCO-)a.4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二-O-甲酸酯的制備在0℃，向4′-CBZ etoposide(100毫克，0.14毫摩爾)的吡啶(0.7毫升)溶液中滴入99%甲酸(1.4毫升)和乙酸酐(0.56毫升)的混合物。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入二氯甲烷稀釋，然后用水洗滌。以Na2SO4干燥有機(jī)相，濾除硫酸鈉，濾液減壓濃縮，得到無(wú)色固體(122毫克)，以硅膠柱層析(甲醇∶二氯甲烷＝1∶50)純化該固體，得4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-3″-二-O-甲酸酯(91毫克，84%)無(wú)定形粉末。
1H NMR(CDCl3)δ8.04 & 7.80(each 1H，s，CHO)，7.36(5H，s，PhCH2CO)，6.72(1H，s，H-5)，6.53(1H，s，H-8)，6.23(2H，s，2′，6′-H)，5.97(2H，s，OCH2O)，5.23(2H，s，PhCH2)CO)，5.4-4.0(9H，m)，3.66(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.6-2.6(6H，m)，1.35(3H，d，J＝5Hz，8″-CH3).
b.2″，3″-二-O-甲?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙的制備在1大氣壓下，在10%Pd-C(50毫克)存在下，攪拌并氫化(a)步的產(chǎn)物(71毫克，0.009毫摩爾)于乙醇-丙酮(4∶1，2.5毫升)的溶液1.5小時(shí)。濾除催化劑并減壓濃縮濾液，得到無(wú)色粉狀的標(biāo)題化合物(59毫克，約100%)。用HPLC法測(cè)得其純度為80%。
熔點(diǎn)278-280℃IRνmax(KBr)cm-13400，1760，1740，1610UVλmax(MeOH)nm(ε)236(sh，14，100)，285(4，230)1H NMR(CDCl3)δ8.04 & 7.83(each 1H，s，CHO)，6.72(1H，s，H-5)，6.53(1H，s，H-8)，6.23(2H，s，2′，6′-H)，5.98(2H，s，OCH2O)，5.6-4.1(9H，m)，3.76(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.7-2.6(6H，m)，1.35(3H，d，J＝5Hz，8″-CH3).
元素分析C31H32O15計(jì)算值C，57.26;H，5.00實(shí)測(cè)值C，57.09;H，5.00實(shí)施例74″-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-O-苯甲酸酯，3″-O-苯甲酸酯以及2″，3″-二-O-苯甲酸酯的制備將苯甲酰氯(100微升，0.86毫摩爾)加到4′-O-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(500毫克，0.7毫摩爾)于吡啶(5毫升)的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天，以二氯甲烷稀釋，然后依次用水、5%鹽酸和水洗滌。有機(jī)層用Na2SO4干燥、過(guò)濾、減壓濃縮濾液，得到含有三種新成份的淡黃色油(硅膠薄層層析∶二氯甲烷/甲醇＝100/1;Rf值各為0.50、0.38和0.21)。以硅膠柱層析(40%己烷-丙酮)分離該混合物，得到2″，3″-二-O-苯甲酸酯7(Rf值0.50，30毫克，5%)、3″-O-苯甲酸酯6(Rf值0.38，227毫克，40%)、2″-O-苯甲酸酯5(Rf值0.21，70毫克，12%)和回收4′-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙1(215毫克，43%)。
4′-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-O-苯甲酸酯(5)
IRνmax(KBr)cm-13400(br)，1700，1720，1600UVλmax(MeOH)nm(ε)281(4，050)1H NMR(CDCl3)δ7.3-7.9(10H，m，2xC6H5，5.17(1H，t，J＝8Hz，2″-HO，5.01(1H，d，J＝8Hz，1″-H)，4.77(1H，q，J＝5Hz，7″-H)，3.2-3.8(1H，m，3″-H)，2.75(1H，br，3″-OH)，1.31(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
元素分析C44H42O16計(jì)算值C，63.92;H，5.12實(shí)測(cè)值C，63.80;H，5.174′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-O-苯甲酸酯(6)IRνmax(KBr)cm-13500(br)，1770，1600UVλmax(MeOH)nm(ε)225(sh，30，890)，281(4，300)1H NMR(CDCl3)δ7.4-8.0(10H，m，2xC6H5，5.34(1H，t，J＝9Hz，3″-H，4.74(1H，d，J＝8Hz，1″-H)，4.68(1H，q，J＝5Hz，7″-H)，3.60(1H，m，2″-H)，1.28(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
元素分析C44H42O16計(jì)算值C，62.55;H，5.25實(shí)測(cè)值C，62.73;H，5.294′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二-O-苯甲酸酯(7)
IRνmax(KBr)cm-11770，1730，1600UVλmax(MeOH)nm(ε)227(sh，40，270)，282(4，550)1H NMR(CDCl3)δ7.3-7.9(10H，m，2xC6H5)，5.55(1H，t，J＝8Hz，3″-H)，5.32(1H，t，J＝8Hz，2″-H)，4.93(1H，d，J＝8Hz，1″-H)，4.50(1H，q，7″-H)，1.31(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
元素分析C51H46O17計(jì)算值C，65.80;H，4.55實(shí)測(cè)值C，65.28;H，4.98實(shí)施例8制備2″-O-苯甲?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝PhCO-，R4＝H)在1大氣壓下，在10%Pd-C(50毫克)存在下，攪拌并氫化4′-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-O-苯甲酸酯(54毫克，0.07毫摩爾)于乙醇-丙酮(2∶1，3毫升)的溶液2小時(shí)。濾除催化劑并減壓濃縮濾液，得到無(wú)色粉狀的標(biāo)題化合物(40毫克，88%)。用HPLC法測(cè)得其純度為95%。
熔點(diǎn)289-292℃。
IRνmax(KBr)cm-13450，1760，1730UVλmax(MeOH)nm(ε)283(4，470)1H NMR(CDCl3)δ7.4-7.8(5H，m，COC6H5)，5.07(1H，dd，J＝7.7 & 9.2Hz，2″-H)，4.89(1H，d，J＝7.7Hz，1″-H)，4.80(1H，q，J＝5.1Hz，7″-H)，4.23(1H，dd，J＝4.8 & 10.3Hz，6″-Heq)，3.98(1H，dt，J＝3.3 & 9.2Hz，3″-H)，3.64(1H，t，J＝10.3Hz，6″-Hax)，3.47(1H，t，J＝9.2Hz，4″-H)，3.40(1H，dt，J＝4.8 & 10Hz，5″-H)，2.74(1H，d，J＝3.3Hz，3″＝OH)，1.41(3H，d，J＝5.1Hz，7″-CH3).
元素分析C36H36O14·H2O計(jì)算值C，60.84;H，5.11實(shí)測(cè)值C，61.10;H，5.40實(shí)施例93″-O-苯甲?；?表鬼臼毒吡喃葡糖甙的制備(Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝H，R4＝PhCO-)按照實(shí)施例8的步驟，將4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-O-苯甲酸酯(34毫克，0.04毫摩爾)氫化，得到無(wú)色固體的標(biāo)題化合物(27毫克，95%)，將此固體在硅膠柱上層析純化，得到無(wú)色結(jié)晶。用HPLC法測(cè)得其純度為95%。
熔點(diǎn)188-191℃。
IRνmax(KBr)cm-13400(br)，1730.
UVλmax(MeOH)nm(ε)223(35，900)，280(4，030).
1H NMR(CDCl3)δ7.4-7.8(5H，m，COPh)，5.38(1H，t，J＝9.2Hz，3″-H)，4.79(1H，d，J＝7.7Hz，1″-H)，4.72(1H，q，J＝5.1Hz，7″-H)，4.22(1H，dd，J＝5 & 10Hz，6″-Heq)，3.67(1H，brt，J＝8Hz，2″-H)，3.61(1H，t，J＝10Hz，6″-Hax)，3.59(1H，t，J＝9.4Hz，4″-H)，3.47(1H，m，5″-H)，2.58(1H，br，2″-OH)，1.31(3H，d，J＝5.1Hz，7″-CH3).
元素分析C36H36O14·2H2O計(jì)算值C，59.31;H，4.98實(shí)測(cè)值C，59.14;H，5.10實(shí)施例10
2″，3″-二-O-苯甲酰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅷ，R1＝CH3，R2＝H，R3＝R4＝Phco-)的制備按照實(shí)施例8的步驟，攪拌并氫化4′-O-芐氧羰基-表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二-O-苯甲酸酯(130毫克，0.14毫摩爾)于乙酸乙酯-乙醇-丙酮(4∶4∶1，4.5毫升)的溶液，得到無(wú)色粉末狀的標(biāo)題化合物(112毫克，約100%)，用APLC法測(cè)得其純度為90%。熔點(diǎn)＞295℃。
IRνmax(KBr)cm-11770，1730.
UVλmax(MeOH)nm(ε)226(sh，24，200)，281，(3，470).
1H NMR(CDCl3)δ7.3-8.0(10H，m，2xCOC6H5)，5.67(1H，t，J＝9.5Hz，3″-H)，5.35(1H，dd，J＝8.1 & 9.7Hz，2″-H)，498(1H，d，J＝8.1Hz，1″-H)，4.73(1H，q，J＝4.8Hz，7″-H)，4.28(1H，dd，J＝4.4 & 10.3Hz，6″-Heq)，3.69(1H，t，J＝9.5Hz，4″-H)，3.67(1H，t，J＝10Hz，6″-Hax)，3.56(1H，dt，J＝9.5 & 10Hz，5″-H)，1.33(3H，d，J＝4.8Hz，7″-CH3).
元素分析C43H40O15·H2O計(jì)算值C，63.39;H，5.20實(shí)測(cè)值C，62.99;H，4.99實(shí)施例11用4′-CBZ-表鬼臼毒噻吩糖甙代替4′-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙進(jìn)行實(shí)施例1描述的實(shí)驗(yàn)步驟，得到2″，3″-二-O-乙?；?表鬼臼毒噻吩糖甙。
實(shí)施例12用4′-CBZ-表鬼臼毒噻吩糖甙代替4′-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙重復(fù)實(shí)施例2-4描述的實(shí)驗(yàn)步驟，得到2″-O-乙?；?表鬼臼毒噻吩糖甙和3″-O-乙?；?表鬼臼毒噻吩糖甙。
實(shí)施例13用4′-CBZ-表鬼臼毒噻吩糖甙代替4′-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙重復(fù)實(shí)施例6描述的實(shí)驗(yàn)步驟，得到2″，3″-二-O-甲醛基-表鬼臼毒噻吩糖甙。
實(shí)施例14用4′-CBZ-表鬼臼毒噻吩糖甙代替4′-CBZ-表鬼臼毒吡喃葡糖甙重復(fù)實(shí)施例7-10的實(shí)驗(yàn)步驟，得到2″-O-苯甲?；?表鬼臼毒噻吩糖甙、3″-O-苯甲?；?表鬼臼毒噻吩糖甙和2″，3″-二-O-苯甲?；?表鬼臼毒噻吩糖甙。
權(quán)利要求
1.一種含抗腫瘤有效量式(Ⅷ)化合物作為活性成分的組合物的制備方法，
其中，R2為氫，R1選自如下基團(tuán)(C1-10)烷基、(C2-10)鏈烯基、(C5-6)環(huán)烷基、2-呋喃基、2-噻吩基、(C6-10)芳基和(C7-14)芳烷基；或R1和R2各為(C1-10)烷基；或R1、R2與其所連接的碳原子一起表示(C5-6)環(huán)烷基；R3與R4之一為氫，而另一個(gè)選自(C1-5)烷?；捅郊柞；?；或R3與R4相同，均選自(C1-5)烷酰基和苯甲?；籖5為H或一個(gè)磷?；?；該方法包括上述活性化合物與藥物學(xué)上可接受的載體相混合。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中式(Ⅷ)所示的活性化合物可以按如下反應(yīng)制備，使式(Ⅸa)所示的4′-酚基被保護(hù)的4′-去甲基表鬼臼毒葡糖甙與所需要的羧酸或其酰化等價(jià)物反應(yīng)，然后再除去酚保護(hù)基，
ⅨaY＝保護(hù)基ⅨbY＝H。
3.如權(quán)利要求2的方法，其中，R2為H，R1選自甲基、2-噻吩基和苯基。
4.如權(quán)利要求3的方法，其中R1為甲基。
5.如權(quán)利要求2的方法，其中R3與R4各為(C1-5)烷?；?。
6.如權(quán)利要求2的方法，其中，R3和R4中的一個(gè)為H，而另一個(gè)為(C1-5)烷酰基或苯甲?；?。
7.如權(quán)利要求5的方法，其中，R2為H，而R1選自甲基和2-噻吩基。
8.如權(quán)利要求7的方法，其中，R1為甲基，R3和R4都是甲酰基，R5為H。
9.如權(quán)利要求7的方法，其中，R1為甲基，R3和R4都是乙?；?，R5為H。
10.如權(quán)利要求4的方法，其中，R3和R4都是苯甲?；琑5為H。
11.如權(quán)利要求4的方法，其中，R5為H，R3和R4中的一個(gè)為H，而另一個(gè)為(C2-5)烷?；?br> 12.如權(quán)利要求4的方法，其中，R5為H，R3和R4中的一個(gè)為H，而另一個(gè)為苯甲?；?。
全文摘要
本文所公開的表鬼臼毒葡糖甙為在其結(jié)構(gòu)的糖部分的一個(gè)或兩個(gè)羥基上是被?；说?。這些化合物對(duì)P388鼠白血病顯示了顯著的活性。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1047869SQ90104190
公開日1990年12月19日 申請(qǐng)日期1990年6月4日 優(yōu)先權(quán)日1989年6月7日
發(fā)明者大沼毅, 小畠利嘉, 亀井英夫, 內(nèi)藤隆之 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁克斯斯奎布公司