專利名稱：用于預(yù)防性病及治療尿道滴蟲病的藥物制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更準(zhǔn)確地說，涉及用于個(gè)人預(yù)防性病及治療尿道滴蟲病的藥物制劑的制備方法。
按推薦的方法制得的藥物制劑已臨床應(yīng)用于皮膚性病和婦科病。
現(xiàn)在，在醫(yī)學(xué)上用于個(gè)人預(yù)防性病的藥物，已眾所周知的有銀制劑，高錳酸鉀制劑和汞制劑，例如升汞溶液，甘汞軟膏，“дуьлозан”軟膏。已有人提出使用“ОксирирдоΛ”制劑來預(yù)防梅毒和淋病，這種制劑是用0.035%(重量)的含氧氰化汞(Оксициаистаяртуть)和綠肥皂溶于甘油〔在甘油中占50%(重量)〕中而制得(М.Х.ъерго
ьц“
”1952年，
)。但是這種制劑對(duì)于梅毒和淋病的病原體沒有足夠的殺菌活性，而且它對(duì)尿道粘膜有較強(qiáng)的刺激作用并能引起上皮外表的脫屑和溶解，因此在臨床上是不安全的。由于上述的制劑缺乏足夠的可靠性，而一些汞制劑又不能保證對(duì)人體無害，因此這些制劑都沒有得到廣泛的實(shí)際應(yīng)用。
近年來，有人提出用0.05～0.1%的雙氯苯雙胍己烷(ХΛоргексидин)(洗必太)溶液作為用于預(yù)防性病的藥物制劑。在試管內(nèi)進(jìn)行的試驗(yàn)以及在動(dòng)物身上進(jìn)行的試驗(yàn)皆表明，上述這種制劑具有足夠的殺菌活性(вестник дермато
огии и венеро
огии，1978年第6期;
49頁)。但是，當(dāng)把這種制劑應(yīng)用于臨床時(shí)，發(fā)現(xiàn)它對(duì)人的皮膚及性器官的粘膜有刺激作用并能使其變得干燥。在生產(chǎn)條件下，洗必太的制備是很復(fù)雜的，并要求大量的勞動(dòng)消耗。
用于治療尿道滴蟲病的外用藥物有硼酸，硝酸銀，硫酸鋅，硫酸銅，左旋霉素和乙酰胂胺(
)等。這些制劑的效果不夠好，因此也沒有得到廣泛的應(yīng)用。
現(xiàn)在，用于治療這些疾病的最有效的藥物為咪唑制劑，例如磺甲硝咪唑(
)、滅滴靈(
)、
。但是，在把這些藥物應(yīng)用于臨床時(shí)，發(fā)現(xiàn)滴蟲對(duì)這些藥物的作用產(chǎn)生愈來愈大的抗藥性，因此，這造成病情的某種階段的復(fù)發(fā)(達(dá)8.4%)并會(huì)引起滴蟲病后遺癥，這些制劑可引起副作用，當(dāng)造血系統(tǒng)破壞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)性發(fā)病時(shí)，這些藥物被禁止使用。
本發(fā)明的基本任務(wù)是要研究出制備這樣一種藥物制劑的方法，所說的這種藥物可以方便的藥品形式用于性病的個(gè)人預(yù)防以及對(duì)滴蟲病的治療，這種藥物在臨床應(yīng)用時(shí)具有很高的療效并且不會(huì)引起副作用。
為解決所述任務(wù)，提出了用于預(yù)防性病及治療尿道滴蟲病的藥物制劑的制備方法，根據(jù)本發(fā)明，該種制劑的制備是將有效量的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛
與二甲基亞砜混合成溶液狀的協(xié)同作用混合物，并以藥用稀釋劑來稀釋到預(yù)定的濃度。
該種方法可以保證獲得一種能高效預(yù)防性病和治療尿道滴蟲病的制劑。
這些由活性組分混合而成的上述化學(xué)組合物具有各種不同的作用機(jī)理，這些組合物在整體上起增效協(xié)同作用，它能導(dǎo)致梅毒，淋病和滴蟲病的病原體的原生質(zhì)和細(xì)胞壁的完全破壞，并可保證所獲得的制劑具有殺菌和殺死原生動(dòng)物的能力。在這種制劑的作用下，只要3分鐘就能使病原體分解。
這種方法的工藝簡單，方便，并且在工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的條件下不需要大量的勞動(dòng)消耗。所有的組分對(duì)生產(chǎn)的操作人員都是無害的。
使用分子量為400的聚乙二醇適合在本發(fā)明的方法中作為藥物稀釋劑，使用上述的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛，二甲基亞砜和分子量為400的聚乙二醇合適的重量比為0.3∶5.0∶94.7。
帶有這種稀釋劑的制劑對(duì)皮膚和粘膜表層沒有局部的刺激作用。這種稀釋劑沒有毒性，而且是滲透活性物質(zhì)，因而能促使活性組分顯露出最大的生物活性。但是，為此目的也可使用一些常用的其它藥物稀釋劑，例如甘油，丙撐二醇，1，2-丙二醇。按所說組分比例制備的液體藥物形式的制劑，當(dāng)這些藥物能與已滲入皮膚和粘膜的滴蟲病病原體有良好的接觸時(shí)，就具有高度預(yù)防作用的可靠性和抗滴蟲的治療活性。
為了把藥物制劑制成在以壓力作用于液體狀態(tài)的制劑時(shí)變成氣溶膠的形式，最好往由0.3%(重量)的上述對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛和5%(重量)的二甲基亞砜以及10～30%(重量)的分子量為400的聚乙二醇所組成的溶液中添加入3.0～6.0%(重量)的表面活性物質(zhì)和水，使總量達(dá)到100%(重量)，用丙烯來徹底飽和裝在氣溶膠容器中的所獲的溶液，丙烯的用量約為溶液重量的3～10%。這些物質(zhì)所需數(shù)量的選擇，是要獲得在應(yīng)用時(shí)能迅速破壞的泡沫。
這種方法可以保證獲得這樣一種藥物形式的制劑，它不僅能在必要的情況下保證有抗性病的能力，并且可保證能單獨(dú)地對(duì)需要治療尿道滴蟲病的婦女進(jìn)行治療。
所推薦的制劑是一種粘滯性的透明液體，其顏色從淺黃到深黃，帶有微弱的特殊氣味，它在避光的地方保存時(shí)是穩(wěn)定的。
所說的制劑可以以一種5～10毫升的密封小管瓶的形式或氣溶膠包裝的形式出售。
按照本發(fā)明，我們用所說制劑進(jìn)行了臨床應(yīng)用前的試驗(yàn)，包括用試管和用實(shí)驗(yàn)用梅毒對(duì)兔子進(jìn)行試驗(yàn)以研究制劑的殺菌和殺原生物的活性;研究該制劑的安全性，其中包括研究其急性的和慢性的毒性，局部的刺激作用，過敏反應(yīng)，對(duì)免疫系統(tǒng)的影響，以及其藥理作用的某些方面。
我們對(duì)濃度為0.075%，0.15%和0.3%的制劑進(jìn)行了研究。在制劑中，具有上述化學(xué)式的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛的含量是這樣測(cè)定的。即把二甲基亞砜的含量固定不變(5%)，而以分子量為400的聚乙二醇含量等量變化。以0.3%的濃度來研究制劑的安全性。
為了研究該制劑的殺淋球菌的能力，從淋病患者身上分離出純的淋球菌培養(yǎng)物并接種到大面積的培養(yǎng)基(“褥子”)上。用滅菌的氯化物等滲溶液來從褥子上洗下一晝夜的培養(yǎng)物，從洗出液中得到一種懸浮體，其中含有109個(gè)微生物體(按“標(biāo)準(zhǔn)濁度”)。分別往每一個(gè)滅菌的試管中加入0.5毫升所獲的懸浮液，再各加入0.5毫升兩倍濃度的所研究的制劑，為的是在各組分經(jīng)過5分鐘的混合以后獲得所需要的(所研究的)濃度。將該混合物以每分鐘1500～3000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離10～15分鐘(洗去淋球菌上所帶的制劑)。移去上清液，往沉淀物上再加入1毫升氯化鈉等滲溶液(達(dá)到初始的體積)并進(jìn)行第二次離心(再洗滌一次)。移去上清液，把沉淀物接種到斜置的瓊脂培養(yǎng)基上(用10個(gè)試管的培養(yǎng)基來處理每一份淋球菌株的培養(yǎng)物)。把裝有培養(yǎng)基的試管在恒溫箱中于37℃下在一種具有提高碳酸氣含量的氣氛中放置。在4晝夜期間內(nèi)每24小時(shí)測(cè)定一次淋球菌培養(yǎng)物的增殖情況。
使用相同體積(0.5毫升)的淋球菌培養(yǎng)物的懸浮液和氯化鈉等滲溶液的混合液作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，再次把該溶液分裝到各試管中，如試管試驗(yàn)中的情況相同，離心分離，將沉淀接種到組成相同的介質(zhì)中。
用兔子肉加上水解酪蛋白、沒有防腐劑的酵母細(xì)胞漿及有角大牲畜的血清以及親液介質(zhì)制成肉胨瓊脂作為培養(yǎng)基。
以如下方法研究所說制劑對(duì)試管試驗(yàn)中梅毒螺旋體和陰道滴蟲的作用從一種患了特種睪丸炎8～10日的兔子和患有傳染性梅毒的病人身上獲得梅毒螺旋體。對(duì)尼克累(никоΛос)和№8
(цвки)菌株的組織培養(yǎng)物進(jìn)行研究。從尿道滴蟲病患者身上分離出陰道滴蟲培養(yǎng)物，并用人造的培養(yǎng)基(
)進(jìn)行培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)的方法包括，把相同體積梅毒螺旋體的懸浮液(或滴蟲培養(yǎng)液)和要研究的制劑溶液混合，加入制劑的濃度應(yīng)為所需的兩倍，因?yàn)樵诨旌虾笃錆舛纫档皆瓭舛鹊?/2。由該混合物制備自造的制劑，并在深顏色的(對(duì)梅毒螺旋體和滴蟲)或相一強(qiáng)反差的(對(duì)陰道滴蟲)顯微鏡載臺(tái)上進(jìn)行顯微鏡觀察。根據(jù)對(duì)病原體的遷移率及對(duì)其形態(tài)影響的程度和速率評(píng)價(jià)所試驗(yàn)制劑的作用。可作為肯定的評(píng)價(jià)的有如下幾種情況病原體立刻(指在配入制劑的瞬間)失去活動(dòng)能力，或者對(duì)密螺旋體來說在約3-5分鐘內(nèi)及對(duì)滴蟲來說在5～10分鐘內(nèi)失去活動(dòng)能力。對(duì)所試制劑的作用可認(rèn)為更肯定的結(jié)果是指制劑可改變密螺旋體及滴蟲的形態(tài)，即在上述期間，致病的病原體失去其形態(tài)(梅毒螺旋體變細(xì)，圈狀物舒展開，呈現(xiàn)膨脹的個(gè)體，斷片，或者完全溶解;陰道滴蟲失去鞭毛，碎裂，溶解)。
對(duì)所試制劑殺密螺旋體的效果的其他研究方案包括依次地往一塊玻璃上加一滴梅毒螺旋體的懸浮液和一滴被試藥物;用巴氏滅菌滴管的尖端仔細(xì)地?cái)嚢杌旌衔?，用一塊蓋玻璃蓋上并立即在目視顯微鏡的深色載臺(tái)上進(jìn)行觀察。該研究使在被藥物與懸浮液接觸約20～30秒之后能夠顯示出該藥物對(duì)密螺旋體的作用。為了與這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對(duì)照，用等體積的梅毒螺旋體(在視野中有20～30至80個(gè)菌體)或陰道滴蟲的懸浮物與氯化鈉等滲溶液的混合物作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)。在“
”顯微鏡的深色載臺(tái)上并借助于“Opton”公司產(chǎn)的顯微鏡對(duì)該制劑的作用進(jìn)行顯微鏡觀察，該種顯微鏡有深色載臺(tái)(
)與具有相差的聚光鏡和物鏡(25×0.45;40×0.60)。
為了研究所說制劑的預(yù)防作用，在實(shí)驗(yàn)性梅毒的試驗(yàn)中，利用一些性成熟的、營養(yǎng)好的，體重在2.5至4公斤之間的不同種類與毛色的雄性兔子(智利兔，白色，灰色或銀白色)。
為了把患自發(fā)性螺旋體病的兔子排除在外，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以前對(duì)所有的兔子都先觀察一個(gè)月以上。所有這些兔子在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以前都用對(duì)梅毒起血清反應(yīng)的絡(luò)合物來進(jìn)行過觀察。
在兔子的實(shí)驗(yàn)性梅毒試驗(yàn)中，以兩種平行的實(shí)驗(yàn)方案來研究所說制劑的預(yù)防效果。
第一種方案包括在皮下注入梅毒螺旋體懸浮液與所說制劑的混合物以研究該制劑的滅密螺旋體的效果。為此目的，用已知的常規(guī)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)用兔進(jìn)行皮下試驗(yàn)，在每個(gè)兔子的陰囊的兩半部，各注入0.75毫升的由梅毒螺旋體懸浮液與兩倍濃度的被試制劑按等體積組成的混合物(因?yàn)樵谂c懸浮液混合后他們的濃度都相應(yīng)降到原來的1/2)。
在把上述組分接觸并以滅菌玻璃棒攪拌10分鐘后立即將這種混合物注入一組兔子體內(nèi)。在把上述混合物與等體積滅菌氯化鈉等滲溶液接觸10分鐘并加以離心(為了洗去制劑)后，然后注入另一組兔子體內(nèi)。
進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)的目的是為了排除所說制劑在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)介質(zhì)中失活(發(fā)生沉淀)以及因此喪失其滅菌效果的可能性。以離心后注入密螺旋體懸浮液的方式，確定了當(dāng)所說制劑在經(jīng)過它對(duì)梅毒螺旋體作用10分鐘后就已達(dá)到足夠的殺死密螺旋體的效果。對(duì)于作對(duì)照用的兔子，將梅毒螺旋體的懸浮液與氯化鈉等滲溶液的等體積混合物皮下注入兔子的陰囊部位。
第二種實(shí)驗(yàn)的基本方案包括進(jìn)行這樣的實(shí)驗(yàn)，在此實(shí)驗(yàn)中要使得兔子感染梅毒的條件在一定程度上要盡量接近于在自然條件下人類感染梅毒的條件。為此，把溶于氯化鈉等滲溶液中的梅毒螺旋體懸浮液從陰囊的皮膚擦破處涂擦，以使兔子發(fā)生感染。為此，預(yù)先把一塊棉花塞在酒精中蘸，然后再在乙醚中蘸，再用它來擦拭陰囊的皮膚。然后，用左手的手指把陰囊的這處皮膚最大程度的展開，同時(shí)，右手用細(xì)砂紙依次地把陰囊兩半部分的皮膚擦破。被擦破處的面積約1～1.5厘米2，擦?xí)r應(yīng)注意使被摩擦的皮膚表面粗糙化達(dá)到局部流出少量組織液的程度。注意應(yīng)避免出血。然后重新準(zhǔn)備梅毒病原體的懸浮液，使其含量達(dá)到在顯微鏡的視野下達(dá)到20～25個(gè)梅毒螺旋體，然后取0.1毫升加到陰囊皮膚的擦破處，并以一個(gè)滅菌的玻璃小鏟摩擦1～1.5分鐘。然后，用兩個(gè)neaH夾具在離開加有傳染物處不小于0.5厘米的地方夾住，使兩個(gè)夾子互相十字交叉，為的是使皮膚形成皺紋，這樣可避免密螺旋體干燥(為了形成最好的感染條件-根據(jù)С.Т.ПавΛов的敘述)。把兩夾子交叉地夾住約1～1.5小時(shí)，然后把夾子取開。
在被試驗(yàn)的兔子進(jìn)行感染處理后經(jīng)過不同的時(shí)間間隔(經(jīng)過15分鐘，1小時(shí)，2小時(shí)和3小時(shí))、然后對(duì)兔子進(jìn)行消毒處理。這種消毒處理包括往陰囊皮膚的各被感染部位加上0.1毫升被試驗(yàn)的制劑并用玻璃小鏟仔細(xì)地摩擦1～1.5分鐘。對(duì)用來作對(duì)照的兔子則不作消毒處理。
對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在4-12個(gè)月內(nèi)每周進(jìn)行一次臨床觀察和每月用對(duì)梅毒起血清反應(yīng)的絡(luò)合物來進(jìn)行血清檢驗(yàn)，所說的血清反應(yīng)有心磷脂與密螺旋體抗原的Вассерман反應(yīng)，Кан和3акс-Вцтеъский的沉淀反應(yīng)，免疫螢光反應(yīng)(РИφ和РИφ-200)以及微量沉淀反應(yīng)(РМП)。
評(píng)價(jià)兔子對(duì)梅毒的預(yù)防作用的可靠性是根據(jù)以下的事實(shí)，即在兔子身上沒有出現(xiàn)致病的臨床現(xiàn)象和血清反應(yīng)表現(xiàn)為陰性，以及根據(jù)二次接連傳代中從被實(shí)驗(yàn)的兔子身上腘部的淋巴結(jié)移植給指示兔子呈陰性結(jié)果。最終結(jié)果表明，用同系的梅毒螺旋體菌株給被試驗(yàn)的和傳代的兔子再接種時(shí)取得了肯定的結(jié)果。
在所有的實(shí)驗(yàn)中所使用的都是新制備的никоΛъс梅毒螺旋體菌株的懸浮液。
以下給出了對(duì)所說制劑的特殊活性的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果。
制劑對(duì)нейссер淋球菌的滅菌作用用從7個(gè)女病人和5個(gè)男病人身上分離出的12組病原體菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所說制劑完全抑制了淋球菌培養(yǎng)物的生活機(jī)能。在所有的試驗(yàn)試管中，沒有一個(gè)試管顯示出淋球菌培養(yǎng)物得到增長，而在所有的對(duì)比試管中卻觀察到培養(yǎng)物顯著的增長。
制劑的殺密螺旋體的活性實(shí)驗(yàn)表明，在制劑的作用下幾乎使梅毒螺旋體瞬間即失去活力，同時(shí)當(dāng)制劑與梅毒病原體接觸后在3～4分鐘內(nèi)即能把梅毒病原體破壞直到完全溶解。在接觸后的第一分鐘內(nèi)已出現(xiàn)被破壞的密螺旋體的個(gè)別的碎片，長條的不動(dòng)的變細(xì)了的“絲”和“帶”(由于彈簧卷展開的結(jié)果)，而在多數(shù)制劑的情況則出現(xiàn)由溶解的病原體組成的細(xì)粒形式的無定形蛋白質(zhì)的群體。在制劑的影響下，不管是никоΛъс菌株或是8號(hào)ЦКВИ菌株的梅毒螺旋體都受到同樣的破壞作用。制劑的殺密螺旋體的活性對(duì)所有從傳染性梅毒病人身上直接分離出的病原體來說都沒有任何程度上的差別。以實(shí)驗(yàn)用梅毒來對(duì)兔子所作的試驗(yàn)也獲得了殺密螺旋體的效果。在這些實(shí)驗(yàn)中共使用了120只公兔。對(duì)兔子的睪丸陰囊部位的皮膚擦破處引入感染物質(zhì)后的15分鐘至3小時(shí)的期間內(nèi)用所說的制劑對(duì)感染的部位進(jìn)行預(yù)防處理，結(jié)果，動(dòng)物對(duì)梅毒感染的預(yù)防達(dá)到100%。同時(shí)，在使用梅毒螺旋體在氯化鈉等滲溶液的懸浮液與所說制劑的等體積混合物對(duì)兔子進(jìn)行皮下感染的實(shí)驗(yàn)，也獲得了預(yù)防梅毒的肯定結(jié)果。
結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)兔子對(duì)梅毒的預(yù)防是完全可靠的，在這些兔子中，既沒有發(fā)現(xiàn)患病的臨床癥狀，又對(duì)梅毒的血清反應(yīng)呈陰性(對(duì)動(dòng)物觀察了4至12個(gè)月)，而且，在兩次連續(xù)傳代中從實(shí)驗(yàn)兔子身上的腘部淋巴結(jié)移植給指示兔子呈陰性結(jié)果(從實(shí)驗(yàn)兔子移植給第一代指示兔子，再從第一代指示兔子移植給第二代指示兔子)，對(duì)梅毒的血清反應(yīng)也呈陰性。實(shí)驗(yàn)證明，用梅毒螺旋體的同系菌株進(jìn)行再接種，不管是對(duì)實(shí)驗(yàn)兔子本身，還是對(duì)傳代的兔子來說，都獲得了肯定的結(jié)果。
在對(duì)實(shí)驗(yàn)兔子進(jìn)行皮下感染的情況下兔子對(duì)梅毒的預(yù)防能力證明，只要制劑與梅毒螺旋體接觸10分鐘，就足以完全消滅梅毒病原體的生命活力。另一方面也表明，制劑在作為兔子有機(jī)組織的蛋白質(zhì)介質(zhì)中同樣是穩(wěn)定的。
制劑對(duì)陰道毛滴蟲(trichomonasVaginales)的作用用從患有尿道滴蟲病的13個(gè)女病人和3個(gè)男病人身上分離出來的共16種陰道滴蟲菌株，在試管中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，制劑具有很強(qiáng)的殺原生物活性(進(jìn)行了256次對(duì)制劑的顯微鏡觀察研究)。在制劑的作用下的第一分鐘內(nèi)，陰道滴蟲就已失去了活動(dòng)能力并脫落了鞭毛。在以后2-3分鐘內(nèi)，原生物就完全碎裂，只在個(gè)別的對(duì)制劑的顯微鏡觀察中，發(fā)現(xiàn)有個(gè)別的失去活力能力的沒有鞭毛的末碎裂的滴蟲。
為了研究制劑的安全性，我們測(cè)定了它的急性和慢性的毒性，它對(duì)皮膚和粘膜的局部刺激以及它的過敏反應(yīng)和免疫作用。同時(shí)，還研究了把制劑應(yīng)用于皮膚和使其進(jìn)到粘膜時(shí)所產(chǎn)生的藥理作用。
對(duì)四種動(dòng)物進(jìn)行了制劑的急性毒性測(cè)定。利用以下四種動(dòng)物進(jìn)行了四組實(shí)驗(yàn)，它們是150只平均體重為18.5克的小白鼠。18只大白鼠(165克)，18只兔子(3000克)和12只豚鼠(400克)。在計(jì)算被試制劑的一次劑量時(shí)，考慮了將來把它實(shí)際應(yīng)用于人類的情況(對(duì)平均體重為70公斤的人來說，每一公斤體重為0.07毫升)。
考慮到制劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)的特點(diǎn)(擦于皮膚和引入陰道)，研究了ЦидпоΛ制劑的毒性，除了進(jìn)行皮下注射(對(duì)大白鼠，小白鼠)外，還進(jìn)行直接的體內(nèi)注入-對(duì)雌性注入陰道，對(duì)雄性注入直腸(對(duì)大白鼠，豚鼠和兔子)。從施用被試藥物時(shí)起，在14個(gè)晝夜內(nèi)不斷地對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所發(fā)生的情況進(jìn)行肉眼觀察。
用兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)ЦидипоΛ制劑進(jìn)行慢性毒性研究24只體重為170～200克的大白鼠和24只體重為2.5～3.0公斤的絨鼠屬兔子。在一個(gè)月的期間內(nèi)每天投藥。因?yàn)榭紤]到要把制劑實(shí)際應(yīng)用于預(yù)防的目的，所以這次實(shí)驗(yàn)中的單次劑量與進(jìn)行急性的毒性試驗(yàn)時(shí)的劑量相同。
對(duì)一組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(兔子和大白鼠各6只)在一個(gè)月的期間內(nèi)每天投以上述治療劑量的制劑。對(duì)其它一組實(shí)驗(yàn)的兩種動(dòng)物(各6只)，在頭兩個(gè)星期內(nèi)每天投以亞毒性劑量的制劑，即10倍于治療劑量(0.7毫升/公斤)，從第三個(gè)星期起至一個(gè)月結(jié)束這一期間，對(duì)兔子所用的一次劑量為2.1毫升/公斤，而時(shí)大白鼠為3.5毫升/公斤。這后一段期間的劑量相當(dāng)于治療劑量的30至50倍。把另一組實(shí)驗(yàn)的兔子和大白鼠(各6只)作為對(duì)比，對(duì)它們不投以制劑而是投以氯化鈉等滲溶液。給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施用制劑的方法盡可能地接近于給人用藥的情況。對(duì)雌性動(dòng)物是把1/3劑量的制劑注入陰道和直腸，同時(shí)把2/3劑量的制劑加到腿部向內(nèi)的表面和腹部表面拔去絨毛的皮膚上，并接著摩擦1分鐘;對(duì)雄性動(dòng)物則是把1/3的劑量注入直腸，同時(shí)把2/3的劑量加到陰囊、腹部以及腿部向內(nèi)的表面的皮膚上并加以摩擦。
在觀察動(dòng)物的整個(gè)期間內(nèi)重點(diǎn)地觀察其總的狀態(tài)和行為，并測(cè)定物質(zhì)的變化及直腸的溫度。研究了所說制劑對(duì)下列各種臟器功能的影響，這些臟器包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)(ЦНС)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、肝、腎、內(nèi)分泌腺、血液，包括進(jìn)行了對(duì)心、肺、肝、腎和內(nèi)分泌腺的生化研究。在一個(gè)月的投藥過程結(jié)束時(shí)，將動(dòng)物屠宰并對(duì)下列臟器進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)研究，這些臟器包括腦、脊髓、心臟、肺、血管、肝、腎、胰腺、性腺、血液和造血器官(脾和淋巴結(jié))。此外，還對(duì)皮膚及陰道和直腸的粘膜擦涂了制劑的部位進(jìn)行了研究，并測(cè)定了內(nèi)臟器官的重量系數(shù)。每星期測(cè)定一次體內(nèi)的物質(zhì)和直腸的溫度。其它的生理學(xué)指標(biāo)都在實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)后分別記錄下來。對(duì)生物化學(xué)的研究共進(jìn)行三次，即分別在實(shí)驗(yàn)前，2星期后和1個(gè)月后(即在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí))。
對(duì)動(dòng)物的慢性毒性指標(biāo)包括外表的狀態(tài)和行為;體溫和身體物質(zhì)的變化;生理試驗(yàn)(用“開放場(chǎng)地”法，蓋克森納麻醉試驗(yàn)，αKT試驗(yàn)法);尿的臨床研究;末稍血液的組成形態(tài)學(xué)指標(biāo);血液的生化指標(biāo)(總的測(cè)定、直接和間接的膽紅素、肌酸酐、尿素、殘留氮、轉(zhuǎn)氨酶、堿性
活性、血清膽堿酯酶活性、α-淀粉酶活性、總蛋白、麝香草試劑反應(yīng);測(cè)定具有C-反應(yīng)的蛋白);測(cè)定微量元素鉀、鈉、鈣、氯;動(dòng)物內(nèi)部臟器的病理形態(tài)學(xué)研究。
根據(jù)“開放場(chǎng)地”的方法研究了神經(jīng)系統(tǒng)的功能活力，在3分鐘的時(shí)間內(nèi)根據(jù)奔跑、洗浴和站立的次數(shù)來記錄了大白鼠的運(yùn)動(dòng)活力和行為反應(yīng)。此外，在按70.0毫克/公斤的劑量注射了0.7%的蓋克塞納(
)溶液而進(jìn)行的蓋克塞納麻醉試驗(yàn)，根據(jù)潛服期的時(shí)間長短評(píng)價(jià)了中樞神經(jīng)系統(tǒng)(ЦНС)的功能狀態(tài)。
借助于帶有兩路標(biāo)準(zhǔn)生物電流輸出的ЗΛКАР087心動(dòng)電流記錄儀，記錄了心臟的電活力，所用的輸帶機(jī)構(gòu)的速度為50毫米/秒。在處理心電圖時(shí)，計(jì)量了心臟收縮的頻率，一個(gè)完整的心臟搏動(dòng)循環(huán)的時(shí)間間隔R-R、GRS和GRST的間隙，此外，還記錄了G、R、S、T的鋸齒狀電壓值。
在供水(每100克動(dòng)物重量用5毫升氯化鈉等滲溶液)后，根據(jù)一晝夜所排的尿的容積和尿的比重來評(píng)價(jià)腎的排水功能和濃縮功能。根據(jù)殘留氮的濃度、尿的濃度、以及根據(jù)在鮮血的血清中肌酸酐的含量來評(píng)價(jià)腎的排氮功能。
大白鼠的鮮血樣品是從砍斷的尾端取得，而兔子的鮮血樣品是從耳朵邊緣的靜脈取得。血紅素的含量是利用一組標(biāo)準(zhǔn)的試劑按照統(tǒng)一的血紅蛋白氰化法來進(jìn)行光度測(cè)定的。紅血球的含量是用-56M儀進(jìn)行光度測(cè)定的預(yù)先用光度法在φЗК儀的暗室中進(jìn)行紅血球絕對(duì)量的測(cè)定，0.1單位的光密度相當(dāng)于在0.01毫升血液中有1217百萬個(gè)紅血球。紅血球的沉降速度，白血球的總量和白血球的種類按常規(guī)的方法測(cè)定。血中的膽紅素、肌酸肝、尿素、轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白和C-反應(yīng)蛋白的含量使用一組標(biāo)準(zhǔn)試劑按照統(tǒng)一的方法來測(cè)定。
為研究病態(tài)學(xué)，內(nèi)部器官的樣品是從被斷頭的動(dòng)物(大白鼠)或從被隔絕空氣殺死的動(dòng)物(兔子)中選擇。樣品標(biāo)本保存在10%的中性福爾馬林中，并用蘇木精曙紅染色。同時(shí)測(cè)定了內(nèi)部器官的物質(zhì)和其重量系數(shù)。
以三組試驗(yàn)進(jìn)行了制劑對(duì)皮膚和粘膜的局部刺激作用的研究。第一組試驗(yàn)使用35只豚鼠和30只智利兔，把制劑擦拭入拔去絨毛的那部分皮膚上，并滴入兩眼的結(jié)膜間隙中(在10天內(nèi)，每天滴一次到兩次)。
在第二組試驗(yàn)(8只兔子)中研究了制劑對(duì)兔子眼睛粘膜的局部刺激作用，出于預(yù)防的考慮所用制劑的濃度為推薦濃度的10倍。象第一組試驗(yàn)?zāi)菢?，把制劑滴入兩眼，?0天內(nèi)每天滴一次或兩次，間隔為2-3小時(shí)。
在第三組試驗(yàn)(在研究慢性中毒時(shí))中研究了制劑的局部刺激作用，所用條件盡可能地接近于實(shí)際應(yīng)用的條件。使用兔子(12只)和小白鼠(12只)進(jìn)行試驗(yàn)，在一個(gè)月期間內(nèi)每天把制劑加到皮膚上以及注入陰道(對(duì)雌性)和直腸(對(duì)雄性)。
除了每天對(duì)動(dòng)物的行為及制劑與皮膚和粘膜所起的反應(yīng)進(jìn)行觀察以外，在試驗(yàn)結(jié)束后，取下皮膚和粘膜中受到制劑作用的那部分，以便進(jìn)行組織學(xué)的研究。
用豚鼠來對(duì)制劑的過敏作用進(jìn)行研究，因?yàn)檫@種動(dòng)物對(duì)研究人工過敏作用是一種最理想的對(duì)象(АаоА.д.，1970年)。對(duì)實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物，在六晝夜的期間內(nèi)每天用制劑涂擦皮膚，或者用注射器把制劑注入體腔內(nèi)(雌性的注入陰道，雄性的注入直腸)。制劑的劑量等于治療用量(0.07毫克/公斤)或相當(dāng)于治療用量10倍和15倍(0.7和1.1毫克/公斤)。在21～23天的期間內(nèi)，施用可分辨的劑量，即等于能引起過敏作用的總量。在實(shí)驗(yàn)中使用了24只豚鼠(每組6只，共四組，其中一組為對(duì)照組)。關(guān)于過敏使用程度的判斷，可根據(jù)目視能觀察到的一些特征(充血、起小皰、皮膚和粘膜的浸潤，不完全適合的動(dòng)物行為，不正常的步態(tài)，戰(zhàn)慓等)。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)的檢驗(yàn)結(jié)果;白血球的附聚反應(yīng)、白血球減少癥試驗(yàn)、血小板減少指數(shù)以及血管末稍血液中的嗜酸細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞數(shù)目的變化。
根據(jù)上述的研究方法所獲的結(jié)果，白血球附聚反應(yīng)的百分率增加30%以上，在1mm3血液中白血球的數(shù)目減少1000個(gè)，血小板減少指數(shù)增加22%以上，不管是對(duì)嗜酸細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞的數(shù)目，還是對(duì)由制劑所引起的過敏作用，都進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
在研究慢性中毒的時(shí)候，用24只兔子來研究了制劑及其主要成份對(duì)免疫系統(tǒng)的影響，(四組動(dòng)物，每組6只，其中一組為對(duì)照組)。免疫學(xué)的研究共進(jìn)行兩次;在開始時(shí)，先確定指標(biāo)的原始水平，然后，在經(jīng)過一個(gè)月后即以治療劑量和亞毒性劑量施用制劑結(jié)束后，測(cè)定亞毒性劑量制劑的主要組分。對(duì)T-和B-免疫因子和非特殊保護(hù)因子的特征所作的試驗(yàn)如下定量測(cè)定血清中C、A和M類免疫球蛋白的水平〔使用放射性免疫法(按Mancini，1956年)〕，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)目的改變，血清防御素的滴定度(比色法)，嗜異性凝集素的滴定度(ПауΛь-ЪуннеΛя反應(yīng))，血清的C-反應(yīng)蛋白量和總蛋白量，脾和腘部淋巴結(jié)的組織學(xué)研究。
由于制劑被用于局部(皮膚與粘膜)，因此測(cè)定從皮膚上和粘膜上攝取制劑的可能性以及測(cè)定在肌體內(nèi)制劑新陳代謝的可能性是很重要的。制劑在血液中的含量是用高靈敏度的氣相液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，此法能測(cè)出的制劑濃度為10-6～10-9克/毫升。
數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理是以EC-1045電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行的。
上述試驗(yàn)結(jié)果如下在給小白鼠腹內(nèi)注射制劑以進(jìn)行急性中毒試驗(yàn)的條件下，觀察到最輕的毒性表現(xiàn)的劑量為8.32毫克/公斤動(dòng)物重量，而最重的毒性表現(xiàn)的劑量為20.0毫克/公斤動(dòng)物。把急性中毒研究所獲得的資料按照Ъ.М.Штаъский等(1980年)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。在給小白鼠進(jìn)行腹內(nèi)注射的情況下，本制劑的半致死量為9.81毫克/公斤(9.67～9.94)，按照СидоровK.K的毒性等級(jí)劃分法，可把本制劑劃入相對(duì)地?zé)o毒的一級(jí)，這屬于最低程度毒性的等級(jí)(измеров等，1977年)。
所說制劑慢性中毒研究的結(jié)果證明在一個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，每天投以治療用劑量和亞毒性劑量的制劑，對(duì)兔子和大白鼠的臟器和肌體的功能狀態(tài)不引起有害的影響。到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，所研究的指標(biāo)水平或者與原始資料相吻合，或者與對(duì)照組的相應(yīng)指標(biāo)相一致，不超出ЭападнюкИ.П.等(1983年)所進(jìn)行的這些類型動(dòng)物生理學(xué)指標(biāo)的變化范圍。對(duì)兩組長期攝取亞毒性劑量制劑的動(dòng)物(兔子和大白鼠)，我們觀察到，對(duì)肝的功能有一定程度的不良傾向的影響，檢查到血清中較高的直接膽紅素和間接膽紅素含量(P＞0.05)以及稍高的轉(zhuǎn)氨酶活性(P＞0.05)。兩種類型的試驗(yàn)組與對(duì)照組動(dòng)物的內(nèi)臟的病態(tài)學(xué)研究表明，不管是使用制劑本身，還是使用制劑的主要成分，兩種情況都沒有表現(xiàn)出明顯的變化。
研究結(jié)果表明，當(dāng)制劑涂擦到實(shí)驗(yàn)的兔子和大白鼠的皮膚上和注入體腔內(nèi)(陰道和直腸)時(shí)，不發(fā)生局部刺激作用。用以實(shí)驗(yàn)的兔子和大白鼠身上取下的部分皮膚所作的形態(tài)學(xué)研究表明，經(jīng)過一個(gè)月涂擦了本制劑的這部分皮膚，沒有顯出任何變化。陰道(雌性動(dòng)物施藥處)粘膜和直腸(雄性動(dòng)物施藥處)粘膜也沒有顯出組織學(xué)結(jié)構(gòu)的破壞。不管是每天一次或者是兩次把制劑以治療劑量的濃度滴入兔子和豚鼠兩眼的結(jié)膜空隙處，只帶來短時(shí)間的(1～2分鐘)流淚和微不足道的粘膜發(fā)紅。
在把超過治療劑量10倍的制劑滴到兔子的眼結(jié)膜時(shí)，才顯露出較明顯的粘膜充血，并且這種反應(yīng)延續(xù)較長時(shí)間(達(dá)1.5～3小時(shí))。對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的眼睛組織結(jié)構(gòu)的研究表明，不管所用制劑量為治療劑量還是為這一劑量的10倍，眼睛的功能特征都發(fā)生了變化。而眼睛的粘膜部分沒有顯示出明顯的破壞性特征。
以這樣的方法對(duì)所說制劑對(duì)三種類型動(dòng)物的局部刺激作用的研究表明，不管是制劑作用于被試動(dòng)物的皮膚，還是作用于眼睛、陰道和直腸的粘膜，皆沒有產(chǎn)生局部的刺激作用。
制劑對(duì)24只豚鼠的過敏性作用的研究表明，按治療劑量使用制劑不會(huì)帶來動(dòng)物全身的反應(yīng)與血液方面的變化，以試管試驗(yàn)對(duì)細(xì)胞所做的檢驗(yàn)表明，細(xì)胞沒有發(fā)生變化。同時(shí)還表明，只在所用制劑達(dá)到治療劑量的10倍以上時(shí)才會(huì)在一定程度上引起過敏現(xiàn)象特征的發(fā)展，這些特征是，白血球的附聚作用增長到原來的千倍以上，在1mm3的血液中，白血球數(shù)目降低1500，血小板數(shù)目的增長達(dá)70%，嗜酸細(xì)胞的含量增加到原來的4倍(P＜0.05)以上。
治療劑量的甚至是亞毒性劑量的制劑皆不會(huì)對(duì)免疫機(jī)理發(fā)生影響即不改變免疫細(xì)胞的數(shù)目，也不改變它們的功能，特別是主要種類的免疫體的綜合功能。也沒顯示出動(dòng)物肌體的非特殊保護(hù)因子受抑制的征兆。脾和淋巴結(jié)的組織學(xué)的研究結(jié)果表明，沒有發(fā)現(xiàn)在脾和淋巴結(jié)中有巨噬細(xì)胞的和淋巴細(xì)胞的滲透以及細(xì)胞質(zhì)反應(yīng)，這就在較大程度上證實(shí)了免疫學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果。
不管是把制劑涂擦在兔子的皮膚上還是在粘膜上，它都被攝取。但通過皮膚比通過粘膜攝取得慢些，量也少些。也查明了，制劑通過粘膜的攝取雖比皮膚進(jìn)行的快得多，但攝取過程畢竟還是慢的。
根據(jù)本發(fā)明的試驗(yàn)研究表明，本制劑對(duì)于梅毒、淋病和滴蟲病的病原體具有很高的特別活性。
關(guān)于制劑對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物肌體有害影響的研究表明，根據(jù)急性中毒的研究結(jié)果，本制劑可列入相對(duì)地?zé)o毒的一等，它長時(shí)間地以治療劑量和亞毒性劑量施用，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的器官和系統(tǒng)都不會(huì)帶來明顯的有害作用。
對(duì)制劑的臨床應(yīng)用前的研究結(jié)果表明，可以推薦一種能最有效地預(yù)防性病的制劑，這種液態(tài)的藥物制劑具有如下組成(重量%)對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛，分子式為
二甲基亞砜5.0
聚乙二醇(分子量400)補(bǔ)充到100、0為了預(yù)防性病和治療婦女尿道滴蟲病，推薦一種在具有壓力的氣溶膠包裝內(nèi)的液體狀態(tài)的制劑，它的組成(重量%)為對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛，分子式為
二甲基亞砜5.0聚乙二醇(分子量400)10.0～30.0表面活性物質(zhì)3.0～6.0水補(bǔ)充至100.0，和加入丙烯使其占總量的3～10%制劑作為個(gè)人預(yù)防性病藥物的臨床試驗(yàn)已在蘇聯(lián)一些大的皮膚性病機(jī)構(gòu)進(jìn)行過研究。這些研究是在一些個(gè)人預(yù)防性病的醫(yī)療站進(jìn)行的，在那里，醫(yī)療站的工作人員給予來訪者預(yù)防幫助，也給一些有紊亂性關(guān)系的人發(fā)放藥物制劑。研究結(jié)果表明，在那些曾有過偶然的性關(guān)系而用本制劑進(jìn)行了治療而被觀察的男人當(dāng)中，沒有發(fā)生過傳染上梅毒、淋病和滴蟲病的情況。也沒有發(fā)現(xiàn)過本制劑作用于病人的肌體時(shí)引起中毒、局部刺激和過敏的征兆。
按照本發(fā)明，使用本制劑對(duì)150名尿道滴蟲病的患者進(jìn)行治療，療程為5～7天，每天兩次，每次1.5～10毫升，治療的結(jié)果表明，本制劑有很高的殺原生物的醫(yī)療效果，其中包括在完整的病原學(xué)上的和醫(yī)療學(xué)上的治療效果。在對(duì)病人的長期(3個(gè)月)觀察監(jiān)督中，沒有發(fā)現(xiàn)滴蟲病復(fù)發(fā)的情況，也沒有發(fā)現(xiàn)副作用現(xiàn)象。
權(quán)利要求
1.一種用于個(gè)人預(yù)防性病和治療尿道滴蟲病的藥物制劑的制備方法，其特征在于，將有效量對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛
與二甲基亞砜混合成溶液狀協(xié)同作用混合物，并以藥用稀釋劑稀釋至預(yù)定濃度。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，用作藥用稀釋劑的是分子量為400的聚乙二醇。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，上述所用的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛、二甲基亞砜和分子量為400的聚乙二醇的重量比為0.3∶5.0∶94.7。
4.一種以液體形式裝在氣溶膠壓力包裝中的如權(quán)利要求1或2所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于，往一種由3%(重量)上述的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛、5%(重量)二甲基亞砜和10～30%(重量)分子量為400的聚乙二醇所組成的溶液中添加3.0～6.0%(重量)的表面活性物質(zhì)和水使之達(dá)到100%(重量)，然后以占溶液總重量3～10%的丙烯充分飽和裝在氣溶膠包裝內(nèi)的所獲溶液。
全文摘要
一種用于個(gè)人預(yù)防性病和治療尿道滴蟲病的藥物制劑的制備方法，該方法包括，將有效量的對(duì)硝基-α-氯代肉桂醛與二甲基亞砜混合成溶液狀的協(xié)同作用混合物，并以藥用稀釋劑稀釋至預(yù)定濃度。使用分子量為400的聚乙二醇作為藥用稀釋劑。
文檔編號(hào)A61K31/11GK1035434SQ88101870
公開日1989年9月13日 申請(qǐng)日期1988年3月3日 優(yōu)先權(quán)日1988年3月3日
發(fā)明者弗拉第米爾·格里高里維克·克拉弗切科 申請(qǐng)人:波爾塔瓦口腔醫(yī)學(xué)研究所