專(zhuān)利名稱(chēng):偕-二鹵代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備方法
眾所周知，與普通靜息細(xì)胞相比較，生物合成的天然聚胺(如腐胺、亞精胺、精胺等)在迅速增殖細(xì)胞中具有重要的作用。相反，腐胺和亞精胺的減少會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖的減慢，這也為人們所熟知。
鳥(niǎo)氨酸是腐胺代謝的前體，腐胺又是亞精胺代謝的前體，亞精胺又是精胺代謝的前體。在代謝上，這些生化轉(zhuǎn)換可以被鳥(niǎo)氨酸脫羧酶，亞精胺合成酶和精胺合成酶催化。此外，亞精胺和精胺合成酶以脫去羧基的S-腺苷-L-甲硫氨酸作為酶的輔助底物，即S-腺苷-L-甲硫氨酸脫羧酶的反應(yīng)產(chǎn)物。因此這些酶的抑制劑，包括S-腺苷-L-甲硫氨酸脫羧酶的抑制劑，可以用于阻止腐胺和高級(jí)聚胺的生物合成，即阻止亞精胺和精胺的生化合成，從理論上講，這些抑制劑作為抗增殖劑和/或抗腫瘤劑也應(yīng)該是有效的。
但是，過(guò)去使用不可逆的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑或S-腺苷-L-甲硫氨酸脫羧酶，亞精胺合成酶和精胺合成酶和精胺合成酶抑制劑并未能證明它們都是有效的。例如，只要予先存在的精胺庫(kù)保持在一定的臨界水平之上，那么對(duì)于保持細(xì)胞活力來(lái)講，腐胺和亞精胺就不是必要的了。此外，由于它們迅速的周轉(zhuǎn)，因此在體內(nèi)脫羧酶的總抑制是困難的。
申請(qǐng)人:已發(fā)明了一類(lèi)可減少精胺在細(xì)胞內(nèi)自然水平的化合物。在迅速增殖的細(xì)胞中，這些化合物是非常有效的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑。因此，本發(fā)明化合物可用作抗增殖劑和抗腫瘤劑。
本發(fā)明涉及一些有選擇的亞精胺偕-二囟代衍生物。更具體地講，本發(fā)明是關(guān)于具有式(1)的偕-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷及其藥學(xué)上可以接受的鹽，
其中X和Y代表氫和囟素，其條件是在任意給定條件下只可在一個(gè)碳原子上有兩個(gè)囟原子。
此外，本發(fā)明還涉及制備上述化合物的方法，含有上述化合物的藥用配方，以及這些化合物作為抗腫瘤藥的應(yīng)用。
如上面通式(1)所述，本發(fā)明化合物組成了特定的偕-二囟代精胺類(lèi)化合物及其藥學(xué)上可以接受鹽。但是應(yīng)用該類(lèi)化合物時(shí)，需要采用更明確的名稱(chēng)，因此該類(lèi)化合物可稱(chēng)為偕-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷衍生物。在本文中所有的術(shù)語(yǔ)“囟素”僅指氯和氟。
本發(fā)明所包括的全部化合物均是偕-二囟代衍生物。這就是說(shuō)，它們是1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的2，2，-二囟代，6，6-二囟代或是7，7-二囟代衍生物，這可作為權(quán)利要求
的限定。因此，權(quán)利要求
1所包括的本發(fā)明化合物包括2，2-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷2，2-二氯代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷2-氯-2氟-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷6，6-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷6，6-二氯代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷6-氯-6-氟-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷7，7-二氯代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷
7-氯-7-氟-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷藥學(xué)上可以接受的鹽包括上述通式(Ⅰ)堿性化合物與無(wú)毒的有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸加成的鹽。所說(shuō)的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸，氫溴酸，硫酸和磷酸及其金屬鹽如磷酸氫二鈉及硫酸氫鉀?？缮蛇m當(dāng)鹽的有機(jī)酸包括單、二和三羧酸;如乙酸，乙醇酸、乳酸、丙酮酸、馬來(lái)酸、丁二酸、戊二酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來(lái)酸·羥基馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、對(duì)一羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸和磺酸類(lèi)(如甲磺酸和二羥基乙磺酸)。上述的鹽可以水合物的形式存在，或者以實(shí)際上無(wú)水的形式存在。
本發(fā)明所有的化合物可以合理的合成路線，用相應(yīng)的2，2-二囟代-1，4-丁二醇(式2)為起始原料來(lái)制備，
其中X′和Y′代表氯和氟。通過(guò)將適當(dāng)?shù)?，2-二囟代丁二酸與三氟乙酸反應(yīng)，生成相應(yīng)的2，2-二囟代丁二酸酐，可以很容易地制得上述化合物。用甲醇解離酸酐，得到相應(yīng)的2，2-二囟代丁二酸甲酯。用甲硼烷-二甲硫復(fù)合物還原相應(yīng)的游離酸官能團(tuán)，得到相應(yīng)醇醇，即2，2-二囟代-4-羥基丁酸甲酯。將酯官能團(tuán)還原，例如用硼氫化鈉還原，得到所需起始原料2，2-二囟代-1，4-丁二醇(式2)。
根據(jù)下述合成路線制備6，6-二囟代和7，7-二囟代衍生物，其中X′和Y′代表氯或氟，X和Y代表氫、氯或氟。
在叔-丁醇鉀存在下，用芐基囟，如芐基溴使2，2-二囟代-1，4-丁二醇(式2)進(jìn)行有控制的烷基化，得到適當(dāng)保護(hù)形式的一級(jí)醇。由于存在兩類(lèi)一級(jí)醇，因此得到1-芐氧基-2，2-二囟代-4-羥基丁烷(式3a)和1-芐氧基-3，3-二囟代-4-羥基丁烷(式3b)的混合物。這里Bz代表芐基。
用色譜法可以很容易地將該異構(gòu)體混合物分離。如果在后面的反應(yīng)中應(yīng)用1-芐氧基-2，2-二囟代-4-羥基丁烷異構(gòu)體(式3a)，則可得到偕-7，7-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷。相反，如果應(yīng)用1-芐氧基-3，3-二囟代-4-羥基丁烷異構(gòu)體(式3b)，則得到偕-6，6-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷。由于反應(yīng)程序完全相同，所以一般的反應(yīng)流程表明是四囟取代，但是事實(shí)上，在任意給定條件下僅有一個(gè)碳原子被二取代。
在無(wú)水非質(zhì)子傳遞溶劑(如二氯甲烷)中，用甲磺酰氯保護(hù)適當(dāng)?shù)?-芐氧基-偕-二囟代-4-羥基丁烷游離的羥基，得到相應(yīng)的1-芐氧基-偕-二囟代-4-甲磺酰氧基丁烷(式4)。其中的符號(hào)Mes代表甲磺?；?。在溶劑(如二甲基甲酰胺)中，將(4)與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)，得到相應(yīng)的N-(4-芐氧基-偕-二囟代丁基)鄰苯二甲酰亞胺(式5)。在溶劑(如乙醇)中，使肼與式5的鄰苯二甲酰亞胺反應(yīng)，得到相應(yīng)的4-芐氧基-偕-二囟代-丁胺(式6)，最好將該丁胺轉(zhuǎn)變?yōu)槠潲}酸鹽。
為了避免在其后的烷基化步驟中得到異構(gòu)體的混合物，按規(guī)范的方法用對(duì)-甲苯磺酰氯保護(hù)一級(jí)胺(式6)，得到相應(yīng)的N-(4-芐氧基-偕-二囟代丁基)-對(duì)甲苯磺酰胺(式7)。在碘化鈉和叔-丁醇鉀存在下，在無(wú)水條件下，于適當(dāng)?shù)姆琴|(zhì)子傳遞溶劑(如二甲基甲酰胺)中，用3-溴丙基鄰苯二甲酰亞胺將被保護(hù)的胺(式7)烷基化，得到相應(yīng)的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)甲苯磺酰基-偕-二囟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷(式8)。
用三甲基甲硅烷基碘化物解離(式8)的芐基制得相應(yīng)的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?偕-二囟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷(式9)。在無(wú)水溶劑(如二氯甲烷)中，在吡啶存在下將式(9)化合物與甲磺酰氯反應(yīng)，得到相應(yīng)的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?偕-二囟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷(式10)。
在無(wú)水二甲基甲酰胺中，將式(10)化合物與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)，得到1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)甲苯磺酰基-偕-二囟代-4-氮雜-辛烷(式11)。在溶劑(如乙醇)中，將式(11)化合物與肼一起加熱，可以脫去鄰苯二甲酰基保護(hù)基，然后再與HBr水溶液一起加熱所得產(chǎn)物，以脫去甲苯磺?；Ｗo(hù)基得到所需要的6，6或7，7-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷(式1)的氫溴酸鹽。
根據(jù)下述的合成路線，可以制備相應(yīng)的2，2-二囟代衍生物，其中X和Y是氯或氟。
在吡啶存在下，將2，2-二囟代-1，4-丁二醇(式2)與2倍量的甲磺酰氯反應(yīng)，生成相應(yīng)的1，4-二-甲磺酰氧基-2，2-二囟代丁烷(式11)。在溶劑(如二甲基甲酰胺)中，將(11)與二氮雜雙環(huán)十一碳烯一起加熱，得到相應(yīng)的1-甲磺酰氧基-2，2-二囟代-3-丁烯(式12)。
在溶劑(如二甲基甲酰胺)中，將(12)與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)得到相應(yīng)的1-鄰苯二甲酰亞氨基-2，2-二囟代-3-丁烯(式13)。在醇溶劑中，用肼解離鄰苯二甲酰衍生物(式13)得到相應(yīng)的1-氨基-2，2-二囟代-3-丁烯(式14)。以規(guī)范的方法，通過(guò)將對(duì)-甲苯磺酰氯與一級(jí)胺反應(yīng)從而使一級(jí)胺(式14)受到保護(hù)得到相應(yīng)的N-(2，2-二囟代-3-丁烯基)-對(duì)-甲苯磺酰胺(式15)。在有叔-丁醇鉀存在及無(wú)水條件下，于適當(dāng)?shù)娜軇?如二甲基甲酰胺)中，用4-溴丁基鄰苯二甲酰亞胺將得到保護(hù)的胺(15)烷基化，得到N-(4-鄰苯二甲酰亞氨基丁基)-N-(2，2-二囟代-3-丁烯基)-對(duì)-甲苯磺酰胺(式16)。
在乙酸水溶液中，用KMNO4氧化雙鍵，得到相應(yīng)的(2，2-二囟代-8-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-4-氮雜-辛酸(式17)，用甲硼烷-二甲硫復(fù)合物將(17)還原，生成相應(yīng)的2，2-二囟代-8-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?4-氮雜-辛醇(式18)。
使用無(wú)水溶劑，如二氯甲烷，在吡啶存在下，將(18)與甲磺酰氯反應(yīng)得到相應(yīng)的2，2-二囟代-1，-甲磺酰氧基-8-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?4-氮雜-辛烷(式19)。
在無(wú)水二甲基甲酰胺中，將(19)與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)，得到2，2-二囟代-1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-4-氮雜-辛烷(式20)。在溶劑(如乙醇)中，將(20)與肼一起加熱，以脫去鄰苯二甲?；Ｗo(hù)基，然后與HBr水溶液一起加熱所得的產(chǎn)物，以脫去起保護(hù)作用的甲苯磺?；?，得到所需的2，2-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷(式1)的氫溴酸鹽。
本發(fā)明的化合物可用作抗增殖劑和抗腫瘤劑。這些化合物的作用機(jī)制尚不清楚。然而已經(jīng)知道，將本發(fā)明化合物加到生長(zhǎng)大白鼠肝癌組織培養(yǎng)(HTC)細(xì)胞的培養(yǎng)基中時(shí)，它們能完全阻斷精胺的重新合成。由于精胺的減少，所以細(xì)胞生長(zhǎng)顯著減慢。在與已知的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑，如2-二氟甲基-2，5-二氨基戊酸(DFMO)和[2R，5R]-6-庚炔-2，5-二胺(R，R-MAP)合用時(shí)，則精胺會(huì)更迅速和明顯的減少。
在對(duì)標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物腫瘤模型進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物能夠使腫瘤細(xì)胞增殖減緩。在治療動(dòng)物的腫瘤中，使用這些化合物優(yōu)先選用的方式是與DFMO或[R，R]-MAP合用，或與其它已知的治療方法或藥品和用，從而影響聚胺的代謝。在此所用的動(dòng)物一詞是指溫血哺乳動(dòng)物，如小白鼠，大白鼠，狗，貓，豚鼠，豬，牛，馬和人。
本發(fā)明的化合物可用于預(yù)防或治療。對(duì)于治療給藥，有效成分用量的的變化范圍較大，其用量決定于下列因素;需治療的動(dòng)物的種類(lèi)，年齡，健康狀況，性別，體重，特性以及需要治療的病情的嚴(yán)重程度。一般來(lái)講，治療有效的有效成分的用量范圍大約為每日0.2至5克，優(yōu)先選用每日0.5至3克。對(duì)預(yù)防來(lái)講，所用劑量相應(yīng)的低一些，大約為每日0.05至2克。
當(dāng)與其它的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑一起服用時(shí)，如DFMO或[R，R]-MAP，則偕二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的量是每日0.1至4克，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑的量是每日0.5至10克。
本發(fā)明的化合物可以口服。口服劑量是每公斤體重2至50毫克。優(yōu)先選用的量是每公斤體重每天服10～20毫克的偕-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷，分?jǐn)?shù)次服用。在非腸道服用的情況下，使用相對(duì)來(lái)講較低的劑量。當(dāng)與鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制劑一起服用時(shí)可以標(biāo)準(zhǔn)的配藥形式服用，如片劑，膠囊，糖衣藥丸，錠劑， 劑，乳化劑，懸浮劑和各種靜脈肌肉或皮下注射液。
優(yōu)先選用的服用方式是片劑或膠囊。當(dāng)然，含在每種劑形中有效成分的量不同，根據(jù)所用的7，7-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜辛烷的不同種類(lèi)來(lái)決定具體的用量。一般來(lái)講，對(duì)給定的劑形除了含有的賦形劑外其有效成分的量為10至500毫克。優(yōu)先選用的劑形是片劑，其含有100至400毫克有效成分，可以每日2次，3次或4次的形式服用。
在制備固體制劑如片劑時(shí)，一般是將有效成分與通常的藥用載體或賦形劑，如明膠，淀粉，乳劑，磷酸鈣或粉狀的食糖混合。這里所用的術(shù)語(yǔ)藥用載體也包括用于改善片劑顆粒流動(dòng)時(shí)的潤(rùn)滑劑，它們可防止片劑之間的粘結(jié)。適用潤(rùn)滑劑包括，如滑石，硬脂酸，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂和硬脂酸鋅。這里所用的藥用載體也是分解劑，以助片劑在服用時(shí)易于破裂和溶解，同時(shí)也是作為色素和調(diào)味劑來(lái)提高片劑的外觀質(zhì)量，以使它們更易于為病人所接受。
對(duì)制備液體制劑來(lái)講，適當(dāng)?shù)囊后w賦形劑包括水和醇，如乙醇，苯甲醇和聚乙烯醇，同時(shí)可以加入表面活性劑，當(dāng)然也可以不加。一般來(lái)講，用于注射劑的優(yōu)先選用的液體賦形劑包括水，生理鹽水，葡萄糖水和1，2-乙二醇液體，如丙二醇水溶液和聚乙烯醇水溶液。作為消毒注射液的液體制備物在溶液中含有大約0.5至25%(重量)，優(yōu)先選用1至10%(重量)的有效成分。在一些局部和非腸道使用的制劑中，使用油來(lái)作為載體或賦形劑。這些油可以是礦物油，甘三酯類(lèi)的油，如豬油，魚(yú)肝油，花生油，芝麻油，玉米油和大豆油。對(duì)不溶化合物的懸浮劑來(lái)講可加入試劑來(lái)控制其粘度，例如加入硅酸鎂，鋁或羧甲基纖維素。此外也可以加入賦形劑，緩沖劑，防腐劑和乳化劑。
用在非腸道制劑中的有效成分比例是總液體組合物的0.05至大約20%(重量)。優(yōu)先選用的量是0.1至大約10%(重量)，余下的成分則是前敘的各種藥用載體或賦形劑。為了盡可能的排除對(duì)注射部位的刺激，這些組合物內(nèi)可含有12至17的親水-親油平衡(HCB)的非離子表面活性劑。表面活性劑在上述配方中的量為5至大約15%(重量)。表面活性劑可以是具有上述HLB值的單一成分，也可以是具有所需HLB值的兩種或兩種以上成分的混合物。用于非腸道制劑配方中的表面活性劑是聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯，如單油酸脫水山梨酯和高分子量的，通過(guò)環(huán)氧丙烷和丙二醇縮合所得到的環(huán)氧乙烷和疏水基的加合物。
下述的制備過(guò)程進(jìn)一步具體地說(shuō)明本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。
7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備2，2-二氟代-1，4-丁二醇將2，2-二氟代丁二酸(120克，0.78摩爾)和三氟乙酸酐(540毫升)回流(浴溫80℃)2小時(shí)。用短程維格羅分餾柱蒸去大部分三氟乙酸，在真空下(12mm Hg，50℃)除去剩下的微量物，最后再用四氯化碳汽提二次。用石油醚在刮痕(scratching)上固化油狀殘留物。用石油醚過(guò)濾并洗滌，得到2，2-二氟丁二酸酐微小的紫色結(jié)晶，98克(92%)。
將2，2-二氟丁二酸酐(98克，0.72摩爾)溶于二氯甲烷中，隨著攪拌緩慢地加入甲醇，用冰浴冷卻。將混合物保持在室溫過(guò)夜，用四氯化碳蒸發(fā)和汽提兩次，得到2，2-二氟丁二酸甲酯的微小淡棕色油狀物，121克(100%)。
在2小時(shí)內(nèi)，向在裝有回流冷凝器和1升漏斗的4升燒瓶中緩慢地加入在無(wú)水二氯甲烷(1升)中的BH3Me2S(10摩爾，88毫升)溶液與燒瓶中攪拌著的在無(wú)水四氫呋喃(20℃)中的2，2-二氟二丁酸甲酯(120克，0.714摩爾)反應(yīng)，回流(浴溫80℃)15小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫，緩慢地加入1升甲醇。蒸發(fā)，得到油狀的2，2-二氟代-4-羥基丁酸甲酯，用甲醇(1升)和四氯化碳汽提得到黃色油狀物100克，(92%)。
向在乙醇中的冰冷的(0℃)氫硼化鈉(10.3克，0.272摩爾)中緩慢地加入在乙醇中的2，2-二氟代-4-羥基丁酸甲酯(55克，0.36摩爾)，同時(shí)保持反應(yīng)混合物內(nèi)的溫度在-5℃至0℃之間。在0℃攪拌混合物1小時(shí)，然后小心地加入在甲醇(200毫升)中的4NHCl溶液。濾出氯化鈉，真空除去甲醇，用乙醇溶解剩余物。過(guò)濾(膜式濾器)再一次除去氯化鈉，蒸發(fā)過(guò)濾物，在150℃/0.05mmHg下用Kugelrohr蒸餾器蒸餾后得到無(wú)色的油狀2，2-二氟代-1，4-丁二醇化合物41克，(90%)。
1-芐氧基-2，2-二氟代丁胺在氮?dú)夥障?，用冰鹽浴將2，2-二氟代-1，4-丁二醇(60克，0.476摩爾)的四氫呋喃溶液和芐基溴一起冷卻到-5℃至0℃。分批加入叔-丁氧化鈉(53.5克，0.477摩爾)，保持內(nèi)溫在大約0℃。在室溫下攪拌過(guò)夜，濾出溴化鉀，蒸發(fā)掉溶劑，用二氯甲烷溶解剩余物，用1N的HCl洗滌二次后用水再洗滌二次。干燥(Na2SO4)，然后蒸發(fā)，得到106克油狀物(稍高于理論值，剩有一些CH2Cl2)。
所得物質(zhì)是1-芐氧基-2，2-二氟代-(1-羥基丁烷和1-芐氧基-3，3-二氟代-4-羥基丁烷的混合物。用二氧化硅色譜進(jìn)行分離(1公斤;洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚20∶80;餾份大小250毫升)。餾分17至19含有1-芐氧基-3，3-二氟代-4-羥基丁烷(12.85克，12.5%)，餾份20至40得到1-芐氧基-2，2-二氟代-4-羥基丁烷(45.85克)，餾份20-24得到上述兩異構(gòu)體的混合物(27.6克)。對(duì)該混合物再一次進(jìn)行色層層析(1公斤SiO2，洗脫劑相同)得到另外的16克1-芐氧基-2，2-二氟代-4-羥基-丁烷異構(gòu)體油狀物，總產(chǎn)量62克(60%)。
向經(jīng)冰浴冷卻了的含有1-芐氧基-2，2-二氟代-4-羥基-丁烷(50克，0.231摩爾)和無(wú)水吡啶(100毫升)的二氯甲烷溶液內(nèi)緩慢地加入含有甲磺酰氯(26.52克，0.232摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用2NHCl(2×1升)洗滌混合物，然后再用水洗滌二次，干燥，蒸去溶劑，得到1-芐氧基-2，2-二氟代-4-甲磺酰氧基丁烷的黃色油狀物，63.44克(93%)。
在攪拌條件下將1-芐氧基-2，2-二氟代-4-甲磺酰氧基丁烷(63.44克，0.216摩爾)，鄰苯二甲酰亞胺鉀(44克，0.238摩爾)和無(wú)水二甲基甲酰胺(500毫升)(與CaH2蒸餾所得)的混合物加熱至100℃。短時(shí)間反應(yīng)后混合物固化，再加入500毫升二甲基甲酰胺。在90至100℃再加熱20小時(shí)，過(guò)濾除去鹽，真空蒸去二甲基甲酰胺(油泵)。用CH2Cl2(800毫升)溶解剩余物，用1N KOH洗滌(2次)后再用1N HCl洗滌(2次)。干燥(Na2SO4)后蒸發(fā)，得到N-(4-芐氧基-3，3-二氟代丁基)鄰苯二甲酰亞胺的黃色油狀物，68.5克(92%)。
將在乙醇中(200毫升)的N-(4-芐氧基-3，3-二氟丁基)-鄰苯二甲酰亞胺(68.5克，198.6毫摩爾)和水合肼(10克，200毫摩爾)攪拌，加熱(90-100℃)過(guò)夜。加入濃鹽酸(94毫升)和乙醇(1130毫升)的混合物，繼續(xù)加熱(90-100℃)1.5小時(shí)。冷卻后(冰浴)，過(guò)濾除去鄰苯二甲酰肼，蒸發(fā)過(guò)濾物。將剩余物溶于水中，用乙醚(2×500毫升)萃取。用膜濾器(Millipore)過(guò)濾后蒸發(fā)過(guò)濾物得到白色結(jié)晶。用乙醇溶解結(jié)晶，過(guò)濾溶液(Millipore organic)，蒸發(fā)過(guò)濾物得到剩余物，加入乙醚產(chǎn)生結(jié)晶，34克(68%)。蒸發(fā)乙醚提取液得到含有原料的部分結(jié)晶物(20克)。用肼對(duì)該混合物重復(fù)解離，得到4-芐氧基-3，3-二氟丁胺(9.1克)的第二次產(chǎn)物?？偭?3.2克(86.5%)。
1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷將在無(wú)水二氯甲烷(60毫升)中的4-芐氧基-3，3-二氟丁胺，三乙胺(37克，0.37摩爾)和對(duì)-甲苯磺酰氯(33.8克，0.177摩爾)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用1N的HCl(250毫升)水(250毫升)洗滌該溶液，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得到N-(4-芐氧基-3，3-二氟代丁基)-對(duì)-甲苯磺酰胺固體63.17克(99.5%)。
向在無(wú)水二甲基甲酰胺(400毫升)中的N-(4-芐氧基-3，3-二氟丁基)-對(duì)-甲苯磺酰胺和碘化鈉(3克)溶液中加入叔-丁氧化鈉(19.2克，171毫摩爾)，并在室溫下攪拌。加入3-溴丙基鄰苯二甲酰亞胺(46克，171毫摩爾)，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。過(guò)濾出鹽，將過(guò)濾物蒸發(fā)至干。將剩余物溶于二氯甲烷(500毫升)，過(guò)濾蒸發(fā)至干。用乙醚溶解(750毫升)，用亞硫酸氫鈉水溶液(10克/250毫升)，水(3×400毫升)洗滌，用Na2SO4干燥，蒸發(fā)，得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷的黃色油狀物(95.0克，99.8%)。在將該化合物用于下列步驟前用氯仿汽提兩次以除去微量的乙醚。
7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷在氮?dú)夥障?，將溶解在二氯甲?100毫升)中的三甲基硅烷基碘化物(26毫升，182.8毫摩爾)緩慢地加入到攪拌著的，在室溫條件下的，在二氯甲烷中的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷(95.0克，170.8毫摩爾)中。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，緩慢地加入三乙胺(25克，0.25摩爾)，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。用1NHCl(500毫升)，10%NaHSO3(250毫升)水溶液和HO(2×250毫升)洗滌。用NaSO4干燥得到棕色油狀物(83.8克)，根據(jù)NMR測(cè)定，它是1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷的一級(jí)鄰-三甲基-甲硅烷基衍生物。用甲醇(100毫升)溶解該油狀物，加入數(shù)滴HCl乙醚飽和溶液，則發(fā)生結(jié)晶。收集起近似白色的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷，用石油洗滌，得到56.0克產(chǎn)物(70.4%)。
在室溫下向在無(wú)水二氯甲烷(400毫升)中的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷(56.0克，120毫摩爾)和無(wú)水吡啶(50毫升)溶液內(nèi)緩慢加入在二氯甲烷中的甲磺酰氯(14.4克，1.05份)溶液。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，用1NHCl(500毫升)，10%的NaHSO3(250毫升)和水(250毫升)洗滌。用Na2SO4干燥，蒸去溶劑得到經(jīng)真空(油泵)固化過(guò)的油狀物。用丙酮/環(huán)己烷混合物提取，得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜辛烷。
將1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷(61.18克，112.5毫摩爾)，鄰苯二甲酰亞胺鉀(30.5克，165毫摩爾)和無(wú)水二甲基甲酰胺(500毫升)在120℃加熱攪拌72小時(shí)。冷卻后過(guò)濾除去鹽，真空脫除溶劑。剩余物溶于二氯甲烷(500毫升)，用2N NaOH(350毫升，乳濁液)和水(2×350毫升)洗滌。用Na2SO4干燥，蒸發(fā)得到油狀物，用氯仿/環(huán)己烷汽提得到固狀泡沫體58.95克(88%)，(濕基)，由1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-4-氮雜-辛烷組成。
將1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-4-氮雜-辛烷(58.95克，99.07摩爾)和1M在乙醇中的水合肼(235毫升，235毫摩爾)在90℃攪拌加熱過(guò)夜。加入150毫升濃HCl，繼續(xù)加熱(90℃)攪拌45分鐘。冷卻至室溫后，過(guò)濾除去鄰苯二甲酰肼，蒸發(fā)掉溶劑。用水溶解剩余物，過(guò)濾溶液，蒸發(fā)，將得到的剩余物用丙酮汽提固化。將所得物溶于水(300毫升)中，加入NaOH(25克NaOH/150毫升水)水溶液，用二氯甲烷(3×400毫升)提取混合物。用水洗滌(200毫升)，用Na2SO4干燥，蒸去溶劑得到3.50克黃色油狀物，將其溶于6NHCl(300毫升)中，蒸發(fā)，用乙醇(2次)CCl4(2次)和丙酮(2次)汽提得到1，8-二氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-4-氮雜-辛烷的白色固體。將其溶于少量的甲醇中重結(jié)晶，再加入丙酮/乙醚重結(jié)晶得到31.3克(78%)。
將所得到的1，8-二氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?7，7-二氟代-4-氮雜-辛烷與100毫升48%的HBr水溶液回流20小時(shí)。冷卻至室溫后用乙醚仔細(xì)地提取該溶液(5×300毫升)。蒸發(fā)掉溶劑，用水汽提二次除去微量的游離HBr;用甲醇汽提，所需的7，7-二氟代-1，8-二氨基-氮雜-辛烷以三氫溴化物的形式結(jié)晶出來(lái)。用丙酮提取得到白色結(jié)晶，再用丙酮和少量乙醇洗滌，最后用乙醚洗滌，得到12.85克(95%)。
分析C7H20Br3F2N3計(jì)算值C，19.83;H，4.75;N，9.91。
測(cè)定值C，19.83;H，4.58;N，9.93。
6，6-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備1-芐氧基-3，3-二氟代丁胺將前述制備4-芐氧基-3，3-二氟代-丁胺的實(shí)施例中所得到的1-芐氧基-3，3-二氟代-4-羥基丁胺(17克，78.7mM)溶于無(wú)水吡啶(35毫升)中，在攪拌下緩慢地加入二氯甲烷(100毫升)和甲磺酰氯(9克，78.6mM)。
將該混合物保持在室溫過(guò)夜。然后加入更多的二氯甲烷，用1NHCl(2次)，水(2次)洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發(fā)該溶液得到1-甲磺酰氧基-2，2-二氟代-4-芐氧基丁烷油狀物;22.8克(98%)。
將1-甲磺酰氧基-2，2-二氟代-4-芐氧基丁烷(21.8克，74mM)，無(wú)水二甲基甲酰胺(100毫升)，和鄰苯二甲酰亞胺鉀(15.16克，過(guò)量10%)在氮?dú)夥障聰嚢杓訜嶂?20℃保持5天。然后加入500毫升水，用乙醚提取。用1NHCl洗滌有機(jī)相，然后用水再洗滌2次，用Na2SO4干燥，濃縮至約100毫升。加入石油醚產(chǎn)生結(jié)晶。在5℃冷凍3小時(shí)后得到N-(4-芐氧基-2，2-二氟代-丁基)鄰苯二甲酰亞胺米色結(jié)晶，用石油醚過(guò)濾并洗滌得到18克(70%)化合物。
在回流條件下攪拌N(4-芐氧基-2，2-二氟丁基)-鄰苯二甲酰亞胺(8.97克，26mM)和1M在乙醇(26毫升)中的水合肼溶液。幾分鐘后可觀察到大量沉淀。繼續(xù)加熱(浴溫90-100℃)攪拌過(guò)夜。加入乙醇(220毫升)和濃鹽酸(18毫升)將混合物再回流1.5小時(shí)。冷卻后(冰浴)過(guò)濾鄰苯二甲酰肼，然后蒸發(fā)過(guò)濾物。用水溶解剩余物，過(guò)濾，再次蒸發(fā)溶液。用乙醇(2次)和CCl4(2次)汽提以除去剩余的水。將剩余物溶于少量的乙醇中。加入水產(chǎn)生結(jié)晶，將其冷卻至5℃得到4-芐氧基-2，2-二氟丁胺鹽酸鹽白色結(jié)晶，5.16克(79%)。
1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-6，6-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷向在無(wú)水二氯甲烷中的4-芐氧基-2，2-二氟丁胺(5.16克，20.5mM)和三乙胺(4.4克，43.4mM)中加入甲苯磺酰氯(4.14克，21.7摩爾)。在室溫將混合物攪拌過(guò)夜。補(bǔ)充加入二氯甲烷，用1NHCl和水洗滌有機(jī)相。用Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑，得到白色固體，將其溶于少量乙醚中。加入石油醚得到N-(4-芐氧基-2，2-二氟丁基)-對(duì)-甲苯磺酰胺的白色結(jié)晶，7.0克(92%)。
向在無(wú)水二甲基甲酰胺(20毫升)中的N-(4-芐氧基-2，2-二氟代丁基)-對(duì)-甲苯磺酰胺(7.0克，19mM)溶液內(nèi)加入叔-丁氧化鉀(2.34克，21毫摩爾)，將該混合物攪拌30分鐘。向該混合物內(nèi)加入N-3-溴丙基-鄰苯二甲酰亞胺(5.1克，19毫摩爾)和碘化鈉(0.33克)，在氮?dú)夥障拢谑覝貙⒃摶旌衔飻嚢柽^(guò)夜。然后加入食鹽水，用乙醚提取，用1N的HCl(2次)和食鹽水(2次)洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷油狀物，用乙醚/石油醚使其在刮痕上結(jié)晶，得到白色結(jié)晶體，9.5克(90%)。
1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷在氮?dú)夥障?，將在無(wú)水二氯甲烷中的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷(9.5克，17.1mM)和二甲基甲硅烷基碘化物(2.7毫升，超量10%)溶液于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。加入三乙胺(3克)，于室溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)。再加入更多的二氯甲烷，用1NHCl(2次)，NaHSO3水溶液(2次)和食鹽水(2次)洗滌反應(yīng)混合物，用Na2SO4干燥。蒸去溶劑得到油狀物。將該油狀物溶于甲醇，加入1毫升9N的甲醇HCl溶劑。蒸發(fā)混合物，用CCl4汽提2次，得到油狀物，用乙醚/石油醚在刮痕上結(jié)晶，得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷的微小紫色結(jié)晶體，6.8克(85%)。
在攪拌條件下向1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-羥基-4-氮雜-辛烷(6.75克，14.5mM)，無(wú)水二氯甲烷(25毫升)，和無(wú)水吡啶(10毫升)的混合物內(nèi)緩慢地加入在二氯甲烷(25毫升)中的甲磺酰氯(1.7克)溶液。將溶液混合物保持在室溫過(guò)夜，補(bǔ)加入二氯甲烷用1NHCl(2次)和食鹽水(2次)洗滌反應(yīng)混合物。用NaSO干燥所生成的溶液，蒸去溶劑得到油狀物。用乙醚/石油醚在刮痕上結(jié)晶油狀物得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷的白色結(jié)晶體，7.64克(97%)。
6，6-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷在氮?dú)夥障?，?-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-6，6-二氟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷(7.6克，14mM)，鄰苯二甲酰亞胺鉀(2.85克，超量10%)和無(wú)水二甲基甲酰胺(20毫升)的混合物加熱至90℃攪拌20小時(shí)。然后加入約100毫升水，用二氯甲烷提取反應(yīng)物，用1N KOH(2次)洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發(fā)除去溶劑，得到油狀物(8.7克)，用二氧化硅閃蒸色譜處理(300克，洗脫劑∶乙酸乙酯/石油醚/50-50)得到100毫升餾分。收集餾分15-29，蒸去溶劑得到1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-4-氮雜-辛烷，靜置結(jié)晶，得產(chǎn)物6.62克(80%)。
將所得到的1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)甲苯磺酰基-6，6-二氟代-4-氮雜辛烷(6.62克，11.1mM)和1N的水合肼乙醇溶液一起在氮?dú)夥障?，?00℃攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余物與乙醇(30毫升)和濃鹽酸(30毫升)一起回流1.5小時(shí)。冷卻后(冰冷)，過(guò)濾鄰苯二甲酰肼，蒸發(fā)過(guò)濾物，將剩余物溶于水(20毫升)，用膜濾機(jī)(Millipore)過(guò)濾。用水洗滌過(guò)濾物，蒸去溶劑，用乙醇(2次)和CCl4(2次)汽提剩余物。然后加入丙酮，結(jié)晶出1，8-二氨基-4-對(duì)甲苯磺?；?6，6-二氟代-4-氮雜-辛烷，加入乙醚后得到很小的米色結(jié)晶體，4.6克(產(chǎn)量)。
將所得到的1，8-二氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?6，6-二氟代-4-氮雜-辛烷(4.6克)與47%的HBr水溶液(100毫升)在100℃(浴溫)加熱20小時(shí)。用冰冷卻后，用3倍的乙醚提取。蒸發(fā)掉水溶液，用水(2次)，CCl4(2次)汽提。將剩余物與少量的乙醇和丙酮一起加熱后得到所需的1-二氨基-6，6-二氟代-4-氮雜-辛烷的白色結(jié)晶，4.2克(88%)。
分析C7H20Br3F2N3計(jì)算值C，19.83;H，4.75;N，9.91。
測(cè)定值C，19.70;H，4.50;N，9.832，2-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備1-鄰苯二甲酰亞氨基-2，2-二氟代-3-丁烯向攪拌著的2，2-二氟代-1，4-丁二醇(12.97克，103mM)，無(wú)水吡啶(65毫升)和二氯甲烷(200毫升)的混合物內(nèi)緩慢地加入在二氯甲烷(50毫升)中的甲磺酰氯(23.6克)溶液。攪拌過(guò)夜后用2NHCl(2次)洗滌反應(yīng)混合物，然后用10%NaHCO洗滌，直至中性，再用水洗滌，用MgSO4干燥有機(jī)層，蒸去溶劑，得到黃色油狀物。在刮痕上用無(wú)水乙醚結(jié)晶，得到1，4-二-甲磺酰氧基-2，2-二氟代丁烷的白色結(jié)晶體，22.3克(77%)。
將1，4-二-甲磺酰氧基-2，2-二氟代-丁烷(20克，71mM)和二氮雜二環(huán)十一碳烯(21.6克，142mM)與無(wú)水四氫呋喃(150毫升)在氮?dú)夥障录訜嶂?0℃，攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑，剩余的油狀物溶于二氯甲烷中，用1NHCl(2次)，食鹽水(2次)洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑得到1-甲磺?；?2，2-二氟代-3-丁烯油狀物，11.2克(85%)。
在氮?dú)夥障拢瑢?-甲磺?；?2，2-二氟代-3-丁烯(11.2克，60.2mM)，2-苯并[C]呋喃酮(Phthalide)鉀(12.3克，66.4mM)和無(wú)色水二甲基甲酰胺(30毫升)攪拌，并加熱(6溫110℃)反應(yīng)120小時(shí)。冷卻至室溫后，加入水(約300毫升)，沉淀粗反應(yīng)產(chǎn)物，過(guò)濾后將其溶于二氯甲烷中。用1N的氫氧化鉀(2次)和水(2次)洗滌二氯甲烷溶液，用Na2SO4干燥，蒸發(fā)后得到1-鄰苯二甲酰亞氨基-2，2-二氟代-3-丁烯的米色結(jié)晶體，11.9克(83%)。
1-對(duì)-甲苯磺酰氨基-2，2-二氟代-3-丁烯將1-鄰苯二甲酰亞氨基-2，2-二氟代-3-丁烯(11.4克，48.1mM)加熱20小時(shí)。用冰浴冷卻后，過(guò)濾除去鄰苯二甲酸，蒸發(fā)過(guò)濾物。將所得到剩余物溶于水中，用乙醚(2次)提取，蒸發(fā)至干，用異丙醇汽提，用乙醚研磨得到的吸濕1-氨基-2，2-二氟代-3-丁烯的鹽酸鹽，6.12克(88%)。
向被攪拌的，已被冰浴冷卻了的1-氨基-2，2-二氟代-3-丁烯鹽酸鹽(6.1克，42.5mM)，50毫升無(wú)水二氯甲烷和三乙胺(8.74克，2當(dāng)量)的混合物內(nèi)緩慢地加入甲苯磺酰氯(8.1克，1份)二氮甲烷(50毫升)溶液。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，補(bǔ)加入二氯甲烷，用1NHCl(2次)，H2O(2次)洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到棕色的半固體(9.66克)，用二氧化硅閃蒸色譜提純(300克，洗脫劑乙酸乙酯/石油醚20-80;餾分100毫升)。合并餾分17-25，蒸發(fā)得到1-對(duì)-甲苯磺酰氨基-2，2-二氟代-3-丁烯的白色結(jié)晶體4.8克(43%)?？捎靡颐?石油醚重結(jié)晶得到所需化合物，其為很細(xì)的，似棉花的針狀物。
分析C11H13F2N2S計(jì)算值C，50.56;H，5.02;N，5.36。
測(cè)定值C，50.93;N，5.02;N，5.45。
下面的制備過(guò)程基本上與7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷和6，6-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷相同，即用4-溴-丁基鄰苯二甲酰亞胺將1-甲磺?；?2，2-二氟代丁烯烷基化;氧化雙鍵得到羧酸;用甲硼烷-甲硫化物復(fù)合物將羧酸還原為一級(jí)醇;甲磺?；患?jí)醇;將該甲磺酰衍生物與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)得到相應(yīng)的1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基衍生物，脫去鄰苯二甲?；图妆交酋；Ｗo(hù)基;得到所需產(chǎn)物2，2-二氟1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷。
7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷抗增殖效果的驗(yàn)證。
作為懸浮培養(yǎng)基，Morris大鼠肝癌7288C(HTC)細(xì)胞在添加了10%(v/v)滲析馬血清，11.0mM葡萄糖，2mM谷氨酰胺，0.057mM胱氨酸，5.9mMNaHCO3和50mM N-三(羥甲基)甲基甘氨酸的Swimis 77介質(zhì)中按例行方式生長(zhǎng)。HTC細(xì)胞培養(yǎng)基在10μm7，7二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷存在下或在沒(méi)有7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷存在下被培養(yǎng)并觀察11天。
在2，4，7和9天時(shí)改變細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)以保持細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。用細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定實(shí)際細(xì)胞數(shù)，計(jì)算相對(duì)的細(xì)胞生長(zhǎng)以評(píng)價(jià)所用的不同稀釋因素。根據(jù)下式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制百分比100-100 (Ntn-Nt O)/(Ncn-Nc O)其中Nc O是在時(shí)間＝0時(shí)對(duì)照培養(yǎng)基的相對(duì)生長(zhǎng);Ncn是在時(shí)間＝n時(shí)對(duì)照培養(yǎng)基的相對(duì)生長(zhǎng);Nto是時(shí)間＝0時(shí)試驗(yàn)培養(yǎng)基的相對(duì)生長(zhǎng);Ntn是時(shí)間＝n時(shí)試驗(yàn)培養(yǎng)基的相對(duì)生長(zhǎng);克隆繁殖效率是用于測(cè)定試驗(yàn)化合物是否作為細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或胞毒劑生存性的測(cè)定法。
將0.25-1.25×103細(xì)胞播種在60mm的塑料陪氏培養(yǎng)皿中，以測(cè)定克隆繁殖效率，每只培養(yǎng)皿含有5毫升下述克隆繁殖介質(zhì)添加了10%(v/v)馬血清，11mM葡萄糖，2mM谷氨酰胺，0.057mM胱氨酸，1.8mMCacl，17.5mMNaHCO3和1mM N-三(羥甲基)甲基甘氨酸的Swims 77介質(zhì)。在37℃，增濕培養(yǎng)器中，在CO/空氣氣氛(5%v/v)下培養(yǎng)12天，計(jì)算在此期間可生存的細(xì)胞克隆，與對(duì)照組相比較。其結(jié)果以可生存細(xì)胞克隆抑制百分比的形式列出。
表1示出了使用10mM 7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷培養(yǎng)基介質(zhì)到第11天末可抑制97%的細(xì)胞生長(zhǎng)。
此外，4天后加入試驗(yàn)化合物，細(xì)胞生長(zhǎng)降低72%。
表2示出了7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷(化合物A)與不可逆的L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酸酶抑制劑，[2R，5R]-6-庚炔-2，5-二胺(化合物B)結(jié)合的效果。該試驗(yàn)證明了使用了100μM[2R，5R]-6-庚炔-2，5-二胺的培養(yǎng)介質(zhì)在10μM7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷存在下增加了抗增殖的效果。例如在第一天結(jié)束時(shí)結(jié)合細(xì)胞生存性降低了44%。
表Ⅲ示出了10μm7，7-二氟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷(化合物A)與5μm不可逆L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抑制，DL-α-二氟代甲基鳥(niǎo)氨酸(化合物C)結(jié)合的效果。
該試驗(yàn)證明了化合物(A)和(C)結(jié)合起來(lái)的抗增殖效果比單獨(dú)使用化合物(A)或(C)的抗增殖效果更好。
本發(fā)明的另一方面是使用本申請(qǐng)中所披露的氟化的化合物來(lái)作為核磁共振(NMR)的成像劑以F19NMR體內(nèi)光譜的方式用于檢測(cè)和診斷腫瘤組織，并可以F19NMR層面X照像的方法使腫瘤成像。
盡管本發(fā)明的所有氟化的化合物可作為NMR試劑來(lái)檢測(cè)并用來(lái)準(zhǔn)確地測(cè)定需要診斷和/或治療的哺乳類(lèi)動(dòng)物腫瘤存在的準(zhǔn)確位置，但還是優(yōu)先選用那些作為抗增殖和抗腫瘤最有效的化合物作為NMR腫瘤成像劑來(lái)使用。用于檢測(cè)和確定哺乳類(lèi)動(dòng)物腫瘤位置的NMR成像劑另一類(lèi)優(yōu)先選用化合物是用于制備通式Ⅰ氟化化合的二氟化中間體，特別是2，2，-二氟-1，4-二胺。對(duì)此用途來(lái)講，化合物的服用量為0.2至5克。
權(quán)利要求
1.具有下列通式的偕-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備方法，
式中X和Y代表囟素，但須在任意給定條件下X和Y僅在一個(gè)碳原子取代，該方法包括(1)在制備6，6-二囟代或7，7-二囟代衍生物時(shí)a.將具有下式的2，2-二囟代-1，4-丁二醇
其中X′和Y′是氯或氟，與芐基溴反應(yīng)生成具有下式的相應(yīng)的1-芐氧基-2，2-二囟代-4-羥基丁烷和1-芐氧基-3，3-二囟代-4-羥基丁烷的混合物
式中X和Y定義同上，BZ代表芐基；(b)分離上述異構(gòu)體，游離羥基與甲磺酰氯反應(yīng)，將所得到的1-芐氧基-偕-二囟代-4-甲磺酰氧基丁烷與鄰苯二甲酰亞銨鉀反應(yīng)得到相應(yīng)的具有下式的N-(4-芐氧基-偕-二囟代丁基)鄰苯二甲酰亞胺衍生物
式中PHt代表鄰苯二甲酰基；(c)將上述鄰苯二甲酰亞胺與肼反應(yīng)生成相應(yīng)的4-芐氧基-偕二囟代丁胺，用對(duì)-甲苯磺酰氯保護(hù)該游離胺，生成相應(yīng)的具有下式的N(4-芐氧基-偕二囟代丁基)-對(duì)-甲苯磺酰胺衍生物
式中Tos代表對(duì)-甲苯磺?；?d)用3-溴丙基鄰苯二甲酰亞胺烷基化上述對(duì)-甲苯磺酰胺，生成相應(yīng)的具有下式的1-鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?偕-二囟代-8-芐氧基-4-氮雜-辛烷衍生物
(e)解離上述芐氧基得到一級(jí)醇，將該一級(jí)醇與甲磺酰氯反應(yīng)，將所得到的1-鄰基二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?偕-二囟代-8-甲磺酰氧基-4-氮雜-辛烷與鄰基二甲酰亞胺鉀反應(yīng)得到相應(yīng)的具有下式的1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯左酰基-偕-二囟代-4-氮雜-辛烷
(f)在乙醇中將上述1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺?；?偕-二囟代-4-氮雜-辛烷與肼一起加熱以除去鄰苯二甲酰保護(hù)基，然后與HBr水溶液一起加熱除去甲苯磺酰保護(hù)基得到所需的具有下式的6，6-或7，7-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷衍生物
(2)在制備2，2-二囟代衍生物時(shí)(a)將上述的2，2-二囟代-1，4-丁二醇與2份的甲磺酰氯反應(yīng)生成相應(yīng)的1，4-二-甲磺酰氧基-2，2-二囟代丁基，與氮雜二環(huán)十一碳烯一起加熱制得相應(yīng)的具有下式的1-甲磺酰氧基-2，2-二囟代-3-丁烯
式中Mes代表甲磺?；?；(b)將上述的1-甲磺酰氧基衍生物與鄰苯二甲酰亞胺反應(yīng)，解離所生成的鄰苯二甲?；玫较鄳?yīng)的具有下式的2，2-二囟代-3-丁烯胺
(c)用對(duì)-甲磺酰氯保護(hù)上述的胺，用4-溴丁基-鄰苯二甲酰亞胺烷基化上述的得到保護(hù)的衍生物得到相應(yīng)的具有下式的N-(4-鄰苯二甲酰亞氨基丁基)-N-(2，2-二囟代-3-丁烯基)-對(duì)-甲苯磺酰胺
(d)氧化上述N-(4-鄰苯二甲酰亞氨基丁基)衍生物的雙鍵，然后用甲硼烷-二甲硫復(fù)合物還原，生成相應(yīng)的具有下式的8-鄰基二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-2，2-二囟代-4-氮雜-辛醇
(e)將上述的2，2-二囟代-4-氮雜-辛醇衍生物與甲磺酰氯反應(yīng)生成相應(yīng)的1-甲磺?；?氧代-8-鄰基二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲磺?；?4-氮雜-辛烷，與鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)得到相應(yīng)的具有下式的2，2-二囟代-1，8-二鄰苯二甲酰亞氨基-4-對(duì)-甲苯磺酰基-4-氮雜-辛烷
(f)在乙醇中與肼一起加熱以脫除鄰苯二甲酰保護(hù)基，然后與HBr水溶液一起加熱以脫除甲苯磺酰基保護(hù)基得到所需要的具有下式的2，2-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷衍生物。
2.根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中所制得的化合物是6，6-二囟代或7，7-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷衍生物。
3.根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中所制得的化合物是2，2-二囟代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷衍生物。
專(zhuān)利摘要
本發(fā)明涉及作為抗增殖或抗腫瘤制劑的偕-二鹵代-1，8-二氨基-4-氮雜-辛烷的制備方法。
文檔編號(hào)C07C209/50GK86105154SQ86105154
公開(kāi)日1987年4月22日 申請(qǐng)日期1986年8月20日
發(fā)明者格哈特·弗里茨, 馬蒙特·彼里 申請(qǐng)人:默里爾多藥物公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan