專利名稱:二-叔-丁基酚類化合物的制作方法
本發(fā)明涉及一類新的二-叔丁基苯基化合物，該類化合物可用于治療炎癥，并可改善由于局部缺血而引起的細(xì)胞損傷。
已知哺乳動(dòng)物可患各種疾病，炎癥則是其一，它伴隨有腫脹、觸疼、可動(dòng)性降低、疼痛及發(fā)燒，人和動(dòng)物均是如此。雖然許多抗炎藥物用于治療如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、變性的關(guān)節(jié)疾病等是有效的，但是，許多該類抗炎藥物有很多付作用，例如有的對(duì)胃有刺激等。
對(duì)于風(fēng)濕性疾病和關(guān)節(jié)炎疾病的病原學(xué)和發(fā)病機(jī)理目前仍不十分清楚。與此同時(shí)，需要有更加安全、更符合標(biāo)準(zhǔn)的藥物，該類藥物應(yīng)能使炎癥的過(guò)程減慢并使炎癥減輕。例如，在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療中，重要的是有能夠減少或延緩喪失活動(dòng)能力的、能減輕炎癥的抗炎藥物。
本發(fā)明涉及某些二-叔-丁基酚衍生物，該類衍生物可用作抗炎藥物，并可用于減慢關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。本發(fā)明方法及其配方中應(yīng)用的化合物之一為5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮，它是Teuber等人介紹的〔利比希化學(xué)紀(jì)事(Liebigs Ann.Chem.)757(1978)〕，它是制備肽類順磁標(biāo)記化合物的中間體。對(duì)于該中間體化合物，其生物學(xué)上的效用并未公開(kāi)。Isomura等人報(bào)道，某些3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯基-取代吡咯衍生物是一類抗炎藥物〔化學(xué)與藥物學(xué)通報(bào)(Chem.Pharm.Bull.)，32(1)，152(1984)〕。
Hidaka等人介紹了α-(3，5-二-叔-丁基-4-羥基亞芐基)-r-丁內(nèi)酯的抗炎活性〔日本藥理學(xué)雜誌(Japan.J.Pha-rmacol.)36，77(1984)美國(guó)專利NO.4，464，382提出某些繞丹寧衍生物為醛糖還原酶的抑制劑。然而，權(quán)利要求
的化合物在其繞丹寧環(huán)的氮原子上全都需要乙酸取代基。
根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式Ⅰ化合物二-叔-丁基酚及其醫(yī)藥上可以接受的鹽類可用作抗炎藥物，例如，用于關(guān)節(jié)炎，
其中Q是O或NR，R為氫或C1-C4烷基;R1和R2各為氫，或一起形成一個(gè)鍵;R3和R4各為氫，或者一起為S＝。
另一方面，本發(fā)明還提供了含有如上面所定義的式Ⅰ化合物或其醫(yī)藥上可以接受的鹽作為有效成分，并伴有一種或諸種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑的藥用配方。
除了式Ⅰ中的R1和R2一起代表一個(gè)鍵，Q為NH，R3和R4一起代表S＝的化合物外，其余式Ⅰ化合物及其醫(yī)藥上可以接受的鹽類均是新的，這也是本發(fā)明的一個(gè)方面。
此外，式Ⅲ化合物及其醫(yī)藥上可以接受的鹽類也宜用于運(yùn)轉(zhuǎn)哺乳動(dòng)物由于局部缺血所引起的細(xì)胞損傷，尤其是可用于中風(fēng)所致的腦損傷，式Ⅲ化合物的結(jié)構(gòu)式為
其中R是氫或C1-C4烷基。
式Ⅰ化合物包括5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮(下文稱作化合物Ⅱa)、5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱb)、5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱc)、5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱd)和5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-甲基-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱe)。式Ⅰ化合物包括Ⅱb、Ⅱc和Ⅱd。其中的R1和R2一起形成一個(gè)鍵的化合物(Ⅱa、Ⅱb和Ⅱe是優(yōu)先選用的化合物，Ⅱe是最優(yōu)選的。
其他化合物命名相似。其中Q為氧，R3和R4為＝S的式Ⅰ化合物稱為2-硫代-1，3-氧硫雜茂烷-5-酮，而相應(yīng)的脫硫酮衍生物(R3和R4各為氫)則是1，3-氧硫雜茂烷-5-酮。該噻唑烷酮類(Q是NR)是優(yōu)先選用的化合物，尤其是其中R是氫或甲基的化合物。
術(shù)語(yǔ)“C1-C4烷基”指的是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基和叔-丁基。
本技術(shù)領(lǐng)域：
中化合物Ⅱa由Tueber等人報(bào)道〔利比?；瘜W(xué)紀(jì)事(Leibigs Ann.Chem)757(1978)〕。該化合物是于回流下、在冰醋酸中由3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯甲醛與繞丹寧反應(yīng)制備的，所用催化劑為熔融的乙酸鈉。
化合物Ⅱb、Ⅱc和Ⅱd可用化合物Ⅱa來(lái)制備。例如，當(dāng)將化合物Ⅱa進(jìn)行催化氫化時(shí)，得到的化合物中既有Ⅱb也有Ⅱc。它們的相對(duì)比例取決于溫度、壓力、氫化持續(xù)時(shí)間、所用溶劑及所用的特定催化劑。如于100℃下、乙醇中，用5%的鈀炭來(lái)處理化合物Ⅱa約18小時(shí)，化合物Ⅱb與Ⅱc的比例約為60∶40。也可用另外的辦法來(lái)實(shí)現(xiàn)這些轉(zhuǎn)化，如可在鋅存在下，于鹽酸和醇(如乙醇)的混合物中加熱化合物Ⅱa來(lái)實(shí)現(xiàn)。在諸如甲苯這類非反應(yīng)性溶劑中，最好是在游離基引發(fā)劑(如偶氮二異丁基腈)存在下，將硫酮與還原劑(如氫化三烷基錫，特別是氫化三-正-丁基錫)一道加熱，可以完成硫酮的還原反應(yīng)，而又不影響芐基雙鍵，其典型的情況是在50-120℃范圍內(nèi)完成該反應(yīng)。
可用本技術(shù)領(lǐng)域：
中各種已知方法使化合物Ⅱa轉(zhuǎn)變?yōu)棰騞。優(yōu)選的方法則是由Nakamura等人所介紹的〔四面體通訊(Tetrah-edron Letters)25，3983(1984)〕，該反應(yīng)是在硅膠存在下，用二氫吡啶(如2，6-二甲基-1，4-二氫-3，5-吡啶二羧酸二乙酯)來(lái)處理化合物Ⅱa。該反應(yīng)最好是在諸如苯或甲苯這類非反應(yīng)性溶劑存在下，最好是在惰性氣流中來(lái)進(jìn)行，進(jìn)行該反應(yīng)的溫度范圍是約從25℃直至混合物的回流溫度，在約80℃這個(gè)優(yōu)選溫度下，12-18小時(shí)后，該反應(yīng)基本上進(jìn)行完全。
可用相似方法來(lái)制備其他噻唑烷酮。例如，其中Q是NR、R是C1-C4烷基的式Ⅱ化合物可按上述方法制備，最初反應(yīng)與制備化合物Ⅱa相似，應(yīng)用適當(dāng)N-取代的繞丹寧。另外，為了制得式Ⅱ相應(yīng)的N-烷基化衍生物，可用合適的通式為RL的烷基化試劑將未取代的化合物(Ⅱ，Q為NH)烷基化，通式RL中的L為適宜的離去基團(tuán)，如鹵素(例如碘或溴)。這樣的轉(zhuǎn)變一般是在如氫化鈉這類強(qiáng)堿存在下，于惰性溶劑(如四氫呋喃或二甲基甲酰胺)中來(lái)完成的，常用的反應(yīng)溫度為0℃-100℃。
可用β-(3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯基)-α-巰基丙烯酸(Ⅳ)制備相應(yīng)的1，3-氧硫雜茂烷-5-酮。為了制得硫酮類似物(Ⅱ，Q為氧，R3和R4為＝S)，可將化合物Ⅳ用二硫化碳處理，而將Ⅳ與甲酸反應(yīng)便得到相應(yīng)的脫硫酮(Ⅱ，Q為氧，R3和R4各為氫)?；衔铫艨捎靡阎椒ㄖ苽洹怖鐓⒁?jiàn)(ampaigne等有機(jī)化學(xué)雜誌(J.Org.chem.)，26，359(1961);出處同上，26，1326(1961);chakrabarti等四面體(Tetrahedron)，25(14)，2781(1969)〕，或者將化合物Ⅱa與稀堿水溶液一起加熱來(lái)制備(見(jiàn)實(shí)施例10A)。
另一方面，本發(fā)明還提供了制備新的式Ⅰ化合的方法，該方法包括(A)將結(jié)構(gòu)式為
的化合物與下式化合物反應(yīng)，則可得到其中的R1和R2一起代表一
個(gè)鍵、Q是NR、R3和R4一起代表＝S的式Ⅰ化合物;
(B)將其中R3和R4代表＝S的式Ⅰ化合物還原，便可制得R3和R4為氫的式Ⅰ化合物;
(C)將其中R1和R2代表一個(gè)鍵的式Ⅰ化合物還原，制得R1和R2是氫的式Ⅰ化合物;
(D)將其中R是氫的式Ⅰ化合物烷基化，制得其中R是C1-C4烷基的式Ⅰ化合物;或(E)將結(jié)構(gòu)式為
的化合物與(ⅰ)甲酸反應(yīng)，以制備其中Q為氧、R1和R2一起代表一個(gè)鍵、R3和R4代表氫的式Ⅰ化合物;或(ⅱ)二硫化碳反應(yīng)，以制備其中Q為氧，R1和R2一起代表一個(gè)鍵、R3和R4一起代表＝S的式Ⅰ化合物。
根據(jù)所定義的R1和R2，式Ⅰ化合物可以有各種異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明并不局限于任何特定的異構(gòu)體，而是包括各種可能的異構(gòu)體和外消旋體。醫(yī)藥上可以接受的鹽類的制備方法是，將式Ⅰ化合物與強(qiáng)堿如氫氧化鈉反應(yīng)。
下述實(shí)施例將進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明化合物的制備方法。
實(shí)施例15-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕-亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱa)于氮?dú)饬髦?，?17.2克3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯甲醛、66.6克繞丹寧、143.5克熔融的乙酸鈉和2500毫升冰醋酸一起加熱回流，加熱23小時(shí)后，反應(yīng)混合物冷卻，邊攪拌邊倒入由1升乙醇和1升冰組成的混合物中。加水500毫升，攪拌30分鐘后，濾集生成的沉淀，用500毫升乙酸乙酯將該沉淀制成漿狀物，過(guò)濾。然后將沉淀溶解在3升乙醇中，加熱至沸騰，加水(約450毫升)直至溶液仍為混濁，冷卻至室溫后，濾出沉淀，得所要的標(biāo)題化合物99.6克，熔點(diǎn)約260℃。
元素分析C18H23NO2S2計(jì)算值C，61.86;H，6.63;N，4.01;
測(cè)定值C，62.13;H，6.55;N，4.15。
實(shí)施例2-35-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱb)和5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱc)將69.90克4-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮溶于4升乙醇中的溶液，在200克5%鈀炭存在下，于100℃和500磅/吋2壓力下氫化過(guò)夜。反應(yīng)混合物過(guò)濾并蒸發(fā)至干。分若干份，每份溶解在1個(gè)體積的熱乙酸乙酯中，用2個(gè)體積的己烷稀釋，過(guò)濾，置于硅膠層析柱上，用含有35%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到不同部分，根據(jù)相應(yīng)化合物的純度將各洗脫液予以合併。從每份樣品中用層析法分離的化合物Ⅱb總重4.6克?；衔铫騜為主的洗脫物用乙酸乙酯/己烷進(jìn)行結(jié)晶，制得的化合物Ⅱb總重13.79克。于硅膠柱上對(duì)含雜質(zhì)化合物Ⅱc的洗脫物再次進(jìn)行層析分離，用含25%乙酸乙酯的己烷溶液作洗脫劑，得到化合物Ⅱc9.82克。
實(shí)施例2.5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-4-噻唑烷酮，熔點(diǎn)209-213℃。
元素分析C18H25NO2S計(jì)算值C，67.67;H，7.89;N，4.38;
測(cè)定值C，67.44;H，8.11;N，4.65。
實(shí)施例3.5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-4-噻唑烷酮，熔點(diǎn)149-152℃。
元素分析C18C27NO2S計(jì)算值C，67.25;H，8.47;N，4.36;
測(cè)定值C，67.43;H，8.44;N，4.21。
實(shí)施例45-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮(化合物Ⅱd)于氮?dú)饬飨?，?3.98克5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮、13.17克2，6-二甲基-1，4-二氫-3，5-吡啶二羧酸二乙酯及600毫升甲苯一道進(jìn)行攪拌以使之溶解。加入40克預(yù)先于50℃真空干燥7小時(shí)的硅膠60(粒度小于230目)，回流下加熱18小時(shí)，趁熱進(jìn)行過(guò)濾，其濾液蒸發(fā)至干，殘余物溶解在500毫升乙酸乙酯中，用1N的鹽酸洗滌5次，每次用量400毫升，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空下蒸發(fā)，得到黃色固體，用硅膠柱進(jìn)行層析分離，用含2.5%乙酸乙酯的甲苯溶液作洗脫劑，得到所要的標(biāo)題化合物8.0克，熔點(diǎn)178-179℃。
元素分析C18H25NO2S2計(jì)算值C，61.50;H，7.17;N，3.98;
測(cè)定值C，61.28;H，7.19;N，3.94。
實(shí)施例55-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-甲基-2-硫代-4-噻唑烷酮按實(shí)施例1的方法，用3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯甲醛和N-甲基繞丹寧為原料，可得到標(biāo)題化合物，產(chǎn)率76%，熔點(diǎn)＞260℃。
元素分析C19H25NO2S2計(jì)算值C，62.77;H，6.93;N，3.85;S，17.64;
測(cè)定值C，62.54;H，7.05;N，3.66;S，17.82。
實(shí)施例65-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-甲基-4-噻唑烷酮該標(biāo)題化合物可用下述方法制備將1.16克偶氮二異丁基腈(AIBN)溶解在142毫升甲苯中，再將該溶液、實(shí)施例5的硫酮10.31克和38.15毫升氫化三-正-丁基錫一道加熱回流1小時(shí)，冷卻后加入水以分離產(chǎn)品，分離后的有機(jī)層用1N鹽酸及飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮，其殘余物用硅膠柱層析法純化，洗脫劑為含10-50%濃度梯度己烷的乙酸乙酯溶液，純化后的產(chǎn)物熔點(diǎn)為142-144℃。
元素分析C19H27NO2S的分析計(jì)算值C，68.43;H，8.16;N，4.20;
測(cè)定值C，68.68;H，8.00;N，3.97。
實(shí)施例75-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-乙基-4-噻唑烷酮將1.20克60%氫化鈉分散劑(分散在礦物油中)加入9.58克5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-4-噻唑烷酮的150毫升四氫呋喃溶液中。在停止釋放氣體后加入2.4毫升乙基碘，于氬氣流下攪拌反應(yīng)混合物2天?；亓飨录訜?小時(shí)，冷卻，用二乙基醚和水稀釋，用1N鹽酸將pH調(diào)節(jié)至3。用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌分離出的有機(jī)層，然后再用飽和氯化鈉溶液洗滌，濃縮干燥后的有機(jī)溶液，殘余物用硅膠層析法進(jìn)行分離，洗脫劑為含10-30%濃度梯度乙酸乙酯的己烷溶液，制得欲要的標(biāo)題化合物3.65克，熔點(diǎn)為169-172.5℃。
元素分析C20H29NO2S計(jì)算值C，69.12;H，8.41;N，4.03;
測(cè)量值C，69.39;H，8.52;N，4.30。
實(shí)施例8-9用適宜的烷基碘為原料，按實(shí)施例7的方法可制得下述化合物實(shí)施例8.5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-丙基-4-噻唑烷酮，產(chǎn)率60%，熔點(diǎn)145-146.5℃。
元素分析C21H31NO2S計(jì)算值C，69.76;H，8.64;N，3.87;
測(cè)定值C，70.05;H，8.76;N，4.01。
實(shí)施例9.5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-丁基-4-噻唑烷酮，產(chǎn)率60%，熔點(diǎn)168.5-169.5℃。
元素分析C22H33NO2S計(jì)算值C，70.36;H，8.86;N，3.73;
測(cè)定值C，70.60;H，8.81;N，3.97。
實(shí)施例104-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-1，3-氧硫雜茂烷-5-酮A.制備β-(3，5-二-叔-丁基-4-羥基苯基)-α-巰基丙烯酸將174.5克5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮溶解在1250毫升10%的氫氧化鈉溶液中，該溶液在蒸汽浴上加熱4小時(shí)，加入脫色炭，用硅藻土墊板過(guò)濾，濾液加入冰冷卻，用6N鹽酸處理。沉淀產(chǎn)物用過(guò)濾法收集、用水洗滌、干燥，得到欲要的中間體-標(biāo)題A化合物150克。
B.制備4-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-1，3-氧硫雜茂烷-5-酮按農(nóng)業(yè)生物化學(xué)〔(Agr.Biol.Chem)29(8)，728(1965)〕的方法，將上面制得的6克巰基丙烯酸36毫升乙酸和6毫升甲醛(37%的溶液)一道在蒸汽浴上加熱1小時(shí)，蒸發(fā)該混合物，殘余物用硅膠層析法分離，制得欲要的產(chǎn)物1.7克，熔點(diǎn)127-129℃。
元素分析C18H24O3S計(jì)算值C，67.47;H，7.55;
測(cè)得值C，67.71;H，7.62。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)式Ⅰ化合物在體外具有抑制5-脂肪氧合酶的作用。此外，已經(jīng)表明該化合物是磷脂酶A2的抑制劑，而且，在所設(shè)計(jì)的用以檢測(cè)抗炎藥劑及抗關(guān)節(jié)炎藥劑效應(yīng)的各種試驗(yàn)體系中已證明，式Ⅰ化合物在體內(nèi)的活性。這些藥效作用將在下述的試驗(yàn)體系中予以說(shuō)明。
角叉菜膠試驗(yàn)用C.A.Winter所介紹的方法〔實(shí)驗(yàn)生物學(xué)與實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)會(huì)會(huì)報(bào)(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，)111，544(1962)〕，評(píng)價(jià)本發(fā)明式Ⅰ化合物的抗炎活性。在試驗(yàn)中，大白鼠的炎癥是通過(guò)在其后爪注射角叉菜膠所致。注射角叉菜膠前先服試驗(yàn)化合物，與對(duì)照組相比測(cè)定抑制隨后發(fā)生的炎癥的百分率，結(jié)果列于表Ⅰ。
表Ⅰ角叉菜膠試驗(yàn)中的抗炎活性實(shí)施例號(hào) 劑量 抑制率化合物毫克/公斤＊(%)1 30 67%2 50 46%3 50 12%4 50 65%＊管飼法口服給藥抗原引起的豚鼠肉芽腫性炎按Andersson的一般方法〔英國(guó)藥理學(xué)雜誌(Br.J.Phar-mac.)69，467(1980)，〕，每只豚鼠一次注射混合有50毫克氫氧化鋁的1微克卵白蛋白，使雄雌Hartley種豚鼠(250-300克)對(duì)于卵白蛋白過(guò)敏。21-26天后，向這些動(dòng)物的腳墊上注射靠共價(jià)鍵連接到瓊脂糖上的卵白蛋白。
在過(guò)敏的豚鼠腳墊上注射0.1毫升Affi-Gel卵白蛋白(加利福尼亞Richmond Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室)，以引起肉芽腫性炎。注射3天后，再測(cè)定注射及未注射的腳墊的體積。用Statham壓力轉(zhuǎn)換器和數(shù)字式電壓表，借助水移動(dòng)度來(lái)測(cè)定其腳爪的體積。注射和未經(jīng)注射的腳爪的體積的差值代表炎癥的程度。對(duì)發(fā)炎的腳爪進(jìn)行組織檢查表明，在第1天和3天之間有中性白細(xì)胞浸潤(rùn)，到第3天有巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，到第11天，觀察到有明顯的肉芽腫性炎病灶蔓延，炎痰明顯地主要由巨噬細(xì)胞所浸潤(rùn)，同時(shí)還有少量的多核巨細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、漿細(xì)胞及包圍著Affi-Gel卵白蛋白球的淋巴細(xì)胞。
試驗(yàn)組豚鼠(一組5只腳墊注射Affi-Gel卵白蛋白3天后，再在食物中混以試驗(yàn)化合物、臨床抗風(fēng)濕性藥物(如青霉胺)，或安慰劑治療8天，或用管試法口服治療4天。測(cè)定腳爪體積，然后將注射和未注射的腳爪體積之間的差值同第3天的差值進(jìn)行比較，第3天是用藥物進(jìn)行治療的第1天，按下面的公式計(jì)算抑制肉芽腫性炎的百分率抑制百分率＝(1- (Diffvol-11)/(Diffvol-3) )×100式中的Diffvol-3和Diffvol-11分別為第3天、第11天注射和未注射的腳爪其體積之差，其研究結(jié)果總結(jié)于表Ⅱ。
表Ⅱ抗原引起的肉芽腫性炎試驗(yàn)中的抗炎活性試驗(yàn) 劑量/ 抑制率化合物 給藥途徑 (%)1 0.1%在食物中 64%25毫克/公斤口服 5%50毫克/公斤口服 23%100毫克/公斤口服 55%2 0.1%在食物中 61%3 0.1%食物中 67%4 0.1%食物中 5%硫唑嘌呤 50毫克/公斤口服 57%
D-青霉胺 100毫克/公斤口服 60%200毫克/公斤口服 73%撲熱息痛 100毫克/公斤口服 69%地塞米松 3毫克/公斤口服 62%(Dexametkazone) 1毫克/公斤口服 70%膠原引起的關(guān)節(jié)炎的試驗(yàn)Ⅱ型膠原是用StraWich和Nimni介紹的方法〔生物化學(xué)(Biochemisfry)，10，3905(1971)〕，從牛的關(guān)節(jié)軟骨中分離出來(lái)的。將這些膠原溶解在0.1M乙酸中并貯存于-20℃下。用等體積不完全的弗羅因德佐劑(ICEA)稀釋到2毫克/毫升的濃度，并進(jìn)行充分地乳化，在飼養(yǎng)的LeWis雄性大白鼠組(一組6只)(charles River Breeders;170-200克)背部的不同部位于開(kāi)始給藥的前一天真皮內(nèi)注射含膠原約0.5毫克的乳化劑。為了確定炎癥反應(yīng)，測(cè)定每只大白鼠后爪體積，在整個(gè)試驗(yàn)期間每週記錄三次。試驗(yàn)組動(dòng)物接受試驗(yàn)化合物懸浮于羧甲基纖維素媒液中，用管飼法口服給藥，從第1天開(kāi)始，每週5天(星期1-5)。對(duì)照組動(dòng)物接受的只是媒液，不給予試驗(yàn)化合物。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第28或30天)，用心穿刺法抽取這些動(dòng)物的血液，用經(jīng)戊二醛處理的綿羊紅細(xì)胞(使Ⅱ型膠原與之相結(jié)合)借助被動(dòng)血細(xì)胞凝集技術(shù)來(lái)評(píng)價(jià)血清抗Ⅱ型膠原抗體水平〔Avrameas等，免疫化學(xué)(Immunochemistry)，6，67(1969);Andriopoulos等，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Arth.Rheum.)，19，613(1976)〕。用放射性劑量耳指數(shù)試驗(yàn)來(lái)測(cè)定對(duì)于Ⅱ型膠原細(xì)胞的反應(yīng)或延遲型過(guò)敏反應(yīng)〔Kostiala，免疫學(xué)(Immunology)，33，561(1977)〕。在一些試驗(yàn)中，對(duì)從每一組動(dòng)物中抽出的2或3只有代表性動(dòng)物的后爪進(jìn)行X射線照相，以確定由于Ⅱ型膠原的免疫作用及藥物的影響所發(fā)生的骨損傷。給一些大鼠注射不含膠原Ⅱ的ICFA，以作陰性對(duì)照，試驗(yàn)期間，這些大白鼠僅接受甲氧甲酰纖維素賦形劑。
由于膠原引起的關(guān)節(jié)炎體系中，式Ⅰ化合物試驗(yàn)的結(jié)果列于表Ⅲ，其百分抑制率是按下面的公式進(jìn)行計(jì)算抑制率(%)＝〔1- (Vt-Vv)/(Vc-Vv) 〕×100其中Vt是接受試驗(yàn)化合物治療的動(dòng)物(試驗(yàn)組)后爪體積，Vc是未接受試驗(yàn)化合物治療的動(dòng)物(只給予甲氧甲酰纖維素媒液，即為對(duì)照組)后爪體積，Vv是接受無(wú)膠原Ⅱ的ICFA、并經(jīng)媒液(甲氧甲酰纖維素)治療的動(dòng)物后爪體積(陰性對(duì)照組)。
表Ⅲ對(duì)膠原引起的關(guān)節(jié)炎的抑制實(shí)施例號(hào) 劑量 抑制率化合物毫克/公斤＊(%)＊1 50 100%50 53%2 30 91%50 100%30 50%3 50 79%
4 50 5%＊試驗(yàn)方法見(jiàn)正文佐劑引起大白鼠關(guān)節(jié)炎的試驗(yàn)試驗(yàn)化合物改變由于佐劑引起的大白鼠水腫而造成的后爪腫脹和骨損傷的能力。為了定量測(cè)定對(duì)佐劑引起的關(guān)節(jié)炎而造成的后爪腫脹的抑制能力，將炎癥劃分為兩期(1)第一和第二次注射的后爪;(2)第二次未注射的后爪，一般說(shuō)來(lái)，由于經(jīng)注射的后爪引起的炎癥，大約11天開(kāi)始產(chǎn)生腫脹。對(duì)于后一類型炎癥的減輕則表示有免疫抑制活性〔參見(jiàn)Chang類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Arth.Rheum.)20，1135-1141(1977)〕。
在雄性LeWis-Wistar大白鼠(200-210克)的右后爪的足底上，一次注射0.1毫升0.5%，經(jīng)熱殺、凍干的結(jié)核桿菌(Cal-biochem-Perrigen-C)于礦物油中的懸浮液，以引起佐劑關(guān)節(jié)炎〔Winter等人報(bào)道的改進(jìn)方法，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Arth.Rheum)，9，394-397(1966)〕。只有一組大白鼠(10只)(“TB”對(duì)照組)接受了這種處理。另一組大白鼠(5只)未予處理(正常對(duì)照組)。將試驗(yàn)化合物懸浮于羧甲基纖維素中(1%)，給大白鼠(每組5只)口服藥物，第1天開(kāi)始每天劑量為50毫克/公斤，佐劑注射后一直口服到第28天(29次量)，用Statham壓力轉(zhuǎn)換器和數(shù)字式電壓表，借助汞移動(dòng)度測(cè)定其爪的體積。在第16、18、21、23、25、28和30天時(shí)測(cè)量注射和未注射的后爪體積。第30天，將這些動(dòng)物活殺后進(jìn)行X-射線透視。未注射的腳爪從第16天開(kāi)始到第30天測(cè)量的爪體積，和TB對(duì)照組、正常對(duì)照組和經(jīng)藥物處理的動(dòng)物組之間的關(guān)系用計(jì)算機(jī)標(biāo)繪出來(lái)，曲線下的面積〔(TB對(duì)照一正常對(duì)照)和(經(jīng)處理的動(dòng)物組-正常對(duì)照組)〕可以求出，其結(jié)果列于表Ⅳ。
表Ⅳ對(duì)未經(jīng)注射腳爪體積炎癥的抑制第16天-30天實(shí)施例號(hào) 劑量 抑制率化合物毫克/公斤口服×29 (%)＊1 50 40%2 50 52%3 50 10%4 50 4%6 50 57%7 50 6%8 50 40%10 50 52%＊抑制%是按下面式子對(duì)于第16、18、21、23、25、28和30天所標(biāo)繪的未經(jīng)注射的腳爪平均體積的曲線(AUC)下面積的差值抑制%＝〔1- ((藥物處理組的AUC)-(正常對(duì)照組AUC))/((TB對(duì)照組AUC)-(正常對(duì)照組AUC)) 〕×100也業(yè)已表明式Ⅲ化合物具有預(yù)防局部缺血引起的細(xì)胞損傷的作用，特別是有預(yù)防由于中風(fēng)引起的神經(jīng)元細(xì)胞損傷的作用，這在下面的實(shí)驗(yàn)中將予說(shuō)明。
大白鼠的中風(fēng)模型按下述方法閉合向其腦供血的四根動(dòng)脈以使大白鼠產(chǎn)生中風(fēng)用甲氧氟烷將雄性Wistar大白鼠麻醉，再置于趨實(shí)體性設(shè)備(Sfe-reotaxic insfrument)中。在其頸的背側(cè)面上縱向切口，頸肌肉顯露出脊椎骨的背側(cè)面。在兩個(gè)脊椎動(dòng)脈所通過(guò)第一個(gè)頸脊椎骨的地方露出了這兩個(gè)脊椎動(dòng)脈。運(yùn)用電烙術(shù)使這兩根動(dòng)脈永久閉合。在這兩根脊椎動(dòng)脈血液凝固后，將大白鼠從趨實(shí)性設(shè)備中取出來(lái)，縫合其外傷。然后在頸的腹側(cè)面上予以縱向切口，于是露出了兩個(gè)共同的頸動(dòng)脈，再把這兩根頸動(dòng)脈從周圍神經(jīng)和結(jié)締組織中分出。在每一頸動(dòng)脈上套以由硅橡膠管制的防外傷的卡環(huán)，套硅橡膠管時(shí)應(yīng)使動(dòng)脈不受外傷或咬合，然后縫合外傷。防外傷的卡環(huán)是按這樣來(lái)設(shè)計(jì)的，即通過(guò)拉硅橡膠細(xì)線，可以使頸動(dòng)脈閉合，所說(shuō)的硅橡膠細(xì)線應(yīng)從該傷口處伸出來(lái)。通過(guò)減少在硅橡膠線上的拉力，從頸到腦的循環(huán)能夠恢復(fù)。手術(shù)后，應(yīng)允許大白鼠恢復(fù)24小時(shí)。
在試驗(yàn)當(dāng)天，將化合物懸浮于2%的阿拉伯樹(shù)膠中，在中風(fēng)前的不同的時(shí)間用口服給藥。把置于頸上的卡環(huán)收緊30分鐘，以使之中風(fēng)(大腦局部缺血)。處于中風(fēng)狀態(tài)下的大白鼠失去了正常的反射，對(duì)刺激物沒(méi)有反應(yīng)。局部缺血30分鐘后，使卡環(huán)放松，恢復(fù)血液向腦流動(dòng)。中風(fēng)后次日早晨，再用化合物處理中風(fēng)的大白鼠，中風(fēng)后的第3天，用過(guò)量的巴比妥進(jìn)行麻醉，在原位置對(duì)其腦灌注10%中性福福爾馬林緩沖液，用足以固定腦的福爾馬林灌注后，將腦取出，制備組織切片以前將腦貯存于10%的福爾馬林中。
大白鼠和人對(duì)局部缺血引起的損傷最敏感的腦區(qū)域之一是海馬CA1椎體狀細(xì)胞層。對(duì)于局部缺血30分鐘仍無(wú)反應(yīng)的動(dòng)物中，CA1椎體狀細(xì)胞層全被毀壞了。由海馬制備的組織切片，在顯微鏡下可以觀察到該細(xì)胞層。腦損傷按下面的標(biāo)度計(jì)算0＝完全無(wú)損傷，有完整無(wú)缺的細(xì)胞層1＝弱損傷，有1/3CA1層壞死2＝中度損傷，有2/3CA1層壞死3＝嚴(yán)重?fù)p傷，CA1層完全壞死為了對(duì)腦損傷有一準(zhǔn)確評(píng)價(jià)，對(duì)由每一腦制備的10-12個(gè)切片的損傷進(jìn)行了評(píng)定。計(jì)算每一治療組的平均損傷評(píng)分。把治療組的評(píng)分從統(tǒng)計(jì)學(xué)上與僅僅接受了媒液(2%的阿拉伯膠)的對(duì)照組的評(píng)分進(jìn)行比較，媒液是用以懸浮試驗(yàn)化合物的。用“t檢驗(yàn)”評(píng)定顯著性水平，結(jié)果總結(jié)于表Ⅴ。
表Ⅴ對(duì)局部缺血引起的大白鼠海馬CA1區(qū)域腦損傷的預(yù)防處理組劑量＊大白鼠數(shù)損傷評(píng)分＊＊媒液對(duì)照組 - 6 2.5±0.2實(shí)施例2 50 10 1.2±0.2+媒液對(duì)照組 - 4 2.3±0.8實(shí)施例2 200 6 0.2±0.2+媒液對(duì)照組 - 10 2.5±0.2實(shí)施例2 500 7 0.07±0.007++
媒液對(duì)照組 - 3 2.8±0.2實(shí)施例2 500 4 0.0++媒液對(duì)照組 - 9 2.4±0.4實(shí)施例6 50 6 0.7±0.3++媒液對(duì)照組 - 4 1.5±0.5實(shí)施例6 150 4 0.3±0.3＊＊＊＊口服2%的阿拉伯膠懸浮液，按毫克/公斤體重計(jì)算＊＊平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤＊＊＊3只大白鼠無(wú)損傷，1只瀕于死亡;
P＜0.02。
+P＜0.02;++P＜0.001式Ⅱ化合物是抗炎藥物和抗關(guān)節(jié)炎藥物，本發(fā)明提供了抗炎癥和抗關(guān)節(jié)炎的方法。該方法包括用各種途徑服用式Ⅱ化合物，如口服、直腸給藥、經(jīng)皮給藥、皮下給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、或鼻內(nèi)給藥，常采用藥用配方的形式給藥。采用口服給藥，上述化合物是有效的，這是這類化合物主要的特點(diǎn)。制備該配方的方法是制藥工業(yè)中人所共知的，該配方至少應(yīng)含有一種有效化合物。
制備本發(fā)明配方的一般方法是，將有效成分與載體混合、或用載體稀釋、或密封于膠囊、小藥囊，紙或其他包皮形式的載體內(nèi)。如果載體是作為稀釋劑，這樣的載體可以是固體的、半固體的或液體物質(zhì)、該載體可以用作有效成分的媒液、賦形劑或介質(zhì)。這樣，配方可采用的劑型有片劑、丸劑、粉劑、錠劑、小藥囊劑、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(以一固體的形式或在液體介質(zhì)中)、按重量計(jì)，如含直到10%有效成分的軟膏劑、軟明膠膠囊劑、硬明膠膠囊劑、栓劑、可注射的無(wú)菌溶液劑和無(wú)菌包裝的粉劑。
適宜的載體、賦形劑和稀釋劑的例子有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油。此外，在配方中還可有潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑或調(diào)味劑。配制本發(fā)明的配方所采用的方法是本技術(shù)領(lǐng)域：
中人所共知的，制得的制劑給病人服用后可使有效成分迅速的釋放、或者使有效成分持續(xù)的或延遲的釋放出來(lái)。
配制本發(fā)明配方優(yōu)先選用的形式是單位劑量的形式，每劑量含有效成分約5-500毫克，而更常采用的則是約25-300毫克。術(shù)語(yǔ)“單位劑量形式”實(shí)際上是指對(duì)人和其它哺乳動(dòng)物適用的單次劑量的獨(dú)立單位，每一單位含有為了產(chǎn)生所希望的治療效果預(yù)先測(cè)定的有效成分的量及合適的藥用載體。
這些有效成分在很寬的劑量范圍內(nèi)都是有效的。例如，每天劑量通常為約0.5-200毫克/公斤體重。治療成年患者時(shí)，優(yōu)選的單次或分次劑量約為1-50毫克/公斤。然而，應(yīng)該明白，化合物的實(shí)際用量是由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)情況決定的，這包括有要預(yù)治療的條件、所選用的化合物、所選擇的投藥途徑、各患者的年齡、體重和反應(yīng)，病情的嚴(yán)重程度。所以，無(wú)論如何不可把上述劑量范圍理解為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
下面的配制實(shí)施例可以應(yīng)用任何式Ⅰ化合物作為有效化合物。無(wú)論如何下述實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，而并非有意限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例11按下述配方制備硬明膠膠囊量(毫克/膠囊)5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕-甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮 250干淀粉 200硬脂酸鎂 10將上述各成分混合后，按460毫克的量裝入硬明膠囊。
實(shí)施例12用下述成分配制片劑量(毫克/片)5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-4-噻唑烷酮 250微晶纖維素 400二氧化硅，烘制的 10硬脂酸 5混合后壓制成片狀，每片重665毫克。
實(shí)施例13用下述各成分配制氣霧劑溶液重量%5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-4-噻唑烷酮 0.25乙醇 29.75發(fā)射劑22(氯二氟甲烷) 70.00將有效化合物與乙醇混合，再將混合物加到一部分發(fā)射劑22中，冷卻至-30℃，移入灌注裝置。然后將需要的量裝入不銹鋼容器中，用剩下的一部分發(fā)射劑稀釋，再于容器上裝入閥門。
實(shí)施例14按下述配方制備每片含60毫克有效成分的片劑5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕-亞甲基｝-2-硫代-4-噻唑烷酮 60毫克淀粉 45毫克微晶纖維素 35毫克聚乙烯吡咯烷酮(其10%的水溶液) 4毫克羧甲基淀粉鈉 4.5毫克硬脂酸鎂 0.5毫克滑石 1毫克總量 150毫克將有效成分、淀粉和纖維素用45號(hào)(u·s)篩子過(guò)篩，并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與經(jīng)14號(hào)(u·s)篩子篩過(guò)的粉料混合，制得的顆粒在50-60℃下干燥后用18號(hào)(u·s)篩子過(guò)篩，將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石先用60號(hào)(u·s)篩子過(guò)篩，然后再將其加到顆粒中，混合后經(jīng)壓片機(jī)壓制，制得每片重150毫克的片劑。
實(shí)施例15按下述配方制備每粒膠囊含80毫克有效成分的膠囊劑4-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝1，3-氧硫氧茂烷-5-酮 80毫克淀粉 59毫克微晶纖維素 59毫克硬脂酸鎂 2毫克總量 200毫克將有效成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合過(guò)45號(hào)篩(u·s)，按200毫克的重量裝入硬明膠膠囊中。
實(shí)施例16按下述配方制備每粒含225毫克有效成分的栓劑5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕甲基｝-3-甲基-2-硫代-4-噻唑烷酮 225毫克飽和脂肪酸甘油脂加至 2，000毫克將有效成分用60號(hào)(u·s)篩子過(guò)篩，然后懸浮于預(yù)先熔化(只需很少熱量)的飽和脂肪酸甘油脂中，再將該混合物倒入其容量為2克的栓劑模具中并使之冷卻。
實(shí)施例17
按下述配方制備每5毫升劑量含有效成分50毫克的懸浮劑4-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-硫代-1，3-氧硫雜茂烷-5-酮 50毫克羧甲基纖維素鈉 50毫克糖漿 1.25毫升苯甲酸溶液 0.10毫升調(diào)味劑 適量色料 適量?jī)艋又? 5毫升將有效成分過(guò)篩(45號(hào)，美國(guó)標(biāo)準(zhǔn))后與羧甲基纖維素鈉、糖漿混合以制成均勻的糊劑。向該糊劑中邊攪拌邊加入經(jīng)一些水稀釋后的苯甲酸溶液、調(diào)味劑和色料，再加水到所需要的體積。
實(shí)施例18按下述配方制備每粒膠囊劑含有效成分150毫克的膠囊劑5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-2-噻唑烷酮 150毫克淀粉 164毫克微晶纖維素 164毫克硬脂酸鎂 22毫克總量 500毫克將有效成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合、過(guò)篩(45號(hào)，u，s)，再按500毫克重裝入硬明膠膠囊。
勘誤表 CPCH 866386
勘誤表
權(quán)利要求
1.制備式Ⅰ化合物或其醫(yī)藥上可以接受的鹽的方法，
其中Q為氧或NR，此處R為氫或C1-C4烷基，R1和R2各為氫，或R1和R2在一起形成一個(gè)鍵，R3和R4各為氫，或R3和R4一起是=S，如果當(dāng)R1和R2一起為一個(gè)鍵并且Q是NH時(shí)、R3和R4只可能為氫，其特征在于(A)將式(a)化合物與式(b)化合物反應(yīng)，以制備其中R1和R2一起代表一個(gè)鍵、Q是NR、R3和R4一起代表=S的式Ⅰ化合物；
(B)還原其中R3和R4一起代表=S的式Ⅰ化合物，以制備其中R3和R4是氫的式Ⅰ化合物；(C)還原其中R1和R2代表一個(gè)鍵的式Ⅰ化合物，制備R1和R2是氫的式Ⅰ化合物；(D)將其中R是氫的式Ⅰ化合物烷基化，制備其中R是C1-C4烷基的式Ⅰ化合物；或(E)將式(C)化合物
與下述化合物反應(yīng)(i)與甲酸反應(yīng)，制備其中Q是氧、R1和R2一起代表一個(gè)鍵、R3和R4代表氫的式Ⅰ化合物；或(ii)與二硫化碳反應(yīng)，制備其中Q是氧、R1和R2一起代表一個(gè)鍵、R3和R4一起代表=S的式Ⅰ化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述制備式Ⅲ化合物或其醫(yī)藥上可以接受的鹽的方法，
其中R是氫或C1-C4烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述制備5-｛〔3，5-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基苯基〕亞甲基｝-3-甲基-4-噻唑烷酮的方法。
專利摘要
本發(fā)明提供了某些二-叔-丁基酚類，它們的藥用配方，它們可用于哺乳動(dòng)物的炎癥、中風(fēng)和關(guān)節(jié)炎。
文檔編號(hào)A61P19/02GK86105036SQ86105036
公開(kāi)日1987年2月4日 申請(qǐng)日期1986年8月8日
發(fā)明者吉爾·安·帕內(nèi)特塔 申請(qǐng)人:伊萊利利公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan