專利名稱:一種具有活血行氣的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種具有活血行氣的藥物組合物，具體地，是川芎活性成分制備而成的藥物組合物，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
川芎是著名的四川產(chǎn)大宗道地藥材，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，臨床應(yīng)用廣泛。由于各地日照、濕度、雨水及土壤環(huán)境等因素存在明顯的差異，因此，來自于不同產(chǎn)地，甚至于不同采收期的川芎藥材不論從外觀(包括個(gè)頭、結(jié)實(shí)程度、氣味等)還是從品質(zhì)(包括化學(xué)成分的種類及含量等)均有很大的不同。藥材發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)是其內(nèi)在的起協(xié)同作用的化學(xué)成分，而川芎的化學(xué)成分十分復(fù)雜，因此，根據(jù)川芎藥材研究的經(jīng)濟(jì)技術(shù)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)，為了方便臨床上使用，保證川芎臨床療效及質(zhì)量穩(wěn)定，有必要制備質(zhì)量可控、穩(wěn)定性高的川芎制劑。
由于川芎中的有效成分包括揮發(fā)油及其它活性成分。目前川芎制劑主要是山東綠葉制藥廠利用川芎揮發(fā)油中的苯酞類成分研制開發(fā)“川芎苯酞軟膠囊”，用于治療缺血性腦血管疾??；山東鳳凰制藥股份有限公司利用川芎中的阿魏酸等酚酸類成分研制出“芎芷膠囊”，用于治療女性產(chǎn)后惡露不盡，血瘀滯痛等；天津中新藥業(yè)集團(tuán)利用川芎中的川芎嗪等生物堿類成分研制出“速效救心滴丸”，用于治療冠心病心絞痛等疾病，這些品種只利用了藥材中部分有效部位，目前尚無將川芎不同部位配比制劑的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種具有活血行氣的藥物組合物，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明提供了一種具有活血行氣的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物31～250份；所述的川芎提取物中不含揮發(fā)油。
進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物250份。
其中，所述的川芎揮發(fā)油、川芎提取物來源于傘形科植物川芎Ligusticumchuanxiong Hort.的干燥根莖及其炮制品。
其中，所述的川芎揮發(fā)油的相對(duì)密度為0.8917～1.0899，折光率為1.3600～1.6641；所述的川芎提取物中每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg。
所述的川芎提取物的HPLC指紋圖譜如圖1所示，色譜條件為色譜柱依利特ODS(250×4.6mm)，5μm；流動(dòng)相甲醇-1％冰醋酸水溶液(體積比35∶65)；柱溫40℃；流速1.0ml/min；靈敏度0.01AUFS；檢測(cè)波長(zhǎng)322nm。
本發(fā)明藥物組合物是由川芎揮發(fā)油、川芎提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔料性成分制備而成的藥劑。
所述的藥劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、合劑。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、川芎加水浸泡，水蒸氣提取，收集揮發(fā)油；b、將a步驟收集揮發(fā)油后的藥渣加水煎煮，合并收集揮發(fā)油后的藥液，濃縮，干燥，得川芎提取物；c、按下述重量配比稱取上述制備的川芎揮發(fā)油及提取物，加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成藥學(xué)上常用的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物31～250份。
步驟a所述的川芎揮發(fā)油可采用β-環(huán)糊精包合，超聲時(shí)間15-45min；川芎揮發(fā)油與β-環(huán)糊精、水的重量配比為川芎揮發(fā)油1份、β-環(huán)糊精4-8份、水60-100份。
進(jìn)一步地，步驟a所述的川芎揮發(fā)油可采用β-環(huán)糊精包合，超聲時(shí)間30min；川芎揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的重量配比為川芎揮發(fā)油1份、β-環(huán)糊精8份、水60份。
本發(fā)明藥物是利用川芎多性味、多成分、多靶點(diǎn)的性質(zhì)，將川芎揮發(fā)油與川芎水提物配比，發(fā)揮綜合作用；明確控制了川芎揮發(fā)油、水提取物的質(zhì)量，使產(chǎn)品質(zhì)量可控，且對(duì)川芎揮發(fā)油進(jìn)行包合，使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，提高了藥材的利用率，為臨床提供了一種新的選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以作出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
圖1川芎提取物HPLC圖圖2阿魏酸對(duì)照品HPLC圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1本發(fā)明藥物原料各有效部位的提取a、川芎揮發(fā)油提取取傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖，切成薄片，加12倍量水，浸泡過夜，蒸餾提取揮發(fā)油6小時(shí)，收集揮發(fā)油，備用，得川芎揮發(fā)油。
b、川芎提取物制備將a步驟的藥液濾過，備用。藥渣加10倍量水煎煮1次，時(shí)間1小時(shí)，濾過，合并藥液，高速離心(12000轉(zhuǎn)/分)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10(60℃)，噴霧干燥(進(jìn)液速度100ml/14min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃，出風(fēng)溫度85℃；中試進(jìn)風(fēng)溫度180～185℃，出風(fēng)溫度90～95℃，塔內(nèi)負(fù)壓0.1kP)，得浸膏粉，備用。
實(shí)施例2本發(fā)明藥物川芎揮發(fā)油的包合揮發(fā)油采用β-環(huán)糊精包合，每1ml揮發(fā)油用β-環(huán)糊精8g，60ml蒸餾水搖勻，水浴加熱溶解，放冷，加入揮發(fā)油無水乙醇溶液(揮發(fā)油1ml，用無水乙醇溶液1ml稀釋，混勻)，充分振搖，超聲30分鐘，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，包合物用少量石油醚洗滌，40℃干燥4h。將浸膏粉、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，加入糊精，混勻，干法制粒，即得。
實(shí)施例3本發(fā)明藥物川芎揮發(fā)油的包合取原料川芎揮發(fā)油1ml、β-環(huán)糊精4g份、水100ml蒸餾水按實(shí)施例2的方法制備包合物。
實(shí)施例4本發(fā)明藥物顆粒劑的制備川芎飲片(薄片)加12倍量水，浸泡過夜，蒸餾提取揮發(fā)油6小時(shí)，收集揮發(fā)油，備用。藥液濾過，備用。藥渣加10倍量水煎煮1次，時(shí)間1小時(shí)，濾過，合并藥液，高速離心(12000轉(zhuǎn)/分)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10(60℃)，噴霧干燥(進(jìn)液速度100ml/14min，進(jìn)風(fēng)溫度140℃，出風(fēng)溫度85℃；中試進(jìn)風(fēng)溫度180～185℃，出風(fēng)溫度90～95℃，塔內(nèi)負(fù)壓0.1kP)，得浸膏粉，備用。揮發(fā)油采用β-環(huán)糊精包合，每1ml揮發(fā)油用β-環(huán)糊精8g，60ml蒸餾水搖勻，水浴加熱溶解，放冷，加入揮發(fā)油無水乙醇溶液(揮發(fā)油1ml，用無水乙醇溶液1ml稀釋，混勻)，充分振搖，超聲30分鐘，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，包合物用少量石油醚洗滌，40℃干燥4h。將浸膏粉、揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物混合，加入糊精，混勻，干法制粒，即得。
實(shí)施例5本發(fā)明藥物顆粒劑的制備按實(shí)施例1方法制備川芎揮發(fā)油、川芎提取物，稱取川芎揮發(fā)油1g、川芎提取物31g，混合，加入淀粉制粒，得顆粒劑。
實(shí)施例6本明藥物膠囊劑的制備按實(shí)施例1方法制備川芎揮發(fā)油、川芎提取物，稱取川芎揮發(fā)油1g、川芎提取物50g，混合，加入淀粉制粒，裝膠囊，得膠囊劑。
實(shí)施例7本明藥物片劑的制備按實(shí)施例1方法制備川芎揮發(fā)油、川芎提取物，稱取川芎揮發(fā)油1g、川芎提取物250g，混合，加入淀粉制粒，加入硬脂酸鎂，得片劑。
實(shí)施例8本發(fā)明藥物合劑的制備按實(shí)施例1方法制備川芎揮發(fā)油、川芎提取物，稱取川芎揮發(fā)油1g、川芎提取物80g，混合，加稀釋劑制備成合劑。
實(shí)施例9本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制方法
鑒別
(1)取本發(fā)明藥物顆粒劑1g，研細(xì)，加石油醚(30～60℃)5ml，放置10小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，靜置，取上清液1ml，揮干后，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，再加2％3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液2～3滴與氫氧化鉀的甲醇飽和溶液2滴，顯紅紫色。
(2)取本發(fā)明藥物顆粒劑10g，研細(xì)，加乙醚30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(體積比9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定
照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％冰醋酸水溶液(體積比35∶65)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，加酸性甲醇(甲醇-甲酸的體積比95∶5)制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品粉末(過二號(hào)篩)0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入酸性甲醇各50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用酸性甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg，即每袋不得少于0.2mg。
阿魏酸的HPLC圖譜見圖2。
不同本發(fā)明藥物顆粒劑的含量測(cè)定分別精密稱取10個(gè)不同批次的本發(fā)明藥物顆粒劑(按實(shí)施例2所述的方法制備)，按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表1。
表1本發(fā)明藥物顆粒劑阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果(n＝2)
結(jié)果表明，本品10批樣品含量平均值為0.2534mg/g，按平均值的80％計(jì)為0.2027mg/g。本次標(biāo)準(zhǔn)研究，測(cè)定樣品批數(shù)有限，10批樣品含量相差不大，故將含量限度定為0.2mg/g。
實(shí)施例10本發(fā)明藥物原料川芎揮發(fā)油、川芎提取物的質(zhì)量控制一、川芎揮發(fā)油相對(duì)密度照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIIA相對(duì)密度測(cè)定法第一法比重瓶測(cè)定。具體操作如下取潔凈、干燥并精密稱定重量的比重瓶，裝滿供試品(溫度應(yīng)低于20℃)后，裝上溫度計(jì)(瓶中應(yīng)無氣泡)，置20℃的水浴中放置若干分鐘，使內(nèi)容物的溫度達(dá)到20℃，用濾紙除去溢出側(cè)管的液體，立即蓋上罩。然后將比重瓶自水浴中取出，再用濾紙將比重瓶的外面擦凈，精密稱定，減去比重瓶的重量，求得供試品的重量后，將供試品傾去，洗凈比重瓶，裝滿新沸過的冷水，再照上法測(cè)得同一溫度時(shí)水的重量，按下式計(jì)算供試品的相對(duì)密度＝供試品重量/水重量。分別測(cè)定三批川芎揮發(fā)油的相對(duì)密度，結(jié)果見表2。
表2相對(duì)密度測(cè)定結(jié)果(n＝3)
由表可知，川芎揮發(fā)油的相對(duì)密度應(yīng)在0.9908±10％，即0.8917～1.0899之間。
折光率測(cè)定折光率可以區(qū)別不同的油類。照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIIF折光率測(cè)定法測(cè)定。具體如下采用鈉光譜的D線(589.3nm)測(cè)定供試品相對(duì)于空氣的折光率，供試品溫度為20℃。分別測(cè)定三批川芎揮發(fā)油的折光率，結(jié)果見表3。
表3折光率測(cè)定結(jié)果(n＝3)
由表可知，川芎揮發(fā)油的折光率應(yīng)在1.5128±10％，即1.3600～1.6641之間。
鑒別
取本品10mg，加甲醇20ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1g，加乙醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解，同法制成對(duì)照藥材溶液。取藁本內(nèi)酯對(duì)照品，加甲醇照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)和石油醚-氯仿(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
兩種展開系統(tǒng)相比較，石油醚-氯仿(19∶1)系統(tǒng)分出斑點(diǎn)多，分離效果好，Rf值適宜。
二、川芎提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
鑒別
取本品1g，研細(xì)，加石油醚(30～60℃)5ml，放置10小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，靜置，取上清液1ml，揮干后，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，再加2％3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液2～3滴與氫氧化鉀的甲醇飽和溶液2滴，顯紅紫色。
檢查
水分照水分測(cè)定法(附錄IX H第一法)測(cè)定，不得過6.0％。
浸出物
照醇溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄X A)測(cè)定，用乙醇作溶劑，不得少于40.0％。
含量測(cè)定
照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％冰醋酸水溶液(35∶65)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，加酸性甲醇(甲醇-甲酸95∶5)制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品粉末(過二號(hào)篩)0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入酸性甲醇各50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用酸性甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。川芎提取物的HPLC圖譜見圖1。
本品按干燥品計(jì)，每克含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.2mg。
實(shí)施例11本發(fā)明藥物原料提取工藝篩選(一)揮發(fā)油提取1、浸泡時(shí)間的篩選稱取川芎飲片350g，加12倍量水，提取6小時(shí)，結(jié)果見表4。
表4浸泡時(shí)間的比較
結(jié)果表明，浸泡12小時(shí)后，揮發(fā)油含量高于未浸泡的揮發(fā)油含量，故在提取揮發(fā)油前應(yīng)浸泡12小時(shí)。
2、加水量的篩選稱取川芎飲片350g，加不同量水，浸泡12小時(shí)后，提取6小時(shí)，結(jié)果見表5。
表5加水量的比較
結(jié)果表明，加水量為12倍量時(shí)，揮發(fā)油含量最高，故用12倍量水進(jìn)行提取。
3、提取時(shí)間的篩選稱取川芎飲片350g，加12倍量水，浸泡12小時(shí)后，提取不同時(shí)間，結(jié)果見表6。
表6提取時(shí)間的比較
結(jié)果表明，提取6小時(shí)后揮發(fā)油含量基本無變化，且提取6小時(shí)后揮發(fā)油含量為提取8小時(shí)后揮發(fā)油含量的90.48％，故從生產(chǎn)實(shí)際考慮，提取6小時(shí)即可。
(二)川芎提取物提取工藝用單因素方法，對(duì)川芎提油后藥渣進(jìn)行煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時(shí)間的考察。
1煎煮次數(shù)考察對(duì)川芎提油后的藥渣以阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行了煎煮次數(shù)考察。根據(jù)川芎提油后藥渣性狀，分別加水量為10倍，提取2次，每次1小時(shí)，結(jié)果見表7。
表7煎煮次數(shù)考察結(jié)果
結(jié)果表明，川芎提油后藥渣再加水煎煮2次，第2次阿魏酸提取含量較低，從工業(yè)生產(chǎn)實(shí)際考慮，川芎飲片提取揮發(fā)油后再水煎煮1次。
2加水量考察川芎提油后藥渣分別加水8倍、10倍、12倍，煎煮1小時(shí)，合并兩次藥液，以出膏率及阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表8。
表8加水量考察結(jié)果
結(jié)果表明，三個(gè)水平加水量出膏率無顯著差異，且10倍量阿魏酸含量最高，故選擇加水量為10倍。
3煎煮時(shí)間考察川芎提油后藥渣加水10倍，分別煎煮0.5小時(shí)、1小時(shí)、1.5小時(shí)，合并兩次藥液，以出膏率和阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表9。
表9煎煮時(shí)間考察結(jié)果
結(jié)果表明，三個(gè)水平煎煮時(shí)間出膏率無顯著差異，煎煮1小時(shí)后阿魏酸含量相對(duì)較高，故選擇煎煮時(shí)間為1小時(shí)。
4水煎煮工藝驗(yàn)證試驗(yàn)川芎提取揮發(fā)油6小時(shí)后工藝為10倍量水煎煮1次，煎煮1小時(shí)。取三批川芎飲片照上述工藝做驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表10。
表10水煎煮工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明，RSD＝0.45％，該工藝穩(wěn)定可行。
綜上所述，川芎提取工藝為川芎薄片浸泡12小時(shí)，加量12倍量水，水蒸氣提取6小時(shí)，收集揮發(fā)油和藥液，藥渣加10倍量水煎煮1次，煎煮1小時(shí)，合并藥液。
(三)除雜除雜方法可分為物理除雜和化學(xué)除雜，物理除雜方法有離心和過濾，化學(xué)除雜方法有醇沉等。本實(shí)驗(yàn)首先采用濾布過濾，通過反復(fù)多次過濾，基本使濾液達(dá)到澄清，再通過離心的方法除雜，以出膏率和阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。
1、普通離心條件篩選取水煎液濃縮至相當(dāng)于0.5g藥材/ml，再分別用2000r/min、5000r/min離心30min，以出膏率和阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表11。
表11離心條件考察結(jié)果
結(jié)果表明，普通離心效果不佳，故需進(jìn)一步采用高速離心的方法除雜。
2、高速離心條件篩選將川芎水煎液用12000r/min高速離心，以出膏率和阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表12。
表12高速離心考察結(jié)果
結(jié)果表明，與分離前藥液及低速離心分離液相比，高速離心能較大程度的降低出膏率，且阿魏酸含量降低較小，故采用12000r/min高速離心的方法除雜。
(四)濃縮工藝考察將川芎離心分離液分別采用常壓濃縮和減壓濃縮(60℃，-0.08～-0.06mpa)的方法，濃縮至相對(duì)密度1.10(60℃測(cè))，以阿魏酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表13。
表13濃縮方法考察結(jié)果(n＝2)
結(jié)果表明，減壓濃縮具有濃縮時(shí)間短、濃縮溫度低等優(yōu)點(diǎn)，能夠防止有效成分長(zhǎng)時(shí)間受熱破壞，減壓濃縮后阿魏酸含量明顯比常壓濃縮高，故采用減壓濃縮的方法進(jìn)行濃縮。
(五)干燥方法考察噴霧干燥與傳統(tǒng)干燥方法相比，具有干燥速度快、物料受熱時(shí)間短、生產(chǎn)工序簡(jiǎn)單、產(chǎn)品流動(dòng)性大、質(zhì)地均勻、質(zhì)量可控性強(qiáng)、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，因此本工藝采用噴霧干燥制備浸膏粉。
影響噴霧干燥的主要因素有清膏的相對(duì)密度、進(jìn)風(fēng)溫度、出風(fēng)溫度。
1清膏相對(duì)密度篩選將清膏相對(duì)密度分別調(diào)為1.06、1.08、1.10、1.12(60℃)，進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度180～185℃，出風(fēng)溫度90～95℃，物料干燥情況見表14。
表14相對(duì)密度篩選結(jié)果
結(jié)果表明，清膏相對(duì)密度在1.06～1.10(60℃)范圍內(nèi)進(jìn)行噴物干燥時(shí)可得到質(zhì)量較好的干燥粉末。相對(duì)密度過高，易堵塞管道，并且會(huì)造成浸膏粘度大，霧化困難，霧化形成顆粒大，物料易粘結(jié)；相對(duì)密度過低，需蒸發(fā)大量水分，耗時(shí)耗能，故將相對(duì)密度定為1.10(60℃)。
2進(jìn)風(fēng)溫度篩選將相對(duì)密度為1.10(60℃)的浸膏進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度分別為175～180℃、180～185℃、185～190℃，出風(fēng)溫度為90～95℃，物料干燥情況見表15。
表15進(jìn)風(fēng)溫度篩選結(jié)果
3出風(fēng)溫度篩選將相對(duì)密度為1.10(60℃)的浸膏進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度分別為180～185℃，出風(fēng)溫度分別為85～90℃、90～95℃、95～100℃，物料干燥情況見表16。
表16出風(fēng)溫度篩選結(jié)果
結(jié)果表明，進(jìn)風(fēng)溫度在180～190℃，出風(fēng)溫度在90～100℃之間，可得到干燥粉末，考慮節(jié)約能源，將進(jìn)風(fēng)溫度定為180～185℃，出風(fēng)溫度為90～95℃。
(六)β-環(huán)糊精包埋揮發(fā)油顆粒劑中揮發(fā)油的普通加入方法是將采用乙醇稀釋后噴入顆粒中，密閉。該法易造成揮發(fā)油分布不均，常溫下油揮散，且易氧化變質(zhì)，難保其穩(wěn)定性。研究資料表明，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精包埋后，與外界環(huán)境隔離，可減少揮發(fā)油在生產(chǎn)、貯存過程中的揮散或氧化變質(zhì)，從而提高制劑穩(wěn)定性。因此，川芎油采用β-環(huán)糊精包埋。
1、材料川芎油自制川芎飲片提取β-環(huán)糊精上海伯奧生物科技有限公司，批號(hào)0305062、方法稱取一定量β-環(huán)糊精，加適量蒸餾水搖勻，水浴加熱溶解，放冷，與2ml的川芎油無水乙醇溶液(50％，V/V)混合，充分振搖，超聲一定時(shí)間后，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，包合物用少量石油醚洗滌，40℃干燥4小時(shí)，即得。
3、包合物的評(píng)價(jià)指標(biāo)以包合物收得率及包合率為指標(biāo)，計(jì)算公式如下包合物收得率(％)＝(包合物實(shí)際重量/β-環(huán)糊精量)*100％包合率(％)＝[(包合物中揮發(fā)油量/揮發(fā)油加入量)/空白回收率]*100％空白回收率(％)＝(提取出揮發(fā)油量/揮發(fā)油加入量)*100％4、空白回收試驗(yàn)取1ml揮發(fā)油，加200ml蒸餾水，按揮發(fā)油測(cè)定法測(cè)定，計(jì)算空白回收率，結(jié)果見表17。
表17空白回收率結(jié)果
5、β-環(huán)糊精包埋川芎揮發(fā)油正交試驗(yàn)在影響β-CD包埋川芎揮發(fā)油主要因素中，加水量、油β-CD、超聲時(shí)間為較重要的因素，對(duì)以上三個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，每因素選擇三個(gè)水平，采用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，正交設(shè)計(jì)見表18。
表18正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表
以綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用直觀分析和方差分析對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷，其中，綜合評(píng)分＝包合物收得率*40％+包合率*60％。包埋工藝正交試驗(yàn)及結(jié)果見表19，方差分析見表20。
表19正交試驗(yàn)結(jié)果
表20方差分析表
由直觀分析知，影響提取的因素順序?yàn)橛挺?CD＞超聲時(shí)間＞加水量。
由方差分析知，油β-CD、超聲時(shí)間各水平間具有顯著性差異，以油β-CD為1∶8、超聲30min為最優(yōu)，加水量各水平間無顯著性差異。
根據(jù)方差分析結(jié)果，結(jié)合直觀分析和生產(chǎn)實(shí)際需要，確定最優(yōu)工藝為8倍量β-CD，加60ml蒸餾水，超聲30min。
6、驗(yàn)證試驗(yàn)照正交試驗(yàn)所得結(jié)果，稱取8g β-環(huán)糊精，加60ml蒸餾水搖勻，水浴加熱溶解，放冷，與2ml的川芎油無水乙醇溶液(50％，V/V)混合，充分振搖，超聲30min后，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，包合物用少量石油醚洗滌，40℃干燥4小時(shí)，即得。結(jié)果見表21。
表21驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明，正交試驗(yàn)所確定β-CD包埋川芎油工藝穩(wěn)定。
通過對(duì)川芎藥材的不同有效組分提取，并對(duì)各有效組分進(jìn)行質(zhì)量控制，有效的保證了本發(fā)明藥物的質(zhì)量，提高了藥物的穩(wěn)定、可控性。
以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
一、本發(fā)明藥物顆粒劑等效性試驗(yàn)1鎮(zhèn)痛試驗(yàn)1.1小鼠熱板法將熱板測(cè)痛儀溫度控制在55±0.5℃，預(yù)熱10分鐘。取昆明種雌性小鼠數(shù)只，體重18～22g，每次1只放在熱板上，小鼠自放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間(秒)作為該鼠的痛域值。凡舔后足時(shí)間小于5秒或大于30秒或跳躍者棄之不用。將合格小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只，重復(fù)測(cè)其正常痛域值，取兩次正常痛域值平均值作為該鼠給藥前痛域值。
各給藥組給藥后1h、2h、3h測(cè)定小鼠痛域值。
表22對(duì)小鼠熱板法的影響
注(1)各給藥組與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；(2)括號(hào)中數(shù)據(jù)是各給藥組與空白對(duì)照組比較，其痛域延長(zhǎng)百分率。
(3)川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑是將川芎藥物直接加水煎煮，與本發(fā)明藥物顆粒劑比較是在相同的原料用量。
結(jié)論本發(fā)明藥物顆粒劑及川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑在給藥1小時(shí)后均能顯著延長(zhǎng)小鼠熱板痛域值(P＜0.05)，其痛域延長(zhǎng)百分率分別為78.42％和83.45％；給藥2小時(shí)后均能顯著延長(zhǎng)小鼠熱板痛域值(P＜0.05)，其痛域延長(zhǎng)百分率分別為50.26％和52.91％；川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑效果略優(yōu)于本發(fā)明藥物顆粒劑，但兩者無顯著性差異。
1.2小鼠扭體法昆明種小鼠60只，體重18～22g，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分成6組，各給藥組給藥后0.5h后，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察各組動(dòng)物出現(xiàn)扭體反應(yīng)的首次時(shí)間及20分鐘內(nèi)扭體次數(shù)。
表23對(duì)小鼠扭體法的影響
注各給約組與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明藥物顆粒劑及川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑在給藥均能延長(zhǎng)小鼠扭體的潛伏期，均能顯著減少20分鐘內(nèi)小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)，其扭體抑制率分別為41.48％和48.89％；川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑效果略優(yōu)于本發(fā)明藥物顆粒劑，但兩者無顯著性差異。
2對(duì)小鼠痛經(jīng)模型的治療作用試驗(yàn)昆明種小鼠60只，體重18～22g，雌性，給小鼠每天灌胃已烯雌酚溶液0.2mg/只，連續(xù)10天，于第6天開始給藥治療，連續(xù)5天，末次給藥1小時(shí)后對(duì)小鼠腹腔注射催產(chǎn)素0.2u/只。觀察小鼠在注入催產(chǎn)素后首次扭體反應(yīng)時(shí)間和30分鐘內(nèi)扭體發(fā)生次數(shù)。
表24對(duì)小鼠痛經(jīng)模型的影響
注各給藥組與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明藥物顆粒劑及川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑給藥后均能延長(zhǎng)小鼠催產(chǎn)素所致扭體反應(yīng)的潛伏期，均能顯著減少30分鐘內(nèi)小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)，其扭體抑制率分別為36.23％和39.13％；川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑效果略優(yōu)于本發(fā)明藥物顆粒劑，但兩者無顯著性差異。
3大鼠血液流變學(xué)檢查SD大鼠70只，體重200～250g，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分成7組。各給藥組連續(xù)給藥5天，空白組和模型組動(dòng)物灌等體積的蒸餾水。給藥第5天，模型組和各給藥組動(dòng)物皮下注射0.1％腎上腺素0.9mg/kg，每日2次，2次之間用冰水浸泡5分鐘，動(dòng)物禁食過夜，第6天取血檢驗(yàn)。
表25對(duì)大鼠血液流變學(xué)影響
注(1)模型組與空白組比較，△△P＜0.01；(2)各給藥組與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論本發(fā)明藥物顆粒劑及川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑給藥后均能顯著降低血瘀模型大鼠的全血粘度(P＜0.05)；本發(fā)明藥物顆粒劑給藥后能顯著降低血瘀模型大鼠的全血高切還原粘度、全血高切相對(duì)指數(shù)(P＜0.05)；川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑給藥后能顯著降低血瘀模型大鼠的全血低切還原粘度、纖維蛋白原含量(P＜0.05)。兩者無顯著性差異。
上述試驗(yàn)說明，針對(duì)鎮(zhèn)痛、血液流變、痛經(jīng)的治療，本發(fā)明藥物與川芎標(biāo)準(zhǔn)湯劑具有相同的功效，但是由于川芎制劑針對(duì)的適應(yīng)癥較廣泛，且川芎的來源不同，品種質(zhì)量不同，采用本發(fā)明藥物可避免上述的影響川芎質(zhì)量的因素，有效地保證了藥物的質(zhì)量。
試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物原料不同配比的藥效學(xué)試驗(yàn)《川芎飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案》含量測(cè)定(1)規(guī)定揮發(fā)油含量不得少于0.8％(ml/g)；本發(fā)明藥物顆粒劑經(jīng)3批小試得揮發(fā)油為0.5％(ml/g)；經(jīng)10批中試得揮發(fā)油為0.1％(ml/g)，川芎提取物為25％。即川芎揮發(fā)油與川芎提取物配比分別為1∶31(理論值)、1∶50(小試量)、1∶250(中試量)。將上述三個(gè)比例揮發(fā)油經(jīng)β-環(huán)糊精包合后，加入川芎提取物，混勻。
1鎮(zhèn)痛試驗(yàn)1.1小鼠熱板法將熱板測(cè)痛儀溫度控制在55±0.5℃，預(yù)熱10分鐘。取昆明種雌性小鼠數(shù)只，體重18～22g，每次1只放在熱板上，小鼠自放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間(秒)作為該鼠的痛域值。凡舔后足時(shí)間小于5秒或大于30秒或跳躍者棄之不用。將合格小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只，重復(fù)測(cè)其正常痛域值，取兩次正常痛域值平均值作為該鼠給藥前痛域值。
各給藥組給藥后1h、2h、3h測(cè)定小鼠痛域值。
表26對(duì)小鼠熱板法的影響
注(1)各給藥組與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；(2)括號(hào)中數(shù)據(jù)是各給藥組與空白對(duì)照組比較，其痛域延長(zhǎng)百分率。
(3)上述試驗(yàn)的理論值、小試量、中試量均為相同的服用劑量。
結(jié)論三個(gè)比例在給藥1小時(shí)后均能顯著延長(zhǎng)小鼠熱板痛域值(P＜0.05)，其痛域延長(zhǎng)百分率分別為97.12％、90.65％、78.42％；給藥2小時(shí)后均能顯著延長(zhǎng)小鼠熱板痛域值(P＜0.05)，其痛域延長(zhǎng)百分率分別為65.61％、56.61％、50.26％；理論值和小試量略優(yōu)于中試量，但無顯著性差異。
1.2小鼠扭體法昆明種小鼠60只，體重18～22g，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分成6組，各給藥組給藥后0.5h后，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察各組動(dòng)物出現(xiàn)扭體反應(yīng)的首次時(shí)間及20分鐘內(nèi)扭體次數(shù)。
表27對(duì)小鼠扭體法的影響
注各給藥組與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論三個(gè)比例在給藥后均能延長(zhǎng)小鼠扭體的潛伏期，其中理論值能顯著延長(zhǎng)小鼠扭體的潛伏期(P＜0.05)；三個(gè)比例均能顯著減少20分鐘內(nèi)小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)，其扭體抑制率分別為53.70％、56.30％、41.48％；理論值和小試量略優(yōu)于中試量，但無顯著性差異。
2對(duì)小鼠痛經(jīng)模型的治療作用試驗(yàn)昆明種小鼠60只，體重18～22g，雌性，給小鼠每天灌胃已烯雌酚溶液0.2mg/只，連續(xù)10天，于第6天開始給藥治療，連續(xù)5天，末次給藥1小時(shí)后對(duì)小鼠腹腔注射催產(chǎn)素0.2u/只。觀察小鼠在注入催產(chǎn)素后首次扭體反應(yīng)時(shí)間和30分鐘內(nèi)扭體發(fā)生次數(shù)。
表28對(duì)小鼠痛經(jīng)模型的影響
注各給藥組與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論三個(gè)比例給藥后均能延長(zhǎng)小鼠催產(chǎn)素所致扭體反應(yīng)的潛伏期，均能顯著減少30分鐘內(nèi)小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)，其扭體抑制率分別為82.13％、68.12％、36.23；理論值和小試量略優(yōu)于中試量，但無顯著性差異。
3大鼠血液流變學(xué)檢查SD大鼠70只，體重200～250g，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分成7組。各給藥組連續(xù)給藥5天，空白組和模型組動(dòng)物灌等體積的蒸餾水。給藥第5天，模型組和各給藥組動(dòng)物皮下注射0.1％腎上腺素0.9mg/kg，每日2次，2次之間用冰水浸泡5分鐘，動(dòng)物禁食過夜，第6天取血檢驗(yàn)。
表29對(duì)大鼠血液流變學(xué)影響
注(1)模型組與空白組比較，△△P＜0.01；(2)各給藥組與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論三個(gè)比例給藥后均能顯著降低血瘀模型大鼠的全血粘度(P＜0.05)；中試量給藥后能顯著降低血瘀模型大鼠的紅細(xì)胞聚集指數(shù)(P＜0.05)。
雖然上述試驗(yàn)說明，各配比組藥效無顯著性差異，通過中試放大試驗(yàn)，理論值與小試量試驗(yàn)結(jié)果均達(dá)不到制劑要求，因此，確定本發(fā)明藥物中揮發(fā)油與川芎提取物的重量配比為1∶250。
權(quán)利要求
1.一種具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物31～250份；所述的川芎提取物中不含揮發(fā)油。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物250份。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1、2所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于所述的川芎揮發(fā)油、川芎提取物來源于傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖及其炮制品。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1-3任一項(xiàng)所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于所述的川芎揮發(fā)油的相對(duì)密度為0.8917～1.0899，折光率為1.3600～1.6641；所述的川芎提取物中每克含阿魏酸C10H10O4不得少于0.2mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于所述的川芎提取物的HPLC指紋圖譜如圖1所示，色譜條件為色譜柱依利特ODS(250×4.6mm)，5μm；流動(dòng)相甲醇-1％冰醋酸水溶液，體積比35∶65；柱溫40℃；流速1.0ml/min；靈敏度0.01AUFS；檢測(cè)波長(zhǎng)322nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1-5任一項(xiàng)所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于它是由川芎揮發(fā)油、川芎提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔料性成分制備而成的藥劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的具有活血行氣的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、合劑。
8.一種制備權(quán)利要求
1-7任一項(xiàng)所述的具有活血行氣的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、川芎加水浸泡，水蒸氣提取，收集揮發(fā)油；b、將a步驟收集揮發(fā)油后的藥渣加水煎煮，合并收集揮發(fā)油后的藥液，濃縮，干燥，得川芎提取物；c、按下述重量配比稱取上述制備的川芎揮發(fā)油及提取物，加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成藥學(xué)上常用的藥劑川芎揮發(fā)油1份、川芎提取物31～250份。
9.根據(jù)權(quán)利要求
8所述的具有活血行氣的藥物組合物的方法，其特征在于步驟a所述的川芎揮發(fā)油采用β-環(huán)糊精包合，超聲處理15-45min；川芎揮發(fā)油與β-環(huán)糊精、水的重量配比為川芎揮發(fā)油1份、β-環(huán)糊精4-8份、水60-100份。
10.根據(jù)權(quán)利要求
9所述的具有活血行氣的藥物組合物的方法，其特征在于步驟a所述的川芎揮發(fā)油采用β-環(huán)糊精包合，超聲處理30min；川芎揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的重量配比為川芎揮發(fā)油1份、β-環(huán)糊精8份、水60份。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種具有活血行氣的藥物組合物，它是由川芎揮發(fā)油、川芎提取物(不含揮發(fā)油)為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法。本發(fā)明藥物是利用川芎多性味、多成分、多靶點(diǎn)的性質(zhì)，將川芎揮發(fā)油與川芎水提物配比，發(fā)揮協(xié)同作用，且具有最佳配比，提高了藥材的利用率，質(zhì)量可控，藥效明確，為臨床提供了一種新的選擇。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1994343SQ200510022428
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2005年12月29日
發(fā)明者韓麗, 羅海燕, 謝秀瓊 申請(qǐng)人:謝秀瓊, 韓麗, 羅海燕導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan