專利名稱:用作傳送活性劑的化合物和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于傳送活性劑，特別是生物或化學(xué)活性劑(如生物活性肽等等)的化合物。這些化合物被用作有利于運(yùn)載體(cargo)向目標(biāo)傳輸?shù)妮d體。這些載體是修飾氨基酸，并且很適于和生物活性劑形成非共價(jià)混合物，用于動(dòng)物的口服給藥。本發(fā)明還涉及這類組合物的制備及其給藥的方法。
背景技術(shù)：
常規(guī)的傳送活性劑方法常常受到生物，化學(xué)和物理屏障的嚴(yán)格限制。這些屏障通常受傳送所要通過的環(huán)境，傳送目標(biāo)的環(huán)境或目標(biāo)本身所影響。
生物或化學(xué)活性劑特別容易受到這種障礙的屏障。例如，在向動(dòng)物傳送藥物和治療劑時(shí)，屏障受身體影響。物理屏障的實(shí)例有皮膚和達(dá)到目標(biāo)之前必須經(jīng)過的各種器官膜。化學(xué)屏障包括但不限于pH變化，雙層類脂和降解酶。
這些屏障在設(shè)計(jì)口服傳送系統(tǒng)時(shí)非常重要。如果不是由于生物，化學(xué)和物理障礙如胃腸(GI)道變化的pH，強(qiáng)力消化酶和活性劑無法滲透的胃腸膜，許多生物或化學(xué)活性劑都可以選擇口服傳送作為給動(dòng)物給藥的途徑。在大量典型不適用于口服給藥的活性劑中有生物或化學(xué)活性肽，如降鈣素和胰島素；多糖類，尤其是粘多糖，包括但不限于肝素；類肝素；抗生素；及其它有機(jī)物。這些活性劑在胃腸道中被酸的水解物，酶等等迅速破壞或使之失效。
易損藥劑的口服給藥的早期方法依賴于輔劑(例如，間苯二酚和非離子表面活性劑如聚氧乙烯油醚和正十六基聚乙烯醚)的聯(lián)合給藥，從而人為地增加腸壁的滲透性，以及與酶抑制劑(例如，胰蛋白酶抑制劑，二異丙基氟磷酸鹽(DFF)和抑肽酶)聯(lián)合給藥，從而抑制酶降解。
脂質(zhì)體被用作胰島素和肝素的藥物傳輸系統(tǒng)早已有文獻(xiàn)描述。例如，參見美國(guó)專利4,239,754；Patel等人(1976)，F(xiàn)EBS Letter，第62卷，60頁；及Hashimoto等人(1979)，Endocrinology Japan，第26卷，337頁。
但是，已經(jīng)排除了這種藥物傳輸系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用的可能性，因?yàn)?1)這些系統(tǒng)要求毒性量的輔劑或抑制劑；(2)不能使用低分子量的運(yùn)載體即活性劑；(3)該系統(tǒng)表現(xiàn)出較差的穩(wěn)定性，而且不適于存放；(4)該系統(tǒng)難以制造；(5)該系統(tǒng)不能保護(hù)活性劑(運(yùn)載體)；(6)該系統(tǒng)會(huì)有害地改變活性劑；或(7)該系統(tǒng)不允許或不利于活性劑的吸收。
最近，混合氨基酸(類蛋白)的人工聚合物微球體已被用于傳輸藥物。例如，美國(guó)專利4,925,673描述了含類蛋白微球體載體藥物以及它們的制備和使用方法。這些類蛋白微球被用于大量活性劑的傳輸。
但是，本領(lǐng)域仍然需要簡(jiǎn)單便宜的傳輸系統(tǒng)，它既易于制備又能夠傳輸多種活性劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了用于傳輸活性劑的組合物。這些組合物包含至少一種活性劑，而且是可傳輸?shù)?eferably)的生物或化學(xué)活性劑，和至少一種下列化合物I-CXXIII或其鹽。










































已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，具有芳香酰胺基，在芳香環(huán)的鄰位有羥基取代基的，且鏈上有4-20個(gè)碳原子的親脂鏈的有機(jī)酸化合物及其鹽可用作傳輸活性劑的載體。優(yōu)選有5-20個(gè)碳原子的親脂鏈。
含有上述載體化合物和活性劑的組合物已經(jīng)表現(xiàn)出在將活性劑傳輸?shù)剿x生物系統(tǒng)時(shí)是有效的。這些組合物包含至少一種活性劑(最好是生物或化學(xué)活性劑)和至少一種下式的載體化合物，2-HO-Ar-CONR8-R7-COOH其中Ar是取代的或未取代的苯基或萘基；R7選自C4-C20烷基，C4-C20烯基，苯基，萘基，(C1-C10烷基)苯基，(C1-C10烯基)苯基，(C1-C10烷基)萘基，(C1-C10烯基)萘基，苯基(C1-C10烷基)，苯基(C1-C10烯基)，萘基(C1-C10烷基)和萘基(C1-C10烯基)；R8選自氫，C1-C4烷基，C1-C4烯基，羥基和C1-C4烷氧基；R7可以任意被C1-C4烷基，C1-C4烯基，C1-C4烷氧基，-OH，-SH和-CO2R9或它們的任意組合取代；其中R9是氫，C1-C4烷基或C1-C4烯基；R7可以任意被氧，氮，硫或它們的任意組合間斷；條件是這些化合物或其鹽不在酸基的a位被氨基取代。
優(yōu)選的R6基團(tuán)為C4-C20烷基和C4-C20烯基。最優(yōu)選的R6基團(tuán)為C5-C20烷基和C5-C20烯基。
優(yōu)選的載體化合物具有下列結(jié)構(gòu)式 其中R7定義如上。
本發(fā)明進(jìn)一步包含這些組合物的劑量單位形式。
本發(fā)明還包括制備這些含有混合了至少一種活性劑和至少一種上述化合物，并且任意含有劑量載體的組合物的方法。
在一具體實(shí)例中，這些無毒化合物可以作為轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)部分給動(dòng)物口服給藥，在給藥之前它們與活性劑捏合或混合。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備下式化合物的方法， 其中Y是
或SO2；R1是C3-C24烷基，C2-C20烯基，C2-C20炔基，環(huán)烷基或芳香基R2是氫，C1-C4烷基或C2-C4烯基；及R3是C1-C7烷基，C3-C10環(huán)烷基，芳基，噻吩基，吡咯并或吡啶基，這里，R3可任意被一個(gè)或多個(gè)C1-C5烷基，C2-C4烯基，F(xiàn)，Cl，OH，SO2，COOH或SO3H取代所說方法包括(a)在水中并在堿存在下，將下式化合物 與下式化合物反應(yīng)，
R3-Y-X其中Y，R1，R2和R3定義如上，X是離去基團(tuán)。



圖1是給大鼠皮下注射rhGH組合物后的結(jié)果的圖示說明。
圖2是給大鼠舌下(SL)，鼻內(nèi)(IN)和結(jié)腸內(nèi)(IC)進(jìn)行rhGH組合物給藥后的結(jié)果的圖示說明。
圖3是用化合物XXXI作為載體進(jìn)行肝素傳輸結(jié)腸內(nèi)給藥的結(jié)果的圖示說明。
具體來說本發(fā)明具體組合物中包括活性劑和修飾氨基酸。這些組合物可用于傳送各種活性劑通過各種生物，化學(xué)和物理屏障，尤其適用于傳送經(jīng)過環(huán)境降解的活性劑。特別地，本發(fā)明組合物被用于將生物或化學(xué)活性劑傳送給或給予任何動(dòng)物如鳥類；哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類，尤其是人類；及昆蟲類動(dòng)物。
本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是使用便于制備和便宜的原料。本發(fā)明組合物和配制方法費(fèi)用合理，簡(jiǎn)單易行，適合工業(yè)規(guī)模的商業(yè)生產(chǎn)。
這里所說的皮下，舌下和鼻內(nèi)聯(lián)合使用活性劑如重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)和傳送劑，特別是蛋白質(zhì)，將使活性劑的生物利用度比單獨(dú)使用活性劑有所增加。將鮭降鈣素與傳送劑給大鼠聯(lián)合給藥可得到類似的結(jié)果。支持這些發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)可在實(shí)施例中找到。
活性劑適合用于本發(fā)明的活性劑包括生物或化學(xué)活性劑?；瘜W(xué)活性劑包括但不限于香料以及其它活性劑如化妝品。
生物或化學(xué)活性劑包括但不限于殺蟲劑，藥劑和治療劑。例如，適用于本發(fā)明的生物或化學(xué)活性劑包括但不限于肽類，特別是小肽；荷爾蒙，特別是依靠其本身不能或只能使一部分所給劑量穿過胃腸內(nèi)粘膜和/或很容易被胃腸道中的酸和酶化學(xué)裂解的荷爾蒙；多糖，尤其是粘液多糖的混合物；碳水化合物；脂類；或上述物質(zhì)的任意組合。進(jìn)一步的實(shí)例包括但不限于人生長(zhǎng)激素；牛生長(zhǎng)激素；生長(zhǎng)釋放激素；干擾素；白介素-1；胰島素；肝素，特別是小分子量肝素；降鈣素；紅細(xì)胞生成素；心鈉素；抗原；單克隆抗體；促生長(zhǎng)素抑制素；促腎上腺皮質(zhì)素，促性腺釋放激素；催產(chǎn)素；加壓素；色甘酸鈉(色甘酸鈉或色甘酸二鈉)；萬古霉素；去鐵胺(DFO)；甲狀旁腺素抗生素，包括但不限于抗真菌劑；或它們的任意組合。
修飾氨基酸術(shù)語“修飾氨基酸”，“修飾多氨基酸”和“修飾肽”指已經(jīng)被修飾的氨基酸，或其中至少一種氨基酸被修飾的多氨基酸和肽，修飾是通過用酰化或磺?；瘎┡c至少存在的游離胺基團(tuán)之一反應(yīng)來?；蚧酋；辽僖环N游離胺基團(tuán)實(shí)現(xiàn)的。
修飾的氨基酸，多氨基酸和肽可用于傳送活性劑，所說活性劑包括但不限于生物或化學(xué)活性劑如藥劑和治療劑。
氨基酸是含有至少一種游離胺基團(tuán)的任意羧酸，氨基酸包括天然和合成氨基酸。
多氨基酸即可以是肽，也可以是由其它可以連接的基團(tuán)如酯，酐或酐類似物形成的鍵連接的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸。
肽是由肽鍵連接的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸。肽鏈的長(zhǎng)度可以各種各樣，可以是由兩個(gè)氨基酸組成二肽，也可以是由幾百個(gè)氨基酸組成的多肽。參見Chambers生物學(xué)辭典(Chambers Biological Dictionary)，編者Peter M.B.Walker，Cambridge，EnglandChambers Cambridge，1989，215頁，其中具體談到二肽，三肽，四肽和五肽的制備。
雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)化合物I-CXXIII可作為生物或化學(xué)活性劑口服傳送的載體，但上述文獻(xiàn)只提到化合物I-XXXI化合物的制備。
修飾氨基酸的典型制備方法是將其中的氨基酸或酯修飾。許多修飾氨基酸的制備是通過用下式試劑進(jìn)行?；蚧酋；磻?yīng)實(shí)現(xiàn)的，X-Y-R4其中R4是在最終產(chǎn)物中產(chǎn)生指定的修飾的適當(dāng)殘基，Y是
或SO2，及X是離去基團(tuán)。典型的離去基團(tuán)包括但不限于鹵素，如氯，溴和碘。此外，用相應(yīng)的的酐作修飾劑。
對(duì)于本發(fā)明許多化合物，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以根據(jù)現(xiàn)已公開的方法從氨基酸很容易地制備。例如，化合物I-VII是從氨基丁酸衍生的；化合物VIII-X和XXXII-XXXV是從氨基己酸衍生的；及化合物XI-XXVI和XXXVI是從氨基辛酸衍生的。例如，上述修飾氨基酸化合物可以通過單個(gè)氨基酸與適當(dāng)?shù)男揎梽┓磻?yīng)來制備，修飾劑與氨基酸中的游離氨基部分反應(yīng)形成酰胺?？梢允褂帽Ｗo(hù)劑以避免不需要的副反應(yīng)發(fā)生，這些對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員都是已知的。
可以將氨基酸溶解于金屬氫氧化物如氫氧化鈉或氫氧化鉀的堿性水溶液中，并在約5-70℃之間，優(yōu)選約10-40℃之間加熱約1-4小時(shí)，優(yōu)選約2.5小時(shí)。對(duì)于氨基酸中每一當(dāng)量NH2(氨基)，所用堿的用量范圍通常約為1.25-3毫摩爾，優(yōu)選約1.5-2.25毫摩爾/每當(dāng)量NH2。溶液的pH值通常約為8-13，優(yōu)選約10-12。
此后，將適當(dāng)氨基修飾劑加到氨基酸溶液中，同時(shí)攪拌?；旌衔锏臏囟韧ǔ１３衷诩s5-70℃，優(yōu)選約10-40℃，反應(yīng)進(jìn)行約1-4小時(shí)。所用氨基修飾劑的用量與氨基酸數(shù)量有關(guān)，它取決于氨基酸中全部游離NH2的摩爾數(shù)。一般，對(duì)于氨基酸中每摩爾當(dāng)量的全部游離NH2，氨基修飾劑的用量范圍在約0.5-2.5摩爾當(dāng)量之間，優(yōu)選約0.75-1.25當(dāng)量。
用適當(dāng)?shù)乃崛鐫恹}酸調(diào)節(jié)混合物的pH值，直到pH值達(dá)到約2-3，淬滅了反應(yīng)。將混合物放置于室溫放置，混合物分成透明的上層和白色或米白色沉淀。除去上層，通過過濾或潷析從下層中收集修飾氨基酸。然后將粗的修飾氨基酸產(chǎn)物溶解于pH約為9-13，優(yōu)選約11-13的水中。過濾除去不溶性物質(zhì)，濾液經(jīng)真空干燥。所得修飾氨基酸的產(chǎn)率一般約為30-60％，通常約為45％。
如果需要，可用氨基酸酯如氨基酸化合物的芐酯，甲酯或乙酯制備本發(fā)明修飾氨基酸。將溶解于適當(dāng)有機(jī)溶劑如二甲基甲酰胺，吡啶或四氫呋喃的氨基酸酯與適當(dāng)氨基修飾劑在約5-70℃，優(yōu)選約25℃，反應(yīng)約7-24小時(shí)。用來處理氨基酸酯的氨基修飾劑的用量與用于上述氨基酸的用量相同。該反應(yīng)可以在有或沒有堿如三乙胺或二異丙基乙胺存在下進(jìn)行。
之后，在負(fù)壓下除去反應(yīng)溶劑，通過在約50-80℃，優(yōu)選約70℃，用適當(dāng)堿性溶液如1N氫氧化鈉水解修飾的氨基酸酯一個(gè)足以水解掉酯基的時(shí)間來除去酯官能度，得到有游離羧基的修飾氨基酸。然后將水解混合物冷卻到室溫并酸化，例如，用25％鹽酸水溶液，使其pH達(dá)到約2-2.5。修飾氨基酸從溶液中沉淀，用常規(guī)方法如過濾或潷析方法回收。芐酯可以通過在有機(jī)溶劑中用過渡金屬催化劑進(jìn)行氫化而除去。
修飾氨基酸可以通過重結(jié)晶或在固體柱載體上分級(jí)進(jìn)行純化。適當(dāng)?shù)闹亟Y(jié)晶溶劑系統(tǒng)包括乙腈，甲醇和四氫呋喃。分餾可以在適當(dāng)固體柱載體如氧化鋁上，用甲醇/正丙醇混合物作流動(dòng)相；反相柱載體用三氟乙酸/乙腈混合物作流動(dòng)相；離子交換色譜用水作流動(dòng)相進(jìn)行。如果采用陰離子交換色譜，優(yōu)選采用0-500mM系列氯化鈉梯度液來洗脫。
在另一種方法中可通過下列方法制備具有下式的修飾氨基酸 其中Y是
或SO2；R1是C3-C24烷基，C2-C20烯基，C2-C20炔基，環(huán)烷基或芳基；R2是氫，C1-C4烷基或C2-C4烯基；及R3是C1-C7烷基，C3-C10環(huán)烷基，芳基，噻吩基，吡咯并或吡啶基，這里，R3可任意被一個(gè)或多個(gè)C1-C5烷基，C2-C4烯基，F(xiàn)，Cl，OH，SO2，COOH或SO3H取代；(a)在水中和堿存在下，將下式化合物 與下式化合物反應(yīng)，R3-Y-X其中Y，R1，R2和R3定義如上，X是離去基團(tuán)。
化合物CXXV可以，例如，采用Olah等人(合成(Synthesis)，537-538(1979))所述方法來制備。
化合物XXXI可按照路線I所述方法從10-十一碳烯-1-醇(1)來制備，三步過程的總產(chǎn)率為31％。在Mitrunobu條件下，用鏈烷醇(1)對(duì)酞酰亞胺進(jìn)行烷基化，接著與肼反應(yīng)，得到1-氨基十一碳-10-烯(2)產(chǎn)率66％。將此胺用鄰-乙?；畻铛Ｂ妊苌孟?3)用高錳酸鉀氧化成酸。除去乙酸鹽，接著由酸性沉淀物中得到基于胺(2)計(jì)算的47％產(chǎn)率的化合物XXXI。
路線1 傳送系統(tǒng)本發(fā)明組合物可包含一種或多種活性劑。
在一個(gè)實(shí)例中，化合物I-CXXIII或至少含有這些化合物之一的多氨基酸或肽可以在給藥之前，經(jīng)過將一種或多種化合物，多氨基酸或肽與活性劑簡(jiǎn)單混合，而被直接用作傳送載體。
在另一實(shí)例中，化合物，多氨基酸或肽可以用來制成含有活性劑的微球。這些化合物，多氨基酸或肽特別適用于某些生物活性劑如小肽激素的口服使用，如果只靠這些活性劑本身，是無法或只有部分所服劑量通過胃腸粘膜和/或易于被胃腸道中的酸和酶進(jìn)行化學(xué)裂解。
如果將修飾氨基酸，多氨基酸或肽轉(zhuǎn)化微球形式，可任意將混合物加熱到約20-50℃，優(yōu)選約40℃，直到修飾氨基酸溶解。最終，每mL溶液中含有約1-2000mg化合物，多氨基酸或肽，優(yōu)選每mL含有約1-500mg。活性劑在最終溶液中的濃度可以各種各樣，這取決于治療所需要的劑量。如果必要，可以通過，例如，反相HPLC分析測(cè)定精確濃度。
如果用化合物，多氨基酸或肽制備微球，另一種可以使用的方法如下將化合物，多氨基酸或肽溶解于濃度約為75-200mg/ml，優(yōu)選約100mg/ml，溫度約為25-60℃，優(yōu)選40℃的去離子水中。留在溶液中的顆粒物可用常規(guī)方法如過濾方法除去。
然后，將保持溫度在約40℃的化合物，多氨基酸或肽溶液以1∶1(v/v)的比例與酸濃度約為0.05-2N，優(yōu)選約1.7N的酸性水溶液(也是約為40℃)混合。將所得混合物在40℃培養(yǎng)足夠長(zhǎng)時(shí)間，直到用光學(xué)顯微鏡可以觀察到已形成微球。在本發(fā)明實(shí)踐中，添加順序最好是將化合物，多氨基酸或肽加到酸性水溶液中。
適于形成微球的酸包括不會(huì)發(fā)生下列情況的任何酸(a)對(duì)修飾氨基酸，多氨酸酸或肽產(chǎn)生不利影響，例如引起或產(chǎn)生傳播化學(xué)分解；(b)干擾微球形成；(c)干擾活性劑運(yùn)載體的微球聯(lián)合；以及(d)與活性劑運(yùn)載體之間發(fā)生不利的作用。
在這方面適合的優(yōu)選酸包括乙酸，檸檬酸，鹽酸，磷酸，蘋果酸和馬來酸。
可以在制備微球之前將穩(wěn)定微球的添加劑混入酸性水溶液或摻入化合物或運(yùn)載體溶液中。在一些活性劑的幫助下這些添加劑的存在將改善溶液中微球的穩(wěn)定性和/或分散性。
穩(wěn)定性添加劑的濃度約為0.1-5％(w/v)，優(yōu)選約0.5％(w/v)。適于作微球穩(wěn)定添加劑的實(shí)例包括但不限于阿拉伯膠，明膠，甲基纖維素，聚乙二醇，聚丙二醇，羧酸及其鹽，和多熔素。優(yōu)選的穩(wěn)定性添加劑是阿拉伯膠，明膠和甲基纖維素。
在上述條件下，化合物分子，多氨基酸或肽形成中空或固體陣列形式的微球，其中，運(yùn)載體分布在裹著液體或固體運(yùn)載體的載體基質(zhì)中或囊狀微球中。如果化合物，多氨基酸或肽在可溶性物質(zhì)存在下形成微球，例如藥劑在上述酸性水溶液中形成，則該物質(zhì)將被封裝在微球中。人們可用這種方式封裝藥理活性物質(zhì)如肽，蛋白質(zhì)和多糖，以及填充有機(jī)分子如抗生素，所說抗生素一般通過口服途徑給藥時(shí)生物利用度很差?？梢曰烊胛⑶虻乃巹┑挠昧咳Q于多種因素，包括該藥劑在溶液中的濃度以及運(yùn)載體與載體的親和力?；衔?，多氨基酸或肽的微球不改變活性劑的生理和生物性質(zhì)。而且，封裝過程也不改變活性劑的藥理性能。任何藥劑都可以混裝在微球中。該系統(tǒng)的突出優(yōu)點(diǎn)是傳送化學(xué)或生物劑，如不采用該系統(tǒng)，這些化學(xué)或生物劑在微球到達(dá)目標(biāo)區(qū)(即到達(dá)此區(qū)后微球才釋放其內(nèi)容)之前，可能會(huì)在給藥的動(dòng)物體內(nèi)遭到破壞或者功效降低，和傳送在胃腸道中吸收很差的藥劑。目標(biāo)區(qū)因所用藥物的不同而多種多樣。
微球的粒徑在決定活性劑于胃腸道的目標(biāo)區(qū)釋放方面起著重要作用。優(yōu)選微球的直徑約為≤0.1μm到10μm，優(yōu)選約0.5-5μm。微球足夠小是為了在胃腸道的目標(biāo)區(qū)，譬如胃和空腸之間有效地釋放活性劑。也可以將小微球懸浮在適當(dāng)流體載體(如等滲鹽水)中，通過直接注射到循環(huán)系統(tǒng)，或者肌肉內(nèi)或皮下注射來進(jìn)行胃腸外給藥。給藥方式的選擇當(dāng)然取決于對(duì)所要給予的活性劑的要求。用氨基酸大微球(＞50μm)作口服傳送系統(tǒng)將會(huì)使其功效降低。
通過將化合物，多氨基酸或肽與水或含有活性劑的水溶液混合而形成的微球的大小可以通過操縱各種物理或化學(xué)參數(shù)如封裝液的pH值，克分子滲透壓濃度或離子濃度，溶液中離子的大小以及通過選擇封裝過程所用的酸來控制。
在臨給藥之前將載體的水溶液與活性成分的水溶液混合來制成給藥混合物。或者，在制劑過程中將載體與生物或化學(xué)活性成分混合。該(混合物)溶液可以任意含有添加劑如磷酸鹽緩沖劑，檸檬酸，乙酸，明膠和阿拉伯膠。
可將穩(wěn)定性添加劑加到載體溶液中。這些添加劑與一些藥物一起可促進(jìn)溶液中制劑的穩(wěn)定性和分散性。
穩(wěn)定性添加劑的濃度可約為0.1-5％(w/v)，優(yōu)選約0.5％(w/v)。適于作穩(wěn)定性添加劑的實(shí)例包括但不限于阿拉伯膠，明膠，甲基纖維素，聚乙二醇，羧酸及其鹽，和多熔素。優(yōu)選的穩(wěn)定性添加劑是阿拉伯膠，明膠和甲基纖維素。
活性劑的用量是能夠完成具體活性劑之目的的有效量。在組合物中的量一般是指藥理或生物有效量。但是，當(dāng)組合物是以單位劑量如膠囊劑，片劑或液體形式使用時(shí)，其用量可以比藥理或生物有效量少，因?yàn)閱挝粍┝靠梢院卸啾遁d體/生物或化學(xué)活性劑組合物，或者可以含有分開的藥理或生物有效量?？偟挠行Я靠梢酝ㄟ^累積單位劑量來實(shí)現(xiàn)，其總劑量含有生物或藥理活性劑的藥理或生物或化學(xué)活性的量。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以測(cè)定將要使用的活性劑，特別是生物或化學(xué)活性劑的總量。但是，人們驚奇地發(fā)現(xiàn)，對(duì)于一些生物或化學(xué)活性劑來說，現(xiàn)公開的載體的使用提供了極為有效的傳送，特別是在口服，鼻內(nèi)，舌下，十二指腸內(nèi)或皮下系統(tǒng)中。因此，可以使用比在以前單位劑量或傳送系統(tǒng)更低的生物或化學(xué)活性劑用量給患者給藥，仍能達(dá)到同樣的血液濃度和治療效果。
本發(fā)明組合物中載體的用量應(yīng)該是有效傳送的量，并且可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法對(duì)任何具體載體或生物或化學(xué)活性劑進(jìn)行測(cè)定。
單位劑量也可以包含任何賦形劑；稀釋劑；崩解劑；潤(rùn)滑劑；增塑劑；調(diào)色劑；以及劑量載體，包括但不限于水，1，2-丙二醇，乙醇，橄欖油，或它們的任意組合。
本發(fā)明組合物或單位劑量?jī)?yōu)選的給藥方式是口服或十二指腸內(nèi)注射。
本發(fā)明傳送組合物也可以包含一種或多種酶抑制劑。這種酶抑制劑包括但不限于這樣的化合物，如放線酰胺素或表放線酰胺素以及它們的衍生物。這些化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
這些化合物的衍生物公開于美國(guó)專利5,206,384。放線酰胺素衍生物具有下列結(jié)構(gòu)式 其中，R5是亞磺甲基(sulfoxymethyl)或選自甲酰胺，羥氨基羰基和烷氧羰基的羧基或取代的羧基；及R6是羥基，烷氧基，羥氨基或亞磺氨基(sulfoxyamino)。
其它酶抑制劑包括但不限于抑肽酶(Trasylol)和Bowman-Birk抑制劑。
本發(fā)明化合物和組合物可用于將生物或化學(xué)活性劑給予任何動(dòng)物，譬如鳥類；哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類，尤其是人類；和昆蟲。該系統(tǒng)特別有利于傳送化學(xué)或生物活劑，如不采用該系統(tǒng)，這些化學(xué)或生物劑在到達(dá)目標(biāo)區(qū)(即到達(dá)此區(qū)后傳送組合物中的活性劑才釋放出來)之前及在要給藥的動(dòng)物體內(nèi)遭到破壞或者功效降低。特別地，本發(fā)明化合物和組合物可用于活性劑的口服給藥，特別是那些通常不能口服傳送的活性劑。
具體實(shí)施方案下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明而非限制本發(fā)明。所有份數(shù)均以重量為單位除非另有說明。
實(shí)施例1化合物XIX制備如下
在一個(gè)3L的三頸圓底燒瓶頂部裝上機(jī)械攪拌器和溫度計(jì)，并將燒瓶在冰浴中冷卻。在圓底燒瓶中加入8-氨基辛酸(100.0g，0.65mol)的2M氫氧化鈉水溶液(1.4L)。溶液的溫度保持在約5℃，并用7小時(shí)分批加入鄰乙?；畻铛Ｂ?198.6g，0.76mol，1.2當(dāng)量)。將混合物在5℃攪拌12小時(shí)，得到黃色均勻溶液。該溶液用1M鹽酸酸化，而將pH調(diào)至6.8，然后用乙酸乙酯(2×600mL)萃取。再將水相的pH調(diào)至6.3，并用乙酸乙酯(2×600mL)進(jìn)一步萃取。合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。將剩余物重新溶解于最小體積的2M氫氧化鈉水溶液，使溶液的pH在9.5-10之間。攪拌混合物的同時(shí)用1M鹽酸酸化至約pH6.2，形成固體。濾出固體，用水(3×300mL)洗滌，再用55％甲醇/水(v/v)重結(jié)晶，得到化合物XVIII為米色固體(99.7g，57％)。
數(shù)據(jù)如下mp 116-117C.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.70(1H；brs)，11.95(1H，br s)8.81(1H，t)，7.82(1H，m)，7.38(1H，m)，6.84(2H，m)，2.36(2H，q)，2.18(2H，t)，1.50(4H，br m)，1.28(6H，m)，元素分析C15H21NO4理論值C，64.50；H，7.58；N，5.02實(shí)測(cè)值C，64.26；H，7.81；N，4.93用類似的的方法制備化合物I，II，III，IV，VI，IX，X，XI，XII，XIII，XIV，XX，XXI，XXIII，XXVII，XXVIII，XXXIII和XXXIV。
數(shù)據(jù)如下
化合物I1H NMR(300MHz，D2O)δ15(2H，m)2.0(2H，t)2.3(2H，t)7.5(2H，t)7.6(1H，m)7.3(2H，m)化合物II1H NMR(300MHz，D2O)δ1.4(8H，m)1.7(6H，m)2.1(2H，t)1.25(1H，m)3.05(2H，t)化合物III1H NMR_(300MHz，DMSO-d6)δ0.7(3H，m)0.9(2H，m)1.1(3H，q)1.6.(5H，m)1.75(2Hr，q)2.1(2H，t)3.0(2H，q)7.9(1H，m)化合物IV元素分析計(jì)算值C11H13NO4C，59.9，H，5.87，N，6.27實(shí)測(cè)值C，58.89，H，5.85，N，6.07.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.8(2H，m)2.3(2H，t)3.1(2H，q)6.9(2H，t)7.4(1H，t)7.8(1H，d)8.85(1H，t)12.0(1H，s)12.15(1H，s)化合物VI1H NMR(300MHz，D2O)δ0.8(2H，m)1.1(4H，m)1.4(2H，q)1.6(7H，m)2.15(4H，m)3.1(2H，t)化合物IX1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.9(q，3H)，1.2(m，7H)，1.3(q，2H)，1.5(q，3H)，1.9(d.2H)，2.0(d，1H)，2.2(t，2H)，3.0(q，3H)，7.7(s，1H)化合物X1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.7(d，2H)，0.9(dd，1H)，1.2-1.3(m，7H)，1.5(q，3H)，1.6-1.8(m，5H)，2.15(t，2H)，3.0(m，3H)，7.5(s，1H)，12.0(s，1H)化合物XI元素分析計(jì)算值C15H20NO3ClC，60.48，H，6.78，N，4.70實(shí)測(cè)值C，60.4，H，6.68，N，4.53.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.28(m，6H)1.48(m，4H)2.19(t，2H)3.19(qt，2H)，7.323-7.48(m，4H)，8.39(t，1H)，12.09(s，1H)化合物XII元素分析計(jì)算值C17H22NO3C，66.42，H，7.23，N，4.56實(shí)測(cè)值C，65.80，H，7.17，N，4.14.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.25(m，6H)1.43-1.49(m，4H)2.18(t，2H)3.15(qt，2H)，6.72(d，1H)，7.21-7.26(m，2H)，7.39(t，1H)，7.48(d，1H)，7.65(t，1H)，8.21(t，1H)化合物XIII元素分析計(jì)算值C15H19NO3C，60.18，H，6，41，N，4.67實(shí)測(cè)值C，60.26，H，6.53，N，4.61.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.28(m，6H)，1.45-1.52(m，4H)，2.19(t，2H)，2.22(qt，2H)，7.13(m，2H)，7.43-7.53(m，1H)，8.67(t，1H)12.03(s，1H)化合物XIV元素分析計(jì)算值C14H20N2O3·0.66H2OC，63.04，H，7.91，N，10.34實(shí)測(cè)值C，63.21，7.59，10.531H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.22-12.8(m，6H)，1.48-1.50(m，4H)，2.18(t，2H)，3.24(qt，2H)，7.48(m，1H)，8.15(d，1H)，8.63-8.69(m，2H)，8.97(d，1H)化合物XX元素分析計(jì)算值C15H20NO3FC，60.09，H，7.19，N，4.98實(shí)測(cè)值C，63.82，H，7.23，N，4.94.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.28(m，6H)1.49(m，4H)2.19(t，2H)3.23(qt，2H)，7.24-7.30(m，2H)，7.49-7.60(m，2H)，11.99(s，1H)化合物XXI元素分析計(jì)算值C17H23NO4C，66.85，H，7.61，N，4.58實(shí)測(cè)值C，66.81，H，7.69，N，4.37.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.26(m，6H)1.42-1.50(m，4)2.18(t，2H)3.13(qt，2H)，6.63(d，1H)，6.80(t，1H)，6.86(d，1H)，7.15(t，1H)，7.39 (d，1H)，7.60(d，1H)，8.03(t，1H)，9，95(s，1H)，12.12(s，1H)化合物XXIII元素分析計(jì)算值C15H27NO3C，66.86，H，10.22，N，5.19實(shí)測(cè)值C，66.92，H，10.72，N，5.14.1H NMR(300MHz，DMSO-d8)δ1.56-1.34(m，13H)1.46(t，2H)1.60-1.68(m，5H)，2.04(t，1H)，2.17(t，2H)，2.97(qt，2H)，7.62(t，1H)，11.98(s，1H)化合物XXVII元素分析計(jì)算值C18H27NO4C，67.25，H，8.48，N，4.36實(shí)測(cè)值C，67.23，H，8.57，N，4.20.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.22-1.26(m，12H)1.45-1.51(m，4H)2.16(t，2H)3.25(qt，2H)，6.85(t，2H)，7.37(t，1H)，7.81(d，1H)，8.79(t，1H)，11.95(s，1H)，12.72(s，1H)化合物XXVIII1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.26(8H，br m)，1.49(4H，m)，2.17(2H，t)，3.26(2H，m)，6.86(2H，m)，7.37(1H，m)，7.83(1H，m)，8.80(1H，t)，11.95(1H，s)，12.73(1H，s).
化合物XXXIII1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.2(a，2H)，1.3(q，2H)，1.3(q，2H)，1.5(q，2H)，2.2(t，2H)，3.0(q，2H)，3.5(s，2H)，7.3(m，5H)，8.0(s，1H)化合物XXXIV元素分析計(jì)算值C12H17NO4C，62.23，H，6.83，N，5.57實(shí)測(cè)值C，61.93，H，6.80，N，5.56.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1-.24-1.34(m，2H)，1.491.57(m，4H)2.19(t，2H)3.26(qt，2H)，6.68(t，2H)，7.37(s，1H)，7.83(d，1H)8.81(t，1H)，12.08(s，1H)，12.72(s，1H)實(shí)施例1A化合物XIX的另一種合成方法如下在一個(gè)5L三頸圓底燒瓶上裝上加熱罩，頂部裝上機(jī)械攪拌器，添加漏斗和溫度計(jì)。反應(yīng)在氬氣中進(jìn)行。將羥胺-鄰-磺酸(196.7g 1.74mol，1.10當(dāng)量)和甲酸(1L)加到圓底燒瓶中，攪拌后形成白色漿液。通過添加漏斗向白色漿液中滴加環(huán)辛酮(200.0g，1.58mol，1.0當(dāng)量)的甲酸(600mL)溶液。添加完成后用回流冷凝器替換添加漏斗，然后將反應(yīng)加熱至回流(內(nèi)部溫度約為105℃)1小時(shí)，得到棕色溶液。將溶液冷卻至室溫后將其倒入飽和氯化銨(1.5L)溶液和水(1.5L)的混合物中。所得混合物用氯仿(3×1200mL)萃取。將合并的氯仿相倒入燒杯，慢慢加入飽和碳酸氫鈉(2L)。然后分離氯仿相，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)，得到棕色油。將該油放入一個(gè)裝有磁性攪拌器的500mL圓底燒瓶中。將圓底燒瓶置于硅油浴，并裝上一個(gè)頭上帶有溫度計(jì)的短徑真空蒸餾裝置。將一個(gè)Cow型接收器連到三個(gè)250mL燒瓶上。通過真空蒸餾(餾分的頭部溫度為80-120℃，壓力為3.0-3.4mmHg)得到2-氮雜環(huán)壬酮(145g，65％，mp 64-69℃)。
在一個(gè)5L三頸圓底燒瓶上裝上加熱罩，頂部裝上機(jī)械攪拌器，回流冷凝器和一個(gè)29溫度計(jì)。將2-氮雜環(huán)壬酮(83g，0.59mol，1.0當(dāng)量)的5M水性氫氧化鈉(650mL，3.23mol，5.5當(dāng)量)懸浮液裝入圓底燒瓶。混合物被加熱回流(內(nèi)部溫度約為110℃)4小時(shí)，得到清澈的黃色溶液。除去加熱罩和回流冷凝器。溶液冷卻到室溫后用水(650mL)稀釋，然后在冰浴中冷卻。在攪拌和繼續(xù)冷卻的同時(shí)用1小時(shí)在溶液中分批加入精細(xì)研磨的鄰-乙?；畻铛Ｂ?114.7g，0.59mol，1.0當(dāng)量)。添加后30分鐘除去冰浴，并繼續(xù)在室溫?cái)嚢?1小時(shí)，得到棕黃色溶液。將攪拌的混合物用2M硫酸(約850mL)酸化至約pH1，形成黃色固體。過濾收集固體，并將其溶解于溫甲醇(1.7L)。在該甲醇中加入活性炭(約5g)，并將溶液攪拌10分鐘。過濾除去活性炭，用300mL甲醇洗滌炭的剩余物。在合并的濾液(即2L甲醇)中加水(2L)，在4℃靜置過夜，產(chǎn)生米白色固體沉淀。濾出粗產(chǎn)物，并從65％甲醇/水(v/v)中重結(jié)晶，得到化合物XIX(69.1g，42％)為米白色固體。
數(shù)據(jù)如下mp 116-117℃；HPLC，1HNMR和元素分析C15H21NO4理論值C，64.50；H，7.58；N，5.02實(shí)測(cè)值C，64.26；H，7.81；N，4.93實(shí)施例2化合物XXXI制備如下1-氨基十一碳-10-烯將10-十一碳烯-1-醇(5.00g，29.36mmol，1當(dāng)量)，三苯膦(7.70g，29.36mmol，1當(dāng)量)和酞酰亞胺(4.32g，29.36mmol，1當(dāng)量)的無水四氫呋喃(THF，30mL)混合物在氬氣中劇烈攪拌。用THF(12mL)稀釋偶氮二羧酸二乙酯(DEAD，5.11g，29.36mmol，1當(dāng)量)，然后用注射器滴加到上述混合物中。添加完成后將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，加入乙醚(30mL)使三苯膦氧化物和肼二羧酸酯沉淀，并濾出沉淀。用乙醚(2×30mL)漂洗沉淀物，蒸發(fā)合并的濾液，得到黃色固體。黃色固體用溫己烷(3×50mL)研制，并過濾。蒸發(fā)合并的己烷相，得到1-酞酰亞胺基十一碳-10-烯為黃色蠟。
將黃色蠟溶解于肼水合物(1.47g，1當(dāng)量，29.36mmol)的乙醇溶液(38mL)中。將混合物加熱回流2小時(shí)?；旌衔锢鋮s到室溫后加入濃鹽酸(30mL)，并用燒結(jié)玻璃濾器濾出固體。剩余物用水(50mL)洗滌，蒸發(fā)合并的濾液，得到黃色固體。將黃色固體重新溶解于1M NaOH(100mL)，并用乙醚(2×50mL)萃取。干燥并蒸發(fā)乙醚，得到黃色油。將該油用Kugelrohr蒸餾方法(約0.1mmHg，100℃)純化，得到1-氨基十一碳-10-烯(2)為淺黃色油(3.29g，66％)。
數(shù)據(jù)如下1H NMR(300mHz，DMSO-d6)；δ1.23(14H，br m)，1.99(2H，m)，2.48(2H，m)，4.94(2H，m)，5.77(1H，m).
1-(鄰-乙酰基水楊酰氨基)十一碳-10-烯將鄰-乙?；畻铛Ｂ?3.82g，19.25mmol，1當(dāng)量)的THF(30mL)放在冰浴中冷卻。用注射器先后加入三乙胺(1.95g，19.25mmol，1當(dāng)量)和1-氨基十一碳-10-烯(3.26g，19.25mmol，1當(dāng)量)的THF(10mL)液。除去冰浴，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物3.5小時(shí)。除去溶劑后將剩余物溶解于EtOAc(50mL)，并用水(2×30mL)洗滌。干燥并蒸發(fā)有機(jī)相，得到6.59g 1-(鄰-乙?；畻铛０被?十一碳-10-烯為無色油。
數(shù)據(jù)如下1H NMR(300mHz，DMSO-d6δ1.26(12H，br s)，1.47(2H，m)，1.99(2H，m)，2.19(3H，s)，3.15(2H，q)，4.95(2H，m)，5.78(1H，m)，7.15(1H，m)，7.30(1H，m)，7.50(2H，m) 8.24(1H，t).
化合物XXXI將1-(鄰-乙?；畻铛０被?十一碳-10-烯(6.59g，19.25mmol，1當(dāng)量)的二氯甲烷(108mL)液加到水(108mL)，硫酸(9M，13mL)，冰醋酸(2.16mL)和甲基三烷(C8-C10)氯化銨(0.32g)(Adogenò464，得自Aldrich Chemical Co.)的混合物中。將混合物在冰浴中劇烈攪拌，并用1.5小時(shí)分批加入高錳酸鉀(9.13g，57.75mmol，3當(dāng)量)。加完后撤除冰浴，在室溫?cái)嚢杷米霞t色溶液20小時(shí)。將溶液在冰浴中冷卻，加入亞硫酸氫鈉(6.8g)以消耗掉過量高錳酸鹽。分離有機(jī)相，水相用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。在剩余物中加入氫氧化鈉(2M，50mL)，并攪拌30分鐘。溶液用水(50mL)稀釋，用乙醚(50mL)洗滌，并用2M鹽酸酸化至pH1。過濾收集生成的固體。將固體從65％MeOH/H2O中重結(jié)晶，得到化合物XXXI為褐色固體(2.78g，基于胺計(jì)算為47％)。
數(shù)據(jù)如下1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ1.24(10H，br m)，1.51(4H，m)，2.17(2H，t)，3.27(2H，m)，6.86(2H，m)，7.37(1H m)，7.82(1H，m)，8.80(1H，t)，11.95(1H，s)，12.72(1H，s).
實(shí)施例3化合物L(fēng)XXXVI制備如下在一個(gè)1L三頸圓底燒瓶上裝上磁性攪拌器和冷凝器。在燒瓶?jī)?nèi)裝入3-(4-氨基苯基)丙酸(30g，0.182mol)的二氯甲烷(300mL)溶液，并一批加入三甲基甲硅烷氯化物(46.2mL，0.364mol)。將反應(yīng)混合物回流1.5小時(shí)，冷卻至室溫后再移至冰水浴。先后加入三乙胺(76.2mL，0.546mol)和2-甲氧基肉桂酰氯(35.8g，0.182mol)。將反應(yīng)混合物暖至室溫，然后攪拌48小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，在剩余物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液和乙酸乙酯。分離各相，水相用2N硫酸水溶液酸化至pH1.4，然后用乙酸乙酯(2×400mL)萃取。真空濃縮合并的有機(jī)相，剩余物從50％(v/v)甲醇水溶液重結(jié)晶，得到的產(chǎn)物為褐色固體(48.57g，82％)。
數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.1(1H，br)，7.8(1H，dd)，7.6(3H，m)，7.4(1H，m)，7.3(2H，m)，7.1(1H，d)，7.0(1H，t)，6.9(1H，d)，3.9(3H，s)，2.8(2H，t)，2.5(4H，m).
元素分析計(jì)算值C19H19NO4C，70.14；H，5.88；N，4.31.實(shí)測(cè)值C，69.76；H，5.91；N，4.21.
實(shí)施例4化合物CXVII制備如下在一個(gè)3L三頸圓底燒瓶的頂部裝上機(jī)械攪拌器和溫度計(jì)。在圓底燒瓶中裝入8-氨基辛酸(10.0g，0.054mol)的2M氫氧化鈉水溶液(1.4L)，再用7h分批加入鄰-硝基苯甲酰氯(12.0g，0.065mol，1.2當(dāng)量)。將混合物在25℃攪拌12h，得到黃色均勻溶液。用1M鹽酸將溶液酸化至約pH2，分離油狀剩余物，然后潷析。將該油溶解于攪拌的水(300mL)中，并在冰水浴中冷卻。濾出產(chǎn)生的白色固體沉淀，用水(3×300mL)洗滌，并從55％乙腈/水(V/V)中重結(jié)晶，得到化合物CXVII為米色固體(7.4g，47％)。mp89-92℃。
數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.0(1H，s)，8.65(1H，t)，8.0(1H，dd)，7.8(1H，m)，7.65(1H，m)，7.5(1H，m)，3.2(2H，q)，2.2(2H，t)，1.5(4H，br m)，1.3(6H，br m).
元素分析計(jì)算值C15H20N2O5C，58.41；H，6.54；N，9.09.實(shí)測(cè)值C，58.50；H，6.71；N，9.14.
本發(fā)明其它化合物可按照實(shí)施例1-4所述方法來制備。
實(shí)施例5-15 大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)重組生長(zhǎng)激素按下表1將修飾氨基酸和重組人類生長(zhǎng)激素(rhGH)在pH約為7-8的磷酸鹽緩沖液中混合來制備劑量組合物。
通過舌下，灌胃，十二指腸內(nèi)給藥或結(jié)腸給藥給予大鼠劑量組合物。用ELISA測(cè)定法對(duì)得自Medix Biotech Inc.的rhGH進(jìn)行傳送情況的測(cè)定評(píng)價(jià)。對(duì)于結(jié)腸內(nèi)給藥，制出樣品并以溶于含丙二醇(0-50％)的緩沖液中的25mg/kg載體和1mg/kg rhGH的劑量給予禁食的大鼠。
下面表1中給出測(cè)定的結(jié)果。
對(duì)比實(shí)施例5A灌胃給予大鼠rhGH(6mg/ml)。根據(jù)實(shí)施例5的方法測(cè)定傳送情況。
結(jié)果列于下面表1。


實(shí)施例16-27大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)重組生長(zhǎng)激素劑量溶液的制備將傳送劑用蒸餾水稀釋，并用鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液調(diào)至pH7.2-8.0，重新制成傳送劑?；旌蟫hGH，D-甘露糖醇和甘油，并將其溶解于2％甘油/水的混合物中，制成rhGH的儲(chǔ)藏溶液。然后將該儲(chǔ)藏溶液加到傳送劑溶液中。研究幾種傳送劑對(duì)活性劑的傳送率。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將體重為200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食24小時(shí)。在給藥前15分鐘給予大鼠酮胺(44mg/kg)和氯丙嗪(1.5mg/kg)。通過皮下注射，鼻內(nèi)滴注或舌下滴注給大鼠使用上述藥劑溶液之一。不斷從大鼠的尾部動(dòng)脈抽取血樣進(jìn)行血清鈣濃度或血清rhGH濃度測(cè)定。在本實(shí)驗(yàn)中所用rhGh的劑量為0.1mg/kg。
用rhGH酶免疫測(cè)定試驗(yàn)試劑盒對(duì)血清rhGH濃度進(jìn)行定量測(cè)定。其結(jié)果在表2和圖1和2中給出。
圖2中，圓點(diǎn)代表化合物CXXIII和rhGH水溶液SL給藥后的反應(yīng)。方塊代表化合物CXXIII和rhGH水溶液IN給藥后的反應(yīng)。三角代表化合物CXXIII和rhGH水溶液IC給藥后的反應(yīng)?；衔顲XXIII的劑量為25mg/kg，rhGH的劑量為1mg/kg。
對(duì)比實(shí)施例16A灌胃給予大鼠rhGH(1mg/kg)。根據(jù)實(shí)施例16的方法測(cè)定傳送情況。
結(jié)果列于下面表2。


實(shí)施例28-33大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)干擾素按下表3將修飾氨基酸化合物與干擾素a2b在pH約為7-8的Trizmaò鹽酸鹽緩沖液(Tris-HCl)中混合，制成藥劑組合物。如果必要，將丙二醇(0-25％)作為溶解劑加入。
通過灌胃，十二指腸內(nèi)給藥或結(jié)腸內(nèi)給藥給予大鼠藥劑組合物。用ELISA測(cè)定法對(duì)得自Biosource Inc.的干擾素a進(jìn)行傳送情況的測(cè)定。
下面表3中給出結(jié)腸內(nèi)給藥的結(jié)果。
對(duì)比實(shí)施例28A在大鼠的結(jié)腸內(nèi)給予干擾素a 2b(250mg/kg)。根據(jù)實(shí)施例14的方法測(cè)定傳送情況。
結(jié)果列于下面表3。


實(shí)施例34-37大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)鮭魚降鈣素按下表4將修飾氨基酸與鮭魚降鈣素混合，制成劑量組合物。將400mg載體加到2.9mL 25％丙二醇水溶液中。攪拌所得溶液，用氫氧化鈉(1.0N)調(diào)至pH7.2.。加水使整個(gè)體積達(dá)到2.0mL。樣品中載體的最終濃度為200mg/mL。將降鈣素(10mg)加到溶液中，使整個(gè)降鈣素的濃度為2.5mg/mL。
對(duì)于每一種樣品，要將一組禁食的大鼠麻醉。通過灌胃，結(jié)腸內(nèi)滴注或十二指腸內(nèi)滴注給予大鼠藥劑組合物。不斷從鼠的尾部動(dòng)脈抽取血樣。通過試驗(yàn)用Calcium Kit(Sigma Chemical Company，St.Louis，Missouri，USA)對(duì)血清鈣濃度進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果在下面表4中給出。


實(shí)施例38-43大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)鮭魚降鈣素劑量溶液的制備將傳送劑用水稀釋，并用鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液調(diào)至pH7.2-8.0，重新制成傳送劑。將sCT溶解于檸檬酸(0.085N)，制成sCT的儲(chǔ)藏溶液。然后將該儲(chǔ)藏溶液加到傳送劑溶液中。研究幾種不同的傳送劑對(duì)活性劑的傳送率的影響。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將體重為200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食24小時(shí)。在給藥前15分鐘給予大鼠酮胺(44mg/kg)和氯丙嗪(1.5mg/kg)。通過皮下注射給予大鼠上述藥劑溶液之一。不斷從大鼠的尾部動(dòng)脈抽取血樣進(jìn)行血清鈣濃度測(cè)定。
采用鄰-甲酚酞氨酸絡(luò)合劑方法(Sigma)，用UV/VIS分光光度計(jì)(PerkinElmer)對(duì)血清鈣濃度進(jìn)行定量測(cè)定。結(jié)果在表5中給出。
實(shí)施例38A
給大鼠灌入鮭魚降鈣素。根據(jù)實(shí)施例38的方法測(cè)定傳送情況。
結(jié)果由下面表5給出。


實(shí)施例44-50大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)肝素按下表6將修飾氨基酸與列于下面表6的肝素混合，制成藥劑組合物。在試驗(yàn)試管中，將900mg載體溶解于3mL丙二醇，并將0.299g鈉肝素溶解于3mL水。溶液用旋渦方式混合。在所得混合物中加入氫氧化鈉(10M)直到形成溶液。然后用濃鹽酸將pH調(diào)至7.4±0.5。所得溶液在40℃用聲波作用30分鐘。
通過灌胃給予一組禁食的有知覺的大鼠藥劑組合物。給予酮胺(44mg/kg)后，通過心臟穿刺抽取血樣。根據(jù)Henry，J.B.，(用實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行臨床診斷和處理(Clinical Diagnosis and Management byLaboratory Methods)；Philadelphia，PA；WB Saunders(1979))所述方法，利用活化的局部促凝血時(shí)間(actiVated partial thromboplastim time，APTT)對(duì)肝素活性進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果列于下面表6。
對(duì)比實(shí)施例44A
灌胃給予大鼠肝素(100mg/kg)。根據(jù)實(shí)施例44的方法對(duì)肝素的活性進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果列于下面表6。


實(shí)施例51依照實(shí)施例44方法，只是用小分子量肝素代替肝素，并根據(jù)需要改變起溶解作用的丙二醇和水的用量。
實(shí)施例50-58大鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)甲狀旁腺激素劑量溶液的制備將傳送劑用蒸餾水和/或丙二醇稀釋，并用鹽酸水溶液或氫氧化鈉水溶液調(diào)至pH7.2-8.0，重新配制傳送劑。將甲狀旁腺激素溶解于水，制成甲狀旁腺激素儲(chǔ)備溶液。然后將該儲(chǔ)備溶液加到傳送劑溶液中。研究幾種不同的傳送劑對(duì)活性劑的傳送率的影響。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將體重為200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食24小時(shí)。在給藥前15分鐘給予大鼠酮胺(44mg/kg)和氯丙嗪(1.5mg/kg)。通過灌胃或結(jié)腸內(nèi)滴注給予大鼠上述藥劑溶液之一。不斷從大鼠的尾部動(dòng)脈抽取血樣進(jìn)行甲狀旁腺激素的血清濃度測(cè)定。用甲狀旁腺激素放射性免疫測(cè)定試驗(yàn)試劑含對(duì)甲狀旁腺激素的血清濃度進(jìn)行定量分析。
體內(nèi)口服給藥將含有甲狀旁腺激素(PTH)和非a-氨基傳送劑的溶液給大鼠口服來進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。結(jié)果表明比類似單獨(dú)使用活性劑相比能顯著增加甲狀旁腺激素的口服生物利用度。
結(jié)果列于下面表7。


上面提到的專利，申請(qǐng)，試驗(yàn)方法和公開的文獻(xiàn)在這里全部引入本文供參考。
根據(jù)上文對(duì)本發(fā)明詳細(xì)描述部分，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)對(duì)本發(fā)明作出許多變化。所有這些顯而易見的變化都包括在所附權(quán)利要求
的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下列化合物或其鹽
2.選自下列的化合物或其鹽
3.選自下列的化合物或其鹽
4.選自下列的化合物或其鹽
5.選自下列的化合物或其鹽
6.基本組成為下列組分的組合物(a)活性劑；及(b)下列化合物或其鹽
7.基本組成為下列組分的組合物(a)活性劑；及(b)下列化合物或其鹽
8.基本組成為下列組分的組合物(a)活性劑；及(b)下列化合物或其鹽
9.基本組成為下列組分的組合物(a)活性劑；及(b)下列化合物或其鹽
10.基本組成為下列組分的組合物(a)活性劑；及(b)下列化合物或其鹽
11.權(quán)利要求
6定義的組合物，其中所說活性劑選自生物活性劑和化學(xué)活性劑。
12.權(quán)利要求
11定義的組合物，其中所說生物活性劑選自肽，粘多糖，碳水化合物，類脂，農(nóng)藥和它們的任意組合物。
13.權(quán)利要求
12定義的組合物，其中所說生物活性劑選自人生長(zhǎng)激素，牛生長(zhǎng)激素，釋放生長(zhǎng)激素的激素，干擾素，白介素-II，胰島素，肝素，降鈣素，紅細(xì)胞生成素，心鈉素，抗原，單克隆抗體，促生長(zhǎng)素抑制素，促腎上腺皮質(zhì)素，促性腺釋放激素，催產(chǎn)素，加壓素，色甘酸鈉，萬古霉素，甲狀旁腺激素，去鐵胺(DFO)，或它們的任意組合物。
14.權(quán)利要求
10定義的組合物，包括甲狀旁腺激素和化合物CXXIII或其鹽。
15.組成為下列組分的劑量單位(A)權(quán)利要求
6定義的組合物；及(B)任選地包含一或多種下列成分(a)賦形劑，(b)稀釋劑，(c)崩解劑，(d)潤(rùn)滑劑，(e)增塑劑，(f)調(diào)色劑，或(g)藥劑的載體。
16.根據(jù)權(quán)利要求
15的劑量單位，包括片劑，膠囊劑或液體制劑。
17.權(quán)利要求
6定義的組合物用于制備為動(dòng)物輸送生物活性劑的藥物的用途。
18.一種制備權(quán)利要求
6組合物的方法，該方法包括將下列組分混合(A)至少-種生物活性劑；(B)至少一種權(quán)利要求
1定義的化合物；及(C)可有可無的劑量載體。
19.權(quán)利要求
6的組合物用于制備為動(dòng)物輸送生物活性劑的藥物的用途，其中所述組合物是經(jīng)口服，鼻內(nèi)，舌下，十二指腸內(nèi)，肌肉內(nèi)或皮下給藥的。
20.制備權(quán)利要求
1-5所述化合物的方法，該方法包括(a)在水中和堿存在下，將下式化合物 其中R1是C3-C24烷基，C2-C20烯基，C2-C20炔基，環(huán)烷基或芳基；R2是氫，C1-C4烷基或C2-C4烯基；與下式化合物反應(yīng)，R3-Y-X其中Y是
或SO2；R3是C1-C7烷基，C3-C10環(huán)烷基，芳基，噻吩基，吡咯并或吡啶基，其中，R3可任意被一個(gè)或多個(gè)C1-C5烷基，C2-C4烯基，F(xiàn)，Cl，OH，SO2，COOH或SO3H取代，X是離去基團(tuán)，生成具式CXXIV的化合物， 其中R1，R2，R3和Y的定義同本權(quán)利要求
中所述。
21.基本組成為下列組分的藥物組合物，它包含(A)至少一種生物活性劑；及(B)至少一種下式載體化合物或其鹽，2-HO-Ar-CONR8-R7-COOH其中Ar是取代的或未取代的苯基或萘基；R7選自C4-C20烷基，C4-C20烯基，苯基，萘基，(C1-C10烷基)苯基，(C1-C10烯基)苯基，(C1-C10烷基)萘基，(C1-C10烯基)萘基，苯基(C1-C10烷基)，苯基(C1-C10烯基)，萘基(C1-C10烷基)和萘基(C1-C10烯基)；R8選自氫，C1-C4烷基，C1-C4烯基，羥基和C1-C4烷氧基；R8可以任意被C1-C4烷基，C1-C4烯基，C1-C4烷氧基，-OH，-SH和-CO2R9或它們的任意組合基團(tuán)取代；其中R9是氫，C1-C4烷基或C1-C4烯基；R7可以任意被氧，氮，硫或它們的任意組合間斷；條件是這些化合物或其鹽不在酸基的α位被氨基取代。
22.權(quán)利要求
21的藥物組合物，其中Ar為未取代苯基，R8為氫。
23.權(quán)利要求
1中的化合物，其選自下面的化合物或其鹽
24.權(quán)利要求
6的組合物，其包括(a)活性劑；和(b)選自下面的化合物或其鹽
專利摘要
本發(fā)明涉及將修飾氨基酸化合物用于活性劑的傳送?；钚詣┛梢允请娜鐁hGH。本發(fā)明還涉及給藥方法，如口服，皮下，舌下和鼻內(nèi)給藥，并涉及修飾氨基酸的制備方法。
文檔編號(hào)A61K9/16GKCN1151836SQ96192998
公開日2004年6月2日 申請(qǐng)日期1996年4月1日
發(fā)明者A·勒尼一貝, K-K·霍, D·J·薩魯比, S·J·米斯特尼, J·B·普里斯, A 勒尼一貝, 普里斯, 米斯特尼, 薩魯比 申請(qǐng)人:艾米斯菲爾技術(shù)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan