專利名稱:磁性分子靶向超聲造影劑微球及其制備方法
磁性分子靶向超聲造影劑微球及其制備方法
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及的是一種具有磁性的新型分子靶向超聲造影劑，即具有磁性的包裹氟碳類不溶性氣體的脂質(zhì)體微球，微球表面裝配有對(duì)靶分子具有特異親和力的配體，并涉及其組分和制備方法。磁性的靶向超聲造影劑包括造影劑微球的脂質(zhì)層中和/或造影劑微球的脂質(zhì)層的表面連接有磁響應(yīng)材料的情況。
發(fā)明背景
早在許多重要疾病出現(xiàn)明顯臨床表現(xiàn)之前，在細(xì)胞和分子水平均已存在明顯的病理生理改變，并且貫穿于疾病的全過程。因此，從分子水平評(píng)價(jià)各種疾病病變組織和器官的病理影像特征，無疑將具有非常重大的臨床價(jià)值。超聲分子影像技術(shù)是應(yīng)用對(duì)靶分子有特異親和力的靶向性超聲微泡作為示蹤劑，這種靶向性超聲微泡既具有與紅細(xì)胞相似的流變學(xué)特征，可順利的通過組織微循環(huán)又可與特異性靶向分子有效的結(jié)合，通過對(duì)粘附在血管內(nèi)皮細(xì)胞特異靶向分子上的靶向性微泡進(jìn)行超聲對(duì)比成像，從而實(shí)現(xiàn)特異性地評(píng)價(jià)血循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞上分子學(xué)變化(或血循環(huán)內(nèi)固定的靶分子)的目的。同時(shí)，與臨床其它無創(chuàng)影像技術(shù)比較，超聲影像具有無輻射及價(jià)格低廉等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，因此超聲分子影像技術(shù)是評(píng)價(jià)血循環(huán)內(nèi)固定的靶分子變化的理想手段，具有廣泛的應(yīng)用前景，而且其與超聲發(fā)射相結(jié)合在治療方面也有良好的應(yīng)用前景。
毫無疑問，要實(shí)現(xiàn)靶向超聲分子成像必須要有一定數(shù)量的特異靶向性超聲微泡與組織細(xì)胞靶分子有效結(jié)合。然而，按目前國(guó)內(nèi)外專利公開的制備方法、組分和工藝(例如a、國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/US00/01277/公開號(hào)W000/42988 ；b、國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/ US2003/021712/ 公開號(hào) W02004/006964A1 ；C、國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)?PCT/US98/10745/ 公開號(hào) W098/53857 ；d、國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2008/004358/公開號(hào) W02008/150326 ；e、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?3114567. 1/公開號(hào)CN1438037A ；f、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00610105195. 1/公開號(hào) CN 1985996A ；g、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2133720. 9/公開號(hào)CN 1404878A ；h、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2008100069831. 9/ 公開號(hào) CN 101314049A ；i、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?200510127996. 3/ 公開號(hào) CN 1814305A。)所構(gòu)建的靶向性超聲微泡，以及文獻(xiàn)報(bào)道的靶向性超聲微泡僅能與血流速度慢、切應(yīng)力小(< ldyne/cm2)的微循環(huán)(通常是微靜脈)上的靶向分子有效結(jié)合，難以與血流速度快、切應(yīng)力大(> ldyne/cm2)的動(dòng)脈系統(tǒng)(尤其是大中動(dòng)脈)上的靶向分子有效結(jié)合，難以實(shí)現(xiàn)動(dòng)脈部位的超聲分子成像。
其主要原因是①在血管中，靶向超聲微泡與紅細(xì)胞一樣具有趨向管腔中軸分布的特性，即“軸流現(xiàn)象”，尤其是在血流速度快的動(dòng)脈系統(tǒng)。靶向超聲微泡的軸向分布趨勢(shì)使得其與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)大大降低，從而阻礙和減少了靶向超聲微泡與血管內(nèi)皮上靶分子的結(jié)合；②動(dòng)脈系統(tǒng)(尤其是大中動(dòng)脈)的血流速度快、切應(yīng)力大，使得靶向微泡與靶分子結(jié)合的時(shí)間短，靶向微泡與靶分子尚未形成牢固結(jié)合前就被沖刷走。
鑒于上述原因，要實(shí)現(xiàn)動(dòng)脈系統(tǒng)的超聲分子成像的策略應(yīng)該是①使靶向超聲微泡與血管內(nèi)皮上的靶分子有足夠的接觸時(shí)間，使靶向微泡與靶分子之間形成牢固的結(jié)合， 抵抗高血流剪切應(yīng)力的沖刷；②使靶向超聲微泡向管壁趨附，增加其與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)。為此，近年來人們進(jìn)行了不懈的努力獲得了一些成功，例如最近Weller等巧妙的提出了“雙配體”連接技術(shù)，同時(shí)將抗小鼠VCAM-I或抗人ICAM-I單抗和P-SLex連接在同一微泡上。平行板流動(dòng)腔實(shí)驗(yàn)顯示，通過快速結(jié)合配體一P-SLex的介導(dǎo)，這種攜帶雙配體的靶向性微泡在高速流動(dòng)的狀態(tài)下，可以與包被人內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-I抗原的平行板形成穩(wěn)定結(jié)合，然而用其在活體動(dòng)物中進(jìn)行大中動(dòng)脈內(nèi)病變的超聲分子成像，成像效果尚不理想。另外，從理論上說攜帶“雙配體”的靶向超聲微泡沒有改變超聲微泡的軸向分布趨勢(shì)， 沒有增加靶向超聲微泡與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)，因此，該技術(shù)也存在明顯不足。
磁性靶向?qū)Ш郊夹g(shù)已廣泛用于藥物靶向釋放及腫瘤治療。既往研究顯示在足夠強(qiáng)的磁場(chǎng)和磁場(chǎng)梯度下，通過磁性靶向載體能將使藥物在所預(yù)定的部位聚集，并有較多相關(guān)的專利公開，例如a、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00610081252. 7/公開號(hào)CN 101077417A ;b、中國(guó)專禾IJ 申請(qǐng)?zhí)?3150818. 9/公開號(hào)CN 1522763A ；C、中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00610104757. 0/ 公開號(hào) CN 101164621A。
是否能將磁性靶向?qū)Ш降睦砟钜氚邢虺曃⑴莸闹苽渲?，進(jìn)而改善動(dòng)脈系統(tǒng)的靶向超聲分子成像？從理論上說是可行的，第一，攜帶磁粒和配體的靶向性超聲微泡在磁場(chǎng)力的作用下，通過磁性導(dǎo)航可以改變靶向性超聲微泡在大中動(dòng)脈中的軸向分布特征，弓丨導(dǎo)靶向性超聲微泡向成像目標(biāo)(動(dòng)脈)的管壁貼近，增加靶向性超聲微泡與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)，進(jìn)而有助于實(shí)現(xiàn)動(dòng)脈部位的靶向超聲分子成像；第二，山于增加了靶向性超聲微泡與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)，故而可以減少靶向性超聲微泡應(yīng)用劑量。 在這樣的背景下，經(jīng)過不懈探索，我們發(fā)明和成功研制出了一種具有磁性的新型分子靶向超聲造影劑，并包括其組分和制備方法，應(yīng)用這種新型分子靶向超聲造影劑可實(shí)現(xiàn)動(dòng)脈和靜脈系統(tǒng)的超聲分子成像，并且其與超聲發(fā)射相結(jié)合在治療方面也有良好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、微泡粒徑適宜、靶向顯影效果佳、可用于評(píng)價(jià)動(dòng)脈和靜脈系統(tǒng)血管內(nèi)皮分子變化的分子靶向超聲造影劑及合理的制備方法。
本發(fā)明的磁性氣乳劑型分子靶向超聲造影劑，為平均直徑1 4微米的包裹氣體的脂質(zhì)體磁性微球混懸液，由含脂質(zhì)體的成膜材料包裹生物相容的水不溶性氣體構(gòu)成，微球的脂質(zhì)層內(nèi)或表面連接有磁響應(yīng)材料，且微球表面裝配有特異性的配體(單克隆抗體、 多肽或多糖等)，溶劑為水介質(zhì)(蒸餾水)。
上述磁響應(yīng)材料，包括造影劑微球的脂質(zhì)層中含有磁響應(yīng)材料(包括磁珠或脂質(zhì)體磁珠等)和/或造影劑微球的脂質(zhì)層的表面連接有磁響應(yīng)材料(包括聚乙二醇聚合磷脂磁珠或親和素磁珠)的情況。最好是選用磷脂磁珠或親和素磁珠，如此微球的磁性穩(wěn)定和易于控制，磷脂磁珠含量以0. 004 0. 2重量％為最佳，或親和素磁珠含量以0. 004 0. 1重量％為最佳。
上述特異性的配體，包括單克隆抗體、多肽或多糖等。通常采用單克隆抗體和多肽，因它們的特異性好和靶向結(jié)合效能高。生物素化的單克隆抗體含量以0. 002 0. 1重量％為最佳，多肽(多肽修飾的PEG聚合磷脂)含量以0. 01 0. 4重量％為最佳。
上述同時(shí)攜帶磁粒和配體的靶向性超聲微泡在磁場(chǎng)力的作用下，通過磁性導(dǎo)航可以改變靶向性超聲微泡在大中動(dòng)脈中的軸向分布特征，引導(dǎo)靶向性超聲微泡向成像目標(biāo)(動(dòng)脈)的管壁貼近，增加靶向性超聲微泡與血管內(nèi)皮上的靶分子接觸的機(jī)會(huì)，進(jìn)而有助于實(shí)現(xiàn)動(dòng)脈部位的靶向超聲分子成像。
上述溶劑為蒸餾水。
本發(fā)明的磁性氣乳劑型分子靶向超聲造影劑，該超聲造影劑球壁材料還包括磷月旨、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇聚合磷脂、生物素化的PEG聚合磷脂或多肽修飾的PEG聚合磷月旨、泊洛沙姆。
上述磷脂選自卵磷脂，大豆磷脂，大豆卵磷脂，磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油，上述磷脂為人體天然細(xì)胞膜成分，無毒，無免疫原性。其中，最好是選用卵磷脂，原料易得，成本低，含量以0. 02 0. 5重量％為最佳。
上述聚乙二醇聚合磷脂包括聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)，聚乙二醇-磷脂酰膽堿(PEG-PC)，最好是選用PEG2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。聚乙二醇(PEG)聚合磷脂含量以0. 001 0. 04重量％為最佳。
上述聚乙二醇(PEG)含量為0. 05 2. 0重量％。PEG的加入，使微球表面被柔順而親水的聚乙二醇長(zhǎng)鏈覆蓋，能有效地阻止血液中許多不同組分特別是調(diào)理素對(duì)微球的吸附，從而降低了單核吞噬細(xì)胞對(duì)微球的親和力，延長(zhǎng)了微球在血液循環(huán)中的駐留時(shí)間。
上述生物素化的PEG聚合磷脂，最好是選用PEG4000- 二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-生物素，其含量以0. 01 0. 2重量％為最佳。生物素化的PEG聚合磷脂的加入，是為了與鏈親和素結(jié)合，進(jìn)而通過親和素橋連方式，將生物素化單克隆抗體連接到微泡表面。
上述多肽修飾的PEG聚合磷脂，其含量以0. 01 0. 4重量％為最佳。
上述泊洛沙姆含量以0. 004 0. 2重量％為最佳。泊洛沙姆的加入，有利于氣乳劑微球的形成和穩(wěn)定。
本發(fā)明的磁性氣乳劑型分子靶向超聲造影劑，被包裹在微球中的氣體在造影劑中發(fā)揮超聲反射層的功效。所述氣體為生物相容的水不溶性氣體，選自全氟甲烷、全氟乙烷、 全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷和六氟化硫，優(yōu)選全氟丙烷氣體。全氟丙烷沸點(diǎn)低，在常溫下為氣體，不溶于水，不易從微球中逸出，可保持微球在水性介質(zhì)中的完整性。全氟丙烷無毒，為生物惰性氣體，可安全應(yīng)用于人體。
1、本發(fā)明的上述超聲造影劑的制備方法之一如下
(1)將磷脂、聚乙二醇(PEG)、PEG聚合磷脂、多肽修飾的PEG聚合磷脂、磷脂磁珠、 泊洛沙姆加入水介質(zhì)(蒸餾水)中以50 80°C充分溶解和混勻；
(2)將將氟碳?xì)怏w通入步驟(1)所述溶液；然后，
a)應(yīng)用超聲波處理器超聲振蕩處理溶液和氣體的混合物使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；
或b)應(yīng)用剪切設(shè)備處理溶液和氣體的混合物，通過機(jī)械剪切力作用使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；
(3)通過以上步驟(1)和O)，可獲得包裹氣體的微球混懸液；
(4)將以上步驟( 所獲微球混懸液靜置24h后，棄掉下清液并加入等量蒸餾水洗滌、純化3次，即可獲得含多肽的磁性靶向超聲造影劑混懸液。
2、本發(fā)明的上述超聲造影劑的制備方法之二如下
(1)將磷脂、聚乙二醇(PEG)、PEG聚合磷脂、生物素化的PEG聚合磷脂、磷脂磁珠、泊洛沙姆加入水介質(zhì)(蒸餾水)中以50 80°C充分溶解和混勻；
(2)將將氟碳?xì)怏w通入步驟(1)所述溶液；然后，
a)應(yīng)用超聲波處理器超聲振蕩處理溶液和氣體的混合物使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；
或b)應(yīng)用剪切設(shè)備處理溶液和氣體的混合物，通過機(jī)械剪切力作用使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；
(3)通過以上步驟(1)和O)，可獲得包裹氣體的微球混懸液；
(4)將以上步驟( 所獲微球混懸液靜置24h后，棄掉下清液并加入等量蒸餾水洗滌純化3次制備出生物素脂質(zhì)微泡，加入一定比例的鏈親和素，冰上孵育30min，按以上方法洗滌純化3次后，加入一定比例的生物素化單克隆抗體，冰上孵育30min后按以上方法洗滌純化3次即可獲得含單克隆抗體的磁性靶向超聲造影劑混懸液。
本發(fā)明所述制備方法，包括配體與超聲造影劑微球連接的兩種方法配體可通過共價(jià)連接和非共價(jià)連接(親和素橋連)的方法與造影劑微球表面連接。多肽類配體采用共價(jià)連接方法與微球連接為宜；而單克隆抗體類配體采用非共價(jià)連接方法與微球連接為宜。 我們?cè)谖⑴莺团潴w之間插入一種分子橋(如PEG)，有利于保證配體的完整性和最大程度的提高靶向微泡的效能。非共價(jià)連接(親和素橋連)的方法可以在生理?xiàng)l件下完成，同時(shí)親和素具有四個(gè)獨(dú)立的生物素結(jié)合位點(diǎn)，可極大的提高配體的結(jié)合效率，但是親和素橋連的方法具有抗原性(親和素是一個(gè)外源性蛋白為潛在性抗原)，因此該方法只適用于早期研究測(cè)試階段和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的靶向性超聲微泡的制備。共價(jià)連接的方法步驟簡(jiǎn)單、沒有抗原性的弊端，是構(gòu)建符合臨床需求的系列靶向性超聲微泡的適宜方法。
本發(fā)明采用超聲振蕩和機(jī)械剪切方法制備造影劑微球設(shè)備投入少，操作簡(jiǎn)易。其中應(yīng)用高速液體剪切機(jī)、勻漿器或膠體磨的機(jī)械剪切作用來制備造影劑微球?yàn)閮?yōu)選方法， 與超聲法比較，更容易進(jìn)行工藝放大用于擴(kuò)大生產(chǎn)，設(shè)備的剪切分散轉(zhuǎn)速為該方法主要參數(shù)，可根據(jù)需要來調(diào)節(jié)該參數(shù)，以制備出濃度、粒徑適宜的造影劑產(chǎn)品。


圖1、本發(fā)明造影劑在普通光鏡所見。磁性生物素化微泡(A)、加入鏈親和素后(B) 和加入單克隆抗體后(C)，均顯示微泡大小均一(圖中標(biāo)尺為ΙΟμπι)。(詳見實(shí)例2說明)
圖2、熒光顯微鏡體外觀察本發(fā)明造影劑的磁響應(yīng)性良好。圖2Α為裝置示意圖； 圖2Β在磁場(chǎng)作用下ΡΕ50管的熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，而圖2C在沒有磁場(chǎng)作用下ΡΕ50管的熒光強(qiáng)度極弱或無。(詳見實(shí)例4說明)。
圖3、腹主動(dòng)脈模型上觀察本發(fā)明造影劑的磁響應(yīng)性。無磁場(chǎng)作用下，磁性靶向 VCAM-I微泡注射后即刻㈧和4分鐘后⑶；磁場(chǎng)作用下，磁性靶向VCAM-I微泡注射后即刻(C)和10分鐘后(D)。(詳見實(shí)例5說明)。
圖4、腹主動(dòng)脈斑塊靶向超聲成像的彩色編碼圖。磁性靶向VCAM-I微泡㈧，非磁性靶向VCAM-I微泡⑶，非磁性同型對(duì)照微泡(C)。(詳見實(shí)例6說明)。
下面結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明。
具體實(shí)施方式
[0044]實(shí)施例1 剪切速率對(duì)微球產(chǎn)率和粒徑的影響
按0. 1重量％稱取磷脂，1重量％稱取聚乙二醇(PEG)，0.01重量％ PEG聚合磷脂， 0. 045重量％稱取生物素化的PEG聚合磷脂，0. 01重量％稱取磷脂磁珠，0. 03重量％稱取泊洛沙姆的混合物，加至水介質(zhì)(蒸餾水)中于50 80°C條件下充分混勻，通入全氟丙烷氣體，將高速液體剪切機(jī)分散刀頭伸入液面下，以不同轉(zhuǎn)速對(duì)溶液進(jìn)行高速剪切分散，制得微球的濃度和粒徑數(shù)據(jù)見表1。
表1剪切速率對(duì)微球濃度及粒徑的影響
權(quán)利要求
1.一種具有磁性的分子靶向超聲造影劑，為平均直徑1 4微米的包裹氣體的脂質(zhì)體微球混懸液，由含脂質(zhì)體的成膜材料包裹生物相容的水不溶性氣體構(gòu)成，微球的脂質(zhì)層內(nèi)或表面連接有磁響應(yīng)材料，且微球表面裝配有特異性的單克隆抗體、多肽或多糖；其特征在于成膜材料包括磷脂、聚乙二醇、PEG聚合磷脂、生物素化的PEG聚合磷脂或多肽修飾的 PEG聚合磷脂、泊洛沙姆；微球球壁包含磁響應(yīng)材料、單克隆抗體和/或親和素橋連材料；被包裹在微球中的氣體為生物相容的水不溶性氣體，溶劑為蒸餾水；所述水不溶性氣體選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷和六氟化硫；所述磷脂選自卵磷脂，大豆磷脂，大豆卵磷脂，磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油；所述氣體25°C時(shí)在水中的溶解度為每ml水中少于0. Olml氣體；其中磷脂含量為0. 02 0. 5重量％，聚乙二醇含量為0. 05 2. 0重量％，PEG聚合磷脂含量為0. 001 0. 04重量％，生物素化的PEG聚合磷脂含量為0. 01 0. 2重量％或多肽修飾的PEG聚合磷脂含量為0. 01 0. 4重量％，泊洛沙姆含量為0. 004 0. 2重量％，磁響應(yīng)材料含量為 0. 004 0. 2重量％，單克隆抗體含量為0. 002 0. 1重量％，親和素含量為0. 001 0. 05 重量％。
2.如權(quán)利要求
1所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述PEG聚合磷脂選自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺.。
3.如權(quán)利要求
1所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的生物素化的PEG聚合磷脂為PEG4000- 二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-生物素。
4.如權(quán)利要求
1所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的PEG聚合磷脂為 PEG2000- 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或PEG2000- 二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。
5.如權(quán)利要求
1所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的磁響應(yīng)材料為磁珠。
6.如權(quán)利要求
5所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的磁響應(yīng)材料為磷脂磁珠。
7.如權(quán)利要求
5所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的磁響應(yīng)材料為親和素磁珠。
8.如權(quán)利要求
5所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的磁響應(yīng)材料為PEG聚合磷脂磁珠。
9.如權(quán)利要求
6所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的磷脂磁珠為二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-磁珠，其含量為0. 004 0. 2重量％。
10.如權(quán)利要求
1所述的磁性的分子靶向超聲造影劑，其中所述的氣體為全氟丙烷。
11.一種制備磁性靶向超聲造影劑的方法，其特征步驟包括(1)將0.02 0. 5重量％的磷脂、0. 05 2. 0重量％的聚乙二醇、0. 001 0. 04重量％ 的PEG聚合磷脂、多肽修飾的PEG聚合磷脂、0. 004 0. 2重量％的磷脂磁珠、0. 004 0. 2 重量％的泊洛沙姆加入蒸餾水中以50 80°C充分溶解和混勻；(2)將氟碳?xì)怏w通入步驟(1)所述溶液；然后，a)應(yīng)用超聲波處理器超聲振蕩處理溶液和氣體的混合物使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；或b)應(yīng)用剪切設(shè)備處理溶液和氣體的混合物，通過機(jī)械剪切力作用使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；(3)通過以上步驟(1)和O)，可獲得包裹氣體的微球混懸液；(4)將以上步驟C3)所獲微球混懸液靜置24h后，棄掉下清液并加入等量蒸餾水洗滌、 純化3次，即可獲得含多肽的磁性靶向超聲造影劑混懸液，所述氟碳?xì)怏w選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷和六氟化硫；所述磷脂選自卵磷脂，大豆磷脂，大豆卵磷脂，磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
12.—種制備磁性靶向超聲造影劑的方法，其步驟包括(1)將0.02 0. 5重量％的磷脂、0. 05 2. 0重量％的聚乙二醇、0. 001 0. 04重量％ 的PEG聚合磷脂、0. 01-0. 2重量％生物素化的PEG聚合磷脂、0. 004 0. 2重量％的磷脂磁珠、0. 004 0. 2重量％的泊洛沙姆加入蒸餾水中以50 80°C充分溶解和混勻；(2)將氟碳?xì)怏w通入步驟(1)所述溶液；然后，a)應(yīng)用超聲波處理器超聲振蕩處理溶液和氣體的混合物使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；或b)應(yīng)用剪切設(shè)備處理溶液和氣體的混合物，通過機(jī)械剪切力作用使混合物乳化，形成粒徑合乎要求的包裹氣體的微球混懸液；(3)通過以上步驟(1)和O)，可獲得包裹氣體的微球混懸液；(4)將以上步驟C3)所獲微球混懸液靜置Mh后，棄掉下清液并加入等量蒸餾水洗滌去掉未結(jié)合的脂質(zhì)、純化3次制備出生物素脂質(zhì)微泡，加入0. 001 0. 05重量％的鏈親和素， 冰上孵育30min，按以上方法洗滌去掉未結(jié)合的鏈親和素后，加入0. 002 0. 1重量％的生物素化單克隆抗體，冰上孵育30min后按以上方法洗滌去掉未結(jié)合在微泡上的生物素化單克隆抗體，即可獲得含單克隆抗體的磁性靶向超聲造影劑混懸液，所述氟碳?xì)怏w選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷和六氟化硫；所述磷脂選自卵磷脂，大豆磷脂，大豆卵磷脂，磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
13.如權(quán)利要求
11或12的制備造影劑方法，其中所述超聲波處理器為聲振頻率10 50KHz的探頭型超聲波儀。
14.如權(quán)利要求
11或12的制備造影劑方法，其中所述剪切設(shè)備為液體高速剪切機(jī)、勻漿器或膠體磨。
專利摘要
本發(fā)明涉及的是一種具有磁性的新型分子靶向超聲造影劑，即平均直徑為1～4微米的包裹氣體的磁性脂質(zhì)體微球混懸液及其制備方法。具有磁性的分子靶向超聲造影劑微球，包括微球的脂質(zhì)層中和/或脂質(zhì)層的表面含(或連接)有磁響應(yīng)材料的情況。本發(fā)明的造影劑微球球壁材料包含磷脂、聚乙二醇(PEG)、PEG聚合磷脂、生物素化的和/或多肽修飾的PEG聚合磷脂、泊洛沙姆、對(duì)靶分子有特異親和力的配體(單克隆抗體或多肽等)、磁響應(yīng)材料和/或親和素橋連材料，被包裹氣體為氟碳類氣體，溶劑為水介質(zhì)(蒸餾水)。本發(fā)明還記載了磁性分子靶向超聲造影劑微球的制備方法，包括特異性配體以共價(jià)和親和素橋連方式與微球連接的情況。本發(fā)明造影劑靶向顯影效果良好，其可用于評(píng)價(jià)器官組織動(dòng)脈和靜脈系統(tǒng)的血管內(nèi)皮分子變化，并且其在治療方面也有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K49/22GKCN101780284 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200910036680
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2009年1月15日
發(fā)明者侯連兵, 劉伊麗, 吳爵非, 賓建平, 廖旺軍, 廖禹林, 李貴平, 楊莉, 查道剛, 王月剛, 蔡晶晶, 高方 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (4),