專利名稱:甾體皂苷藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種留體皂苷藥物組合物,具體地說,是主要以黃山藥、穿龍薯蕷為原 料提取的留體皂苷藥物組合物。
背景技術(shù):
留體皂苷(steroidal saponins)是植物中一類重要的生物活性物質(zhì),留體皂苷的 研究在天然產(chǎn)物化學(xué)中一直占有重要的地位。留體皂苷的苷元是含有27個碳原子的螺甾 烷醇或呋留烷醇,大多數(shù)存在于單葉子植物的百合科,石蒜科和薯蕷科植物中。
黃山藥又名姜黃、姜黃草、老虎姜、猴節(jié)蓮,為薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥 Dioscoreapanthaica Prain et Burkill的根莖,分布于西南及湖北、湖南等地;能理氣止 痛,解毒消腫,主治胃氣痛,吐瀉腹痛,跌打損傷,瘡瘍腫毒,毒蛇咬傷等癥[國家中醫(yī)藥管 理局《中華本草編委會》中華本草(1999年上??茖W(xué)技術(shù)出版社)第8卷,P8. 247]。穿山龍 為薯蕷科薯蕷屬植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的根莖,又名穿山骨、穿地龍、 狗山藥、山常山、穿山骨、火藤根、姜黃、土山薯、竹根薯、鐵根薯、雄姜、黃鞭、野山藥、地龍 骨、金剛骨、串山龍、過山龍,分布于東北、華北、西北及河南、湖北、山東、江蘇、安徽、浙江、 江西、四川等地;能祛風(fēng)除濕,活血通絡(luò),止咳;主治風(fēng)濕痹痛,肢體麻木,胸痹心痛,慢性氣 管炎,跌打損傷,瘧疾,癰腫等癥[國家中醫(yī)藥管理局《中華本草編委會》中華本草(1999年 上??茖W(xué)技術(shù)出版社)第8卷,P238]?!吨腥A人民共和國藥典》1977年版一部P435-436將 穿山龍作為中藥材收入其中。
目前,對黃山藥、穿山龍的研究甚少。李伯剛等人從黃山藥中分離并鑒定得到2 種水難溶留體皂苷薯蕷皂苷(dioscin)和纖細(xì)皂苷(gracillin)[李伯剛等,植物學(xué)報, 1986,28(4) 409-411];董梅等人從黃山藥中分離得到3種留體皂苷[董梅等,藥學(xué)學(xué)報 2001,36(1) :42-45],其化學(xué)結(jié)構(gòu)分別鑒定為,偽原薯蕷皂苷(留體皂苷1),DI-9(留體皂 苷6);方一葦?shù)热藦拇┥烬堉蟹蛛x得到2種水難溶甾體皂苷薯蕷皂苷(dioscin)和纖細(xì) 皂苷(gracillin),兩種均為川龍冠心寧的藥用成分[方一葦?shù)?,藥學(xué)學(xué)報1982,17(5) 388-391];都述虎等人從穿山龍中分離得到從穿龍薯蕷總皂苷中分得2個留體皂苷(1個水 難溶性皂苷和1個水溶性皂苷),其化學(xué)結(jié)構(gòu)分別鑒定為纖細(xì)皂苷等[都述虎等,藥學(xué)學(xué)報 2002,37(4) :267-270]。另一項國內(nèi)研究公開了薯蕷總皂苷提取物中含有的8種留體皂苷 的結(jié)構(gòu)式[李伯剛,周正質(zhì).中藥新藥與臨床.1994,13 (2) :75-76],治療冠心病的有效成 分為該八種留體皂苷,其中包括薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷、原纖細(xì)皂苷、纖細(xì)皂苷等。中國專利 (申請?zhí)朇N02128119.X)螺甾烷醇類甾體皂苷在制備治療心血管疾病藥物中的應(yīng)用,公開 了六種螺甾烷醇類甾體皂苷的新用途。中國專利(申請?zhí)朇N02112159. 1)具有治療心肌缺 血,心絞痛和心肌梗死功能的藥物組合物,公開了含有薯蕷皂苷元的藥物組合物的新用途。 到目前為止僅從黃山藥、穿山龍中分離鑒定了偽原薯蕷皂苷(I)、薯蕷皂苷(III)。
雖然上述資料公開了黃山藥、穿山龍含有多種對治療心血管疾病有效的甾體皂 苷,但僅僅是對兩種植物中的有效成分的化學(xué)研究,由于有些成分含量極低,在制藥上并無
5太大價值。眾所周知,從植物中獲得純的有用價值的化合物極為困難,成本很高,同時也為 了避免難以預(yù)料的副作用,一般不使用植物中的有效純化合物,而使用藥用植物提取物直 接作用藥用原料,成本低而且應(yīng)用簡便。但植物提取物的一個缺陷是,由于植物采收季節(jié)和 產(chǎn)地不同都會造成有效成分含量的波動,同時,如果主要有效成分及其含量不清楚,都會給 藥品的質(zhì)量控制造成很大困難,因此,為了保持植物藥的質(zhì)量穩(wěn)定,清楚知道植物中各基本 藥效成分及其含量是很重要的,目前由于技術(shù)手段所限和留體皂苷的種類復(fù)雜,至今未見 確切的主要有效成分、含量及其純度的報道。
傳統(tǒng)的制備留體總皂苷的方法用甲醇或乙醇熱提,所得的醇溶液濃縮,除去甲醇 或乙醇,再用氯仿等脫脂,然后用含水的正丁醇提取,所得的正丁醇溶液濃縮即得留體總皂 苷。以上工藝存在如下缺點(1)收率低,成本高,(2)生產(chǎn)周期長,(3)需要大量的有機溶 劑,生產(chǎn)上存在易燃易爆有毒的危險,同時帶來嚴(yán)重的環(huán)境污染,(4)能耗大,由于正丁醇沸 點高,造成濃縮干燥困難,(5)產(chǎn)品色澤差;且不適合工業(yè)化生產(chǎn)。按傳統(tǒng)的工藝制備甾體 總皂苷,各留體皂苷含量不穩(wěn)定,導(dǎo)致藥效不穩(wěn)定。
發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述缺陷,本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了 一種留體皂苷藥物組合物,本發(fā) 明的另一技術(shù)方案是提供了該留體皂苷藥物組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種甾體皂苷藥物組合物,它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇 甾體皂苷,通式C螺留烷醇類留體皂苷或皂苷元,其重量配比為呋留烷醇留體皂苷5-25 份、螺留烷醇類留體皂苷1-10份,
通式B
其中,通式A中,呋甾烷醇甾體皂苷為
通式 B 中
通式C中
進一步地,含有下列化合物通式A中,當(dāng)
時,為偽原薯蕷皂苷
時,為偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II);通式B中,當(dāng)
時,
為原薯蕷皂苷
時,為原纖細(xì)皂苷(V);通式C中,項10<@時
為薯蕷皂苷(III),
其中,偽原薯蕷皂苷(I)和/或原薯蕷皂苷(IV) 5 22份偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II) 和/或原纖細(xì)皂苷(V) 1 5份、薯蕷皂苷(III) 1 8份。
更進一步地,含有偽原薯蕷皂苷(1)5 20份、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(11)1 3份、 薯蕷皂苷(111)1 5份。
更進一步地,含有偽原薯蕷皂苷(1)12 18份、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(11)1份、薯蕷 皂苷(III) 1.2 2. 5份。
所述的甾體皂苷來源于薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥Dioscorea panthaica Prain etBurkill>^^W!i Dioscorea nipponica Makino 白勺
其中,所述留體總皂苷提取物中,留體總皂苷含量大于80% (w/w),留體總皂苷以 薯蕷皂苷計,其含量不少于65% (w/w) 0
其中,所述的提取物中含有偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II)、薯蕷皂苷 (III)三種甾體皂苷的含量之和不少于甾體總皂苷的50% w/w。[0024]所述的提取物具有如圖1所示的HPLC指紋圖譜,其中,指紋圖譜的特征峰分別為 偽原薯蕷皂苷(I)保留時間28. 27min ;偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II)保留時間29. 5min ;薯蕷 皂苷(III)保留時間57. lOmin。
色譜條件色譜柱:Alltima C184. 6 X 250_,5um,梯度洗脫,蒸發(fā)光散射檢測器檢 測,漂移管溫度100°c,氣體流速2. OL/min。
所述的提取物是由如下方法制備
a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料,經(jīng)切片或粉 碎后,加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意 比例組成的混合溶液為溶媒提取,溶媒量為原料的15 25倍;
b、將a步驟制備的提取液冷卻過濾、濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液,用水洗至 流出液至無色,棄去水洗液;
c、將b步驟的水洗后的吸附樹脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50 % 90 %乙醇、30 80%含水甲醇或60 95%含水丙酮中的一種或多種洗脫,收集洗脫液,濃縮;
d、將c步驟的濃縮液加60 95%醇醇沉,過濾,收集濾液,濃縮,干燥,即得。
其中,所述的提取物的制備方法步驟b中當(dāng)提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它 低脂肪醇時,先減壓濃縮,再冷卻過濾。
所采用的溶劑提取法中,可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低級脂肪醇中的 一種溶媒,也可以選用其中的任意兩種或者多種溶劑以任意比例組成的混合溶媒,在室溫 下浸潤提取或者用超聲波振蕩提取,或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取。提取次數(shù)可 以是一次,也可以是多次。
所采用的大孔樹脂吸附法中,樹脂可選用HPD1(1(1、HPD30> LD140, D101以及其他類型的 大孔吸附樹脂,或以上不同型號的大孔吸附樹脂按一定比例混合,洗脫溶媒用水、甲醇、乙 醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種,洗脫時可以濃度洗脫,也可以 梯度洗脫。
本發(fā)明藥物組合物是由所述的留體皂苷或提取物為活性成分,加上藥學(xué)上可接受 的輔料或輔料性成分制備而成的制劑。
其中,所述的制劑是片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、口服液、滴丸、注射劑。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法,它包括如下步驟
稱取含有通式A和/或通式B的呋留烷醇留體皂苷,通式C螺留醇類留體皂苷,重 量配比為呋留烷醇留體皂苷5 25份、螺留烷醇類留體皂苷1 10份;混合,加入藥學(xué)上 可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
本發(fā)明提供的藥物組合物還可以由以下方法制備
a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料,經(jīng)切片或粉 碎后,加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意 比例組成的混合溶液為溶媒提取,溶媒量為原料的15 25倍;
b、將a步驟制備的提取液冷卻過濾、濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液,用水洗至 流出液至無色,棄去水洗液;
c、將b步驟的水洗后的吸附樹脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50 % 90 %乙醇、30 80%含水甲醇或60 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一種或多種洗脫,收集洗脫液,濃縮;
d、將c步驟的濃縮液加60 95%醇醇沉,過濾,收集濾液;
e、取d步驟所述的濾液,濃縮干燥,加入藥物上可接受的輔料或輔助性成分制備 成藥學(xué)上常用的制劑。
e、取d步驟所述的濾液,濃縮干燥,加入藥物上可接受的輔料或輔助性成分制備 成藥學(xué)上常用的制劑。
其中,步驟b中,當(dāng)提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇時,先減壓濃縮, 再冷卻過濾。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療和預(yù)防心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。其 中,所述藥物是治療冠心病、心絞痛、心肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性腦血管病的藥 物。
通過對本發(fā)明藥物組合物中三個留體皂苷成分的測定,藥效穩(wěn)定性高,療效可靠, 同時提供三個留體皂苷成分的鑒定方法,可控性強,且本發(fā)明藥物日服劑量300 600mg, 服用劑量少,為臨床提供了 一種新的選擇。
顯然,根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容,按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段,在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下,還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
,對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
圖1原薯蕷皂苷標(biāo)樣、化合物1-8混合的HPLC分析譜圖,圖中1-8號峰分別對應(yīng) 化合物1-8 ;
圖2實施例1的組合物的HPLC分析譜圖,圖中1號峰為化合物1,6號峰對化合物 2,7號峰對應(yīng)化合物9,8號峰對應(yīng)化合物3,11號峰對應(yīng)化合物5 ;
圖3實施例2的組合物的HPLC分析譜圖,圖中1號峰為化合物1,6號峰對化合物 2,7號峰對應(yīng)化合物9,8號峰對應(yīng)化合物3,10號峰對應(yīng)化合物5 ;
圖4實施例3的組合物的HPLC分析譜圖,圖中1號峰為化合物1,6號峰對化合物 2,7號峰對應(yīng)化合物9,8號峰對應(yīng)化合物3,10號峰對應(yīng)化合物5 ; 具體實施方式
實施例1本發(fā)明藥物組合物的制備
中藥穿山龍的干燥根莖100kg,粉碎,用95%乙醇(1200LX3)回流,第一次3小 時,第二、三次各2小時,濾過,合并提取液;回收乙醇,加水至2g/ml,冷藏24小時,離心;上 清液過HPD■吸附樹脂柱,先用水洗至流出液無色后,用70%乙醇洗脫;接收70%乙醇洗脫 部分,濃縮,將濃縮液加75%乙醇醇沉,過濾,收集濾液,濃縮,干燥,再經(jīng)真空干燥即得穿山 龍總甾體皂苷,收率為2. 32%。甾體總皂苷含量為85% (w/w) 0
實施例2本發(fā)明藥物組合物的制備
中藥黃山藥的干燥根莖100kg,切片,用12倍(V/W)水煎煮4次,第一次3小時, 第二、三、四次各2小時,濾過,合并提取液;放至室溫,離心;上清液過大孔吸附樹脂柱 [HPD100/LD100 = 7 3(W/W)],先用水洗至流出液無色后,再用10%乙醇洗脫,最后用75%乙醇洗脫;接收75 %乙醇洗脫部分,濃縮,將濃縮液加80 %乙醇醇沉,過濾,收集濾液,濃縮, 干燥回收乙醇至無醇味,再經(jīng)噴霧干燥即得黃山藥總留體皂苷,收率為1. 15%。留體總皂苷 含量為90% (w/w)。
實施例3本發(fā)明藥物組合物的制備
新鮮穿山龍的干燥根莖400kg,切片,用8倍(V/W)水煎煮3次,第一次3小時,第 二、三次各2小時,濾過,合并提取液;放至室溫,離心;上清液過大孔吸附樹脂柱[HPD1Q(i/ LD101 = 6 4 (W/W)],先用水充分正反洗后,再用10%乙醇洗脫,最后用80%乙醇洗脫;接 收80 %乙醇洗脫部分,濃縮,將濃縮液加90%乙醇醇沉,過濾,收集濾液,濃縮,回收乙醇至 無醇味,再經(jīng)噴霧干燥即得穿山龍總留體皂苷,收率為0.56%。留體總皂苷為95% (w/w) 0
實施例4本發(fā)明藥物組合物中化合物的制備及鑒定
取實施例1粗提物1278g,分散于11100ml水中,依次用乙酸乙酯(7500ml X 4)、正 丁醇(7500ml X 5)進行萃取,得乙酸乙酯萃取物102g和正丁醇萃取物503g。取正丁醇部分 236g進行硅膠柱層析(①10. 5X52cm,2000g),氯仿-甲醇-水(9 1 0. 1)梯度洗脫, 每瓶接收500ml洗脫劑,共收集160份。Fr. 16-21析出化合物8 (140mg),F(xiàn)r. 41-45析出化 合物7(427mg),F(xiàn)r. 56-65析出化合物6 (30g) Fr. 94-104析出化合物5(8. 62g),即為本發(fā)明 的甾體皂苷(III)。Fr. 113-127合并為E(26g),進行硅膠柱層析(①6. 5X71cm,800g),氯 仿-甲醇(5 1)水飽和洗脫,E過柱Fr. 14-20合并為B(4g),過0DS純化得化合物4(1. 3g)。 Fr. 128-143合并為F(63g),進行硅膠柱層析(①7 X 52cm,850g),氯仿-甲醇(5 1)水飽 和洗脫,F(xiàn)過柱Fr. 36-60合并為A(10g),0DS純化得化合物3 (115mg),F(xiàn)過柱Fr. 61-68合 并為B(llg),0DS純化得化合物9(105mg),即為本發(fā)明的甾體皂苷(II)。F過柱Fr. 69-78 合并為C(10g),0DS純化得化合物2(2. 89g),即為本發(fā)明的甾體皂苷(I)。
柱層析用硅膠(160-200目,200-300目),TLC用GF254硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn) 品,反向硅膠0DS(Cosmosil 75C18-0PN)為日本Nacalai tesque公司產(chǎn)品,反相高效硅膠板 RP-18F254 為 Merck 產(chǎn)品。
經(jīng)MS H NMR、13C NMR、DEPT、HMQC、HMBC等現(xiàn)代波譜學(xué)方法結(jié)合理化常數(shù)鑒定了它 們的結(jié)構(gòu)如下
質(zhì)譜儀為Finnigan LCQdeca ;核磁共振儀為Bruker AM-400,TMS為內(nèi)標(biāo)。
化合物9 (偽原纖細(xì)皂苷)
化合物9的13C NMR數(shù)據(jù)分別與偽原薯蕷皂苷[3]和纖細(xì)皂苷[4]比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)化 合物9的26-C所接糖信號及苷元部分的化學(xué)位移與偽原薯蕷皂苷完全吻合,而剩余糖的信 號與纖細(xì)皂苷的糖信號完全吻合,因此初步判斷化合物9為原纖細(xì)皂苷在C2(l C22脫去1 分子水的產(chǎn)物(即偽原纖細(xì)皂苷(II)。
在HMBC譜中,1-H-glc"“ ( S 4. 83)與苷元26-C( S c 74. 7)相關(guān);l-H-rha" ( 8H 6.40),l-H-glc〃 ‘ (SH 5. 10)分別與 2-C-glc' (6C 76. 8), 3-C-glc ‘ ( S c 89. 3)相關(guān), 1-H-glc' (6h 4.95)與苷元3-C(Sc 77. 7)相關(guān),也證實了上述推測的糖的連接位置和順序。
綜上所述,化合物9的結(jié)構(gòu)鑒定為26-0- 3 -D-吡喃葡萄糖基_3 0,26- 二 醇-25 (R)化合物7 (Progenin II :3_0_[ a _L_鼠李吡喃糖(1 — 4) ]化合物6(Progenin III :3_0-[ a-L-鼠李吡喃糖(1 — 2) ]化合物5 (薯蕷皂苷dioscin)白色針狀結(jié)晶。ESI-MS m/z 891 [M+Na]+, 869 [M+H] +,577 [M-rha-rha+H] +,437 [M-rha-rha-glc+Na] +,903 [M+Cl]、867 [M_H]、 721[M-rha-Hr ;1H NMR(400MHz, C5D5N) 8 1. 74 (3H, d, J = 6. 5Hz),1. 60 (3H, d, J = 6. 2Hz) 分別顯示2個鼠李糖的甲基質(zhì)子信號,S6.37(lH,br,S),5.83(lH,br,S)顯示兩個鼠李糖 的構(gòu)型為a型,6 4. 92(lH,d,J = 6. 4Hz)顯示葡萄糖的構(gòu)型為3型,S 1. 11 (3H,d,CH3_21, J = 6. 8Hz),1. 02 (3H, s, CH「19),0. 79 (3H, s, CH3_18),0. 66 (3H, d, CH3_27,J = 4. 9Hz)分 別顯示薯蕷皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號?;衔?的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4)與文獻[1] 報道吻合。為薯蕷皂苷。
化合物4 (3 3,26- 二醇-(25R) A 5,20(22)- 二 烯-呋甾-26-0- 3 _D_ 吡喃葡萄糖 苷)白色粉末。ESI-MS m/z 907[M+Na]885[M+H]723[M-glc+H]577[M-glc-rha+H] 437 [M-glc-rha-glc+Na]+, 883 [M-H] “ ;1H NMR(400MHz, C5D5N) 8 1. 61 (3H, s, CH3_21), 0. 99 (3H, d, CH3-27, J = 6. 4Hz),0. 89 (3H, s, CH「19),0. 70 (3H, s, CH3_18)顯示甾體皂苷元 的4個甲基質(zhì)子信號。6 4. 95(lH,d,J = 7. 5Hz),4.82(lH,d,J = 6. 1Hz)表明化合物4中 的葡萄糖為0構(gòu)型,6 5. 90(lH,br,s)表明化合物4中含有一個a構(gòu)型的鼠李糖;化合物 4的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4),苷元部分與化合物7比較C-3由S 71. 2 — 78. 3說明除了 C-26位接糖外,C-3位也接糖,化合物4的13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[4]報道吻合。
化合物3 (26-0-0-D-吡喃葡萄糖 _3 0,26- 二 醇 _(25R) — A5’ 20(22)-3 -0-{[a-L-(25R)-吡喃鼠李糖(1 — 4) ]-3 _D_吡喃葡萄糖苷})白色粉末。ESI-MS m/z 907 [M+Na]885 [M+H]723 [M-glc+H]577 [M-glc-rha+H]+ ;1H NMR (600MHz, C5D5N)
118 1. 62 (3H, s, CH3-21),1. 02 (3H, d, CH「27,J = 6. 5Hz),0. 88 (3H, s, CH3_19),0. 70 (3H, s, CH3-18)顯示甾體皂苷元的4個甲基質(zhì)子信號,Sl.77(3H,d,J = 6.0Hz)顯示鼠李糖末端 甲基質(zhì)子信號;13CNMR( 150MHz,C5D5N)數(shù)據(jù)(見Table 4),苷元部分同化合物8,化合物3的 NMR數(shù)據(jù)與文獻[5]報道吻合。
化合物2(偽原薯蕷皂苷)白色粉末。ESI-MS m/z :1053[M+Na]+, 723[M-rha-glc+H] +,577[M-rha-glc-rha+H] +,415[M-rha-glc-rha-glc+H] +,1029[M-H] 883 [M-rha-H]-JHNMR(400MHz,C5D5N) 8 1. 61 (3H, s, CH3-21) , 1. 03 (3H, s, CH3_19), 0. 99(3H,d,CH3-27,J = 6. 8Hz),0. 70 (3H,s,CH3_18)顯示 4 個甲基質(zhì)子信號,8 1. 74(3H,d, J = 7. 2Hz),1.60(3H,d,J = 7. 7Hz)分別顯示2個鼠李糖的甲基質(zhì)子信號,6 6. 37(lH,br, s),5. 83 (1H, br,s)表明兩個鼠李糖的構(gòu)型是 a 型,6 4. 92 (1H, d,J = 6. 9Hz),4. 81 (1H, d,J = 7. 7Hz)表明兩個葡萄糖的構(gòu)型是0型;化合物2的13C NMR數(shù)據(jù)(見Table 4)與 文獻[5]報道吻合。
化合物1(原薯蕷皂苷)分離鑒定方法見李伯剛,周正質(zhì).中藥新藥與臨 床 1994,13(2) :75-76。
表1.化合物2-9的13C NMR數(shù)據(jù)(溶劑C5D5N)
通過上述方法,可分離并鑒定本發(fā)明藥物組合物中各化合物。
實施例5本發(fā)明藥物組合物的質(zhì)量控制
將9個已經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定的對照品混合進樣通過HPLC分析,色譜條件色譜柱 AlltimaC184. 6X250mm,5um,梯度洗脫,蒸發(fā)光散射檢測器檢測,漂移管溫度10(TC,氣體流[0094] 上述試驗證明,本發(fā)明藥物組合物中偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細(xì)皂苷(II)、薯裁 阜苷(III)均在恒定的比例中,通過直接控制三個化合物的含量,可以達到控制本發(fā)明藥
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速2. OL/min。梯度洗脫表如下
表2梯度洗脫表
色譜圖見附圖1。
將實施例1、2、3所得的組合物經(jīng)HPLC分析,色譜圖分別見附圖1、2、3,用外標(biāo)兩點 法對數(shù)方程計算化合物I、II、III的重量百分含量,見表3。
表3化合物⑴、(II)、(III)的對甾體總皂苷的重量百分比
通過對本發(fā)明組合物20批次的跟蹤測試,表明三個化合物在組合物中含量相對 穩(wěn)定,故將三個化合物作為質(zhì)量指標(biāo),可控性強。見表4
表4各批次本發(fā)明組合物各留體皂苷對留體總皂苷的重量百分比
物質(zhì)量的目的。在不同原料、不同提取工藝中,上表中偽原薯蕷皂苷(I)與原薯蕷皂苷(IV) 可以相互轉(zhuǎn)換;但是通過試驗表明,相同原料,相同工藝的批次中,偽原薯蕷皂苷(I)或原 薯蕷皂苷(IV)的含量基本恒定,偽原纖細(xì)皂苷(II)或原纖細(xì)皂苷(V)的含量基本恒定,可 以將其中含量較高的一種或二者之和作為質(zhì)量控制成分之一,即本發(fā)明藥物組合物偽原薯 蕷皂苷(I)和/或原薯蕷皂苷(IV)、偽原纖細(xì)皂苷(II)和/或原纖細(xì)皂苷(V)、薯蕷皂苷 (III)均在恒定的比例中,通過直接控制該三類化合物的含量,可以達到控制本發(fā)明藥物質(zhì) 量的目的。
實施例6本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備
每粒膠囊的組成
總甾體皂苷(實施例2制得)100g
淀粉150g (共制成1000粒)
按上述比例取、淀粉,混勻,裝膠囊。每粒裝250mg,用于心腦血管疾病治療,口服, 每日三次,每次1 2粒。二月為一療程。
每粒含甾體皂苷以薯蕷皂苷計,不少于65. Omg。
實施例7 片劑的制備
片劑組成
總甾體皂苷(實施例2制得)100g
HPMC LV10030g
乳糖70g
硬脂酸鎂lg(共制成1000片)
總甾體皂苷、HPMC、乳糖混勻,以75%乙醇為粘合劑制濕顆粒,過22目篩,50°C干 燥3h,22目篩整粒,加入硬脂酸鎂混勻壓片,每片重0.15g。用于心腦血管疾病治療,口服, 每日三次,每次1 2片。二月為一療程。
每片含甾體皂苷以薯蕷皂苷計,不得少于65. Omg。
實施例8注射液的制備
注射液組成總留體皂苷50g
吐溫 8010ml
氯化鈉8g(共制成1000ml)
總甾體皂苷,加10 % Na2C03調(diào)PH至7. 0-7. 5,冷藏濾過,加吐溫-80,NaCl,加注射 用水至1000ml,G3垂熔漏斗(玻璃)濾過,分裝,灌封,100°C流通蒸氣滅菌30min即得。用 于心腦血管疾病治療,皮下注射,每日二次,每次1 2ml。二月為一療程。
每支含甾體皂苷以薯蕷皂苷計,不得少于65. Omg。
軟膠囊、滴丸可按常規(guī)方法,加入常用基質(zhì)制備。
以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明藥物組合物的有益效果。
試驗例1偽原纖細(xì)皂苷(II)對大鼠急性心肌梗死的影響
使用實施例4所得偽原纖細(xì)皂苷(II)的進行了以下相關(guān)藥理試驗
取Wistar大鼠,180_220g/只,隨機分為3組,即對照組、偽原纖細(xì)皂苷高、低劑量 組,每組12只。對照組灌胃給予蒸餾水,其余各組按表中高劑量(3mg/kg)、低劑量(1.5mg/ kg)分別灌胃給予相應(yīng)藥液(均以蒸餾水配制)。每天給藥1次,連續(xù)給藥一周。末次給藥lh后,氨基甲酸乙酯(Urathan,lg/kg)腹腔麻醉大鼠,仰位固定,沿胸骨中線剪開動物皮 膚,在胸骨左緣3-5肋開口,迅速擠出心臟后,立即結(jié)扎左心冠狀動脈前降支根部,將心臟 放回胸腔,關(guān)閉胸腔并縫合恢復(fù)自主呼吸。結(jié)扎3h后結(jié)束試驗,心臟結(jié)扎線以下橫切5片, 硝基四氮唑藍染色,采用多媒體彩色病理圖分析系統(tǒng)(MPIAS-500),以固定象距測量正常心 肌及梗塞心肌面積,觀察心肌梗塞程度,結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理(t檢驗),結(jié)果見表4。
表4偽原纖細(xì)皂苷(II)對心肌缺血致心肌梗塞的影響(x士s)
注與模型組比較,*P< 0.05 **P < 0.01
表4結(jié)果顯示,與模型組比較,化合物(II)高、低劑量組大鼠梗塞心肌面積、梗塞 區(qū)重量、梗塞區(qū)占心室比以及梗塞區(qū)占全心比均明顯降低(分別P < 0. 01和P < 0. 05),且 呈量效關(guān)系,說明本發(fā)明新化合物偽原纖細(xì)皂苷(II)具有明顯減輕心肌梗塞程度,縮小梗 塞面積,減輕梗塞區(qū)重量,對心肌缺血有明顯的保護作用。
上述藥效試驗說明,本發(fā)明藥物組合物中的新化合物偽原纖細(xì)皂苷(II)不僅僅 是新的發(fā)現(xiàn),且實驗充分證明該新化合物具有藥效,可單獨用于制劑使用,藥效明確。
試驗例2本發(fā)明藥物組合物治療心絞痛,對血脂、血小板聚集功能的影響
臨床共觀察胸痹(心絞痛)患者1084例患者,采用隨機、對照、雙盲法。隨機分別 給與六1、六2、六3、六4、復(fù)方丹參片或硝酸異山梨酯。
從性別、年齡、病程、合并癥等幾個方面,對參加服用藥物的病例,進行了均衡性 (可比性)檢驗。檢驗結(jié)果表明A1、A2、A3、A4膠囊組和復(fù)方丹參片組與硝酸異山梨酯組病 人之間在性別、年齡、病程和合并癥方面沒有顯著差異,具有可比性。
A1、A2、A3、A4、B、C六藥均裝入膠囊,外觀一致。五組藥物均口服,每次1粒,每天 3次,五藥均以8周為一療程。在服上述六種藥物期間,病人停用一切對冠脈血流、血脂及血 壓有影響的藥物。在病情急需時,可臨時加用,一旦病情好轉(zhuǎn)則停藥,并記錄用藥量。
最后揭盲A1、A2、A3為實施例1、2、3組合物按實施例6的方法制得膠囊,A4為老 工藝組合物按實施例6的方法制得膠囊,A1、A2、A3、A4每粒膠囊中總皂苷含量相同,劑量每 次200mg,每天3次;B為復(fù)方丹參片,劑量每次3片,每天3次;C為硝酸異山梨酯,劑量每 次5mg,每天3次。
接受治療者用藥前停用對冠性病有效的藥物3天,進行血、尿常規(guī),肝、腎功能,血 脂分析,靜息心電圖和負(fù)荷試驗。療程結(jié)束,全部復(fù)查以上各項指標(biāo)。
治療期間停用降壓、降脂、擴張冠狀動脈藥物,僅對心絞痛發(fā)作頻繁或嚴(yán)重心率失 常患者臨時給以硝酸甘油類藥物,并記錄停減量。
療效評定標(biāo)準(zhǔn)按1979年全國中西醫(yī)結(jié)合防治冠心病、心絞痛心律失常研究座談 會修訂的《冠心病心絞痛及心電圖療效評定標(biāo)準(zhǔn)》進行評定。
結(jié)果見表5、表6:
16[0134]表5五組藥物對心絞痛療效的比較
經(jīng)Ridit分析,A1、A2、A3組分別與B組、A1、A2、A3組分別與C組比較,均P < 0. 01。 x2分析比較Al、A2、A3組分別和B組顯效率,P < 0. 05 ;Al、A2、A3組分別組和C組顯效率 比較,P < 0. 01。表明實施例1、2、3的本發(fā)明組合物膠囊對心絞痛的療效均優(yōu)于復(fù)方丹參 片(B)和硝酸異山梨酯(C)。對緩解心絞痛癥狀總有效率為89.9%、90.5%、90.4%,療效 確切,即證明通過控制三個成分,達到了有效、穩(wěn)定的藥效。
用本發(fā)明的制備方法與常規(guī)方法相比,成本降低35%以上,收率提供13%,在相 同原料用量,經(jīng)258例臨床觀察,采用本發(fā)明藥物藥效提高5%以上。
對心肌缺血的療效8周療程,本發(fā)明藥物組合物對心肌缺血療效的比較,見表6。
表6五組藥物對心肌缺血療效的比較
經(jīng)Ridit分析,Al、A2、A3組分別與硝酸異山梨酯組對心肌缺血的療效無顯著性 差異(均P > 0.05)、但六1、六2、々3組優(yōu)于復(fù)方丹參片,均?< 0.01。x2分析比較Al、A2、 A3組顯效率分別優(yōu)于復(fù)方丹參片,P < 0. 05 ;A1、A2、A3組顯效率分別與硝酸異山梨酯無顯 著差異,均P > 0. 05。表明實施例1、2、3的本發(fā)明組合物膠囊對心絞痛的療效均優(yōu)于復(fù)方 丹參片(B),與硝酸異山梨酯(C)等效。對靜息心電圖ST-T段總有效率為55.5%、56.0%、 54.8%,療效確切,即證明通過控制三個成分,達到了有效、穩(wěn)定的藥效。本發(fā)明組合物療效 比按老工藝提取的組合物療效提高5%以上。
對血脂的作用治療前有高膽固醇血癥者164例,高甘油三脂血癥162例,治療后高 膽固醇患者中有78例恢復(fù)正常,高甘油三脂患者中有87例恢復(fù)正常。血膽固醇由治療前 6. 8士 1. lmmol/L降至治療后6. 3士 1. lmmol/L,血甘油三脂由治療前2. 4士0. 8mmol/L降至 治療后1. 9 士0. 7mmol/L,經(jīng)t檢驗,差別有非常顯著意義(P < 0. 01)。
對血小板聚集功能的影響該藥對二磷腺苷(ADP)和腎上腺素誘導(dǎo)的血小板聚集 均有明顯影響,ADP使聚集率有治療前68% 士 15%降至治療后60% 士 15%,腎上腺素使聚集率由治療前73% 士 15%降至治療后64% 士 12%,經(jīng)經(jīng)t檢驗,差別有非常顯著意義(P < 0. 01)。
本發(fā)明藥物組合物對冠心病人臨床癥狀改善
表7本發(fā)明藥物組合物膠囊治療前后主要癥狀改變
不良反應(yīng)本組826例在服藥期間有頭暈5例,胃腹部不適9例,頭痛2例,面部發(fā) 熱1例,均不影響治療。治療前后所作血、尿常規(guī),肝、腎功能結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。
通過上述制備工藝、結(jié)構(gòu)測定、定量控制及藥效學(xué)試驗說明,本發(fā)明藥物組合物中 的三種化合物偽原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細(xì)皂苷(II)、薯蕷皂苷(III)同時進行控制,有效 的控制質(zhì)量,提高藥效及藥物的穩(wěn)定性,藥物服用劑量小,使用方便。
參考文獻
1. P. K. AGRAWAL, D. C. JAIN, R. K. GUPTA, et al. CARBON-13 NMRSPECTROSCOPY OF STEROIDAL SAP0GENINS AND STEROIDAL SAPONINS. Phytochemistry,1985, 24(11) 2479-2496.
2.徐成基.中國薯蕷資源留體激素藥源植物的研究與開發(fā).四川科學(xué)技術(shù)出版 社,2000.
3. Mei Dong et al TWO novel furostanol saponins from the rhizomes of Dioscoreapanthaica Prain et Burkill and their cytotoxic activity. Tetrahedron, 2001,57,501-506.
4.Zhou Zhong Liang, Rita Aquino, Francesco et al. Oligofurostanosides from Asparaguscochinchinensis. Plant medica. 1988,50(4) :344-346.
5.董梅,吳立軍,陳泉等。黃山藥中甾體皂苷的分離與鑒定。藥學(xué)學(xué)報,2001, 36(1) -.42-45.
6.都述虎,劉文英,付鐵軍等。穿龍薯蕷總皂苷中甾體皂苷的分離與鑒定。藥學(xué)學(xué) 報,2002,37 (4) 267-270.
權(quán)利要求
一種甾體皂苷藥物組合物,其特征在于它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾體皂苷,通式C螺甾烷醇類甾體皂苷或皂苷元,其重量配比為呋甾烷醇甾體皂苷5~25份、螺甾烷醇類甾體皂苷1~10份,通式A通式B通式C其中,通式A中,呋甾烷醇甾體皂苷為通式B中通式C中,F(xiàn)C20015702200580033335201C00011.tif,FC20015702200580033335201C00012.tif,FC20015702200580033335201C00013.tif,FC20015702200580033335201C00014.tif,FC20015702200580033335201C00021.tif,FC20015702200580033335201C00022.tif,FC20015702200580033335201C00023.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述留體皂苷藥物組合物,其特征在于含有下列化合物通式A 中,當(dāng) -glc^Ck時,為偽原薯蕷皂苷⑴; _gle《時,為偽原纖細(xì)薯蕷皂苷 (II);通式B中,當(dāng) _ 時,為原薯蕷皂苷(IV) ; -8lc<T 時,為原纖細(xì) 皂苷(V);通式C中,,時為薯蕷皂苷(III), 其中,偽原薯蕷皂苷(I)和/或原薯蕷皂苷(IV) 5 22份、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II)和 /或原纖細(xì)皂苷(V) 1 5份、薯蕷皂苷(III) 1 8份。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于含有偽原薯蕷皂苷 (I) 5 20份、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II) 1 3份、薯蕷皂苷(III) 1 5份。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于含有偽原薯蕷皂苷 (I) 12 18份、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II) 1份、薯蕷皂苷(III) 1. 2 `2. 5份。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1 4任一項所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的甾體 皂苷來源于薯蕷科薯蕷屬植物黃山藥Dioscorea panthaica Prain et Burkill、穿龍薯蕷 Dioscorea nipponica Makino 的提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求
5所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述提取物中,留體總皂 苷以薯蕷皂苷計,其含量不少于65% w/w。
7.根據(jù)權(quán)利要求
5所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的提取物中含有偽 原薯蕷皂苷(I)、偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II)、薯蕷皂苷(III)三種留體皂苷的含量之和不少于 甾體總皂苷的50% w/w。
8.根據(jù)權(quán)利要求
6或7所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的提取物具 有如圖1所示的HPLC指紋圖譜,其中,指紋圖譜的特征峰分別為偽原薯蕷皂苷(I)保留 時間28. 27min ;偽原纖細(xì)薯蕷皂苷(II)保留時間29. 5min ;薯蕷皂苷(III)保留時間 57.IOmin0色譜條件色譜柱:Alltima C18 4. 6 X 250mm,5um,梯度洗脫,蒸發(fā)光散射檢測器檢測, 漂移管溫度100°C,氣體流速2. OL/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求
5所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的提取物是由如下 方法制備a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料,經(jīng)切片或粉碎 后,加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意比 例組成的混合溶液為溶媒提取,溶媒量為原料的15 25倍;b、將a步驟制備的提取液冷卻過濾、濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液,用水洗至流出 液至無色,棄去水洗液;C、將b步驟的水洗后的吸附樹脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50% 90%乙醇、30 80%含 水甲醇或60 95%含水丙酮中的一種或多種洗脫,收集洗脫液,濃縮;d、將c步驟的濃縮液加60 95%醇醇沉,過濾,收集濾液,濃縮,干燥,即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求
9所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的提取物的制備方 法步驟b中當(dāng)提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇時,先減壓濃縮,再冷卻過濾。
11.根據(jù)權(quán)利要求
1 4任一項所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于它是由所述 的甾體皂苷或黃山藥、穿山龍?zhí)崛∥餅榛钚猿煞?,加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔料性成分 制備而成的制劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求
11所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的制劑是片劑、 膠囊劑、顆粒劑、口服液、滴丸、注射劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求
12所述的留體皂苷藥物組合物,其特征在于所述的制劑是軟膠囊。
14.一種制備權(quán)利要求
1 13任一項所述的藥物組合物的方法,它包括如下步驟 稱取含有通式A和/或通式B的呋留烷醇留體皂苷,通式C螺留醇類留體皂苷,重量配比為呋留烷醇留體皂苷5 25份、螺留烷醇類留體皂苷1 10份;混合,加入藥學(xué)上可接 受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
15.一種制備權(quán)利要求
1 13任一項所述的藥物組合物的制備方法,它包括如下步驟a、以中藥黃山藥、穿山龍或新鮮采集的黃山藥、穿山龍的根莖為原料,經(jīng)切片或粉碎 后,加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意比 例組成的混合溶液為溶媒提取,溶媒量為原料的15 25倍;b、將a步驟制備的提取液冷卻過濾、濾液通過吸附樹脂柱、棄去流出液,用水洗至流出 液至無色,棄去水洗液;C、將b步驟的水洗后的吸附樹脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50% 90%乙醇、30 80%含 水甲醇或60 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一種或多種洗脫,收集洗脫液,濃 縮;d、將c步驟的濃縮液加60 95%醇醇沉,過濾,收集濾液;e、取d步驟所述的濾液,濃縮干燥,加入藥物上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥 學(xué)上常用的制劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求
15所述的藥物組合物的制備方法,其特征在于步驟b中,當(dāng)提取液 含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇時,先減壓濃縮,再冷卻過濾。
17.權(quán)利要求
1 13任一項所述的藥物組合物在制備治療和預(yù)防心腦血管疾病藥物中 的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求
17所述的應(yīng)用,其特征在于在制備治療和預(yù)防治療冠心病、心絞痛、心 肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種甾體皂苷藥物組合物,它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾體皂苷,通式C螺甾烷醇類甾體皂苷,其重量配比為呋甾烷醇甾體皂苷5-25份、螺甾烷醇類甾體皂苷1-10份。本發(fā)明還提供了該甾體皂苷藥物組合物的制備方法和其中三種甾體皂苷成分的HPLC鑒定方法,以及其在制備預(yù)防和治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
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公開日2010年9月29日 申請日期2005年9月29日
發(fā)明者付鐵軍, 劉忠榮, 及元喬, 李伯剛, 祁偉, 鄒文俊, 黃瑜 申請人:成都地奧制藥集團有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (1), 非專利引用 (2),