專利名稱:一種治療肺癌的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及用于治療肺癌的中藥組合物，同時(shí)涉及該組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近半個(gè)世紀(jì)來(lái)許多國(guó)家和地區(qū)肺癌的發(fā)病率和死亡事都在逐年增加，在男性公民中尤為明顯。本病病因目前尚未完全明確，但是根據(jù)流行病學(xué)資料表明，本病與吸煙、大氣污染和某些職業(yè)性因子如石棉、砷、鉻、瀝青及某些放射性物質(zhì)有密切關(guān)系，內(nèi)分泌紊亂可能超綜合作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病主要采用手術(shù)、放療和化療等方法，手術(shù)切除是各種治療方法中療效最佳的一種，然而，大約90％的肺癌病人在確診時(shí)巳無(wú)手術(shù)條件，在可手術(shù)治療的20％病例中，五年生存率也要下降，后期也要復(fù)發(fā)，五年生存率很低。中醫(yī)是中國(guó)幾千年傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的寶貴財(cái)富，在現(xiàn)代科技條件下，發(fā)掘、研究，利用中醫(yī)方法，研制利用中藥治療肺癌，不僅必需而目可能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種新的治療肺癌的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)制備一種新的治療肺癌中藥組合物的方法；本發(fā)明目的還在于公開(kāi)一種新的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)熟大黃180-350重量份 急性子180-400重量份 水 蛭80-280重量份全 蝎30-150重量份 蜈 蚣30-150重量份 細(xì) 辛30-150重量份牡蠣450-700重量份 瓜 萎150-350重量份 人 參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份 金錢白花蛇10-100重量份。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比優(yōu)選如下(按重量份)熟大黃210-270重量份 急性子210-270重量份 水蛭100-150重量份全 蝎40-80重量份 蜈 蚣40-80重量份 細(xì) 辛40-80重量份牡蠣500-580重量份 瓜 萎200-280重量份 人 參140-200重量份補(bǔ)骨脂200-260重量份 金錢白花蛇10-60重量份。
本發(fā)明藥物還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。
本藥物組合物的制備方法金錢白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加60-90％乙醇，浸泡0.5-1.5小時(shí)后，加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至55-65℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢白花蛇之外的熟大黃等八味，加水煎煮3次，第一次0.5-1.5小時(shí)，第二，三次分別為0.3-1小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至55-65℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，加入金錢白花蛇細(xì)粉，最后經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上可接受的賦型劑或者增溶劑制成臨床可接受的劑型，如膠囊、片劑、口服液體制劑、顆粒劑等，優(yōu)選膠囊劑。
本組合物制成藥劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別和/或含量測(cè)定。
鑒別方法包括下列方法中的一種和/或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正已烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
所述每單位量是指相當(dāng)原藥材20g的成品藥劑量。
本發(fā)明組合物治療肺癌具有能抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)免疫功能的作用；該組合物毒性甚小，臨床應(yīng)用安全可靠，本發(fā)明組合物制備方法先進(jìn)，有效成份得到充分釋放。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。下列材料與儀器適用于實(shí)施例1-4。
1.藥物本組合物制劑瘀毒清(YDQ膠囊)主要成份為熟大黃，水蛭，瓜萎，蜈蚣，全蝎，牡蠣，人參等，經(jīng)水煎、濃縮，干燥而成干粉，每克干粉相當(dāng)于5克生藥，全部試驗(yàn)均按干粉計(jì)算給藥量。同北京東亞傳統(tǒng)醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)中心提供。批號(hào)971212。參蓮膠囊吉林省通化生化制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)96001；順氨氯鉑(CDDP)濟(jì)南齊魯制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)Q1014。環(huán)磷酰胺(cy)上海第十二制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)940120。
2.動(dòng)物選用符合等級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)要求的SPF三級(jí)裸鼠，近交系純種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。三級(jí)K.M種小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第079號(hào)；三級(jí)C57BL/6J小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第075號(hào)；三級(jí)BALB/c小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第074號(hào)；三級(jí)BALB/c pi-nu裸鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第074號(hào)。小鼠體重均為18～22g，雌雄兼用，同一批試驗(yàn)用同一性別，由中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育中心供應(yīng)。
3.瘤種Lewis肺癌、人肺腺癌LAX-83，肝癌H22瘤株均為中國(guó)藥品生物制品檢定所藥理室傳代保存。
4.儀器血球計(jì)數(shù)儀(PC604型)，經(jīng)計(jì)量認(rèn)證合格，北京埃爾瑪產(chǎn)品。60Co照射條件軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放別醫(yī)學(xué)研究所鉆源室照射。
實(shí)驗(yàn)例1本組合物制劑(YDQ膠襄)抑瘤試驗(yàn)根據(jù)《新藥審批辦法》有關(guān)規(guī)定，按照國(guó)內(nèi)《抗腫瘤藥物篩選規(guī)程》規(guī)定方法，即按1∶3的比例以無(wú)菌生理鹽水稀釋成腫瘤細(xì)胞懸液，以0.2ml給小鼠皮下接種后，24小時(shí)后開(kāi)始灌胃給藥。實(shí)體瘤觀察14天，人肺癌裸鼠移植模型觀察24火，試驗(yàn)到期后，解剖實(shí)體瘤并稱重，按平均瘤重計(jì)算瘤重抑制率。
YDQ膠囊設(shè)三個(gè)劑量組，選用1g/kg(相當(dāng)于人用劑量1.56倍)為低劑量組，2g/kg(相當(dāng)于人用劑量的3.1倍)為中劑量組，4g/kg(相當(dāng)于人用劑量的6.2倍)為高劑量組。CDDP，(3mg/Kg)和參蓮膠(4g/Kg)為陽(yáng)性藥。除CDDP外，其它各組給藥方法均為灌胃給藥。荷瘤對(duì)照組給等體積溶劑，每天一次，連續(xù)7天，停藥后觀察7天后解剖。計(jì)算各給藥組的瘤重抑制率。
1.1對(duì)Lewis肺癌的抑瘤作用按上述方法分組給藥，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批，三批結(jié)果均表明察瘀毒清膠囊對(duì)C57BL、6J小鼠移植Lewis肺癌有明顯抑瘤作用。1g/kg組的瘤重抑制率三次結(jié)果分別為37.2％，26.1％和34.5％，2g/kg組的瘤重抑制率為41.9％，38.5％和48.7％，4g/kg組的瘤重抑制率為43.2％和52.6％。見(jiàn)表1-1，與參蓮膠囊比較抑瘤作用相當(dāng)。
表1-1YDQ膠囊對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用


t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較1.2對(duì)人肺腺癌LAX-83裸鼠移植模型的抑瘤作用按茁述方法稠成細(xì)胞懸液，給每只裸鼠右腋部下接種0.2m1，在移植腫瘤7天后，肉眼可見(jiàn)小米粒大小的瘤體，經(jīng)挑選后。將長(zhǎng)瘤裸鼠隨機(jī)分組。每組8只，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)7天。停藥后觀察17天，解剖瘤體并稱重，計(jì)算瘤重抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批。結(jié)果表明，YDQ膠囊對(duì)人肺腺癌LAX-83裸鼠移植模型有明顯抑瘤作用。1g/kg組的瘤重抑制率三次結(jié)果分別為16.7％、30.8％t和24.8％；2g/kg組的瘤重抑制率為34.3％、35.5和34.1％；4g/kg組的瘤重抑制率為38.1％、37.4％和41.1％。見(jiàn)表1-2，與參蓮膠囊比較抑瘤作用相當(dāng)。
表1-2 YDQ膠囊對(duì)人肺腺癌LAX-83移植裸鼠模型的抑制作用


t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較1.3對(duì)Lewis肺瘤的抗轉(zhuǎn)稱作用按前述方法制成癌細(xì)胞懸液。于每只C57 BL/6J鼠左后腿皮下接種0.2ml，24小時(shí)開(kāi)始給藥。連續(xù)7天，第八大行截肢術(shù)，切除原發(fā)灶，延長(zhǎng)已肺轉(zhuǎn)移鼠的生命，第25天解剖取腫，經(jīng)固定處理計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移灶數(shù)。按腫瘤抑制率＝(C-T)/C×100公式計(jì)算抗轉(zhuǎn)移率。試驗(yàn)重復(fù)二批結(jié)果表明YDQ膠囊對(duì)Lewis肺癌具有抗轉(zhuǎn)移作用。1g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為24.8％和25.5％g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為45.1％和44.0％；4g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為48.9％和53.7％。見(jiàn)表1-3。
表1-3YDQ膠囊對(duì)小鼠Lewis肺癌的抗轉(zhuǎn)移作用


*P＜0.05 **p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)與對(duì)照組平均肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)比較實(shí)驗(yàn)例2本組合物制劑(YDQ膠囊)對(duì)增強(qiáng)荷瘤鼠機(jī)體免疫功能的影響2.1重對(duì)荷瘤鼠血清溶菌酶含量的影響實(shí)驗(yàn)用小鼠Lewis肺癌。選生長(zhǎng)良好的瘤種按1∶3制成瘤細(xì)胞懸液，給每只C5BL/6J小鼠右腿皮下接種0.2ml作抑瘤試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采血分離血清，以微球菌制成菌體的瓊脂板。用前在板上打孔?？讖綖?mm，孔中加入標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶10μl，37℃保溫一定時(shí)間，測(cè)量溶菌環(huán)直徑。繪制半對(duì)數(shù)檣準(zhǔn)曲線，求出血清中溶菌酶含量。試驗(yàn)結(jié)果表明.YDQ膠囊對(duì)Lewis肺癌荷瘤鼠具有活化單核巨噬細(xì)胞功能，增加荷瘤鼠血清溶菌酶含量。試驗(yàn)重復(fù)二批YDQ膠囊低、中、高三個(gè)劑量組的血清溶菌釀含量分別為34.4g/ml 36.5μg/ml 39.2μg/ml和32.7μg/ml、36.0μg/ml和38.2μg/ml。見(jiàn)表2-1與，參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差別。
表2-1YDQ膠囊對(duì)小鼠Lewis肺癌荷瘤鼠血清溶菌酶含量的影響


*P＜0.05 **p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均溶菌酶含量與對(duì)照組平均溶菌酶含量比較2.2對(duì)荷瘤鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(PTH)的影響試驗(yàn)用小鼠肝癌H22實(shí)體型瘤譜，選生長(zhǎng)良好的瘤種按1∶3制成瘤細(xì)胞懸液，給每只BALB/C小鼠皮下接種0.2ml。按前述方法分組給藥。另設(shè)一組正常小鼠為脾指數(shù)對(duì)照。在給藥同一天。除正常鼠組以外。將各組小鼠用1％二硝基氟苯(DNFB)10μl于腹部皮下致敏。7天后再用1％二硝基氟苯(DNFB)10μl于每只小鼠左足趾部皮下攻擊。右足趾用溶媒10μl作對(duì)照，24小時(shí)后取左、右足稱重，以足腫脹度表示反應(yīng)強(qiáng)弱。同時(shí)解剖荷蘭鼠。取脾和瘤體稱重。計(jì)算脾指數(shù)和瘤重抑制率。以足重差。脾指數(shù)。瘤重抑制率三項(xiàng)指標(biāo)觀察YDQ膠曩對(duì)致敏性T淋巴細(xì)胞的影響。試驗(yàn)重復(fù)2次，2次結(jié)果均表明。YDQ膠囊對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)具有免疫增強(qiáng)作用。
YDQ膠囊各給藥組的胖指數(shù)與正常鼠組比較明顯增高、足重差加大、遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)增強(qiáng)。并能抑制腫瘤生長(zhǎng)。見(jiàn)表2-2，與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表22YDQ膠囊對(duì)肝癌H22荷瘤鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(PTH)的影響


*p＜0.05 **p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均足重量差比較2.3對(duì)產(chǎn)生腫瘤壞死因子的影響腫瘤壞死因子(RNF)是油激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，其抗腫瘤作用表現(xiàn)為直接的細(xì)胞毒作用(Cytotoxicity)[2]。YDQ膠囊按前述方法分組給藥，用厭氧棒狀菌苗(cp)為陽(yáng)性對(duì)照藥，0.5g/ml ip一次給藥事7天后，停藥24小時(shí)后給各組每只鼠iv LPS 10mg/0.2ml小時(shí)后采血，分離血清，檢測(cè)TNF活性，解剖小鼠取肺和瘤體，分別計(jì)算脾指數(shù)和腫瘤抑制率。
TNF活性檢測(cè)用微量細(xì)胞毒試驗(yàn)法，將傳代7天生長(zhǎng)旺盛的S180腫瘤細(xì)胞制成靶細(xì)胞，用RPNH 1640營(yíng)養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞數(shù)為4×102/ml，于96孔板上每孔加細(xì)胞懸液100ul.再加待檢血清500l，混勻，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞中死細(xì)胞數(shù)。按給藥組死細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組死細(xì)胞數(shù)計(jì)算直接細(xì)胞毒活性指數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)二批，結(jié)果表明經(jīng)給藥7天YDQ膠囊小鼠，單核巨噬細(xì)胞功能增強(qiáng)，脾指數(shù)增高，能抑制腫瘤生長(zhǎng)。再靜脈注射誘出劑LPS后，血清中TNF活性明顯增強(qiáng)，1g/kg組的直接細(xì)胞毒指數(shù)為2.18和2.09；2g/kg組為2.36和2.05；4g/kg組為2.26和2.12。見(jiàn)表2-3，與cP菌苗比較。未見(jiàn)明顯差異。
表2-3YDQ膠囊對(duì)增強(qiáng)巨嗜細(xì)胞功能產(chǎn)生腫瘤壞死因子的影響


*P＜0.01t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均死細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組平均死細(xì)胞數(shù)比實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明組合物制劑(YDQ膠囊)的協(xié)同增效作用3.1與CDDP合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用試驗(yàn)用的化療藥順氨氯鉑(CDDP)3mg/kg(相當(dāng)1/5LD50)ip，隔日給藥，連續(xù)4次，為治療高劑量0.6mg/kg(相當(dāng)1/25 LD50)ip。連續(xù)4次，為治療低劑量。低劑量(CDDP加用YDQ膠囊中或高二個(gè)劑量組。設(shè)參蓮膠囊陽(yáng)性對(duì)照組，荷瘤對(duì)照組。按前述方法用Lewis腫瘤和人肺腺癌LAX-83兩個(gè)瘤株模型，進(jìn)行組間的對(duì)比觀察，結(jié)果表明對(duì)Lewis腫癌。CDDP高劑量組瘤重抑制率為62.4％，低劑量組為20.0％。當(dāng)YDQ膠囊中、高2個(gè)劑量組分別與低劑量組CDDP合用時(shí)，其瘤重抑制率平均可達(dá)40％以上，與低劑量CDDP比較可增效2倍。對(duì)人肺腺癌LAX-83模型，CDDP高劑量組的瘤重抑制率為61.4％低劑量組為15.0％。當(dāng)YDQ膠囊中、高2個(gè)劑量分別與低劑量CDDP合用時(shí)，其腫瘤抑制率可達(dá)47.6～54.1％。與低劑量CDDP相比可增效三倍以上。見(jiàn)表3-1，照片3-1。提示YDQ膠囊與小劑量CDDP合用具有明顯增效作用。但YDQ膠囊與小劑量CDDP合用。分別與單一使用YDQ膠囊及單一使用參蓮膠囊比較，均來(lái)見(jiàn)明顯差異。
表3-1YDQ膠囊與CDDP合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用


T檢驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較3.2與60Co照射合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用試驗(yàn)用60Co倍量照射率為166.6倍量/分照射。治療劑量為4Gy，一次性全身照射，動(dòng)物分組與造模方法同3.1項(xiàng)。結(jié)果表明，對(duì)Lewis肺癌模型，單獨(dú)4Gy，照射劑量治療組的腫瘤抑制率為14.2％，當(dāng)瘀毒清膠囊與4Gy用時(shí)，其腫瘤重抑制率可增高至63.9～66.2％，與單獨(dú)照射相比可增效4.5倍。對(duì)人肺腺癌LAX-83模型，單獨(dú)照射治療組的腫瘤抑制率為17.3％瘀毒清膠囊中、高劑理與照射合用時(shí)，其腫瘤制率可增高至49.2～49.7％。與單獨(dú)照射相比增效2.8倍。見(jiàn)表3-2，照片3-2。提示瘀清膠囊與照射治療合用有明顯增效作用。與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差別。
表3-2YDQ膠囊與60Co輻射合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用


T測(cè)驗(yàn)各給藥組藥前體重與給藥后體重比較實(shí)驗(yàn)例4本組合物制劑(YDQ膠囊)的減毒作用按照新藥(中藥)抗腫瘤藥效研究指南中規(guī)定方法，選用環(huán)磷酰胺(cy)、CDDP ip給藥和60Co照射使正常鼠，荷瘤鼠出現(xiàn)體重減輕、紅白細(xì)胞減少、骨髓有核細(xì)胞下降等特定毒副瓜，用YDQ膠囊以觀察對(duì)放、化療引起特定毒副瓜的減毒作用。
4.1對(duì)cy CDDP引起荷瘤鼠體重下降的影響試驗(yàn)用Lewis肺癌模型cy組為ip 100mg/kg×2d。YDQ膠囊為國(guó)，高2個(gè)劑量，在給予cy同時(shí)，口服YDQ膠囊，連續(xù)7天，停藥后24小時(shí)稱各組小鼠體重。按3.1項(xiàng)方法分組。給藥。在觀察CDDP對(duì)Lewis肺癌、人肺腺癌兩個(gè)腫瘤模型增效作用的同時(shí)觀察對(duì)荷瘤鼠體重下降的影響。結(jié)果表明。cy、CDDP中毒模型組第8～14天體重下降3.1和0.2克。ip cy或CDDP同時(shí)口服YDQ膠囊組。體重增長(zhǎng)1.9和3.4克。見(jiàn)表4-1。提示YDQ膠囊對(duì)荷瘤鼠由cy、CDDP中毒所致體重下降有保護(hù)作用，與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表4-1YDQ膠囊對(duì)cy，CDDP引起荷瘤鼠體重下降的影響


T測(cè)驗(yàn)各給藥組給藥前體重與給藥后體重比較4.2對(duì)cy引起荷瘤鼠外周血象變化的影響按4.1項(xiàng)所述方法分組。給藥。試驗(yàn)結(jié)果表明。荷瘤鼠組、cy中毒模型鼠，WBC，減少當(dāng)ip cy同時(shí)口服瘀毒清膠囊WBC明顯升高，見(jiàn)表4-2。提示瘀毒清膠囊對(duì)荷瘤鼠同cy所致，骨髓血細(xì)胞腡傷有保護(hù)作用。與參蓮膠囊比較未見(jiàn)明顯差異。
表4-2YDQ膠囊對(duì)cy引起荷瘤鼠外周血毒性反應(yīng)的影響


▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較p＜0.05 *t測(cè)驗(yàn)與cy組比較p＜0.05▲▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較p＜0.01 **t測(cè)驗(yàn)與cy組比較p＜0.014.3對(duì)cy引起荷瘤鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響按4.1項(xiàng)所述方法分組。給藥，在試驗(yàn)到期后。解剖取每只鼠股骨，沖出骨髓.計(jì)數(shù)每根股骨有核細(xì)胞數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明。cy中毒模型組骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯下降。當(dāng)ip注射cy同時(shí)瘀毒清膠囊。骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯升高，見(jiàn)表4-3。提示瘀毒清膠囊對(duì)正常鼠由cy所致有核細(xì)胞數(shù)下降有保護(hù)作用。參蓮膠囊亦有保護(hù)作用。
表4-3YDQ膠囊對(duì)cy抑制小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)下降的影響


▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較*t測(cè)驗(yàn)與cy組比較4.4對(duì)60Co引起荷瘤鼠體重下降的影響試驗(yàn)用昆明小鼠。用60CO 6Gy亞致死劑量全身照射，瘀毒清膠囊為中，高2個(gè)劑量組。
按3.2項(xiàng)所述方法分組給藥，在照小時(shí)開(kāi)始口服瘀毒清膠囊，連續(xù)7天，停藥后24小時(shí)稱各組小鼠重。觀察毒清膠囊與60Co照射合用時(shí)對(duì)Lewis肺癌。人肺腺癌兩個(gè)腫瘤模型增效作用的同時(shí)觀察對(duì)荷瘤鼠體重下降的影響。結(jié)果表明。經(jīng)60Co 6Gy 4Gy全身照射的正常鼠和荷瘤治療鼠，第8～14天體重下降0.7～1.1克，在照射后2小時(shí)，口服瘀毒清膠囊的正常鼠和茶瘤治療鼠體重增長(zhǎng)1.3～4.2克，見(jiàn)表4-4。提示瘀毒清膠囊對(duì)正常鼠荷瘤同60Co照射所至體重下降有保護(hù)作用。與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表4-4YDQ膠囊對(duì)60Co照射引起荷瘤鼠體重下降的影響


t測(cè)驗(yàn)各給藥組給藥前體重與給藥后體重比較4.5對(duì)60Co照射引起正常鼠外周血毒性反應(yīng)的影響按4.4所述方法分組、給藥，試驗(yàn)結(jié)果表明，正常鼠經(jīng)60Co亞致死量照射后，WBC損傷非常嚴(yán)重，60Co照射模型組WBC為1.2×100/L，照射后口服瘀毒清膠囊高劑量組為2.6×100/L(p＜0.01)。見(jiàn)表4-5。提示瘀毒清膠囊對(duì)60Co照射引起小鼠WBC損傷有一定保護(hù)作用。
表4-5YDQ膠囊對(duì)60Co亞致死量照射引起正常鼠外周血毒性反應(yīng)的影響


▲t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.01 *t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.05**t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.01
4.6對(duì)60Co照射引起正常鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響按上述及4.4項(xiàng)所述方法分組，給藥，在試驗(yàn)到期后，解剖取每只鼠股骨，沖出骨髓，計(jì)數(shù)每根股骨有核細(xì)胞數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果表明，60Co中毒模型組骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯下降。當(dāng)照射后口服YDQ膠囊，骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯升高，接近正常鼠的水平，見(jiàn)表4-6。提示YDQ膠囊對(duì)正常鼠同60Co所致有核細(xì)胞數(shù)下降有保護(hù)作用。參蓮膠囊亦有保護(hù)作用。
表4-6YDQ膠囊對(duì)60Co亞致死量照射引起正常鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響


▲t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較*t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明組合物提取工藝研究實(shí)驗(yàn)1、人參和補(bǔ)骨脂的醇提工藝優(yōu)化影響提取效果的主要因素是乙醇濃度、溶媒量、提取時(shí)間和提取次數(shù)。以HPLC測(cè)定補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)篩選其最佳提取工藝，以下交表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)[2]。稱取全方1/20的相應(yīng)醇提藥人參和補(bǔ)骨脂，按表5-1安排實(shí)驗(yàn)，回流提取，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表5-2。
表5-1醇提正交實(shí)驗(yàn)因素水平表


5-2醇提實(shí)驗(yàn)具體實(shí)施方案及結(jié)果表


結(jié)果的直觀分析按浸膏收率分析，影響浸膏收率因素的排列順序A＞D＞B＞C。然而，由極差R1的大小順序可知，對(duì)補(bǔ)骨脂素含量影響較大的是B和C，A和D則處于閃要地位。影響因素的排列順序?yàn)锽＞C＞A＞D，其最佳提取條件為A1B1C2D1(1)。結(jié)合工業(yè)化生產(chǎn)的安全及成本等，把乙醇濃度(A)調(diào)整為85％。另外，考慮到此二藥的醇提藥渣還要并入水提藥材一起再提取，為了節(jié)能、省時(shí)，因此，把提取次數(shù)(D)改為提取1次。綜合各種因素，調(diào)整后較佳提取條件為A2B1C2D3(H)，這樣補(bǔ)骨脂素含量和浸膏收率都較高。分別投料5批，對(duì)最佳提取條件I和較佳提取條件II進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5-3。
表5-3醇提取實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果表


表5-3結(jié)果表明，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，采用較佳條件的驗(yàn)證結(jié)果與最佳條件的驗(yàn)證結(jié)果無(wú)顯著性差別，因此，該醇提工藝條件是最佳搭配，即將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流2h，提取1次。
2、牡蠣對(duì)大黃有效成分提取的影響稱取全方1/20的大黃各5份，另稱取全方1/20的大黃和牡蠣各5份。分別加20倍水，浸泡1h，煎煮1h，測(cè)定大黃素含量，計(jì)算出100g大黃素的收率，結(jié)果見(jiàn)表5-4。
表5-4大黃單煎(1)及與牡蠣合煎(H)的大黃素收率(％)


由表5-4的結(jié)果可知牡蠣與大黃一起煎煮，對(duì)大黃有效成分的提取無(wú)顯著性影響。
3、水煎工藝的優(yōu)化影響中藥材水煎煮提取的主要因素有浸泡時(shí)間，用水量，煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為了合理有效地優(yōu)選這些工藝條件，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，按正交表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)。以HPLC測(cè)定本方中大黃的有效成分大黃素為指標(biāo)，來(lái)篩選較優(yōu)的條件。稱取全方1/20的水提藥材及醇提藥渣總重為100g，按表5-6安排實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行水煎煮提取。結(jié)果見(jiàn)表5-7。
表5-5水提正交實(shí)驗(yàn)因素水平表


表5-6水提正交實(shí)驗(yàn)安排表


表5-7水提正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析表


結(jié)果的直觀分析按浸膏收率分析，影響收膏收率最主要的因素是煎煮次數(shù)，其次是加水量和煎煮時(shí)間，其最佳搭配為A2B3C3D3。按大黃素含量分析，由極差R1的大小可知，影響因素的排列順序?yàn)镈＞B＞C＞A，其最佳提取工藝為A1B3C2D3(因?yàn)锳1的K值與A3幾乎相等，所以為了省時(shí)取A1)，而且，收膏率也較高，按此最佳條件分別投料5批，進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5-8。
表5-8水提驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果


由此可見(jiàn)，此水提工藝最佳搭配。即將藥材浸泡1h，提取3次。第1次加8倍量的水，煎煮1h；第2和第3次分別加6倍量水，煎煮0.5h。
實(shí)驗(yàn)例6制劑工藝研究1.賦形劑及其用量的選擇由于純干浸膏粉吸濕性較強(qiáng)，若直接裝膠囊，則膠囊易碎裂，不利于藥品的儲(chǔ)存，故須加入適量輔料，制粒，干燥再填裝膠囊。以成粒情況及臨界相對(duì)濕度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)淀粉、糊精、乳糖及其用量進(jìn)行優(yōu)選，結(jié)果見(jiàn)表6-1。
表6-1輔料及其用量的選擇試驗(yàn)結(jié)果表


由表6-1可知乳糖無(wú)吸濕性，成粒好，但價(jià)格太貴。而糊精易于制粒，成粒好，吸濕性低，故選擇糊精為賦形劑。按干浸膏粉∶糊精為1∶0.8加糊精及金錢白花蛇細(xì)粉，混勻，制粒。
2.干燥時(shí)間與顆粒水分的關(guān)系制粒完成后，以測(cè)定水分為考察指標(biāo)來(lái)選定干燥時(shí)間，根據(jù)本方藥材中含有大量的酶類，氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖等有效成分，溫度太高可能破壞這些有效成分，溫度太低則干燥時(shí)間太長(zhǎng)，故確定干燥溫度為60℃。
表6-2顆粒水分與干燥時(shí)間的關(guān)系


由表中可看出，以干燥時(shí)間為1～5h，顆粒水分變化較大。
選定以60℃溫度干燥4h。
3、膠囊成型工藝研究將干燥顆粒整粒后，進(jìn)行填裝膠囊。為了選擇膠囊裝量大小與臨床劑量相適應(yīng)，進(jìn)行粉粒的堆密度實(shí)驗(yàn)[4]，結(jié)果表6-3。
表6-3粉粒的堆密度實(shí)驗(yàn)


根據(jù)堆密度和臨床一日劑量5.6g以及各號(hào)膠囊的容量[5]，選擇1號(hào)膠囊，經(jīng)全自動(dòng)膠囊填裝機(jī)試裝，每粒膠囊裝0.35g。這樣在臨床上每日服16粒，基本上能適應(yīng)病人的需要。
下列實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
實(shí)施例1熟大黃240g 急性子240g 水蛭120g 全蝎60g蜈蚣60g 細(xì)辛60g 牡蠣530g 瓜萎240g人參180g 補(bǔ)骨脂240g 金錢白花蛇30g取金錢白花蛇31.5g打粉，過(guò)100目篩，取30g備用。將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流提取2h；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1h、0.5h、0.5h；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉。加入金錢白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得成品，制成1000粒膠囊。
原料藥中大黃為四川產(chǎn)掌葉大黃，按中國(guó)藥典(1995年版)大黃炮制項(xiàng)下熟大黃的炮制方法炮炙成熟大黃，即取大黃塊，加酒拌勻，置適宜容器內(nèi)，加熱蒸至內(nèi)外均呈黑色，取出，干燥。
金錢白花蛇打粉。取三批金錢白花蛇，洗凈，60℃干燥，用小型萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，計(jì)算出粉率，三次平均出粉率為95％。中國(guó)藥典(1995年版)凡例規(guī)定，制劑處方中規(guī)定的藥量，系指凈藥材或炮制品粉碎后的份量，故生產(chǎn)時(shí)，金錢白花蛇應(yīng)比處方量多取5％。
其余藥材無(wú)需另外炮制，均按中國(guó)藥典(1995年版)附錄“藥材炮制通則”的規(guī)定進(jìn)行凈切，切制，炮炙，制成制劑提取所需的飲片供用。
實(shí)施例2熟大黃240g 急性子240g 水 蛭120g 全 蝎60g蜈 蚣60g 細(xì) 辛60g 牡 蠣530g 瓜 萎240g人 參180g 補(bǔ)骨脂240g 金錢白花蛇30g金錢白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢白花蛇之外的熱大黃等八味，加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，干燥，裝入膠囊1000粒即得。每粒裝0.35g，相當(dāng)原料藥2g，口服，1日4次，每次4粒.
實(shí)施例3熟大黃230g 急性子230g 水 蛭130g 全 蝎70g蜈 蚣70g 細(xì) 辛70g 牡 蠣510g 瓜 萎230g人 參190g 補(bǔ)骨脂230g 金錢白花蛇40g金錢白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢白花蛇之外的熱大黃等八味，加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓制成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相當(dāng)于原藥材2g，口服，1日4次，每次4粒。
熟大黃180-350重量份 急性子180-400重量份 水 蛭80-280重量份全 蝎30-150重量份 蜈蚣30-150重量份 細(xì) 辛30-150重量份牡蠣450-700重量份 瓜 萎150-350重量份 人 參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份 金錢白花蛇10-100重量份實(shí)施例4熟大黃300g 急性子300g 水蛭240g 全蝎120g蜈蚣120g 細(xì)辛100g 牡蠣600g 瓜萎320g人參220g 補(bǔ)骨脂300g 金錢白花蛇70g取金錢白花打粉，過(guò)100目篩備用。將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流提取2h；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1h、0.5h、0.5h；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉。加入金錢白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得成品，制成1000粒膠囊。
實(shí)施例5本組合物制劑的質(zhì)量控制方法鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，燕干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘雪立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)子同一含羧甲基纖維索鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出多晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色普相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約20ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層析上，以8∶2的正已烷-醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，比例為80∶20，磷酸凋PH為3.0，該溶液作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物膠囊制劑每粒合大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
實(shí)施例4鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色普相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水30ml研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水20ml，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁1g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用40％甲醉60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂甙Re1、Re、Rb2，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層板上，以65∶35∶10氧仿-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，365nm紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種治療肺癌的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃180-350重量份 急性子180-400重量份 水 蛭80-280重量份全 蝎30-150重量份 蜈 蚣30-150重量份 細(xì) 辛30-150重量份牡 蠣450-700重量份 瓜 萎150-350重量份 人 參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份 金錢白花蛇10-100重量份。
2.如權(quán)利要求
1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃210-270重量份 急性子210-270重量份 水 蛭100-150重量份全 蝎40-80重量份 蜈 蚣40-80重量份 細(xì) 辛40-80重量份牡 蠣500-580重量份 瓜 萎200-280重量份 人 參140-200重量份補(bǔ)骨脂200-260重量份 金錢白花蛇10-60重量份。
3.如權(quán)利要求
1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃240重量份 急性子240重量份 水 蛭120重量份全 蝎60重量份 蜈 蚣60重量份 細(xì) 辛60重量份牡 蠣530重量份 瓜 萎240重量份 人 參180重量份補(bǔ)骨脂240重量份 金錢白花蛇30重量份。
4.如權(quán)利要求
1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃230重量份 急性子230重量份 水 蛭130重量份全 蝎70重量份 蜈 蚣70重量份 細(xì) 辛70重量份牡 蠣510重量份 瓜 萎230重量份 人 參190重量份補(bǔ)骨脂230重量份 金錢白花蛇40重量份。
5.如權(quán)利要求
1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的熟大黃300重量份 急性子300重量份 水 蛭240重量份全 蝎120重量份 蜈 蚣120重量份 細(xì) 辛100重量份牡 蠣600重量份 瓜 萎320重量份 人 參220重量份補(bǔ)骨脂300重量份 金錢白花蛇70重量份。
6.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物加入賦型劑制成臨床接受的劑型。
7.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為金錢白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加80-90％乙醇，浸泡0.5-1.5小時(shí)后，加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至55-65℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與急性子、水蛭、全蝎、蜈蚣、細(xì)辛、牡蠣、瓜萎加水煎煮3次，第一次0.5-1.5小時(shí)，第二，三次分別為0.4-1小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至55-65℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，加入金錢白花蛇細(xì)粉和適量糊精，最后經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上接受的賦型劑制成臨床接受的膠囊、片劑、口服液體制劑、顆粒劑中的任意劑型。
8.如權(quán)利要求
7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為金錢白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與急性子、水蛭、全蝎、蜈蚣、細(xì)辛、牡蠣、瓜萎加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，干燥，即得膠囊。
9.如權(quán)利要求
7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取金錢白花蛇打粉，過(guò)100目篩備用；將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1小時(shí)，熱回流提取2小時(shí)；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至60℃相對(duì)密度為1.20～1.25的濃縮液；藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1小時(shí)、0.5小時(shí)、0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至60℃相對(duì)密度為1.20～1.25的濃縮液；將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉；加入金錢白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得。
10.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維索鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220日，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用30-50％甲醉50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Re1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
11.如權(quán)利要求
10所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)、加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm中性氧化鋁柱的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
12.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
13.如權(quán)利要求
12所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-由磷酸調(diào)PH為3.0的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相比例為80∶20，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑0.35g含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
14.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于100～220目、5g、內(nèi)徑9～10mm中性氧化鋁柱的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
15.如權(quán)利要求
14所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘后立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出多晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8∶2的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水30ml研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水20ml，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁1g，拌勻、蒸干，加于100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm中性氧化鋁柱的上部，用40％甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層板上，以65∶35∶10氧仿-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，365nm紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為80∶20，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
16.如權(quán)利要求
1-5之一所述的藥物組合物在制備治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療肺癌的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該組合物由熟大黃、急性子、水蛭、全蝎、蜈蚣、細(xì)辛、牡蠣、瓜萎、人參、補(bǔ)骨脂、金錢白花蛇組成。該中藥組合物制備時(shí)對(duì)不同組分采用煎煮、乙醇提取方法，達(dá)到使有效藥物的充分發(fā)揮，同時(shí)本發(fā)明還提供了對(duì)該組合物進(jìn)行成分鑒別、含量測(cè)定的質(zhì)量控制方法。本組合物治療肺癌具有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)免疫功能的作用。
文檔編號(hào)G01N33/90GKCN1229135SQ200310122425
公開(kāi)日2005年11月30日 申請(qǐng)日期2003年12月23日
發(fā)明者肖偉, 楊寅, 凌婭, 廖正根, 鄒紅, 劉濤, 柳于介 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan