本發(fā)明涉及一種從藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂的調(diào)節(jié)和治療作用，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。

背景領(lǐng)域

背景技術(shù)：

藍(lán)莓又名篤斯越橘、藍(lán)漿果等，原產(chǎn)于北美，按照植物學(xué)分類，屬于杜鵑花科越橘亞科越橘屬多年生落葉或常綠灌木。與藍(lán)莓果實(shí)相比，藍(lán)莓葉的多酚含量更高。南京地區(qū)兔眼藍(lán)莓藍(lán)莓葉中多酚含量高達(dá)81.82mg沒食子酸當(dāng)量/g干重。藍(lán)莓葉多酚組成主要有咖啡酰奎尼酸類、兒茶素及其聚合物、槲皮素及其糖苷衍生物、山奈酚及其糖苷衍生物等。藍(lán)莓葉多酚是藍(lán)莓葉中的主要生理活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒以及降血壓、血脂等功效，在醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用價值。

高血脂是指血脂水平高，可直接引起一些嚴(yán)重危害人類健康的疾病，如動脈粥樣硬化、冠心病、胰腺炎等等。高血脂癥分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性與先天遺傳有關(guān)系，是由于單基因缺陷或者多基因缺陷使得參與脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的受體、酶或者載脂蛋白異常所致。而繼發(fā)性高血脂癥多與糖尿病、高血壓、肥胖以及肝臟、腎臟、甲狀腺疾病等代謝紊亂疾病有非常密切的關(guān)系。另外，繼發(fā)性高血脂癥也與年齡、性別、季節(jié)、飲酒、飲食、情緒緊張等有關(guān)?；颊咴诟哐Y初期一般無明顯癥狀和異常體征，僅在生化檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)血漿脂蛋白水平增高。隨著病情的進(jìn)展，部分患者會出現(xiàn)黃色瘤以及動脈粥樣硬化等。目前雖有多種用于治療高血脂癥的藥物，但由于種種原因，其使用和療效并不盡人意。鑒于此，本發(fā)明研究了藍(lán)莓葉醇提取物對小鼠血脂調(diào)節(jié)和肝臟的保護(hù)作用，為開發(fā)新型高血脂癥治療藥物提供一定理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種藍(lán)莓葉醇提物的提取物制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明提供的一種藍(lán)莓葉醇提取物，其中以多酚類為主要生物活性物質(zhì)。

本發(fā)明提供的一種藍(lán)莓葉醇提取物，該提取物能夠顯著降低高脂小鼠體質(zhì)量的增長。

本發(fā)明提供的一種藍(lán)莓葉醇提取物，該藍(lán)莓葉醇提取物可以降低小鼠血脂，從而有利于改善小鼠脂代謝紊亂的情況。

本發(fā)明提供的一種藍(lán)莓葉醇提取物，該藍(lán)莓葉醇提取物對高脂小鼠的肝臟具有保護(hù)作用。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓葉醇提取物高、中、低劑量均能明顯降低小鼠血清中甘油三酯(tg)、總膽固醇(tc)以及低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)水平，并能提高高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)水平。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓葉醇提取物高、中、低劑量均能明顯降低高血脂癥小鼠肝臟指數(shù)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)活力和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)活力。

本發(fā)明提供的藍(lán)莓葉醇提取物的制備方法，具體技術(shù)方案如下：

將新鮮采摘的藍(lán)莓葉陰干后粉碎，按照料液質(zhì)量比1∶30加入60％的乙醇，在30℃，500w、40khz條件下超聲提取20min后，過濾合并提取液，減壓濃縮至浸膏狀，冷凍干燥后得到藍(lán)莓葉醇提取物。

本發(fā)明藍(lán)莓葉醇提取物的對高血脂癥的作用，其特征在于是以綠原酸等總多酚為主要成分制成的。在本發(fā)明中，我們測定了藍(lán)莓葉醇提取物對高脂膳食誘導(dǎo)的高血脂癥小鼠的體重、血脂以及肝臟的影響，結(jié)果表明，藍(lán)莓葉醇提取物可以有效降低高血脂癥小鼠體重和血脂水平，并對高血脂癥小鼠的肝臟起到保護(hù)作用。

本發(fā)明的積極效果在于：以藍(lán)莓葉為主要原料，采用常規(guī)方法，簡便易得，本發(fā)明提供的藍(lán)莓葉醇提取物具有降血脂和肝臟保護(hù)作用，可用于高血脂癥患者提高免疫力和保健治療。

為進(jìn)一步說明本發(fā)明中的藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥的治療作用，下面提供藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)例1藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠影響

1實(shí)驗(yàn)材料

藍(lán)莓葉醇提取物參照[0011]中方法加工而成。

2方法

(1)造模與給藥

60只spf級昆明小鼠(雌性、體質(zhì)量20g左右)，控制室溫25℃，相對濕度60％，自由飲食(基礎(chǔ)飼料)飲水，每2天換1次墊料，飼養(yǎng)1周稱質(zhì)量后，隨機(jī)分為6組，分別為基礎(chǔ)組、高脂模型組、藍(lán)莓葉醇提取物低劑量組、藍(lán)莓葉醇提取物中劑量組、藍(lán)莓葉醇提取物高劑量組和立普妥陽性對照組。除基礎(chǔ)組喂食普通飼料，其他各組均喂食高脂飼料。各組通過灌胃的方式給藥，藍(lán)莓葉醇提取物低、中、高各組劑量分別為50、150、300mg/(kg·天)，立普妥的劑量為3mg/(kg·d)。基礎(chǔ)組和高脂模型組灌胃生理鹽水。每天灌胃1次，每次1ml，每周稱質(zhì)量。連續(xù)灌胃30d后，稱質(zhì)量，禁食不禁水24h后稱質(zhì)量，眼球取血，處死小鼠，制備肝臟組織勻漿液，并離心血清測定指標(biāo)。

(2)指標(biāo)檢測

一般狀態(tài)測定每天測定小鼠體質(zhì)量、飲食量和飲水量并觀察其一般狀態(tài)的變化。

血脂測定

血液在3000r/min、4℃條件下離心10min，取上清液按試劑盒說明測定tc、tg、ldl-c及hdl-c含量。

肝臟指數(shù)測定

小鼠摘除眼球后脊椎脫臼處死小鼠取肝臟組織，用帶冰的生理鹽水吸取肝臟組織上的血，稱量肝臟組織濕重，計(jì)算肝臟指數(shù)。

肝臟指數(shù)＝肝臟組織濕重/體重×100％。

轉(zhuǎn)氨酶測定

制備10g/100ml肝臟組織勻漿液，按各試劑盒說明測定谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量。

3數(shù)據(jù)處理采用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4結(jié)果

(1)對高血脂癥小鼠體質(zhì)量的影響表1結(jié)果說明，連續(xù)灌胃30天后，高脂模型組小鼠的體質(zhì)量明顯高于各組小鼠的體質(zhì)量，其增長的比例顯著高于基礎(chǔ)組，這是由于高脂飼料在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加了10％的豬油和1％的膽固醇，因此高脂模型組體質(zhì)量增加速率較基礎(chǔ)組快。藍(lán)莓葉醇提取物中、高劑量組的體質(zhì)量增長率顯著低于高脂模型組(p＜0.05)，說明藍(lán)莓葉醇提取物可以有效地控制體質(zhì)量的增長。

表1.藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠體質(zhì)量的影響

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(p＜0.05)。

(2)對高血脂癥小鼠血脂水平的影響由表2可知，高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠血清tc、tg、ldl-c水平較基礎(chǔ)組均顯著升高(p＜0.05)，hdl-c水平顯著低于基礎(chǔ)組(p＜0.05)，說明高脂模型小鼠誘導(dǎo)成功。從tc水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉醇提取物3個劑量組的tc水平都顯著降低(p＜0.05)；藍(lán)莓葉醇提取物3個劑量組tc水平顯著高于陽性對照組，說明藍(lán)莓葉醇提取物未能與藥物達(dá)到同等效果。從tg水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉醇提取物3個劑量組的tg水平都顯著降低(p＜0.05)；與陽性對照組相比，藍(lán)莓葉醇提取物高劑量組的tg水平與陽性對照組差異不顯著(p＞0.05)，說明高劑量的藍(lán)莓葉醇提取物與藥物在降低tg水平方面達(dá)到同等效果。從ldl-c水平看，與高脂模型組相比，藍(lán)莓葉醇提取物各個劑量組的ldl-c水平顯著降低(p＜0.05)，且各個劑量組的ldl-c水平與陽性對照組沒有顯著性差異(p＞0.05)，說明藍(lán)莓葉醇提取物在降低ldl-c水平方面與藥物無差異。從hdl-c水平看，藍(lán)莓葉醇提取物中、高劑量組的hdl-c水平顯著高于高脂模型組(p＜0.05)，并且與陽性對照組相比差異不顯著(p＞0.05)，說明與藥物達(dá)到同等效果。

表2.藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠血脂水平的影響

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(p＜0.05)。

(3)對高血脂癥小鼠肝臟水平的影響由表3可知，藍(lán)莓葉醇提取物高劑量組與陽性對照組的肝臟指數(shù)、ast以及alt活力較高脂模型組都顯著下降(p＜0.05)，且低、中劑量組的ast活力也顯著低于高脂模型組(p＜0.05)，說明藍(lán)莓葉醇提取物對小鼠肝臟有一定的保護(hù)作用；藍(lán)莓葉醇提取物高劑量組的肝臟指數(shù)與alt活力與陽性對照組相比差異不顯著(p＜0.05)，說明高劑量藍(lán)莓葉醇提取物對小鼠的肝保護(hù)作用能達(dá)到藥物同等效果。

表3.藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠肝臟指標(biāo)的影響

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(p＜0.05)。

本實(shí)驗(yàn)例中，測定了藍(lán)莓葉醇提取物對高血脂癥小鼠質(zhì)量、血脂以及肝臟組織的調(diào)節(jié)效果。結(jié)果表明，藍(lán)莓葉醇提取物高、中、低計(jì)量組均可以顯著降低體質(zhì)量和血脂，并在保護(hù)肝臟組織方面有一定的作用。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，特例舉以下實(shí)施例。其作用被理解為是對本發(fā)明的闡釋而非對本發(fā)明的任何形式的限制。

實(shí)施例1藍(lán)莓葉多酚醇提取物的制備

稱取陰干后的藍(lán)莓葉100g粉碎，加入3l60％乙醇溶液，在60℃，500w、40khz條件下超聲提取20min后，用8層紗布過濾得到濾液，減壓濃縮至浸膏狀，冷凍干燥后得到藍(lán)莓葉醇提取物。

實(shí)施例2藍(lán)莓葉醇提取物的制備

(1)稱取陰干后的藍(lán)莓葉200g，去除雜質(zhì)后粉碎。

(2)加入6l60％乙醇溶液，在60℃，500w、40khz條件下超聲提取20min，離心后用濾紙過濾得到濾液。

(3)濾液在25℃條件下減壓除去乙醇，余下的提取物冷凍干燥制成干粉。

(4)分裝即得到藍(lán)莓葉醇提取物。

實(shí)施例3藍(lán)莓葉醇提取物在調(diào)節(jié)血脂方面的應(yīng)用

取實(shí)施例1中所得到藍(lán)莓葉醇提取物，與其他降血脂藥物配合，或者單獨(dú)與輔料配合，制成天然的降血脂產(chǎn)品，供高血脂癥患者調(diào)節(jié)血脂代謝紊亂的狀況，做治療或輔助治療用。

實(shí)施例4藍(lán)莓葉醇提取物在肝臟保護(hù)方面的應(yīng)用

取實(shí)施例2中所得到藍(lán)莓葉醇提取物，與其他護(hù)肝藥物配合，或者單獨(dú)與輔料配合，制成天然的護(hù)肝產(chǎn)品，起到保護(hù)高血脂癥患者肝臟組織、降低轉(zhuǎn)氨酶的效果。