本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及瑪俐那提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

瑪俐那為薔薇科(rosaceae)山楂屬(crataegus)植物光葉山楂(crataegusdahuricakoenhneexschneid)的新鮮和/或干燥成熟果實(shí)，又名面果、漲肚黃、面都落等?，斃鞘嵌鮽惔鹤迦嗣袢粘Ｊ秤玫囊环N野果，其味酸甜可口，在民間常入藥，有健脾消積、生津止渴之功效，多用于小兒積滯。該藥材在我國(guó)廣泛分布于東北各省及大興安嶺地區(qū)，在黑龍江省及內(nèi)蒙古自治區(qū)東部分布較為集中，在山西和蒙古、俄羅斯等地亦有分布，植物資源豐富，果實(shí)產(chǎn)量大，為重要的藥食兩用天然植物資源。目前對(duì)瑪俐那化學(xué)成分的研究?jī)H停留在營(yíng)養(yǎng)成分比較研究和成分類(lèi)型測(cè)定階段，對(duì)其系統(tǒng)化學(xué)成分及相關(guān)藥理活性的研究未見(jiàn)報(bào)道。

一方面，瑪俐那作為藥食同源的植物資源，具有功能性食品特征，毒副作用小，其開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品可作為食品或保健品供適用人群日常食用，對(duì)病癥的預(yù)防、治療或輔助治療均具有重要意義；另一方面，瑪俐那作為我國(guó)鄂倫春民族藥，有一定的民間應(yīng)用基礎(chǔ)，具有巨大的開(kāi)發(fā)價(jià)值。因此，迫切需要對(duì)瑪俐那的藥理活性進(jìn)行研究。

隨著現(xiàn)代社會(huì)生活水平的提高，人們的飲食及生活習(xí)慣逐漸發(fā)生變化，加之生活節(jié)奏的加快，工作壓力的增大，不良生活習(xí)慣已逐漸成為人們?nèi)粘Ｉ畹某B(tài)，并由此引發(fā)了一系列威脅人類(lèi)健康的疾病。

血脂異常是由人們不良生活習(xí)慣所引發(fā)的一大典型病癥，是現(xiàn)代社會(huì)的常見(jiàn)病、多發(fā)病，而進(jìn)一步引發(fā)的心腦血管疾病已成為人類(lèi)健康的第一大殺手，日趨嚴(yán)重的致死率和致殘率給國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。目前臨床上已有他汀類(lèi)、貝特類(lèi)等降脂藥，但由于其副作用較多，且長(zhǎng)期使用藥物有效性明顯降低等缺點(diǎn)的存在，其臨床應(yīng)用受到了一定的限制。

而由于人們飲食不規(guī)律和飲食結(jié)構(gòu)失衡等造成的消化不良，近年來(lái)在人群中表現(xiàn)愈加普遍。消化不良可直接導(dǎo)致機(jī)體血糖、血脂代謝異常，打破機(jī)體代謝平衡，增加肥胖的發(fā)生率，肥胖可進(jìn)一步引發(fā)機(jī)體代謝及各器官運(yùn)轉(zhuǎn)負(fù)荷增加，使得心腦血管疾病發(fā)病率增加、病癥加重且病程加快。另一方面，消化不良會(huì)直接加重消化系統(tǒng)負(fù)擔(dān)，急劇增加了各種消化道疾病的發(fā)生概率，極大地降低人們的生活質(zhì)量。臨床上已有的促消化藥物種類(lèi)較多，但短期應(yīng)用往往療效有限，長(zhǎng)期應(yīng)用則副作用較多，容易誘發(fā)其他病癥。因此有必要尋找新的具有良好降脂和促消化活性且毒副作用低的藥物或保健食品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種瑪俐那提取物及其制備方法和應(yīng)用。所述瑪俐那提取物具有降脂和促消化功能，可用于制備具有降脂和促消化雙重功效的藥物或保健食品。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

一種瑪俐那提取物的制備方法，包括步驟：

1)用提取溶劑對(duì)瑪俐那果實(shí)浸提，所得浸提液濃縮，得瑪俐那總提取物浸膏或濃縮液；

2)瑪俐那總提取物浸膏或濃縮液經(jīng)水分散后用洗滌溶劑洗滌至第一有機(jī)溶劑呈無(wú)色，得到待萃取水相；

3)所得待萃取水相用第一有機(jī)溶劑萃取至第一有機(jī)溶劑呈無(wú)色，對(duì)應(yīng)地得到第一有機(jī)溶劑相和第一水相，第一有機(jī)溶劑相濃縮得瑪俐那第一提取物；

4)所得第一水相用第二有機(jī)溶劑萃取至第二有機(jī)溶劑呈無(wú)色，得到第二有機(jī)溶劑相，第二有機(jī)溶劑相濃縮得瑪俐那第二提取物；

其中，所述提取溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液、異丙醇水溶液或水；

其中，所述洗滌溶劑包括石油醚、5～10個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷烴和5～8個(gè)碳原子的環(huán)烷烴中的一種或多種；

其中，所述第一有機(jī)溶劑包括乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸叔丁酯、丙酸乙酯、乙醚和甲基叔丁基醚中的一種或多種；

其中，所述第二有機(jī)溶劑包括丁醇、戊醇、氯仿和2-甲基四氫呋喃中的一種或多種。

其中，在步驟2)中，所述的洗滌是指用洗滌溶劑萃取水相后，保留水相而棄去洗滌溶劑相。優(yōu)選地，步驟1)具體為：經(jīng)過(guò)干燥的瑪俐那果實(shí)粉碎后，在20～30℃下用提取溶劑進(jìn)行浸提3～5次，浸提液合并，減壓濃縮，得瑪俐那總提取物浸膏或濃縮液；瑪俐那果實(shí)與提取溶劑的比例為1g：(2ml～7ml)；每次浸泡提取的時(shí)間為48h～72h。

優(yōu)選地，所述甲醇水溶液中甲醇的容量比例不大于95％；所述乙醇水溶液中乙醇的容量比例不大于60％；所述異丙醇水溶液中異丙醇的容量比例不大于50％；其中，所述的容量比例為20℃下的測(cè)量結(jié)果。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述提取溶劑為95％甲醇、60％乙醇或水。

優(yōu)選地，所述洗滌溶劑為石油醚；所述第一有機(jī)溶劑為乙酸乙酯；所述第二有機(jī)溶劑為正丁醇。

優(yōu)選地，在步驟1)中，所得浸泡提取液減壓濃縮，減壓濃縮的溫度為45～60℃。

一種瑪俐那提取物，為如上制備方法中的步驟1)制備的瑪俐那總提取物浸膏或濃縮液。

一種瑪俐那提取物，為如上制備方法中的步驟3)制備的瑪俐那第一提取物。

一種瑪俐那提取物，為如上制備方法中的步驟4)制備的瑪俐那第二提取物。

上述的瑪俐那提取物在制備降脂和/或促消化藥物或保健食品中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述降血脂藥物或保健食品是能夠降低血漿甘油三酯水平的藥物或保健食品。

優(yōu)選地，所述促消化藥物或保健食品是具有促進(jìn)腸推進(jìn)作用的藥物或保健食品。

優(yōu)選地，所述降血脂和促消化藥物或保健食品是夠降低血漿甘油三酯水平、具有促進(jìn)腸推進(jìn)作用的藥物或保健食品。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

本發(fā)明提供了瑪俐那提取物，包括瑪俐那總提取物、瑪俐那第一提取物或瑪俐那第二提取物?，斃翘崛∥锸菑乃幨硟捎玫囊肮斃侵刑崛〕鰜?lái)的，其原料來(lái)源廣泛且經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)踐證明其毒副作用小，經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明其具有顯著的降血脂和促消化功能。在驗(yàn)證瑪俐那提取物對(duì)急性高血脂小鼠血脂的影響的實(shí)驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)，瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物在高、中、低劑量組均表現(xiàn)出顯著的降脂的效果，且降脂效果均與非諾貝特相當(dāng)，并且在低于陽(yáng)性藥非諾貝特劑量下(75mg/kgvs100mg/kg)即可顯示相同程度的效果。在瑪俐那對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)的實(shí)驗(yàn)中，瑪俐那總提取物、瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物均表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)腸推進(jìn)效果。因此，本發(fā)明提供的瑪俐那提取物可以用于制備新的具有良好降血脂和促消化活性且毒副作用低的藥物或保健食品。

本發(fā)明提供的瑪俐那提取物的制備方法，提取條件溫和，環(huán)境友好，簡(jiǎn)便易行，能最大程度保留和富集有效成分，成本低、產(chǎn)量高。

本發(fā)明提供的瑪俐那提取物在制備降血脂和/或促消化藥物或保健食品中的應(yīng)用，可以制備新的具有良好降脂和促消化活性且毒副作用低的藥物或保健食品。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。

一、瑪俐那提取物的制備

實(shí)施例1

瑪俐那總提取物制備方法，包括以下步驟：

稱取瑪俐那干燥果實(shí)約100g，粉碎后，按1g∶5ml的液料比加入95％甲醇，室溫(20～30℃)冷浸提取3次，每次48～72h，合并提取液后，45℃減壓回收溶劑，室溫干燥至恒重，得到瑪俐那總提取物浸膏37.0g，提取率為36.3％。

實(shí)施例2

瑪俐那總提取物制備方法，包括以下步驟：

稱取瑪俐那干燥果實(shí)約100g，粉碎后，按1g∶5ml的液料比加入60％乙醇，室溫冷浸提取3次，每次48～72h，合并提取液后，55℃減壓回收溶劑，室溫干燥至恒重，得到瑪俐那總提取物浸膏32.5g，提取率為32.8％。

實(shí)施例3

瑪俐那總提取物制備方法，包括以下步驟：

稱取瑪俐那干燥果實(shí)約100g，粉碎后，按1g∶5ml的液料比加入水，室溫冷浸提取3次，每次48～72h，合并提取液后，60℃減壓回收溶劑，室溫干燥至恒重，得到瑪俐那總提取物濃縮液29.0g，提取率為28.2％。

實(shí)施例4

瑪俐那第一提取物制備方法，包括以下步驟：

1)按實(shí)施例1所提供的制備方法，得到瑪俐那總提取物浸膏；

2)將瑪俐那總提取物浸膏加水分散，按1:1體積比加入石油醚連續(xù)萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到石油醚相和待萃取水相；

3)將待萃取水相用乙酸乙酯以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第一有機(jī)溶劑相和第一水相；將第一有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第一提取物1.0g，收率1.0％。

實(shí)施例5

瑪俐那第一提取物制備方法，包括以下步驟：

1)按實(shí)施例2所提供的制備方法，得到瑪俐那總提取物浸膏；

2)將瑪俐那總提取物浸膏加水分散，按1:1體積比加入石油醚連續(xù)萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到石油醚相和待萃取水相；

3)將待萃取水相用乙酸乙酯以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第一有機(jī)溶劑相和第一水相；將第一有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第一提取物0.9g，收率0.9％。

實(shí)施例6

瑪俐那第一提取物制備方法，包括以下步驟：

1)按實(shí)施例3所提供的制備方法，得到瑪俐那總提取物濃縮液；

2)將瑪俐那總提取物濃縮液按1:1體積比加入石油醚連續(xù)萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到石油醚相和待萃取水相；

3)將待萃取水相用乙酸乙酯以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第一有機(jī)溶劑相和第一水相；將第一有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第一提取物0.7g，收率0.7％。

實(shí)施例7

瑪俐那第二提取物制備方法，包括以下步驟：

1～3)按實(shí)施例4中步驟1)、2)、3)所提供的制備方法，得到第一水相；

4)將第一水相用正丁醇以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第二有機(jī)溶劑相和水相部分；第二有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第二提取物4.0g，收率3.9％。

實(shí)施例8

瑪俐那第二提取物制備方法，包括以下步驟：

1～3)按實(shí)施例5中步驟1)、2)、3)所提供的制備方法，得到第一水相；

4)將第一水相用正丁醇以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第二有機(jī)溶劑相和水相部分；第二有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第二提取物3.6g，收率3.6％。

實(shí)施例9

瑪俐那第二提取物制備方法，包括以下步驟：

1～3)按實(shí)施例6中步驟1)、2)、3)所提供的制備方法，得到第一水相；

4)將第一水相用正丁醇以1:1體積比萃取至萃取液呈無(wú)色(萃取3～5次)，對(duì)應(yīng)得到第二有機(jī)溶劑相和水相部分；第二有機(jī)溶劑相濃縮干燥，得到瑪俐那第二提取物3.3g，收率3.2％。

由實(shí)施例可知，95％甲醇為提取溶劑，乙酸乙酯為第一有機(jī)溶劑，正丁醇為第二有機(jī)溶劑時(shí)各部分提取物得率最高。

二、瑪俐那提取物降脂和促消化功能驗(yàn)證試驗(yàn)

1、降低小鼠急性高血脂實(shí)驗(yàn)：

實(shí)驗(yàn)方法：取50只昆明小鼠，體重25±3克，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、樣品高劑量組、樣品中劑量組和樣品低劑量組。陽(yáng)性對(duì)照組給予非諾貝特100mg/kg，模型組對(duì)應(yīng)給予空白溶劑5％阿拉伯樹(shù)膠水溶液，樣品為瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物，樣品高、中、低劑量組分別給予樣品300mg/kg、150mg/kg、75mg/kg，各組分別連續(xù)灌胃給藥7日。末次灌胃前10小時(shí)，各組老鼠禁食不禁水，腹腔注射75％卵黃乳液造模，末次給藥后2小時(shí)眼眶采血，全血離心取上清，以酶法測(cè)定小鼠血漿甘油三酯和總膽固醇水平。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，參見(jiàn)表1和表2：

表1瑪俐那第一提取物對(duì)急性高血脂小鼠血脂的影響(n＝10)

表2瑪俐那第二提取物對(duì)急性高血脂小鼠血脂的影響(n＝10)

注：與模型組比較，**表示有顯著性差異且p<0.01，^*表示有顯著性差異且p<0.05。

由表1可知，瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物對(duì)小鼠血漿甘油三酯水平降低效果明顯，樣品高、中、低劑量(75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg)組與對(duì)照組相比均有顯著性差異(p<0.05)，且與陽(yáng)性對(duì)照非諾貝特組相比無(wú)顯著性差異，說(shuō)明降低效果均與非諾貝特相當(dāng)。該實(shí)驗(yàn)表明，瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物均具有很好的降低急性高血脂小鼠血漿甘油三酯水平的作用，并且在低于陽(yáng)性藥非諾貝特劑量下(75mg/kgvs100mg/kg)即可顯示相同程度的效果。

另外，體外實(shí)驗(yàn)證明瑪俐那不具有胰脂肪酶抑制活性和hmg-coa還原酶抑制活性，其降血脂作用機(jī)制獨(dú)特，有待深入研究。從化學(xué)成分方面，通過(guò)薄層色譜法檢識(shí)，瑪俐那與山楂屬常見(jiàn)品種相比具有一定的差異性，推測(cè)二者發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)不同。

2、小鼠胃腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)方法：取50只昆明小鼠，體重25±3克，隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組，樣品高劑量組、樣品中劑量組和樣品低劑量組，每組10只。樣品為瑪俐那總提取物，樣品高、中、低劑量組分別給予樣品500mg/kg、250mg/kg、125mg/kg，對(duì)照組對(duì)應(yīng)給予空白溶劑5％阿拉伯樹(shù)膠水溶液，各組分別灌胃給藥，半小時(shí)后，給予5％的活性炭溶液，30min后脫頸處死小鼠，取出腸道，測(cè)量小鼠幽門(mén)至活性炭推進(jìn)前沿距離(l1)和幽門(mén)至盲腸全長(zhǎng)(l2)，計(jì)算活性炭推進(jìn)距離占整個(gè)腸段長(zhǎng)度的百分比。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，參見(jiàn)表3：

表3瑪俐那總提取物對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)的作用(n＝10)

注：與模型組比較，**表示有顯著性差異且p<0.01，^*表示有顯著性差異且p<0.05。

結(jié)果顯示，瑪俐那總提取物對(duì)小鼠腸推進(jìn)具有明顯促進(jìn)作用，當(dāng)劑量達(dá)到250mg/kg時(shí)，樣品組與對(duì)照組數(shù)據(jù)比較有顯著性差異(p<0.05)，即有明顯促進(jìn)腸推進(jìn)效果，500mg/kg劑量下效果顯著(p<0.01)，促進(jìn)效果明顯增強(qiáng)。說(shuō)明瑪俐那總提取物具有明顯促消化作用。

以上述相同實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，參見(jiàn)表4和表5：

表4瑪俐那第一提取物對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)的作用(n＝10)

表5瑪俐那第二提取物對(duì)小鼠胃腸推進(jìn)的作用(n＝10)

注：與模型組比較，**表示有顯著性差異且p<0.01，^*表示有顯著性差異且p<0.05。

瑪俐那第二提取物125mg/kg劑量即可明顯提升小鼠腸道推進(jìn)率，且大于80％(p<0.05)，隨著劑量增大，推進(jìn)率明顯增大，作用較瑪俐那總提取物更強(qiáng)；瑪俐那第一提取物在500mg/kg劑量下亦可表現(xiàn)顯著的促進(jìn)作用，推進(jìn)率可達(dá)88.4±4.5％(p<0.01)。說(shuō)明瑪俐那第一提取物和瑪俐那第二提取物均具有明顯的促消化作用。

綜上所述，本發(fā)明制備的瑪俐那提取物具有明顯的降血漿甘油三酯作用和促進(jìn)胃腸推進(jìn)作用，能夠制備成為具有降脂和促消化功能的藥物和/或保健品。