本發(fā)明屬于中醫(yī)藥領域，具體涉及一種基于伴生原理制備的藥物組合物及其在戒毒中應用。
背景技術：
毒品不僅危害吸食者本人的身體健康、心理健康，而且危及到家庭的幸福安寧。毒品問題已經(jīng)成為威脅社會治安和社會穩(wěn)定的一個重要因素。目前，普遍采用的戒毒方法主要有兩種：一是人為的生理強制性硬脫毒法，例如泰國推行的水桶排水法、印度的強行軍治療法、中國的關押強制勞動法等，二是藥物戒毒法，一般采用阿片受體激動劑或拮抗劑。生理強制性硬脫毒法讓患者承受較大身體痛苦的條件下，依靠時間來消耗積聚在自身體內(nèi)的生物堿毒素，并不能完全清楚患者體內(nèi)的毒素，復吸率高達90％，藥物戒毒法如美沙酮、阿片、丁丙諾非、鹽酸二氫埃托啡等容易造成患者對這些藥物產(chǎn)生依賴，加之這些藥物價格較高，普通患者是難于承受的。中藥戒毒具有多靶點、無成癮性等的特點，被認為是藥物戒毒的良方，逐漸為人們所重視。申請?zhí)?01410388420.1的中國發(fā)明專利中公開了一種戒毒純中藥制劑，戒毒鎮(zhèn)痛效果良好，但是其并未指明該中藥制劑的主效成分及含有的具體化學成分。
本發(fā)明基于植物提取物伴生原理：中藥提取物可分為基本活性物質(有效成分、有效部位)與伴生物質(輔助成分、無效成分、組織成分)，基本活性物質與其制劑的治療特性完全或大體相關聯(lián)。伴生物質可分為附加物質(輔助成分、部分無效成分)和無活性副產(chǎn)物(部分無效成分、組織成分)。附加物質可增強或減弱基本活性物質的作用；無活性副產(chǎn)物無藥理作用，其存在往往是不期望的。伴生物質可改變基本活性物質的理化性質，從而影響其生物藥劑學參數(shù)，特別是影響活性物質從藥物處方或植物提取物中溶出和進一步吸收。以植物藥為主體的中藥含復方，其提取物不僅具有上述體系的基本屬性，還因處方“君、臣、佐、使”的配伍原理賦予“伴生物質”更豐富的內(nèi)涵和更具彈性的廣闊空間。一方面，提取物中“臣、佐、使”藥貢獻的部分可作為基本活性物質與“君”藥的有關成分共同發(fā)揮多靶點治療作用，從藥物動力學角度而言，“君、臣、佐、使”藥中的效應成分則可能影響君藥中有效成分的吸收、分布、消除；另一方面，與基本活性物質共存的多種伴生物質，又因具有某些獨特的性質而充當前者的天然輔料，對基本活性物質起著促進溶解與吸收的作用。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明基于植物提取物伴生原理，提供一種藥物組合物，該組合物包括a、b、c、d組分，其中組分a為高烏頭和川芎的提取物；組分b為延胡索和西洋參的提取物；組分c為草珊瑚和甘草的提取物；組分d為牛黃和維生素b6。
上述藥物組合物作為整體，按重量份計，組分a提取物使用高烏頭1-10份，川芎0.1-5份；組分b提取物使用延胡索1-15份，西洋參1-20份；組分c提取物使用草珊瑚1-10份，甘草1-10份；組分d中含牛黃0.01-0.5份，維生素b60.01-0.5份。
上述藥物組合物作為整體，按重量份計，優(yōu)選組分a提取物使用高烏頭1-5份，川芎0.5-3份；組分b提取物使用延胡索2-7份，西洋參3-9份；組分c提取物使用草珊瑚1-5份，甘草2-6份；組分d中含牛黃0.05-0.2份，維生素b60.05-0.2份。
本發(fā)明利用植物提取物伴生原理制備的上述藥物組合物中，組分a中基本活性物質來自高烏頭，伴生物質來自川芎，即高烏頭為主效植物藥，川芎為伴生植物藥；組分b中基本活性物質來自延胡索，伴生物質來自西洋參，即延胡索為主效植物藥，西洋參為伴生植物藥；組分c中基本活性物質來自草珊瑚，伴生物質來自甘草，即草珊瑚為主效植物藥，甘草為伴生植物藥；組分d為聯(lián)合用藥成分。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分a提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)取主效植物藥高烏頭(aconitumsinomontanumnakai)1-10份和伴生植物藥川芎(ligusticumchuanxionghort)0.1-5份，粉碎混勻，得物料，上述份為重量份；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水，密閉浸潤，加入無水乙醇提取，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用有機溶劑萃取1-5次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，真空干燥得組分a提取物，(經(jīng)hplc分析組分a提取物中的主要成分為高烏甲素和川芎嗪)。
步驟(1)中所述的粉碎，優(yōu)選粉碎粒度為10-200目；步驟(2)中所述氨水的用量以充分浸潤物料為宜，所述密閉浸潤時間優(yōu)選10-30分鐘，所述無水乙醇的用量為物料質量的3-8倍，所述提取方式選自超聲提取或浸泡提取，提取溫度為室溫至60℃，超聲提取時間為5-30分鐘，超聲頻率為30-60khz，浸泡提取時間為2-6小時；步驟(3)所述的鹽酸優(yōu)選質量分數(shù)為1-3％的鹽酸，所述有機溶劑優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯中的一種；所述真空干燥溫度選自室溫至50℃，真空干燥時間優(yōu)選12-24小時。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分a提取物的制備方法的另一優(yōu)選實施方案，其特征在于步驟(1)中使用高烏頭1-5份，川芎0.5-3份，其他步驟及參數(shù)同上。
本發(fā)明的另一實施方案提供上述組分a提取物在制備中藥戒毒藥物中的應用。
本發(fā)明的另一實施方案提供一種中藥戒毒藥物，其特征在于以組分a提取物作為有效成分。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分b提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)取主效植物藥延胡索(corydalisyanhusuow.t.wangexz.y.suetc.y.)1-15份和伴生植物藥西洋參(panaxquinquefoliusl)1-20份，粉碎混勻，得物料，上述份為重量份；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入醋酸溶液和水，室溫下浸泡提取1-4小時后，再加熱回流提取1-3小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，真空干燥得組分b提取物。(經(jīng)hplc分析組分b提取物中的主要成分為延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1)。
步驟(1)中所述的粉碎，優(yōu)選粉碎粒度為10-200目；步驟(2)中所述醋酸溶液的質量分數(shù)為0.1％-12.0％，醋酸溶液的用量與水相同，均為步驟(1)得到物料質量的2-5倍，所述真空干燥溫度選自室溫至50℃，真空干燥時間優(yōu)選12-24小時。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分b提取物的制備方法的另一優(yōu)選實施方案，其特征在于步驟(1)中使用延胡索2-7份，西洋參3-9份，其他步驟及參數(shù)同上。
本發(fā)明的另一實施方案提供上述組分b提取物在制備中藥戒毒藥物中的應用。
本發(fā)明的另一實施方案提供一種中藥戒毒藥物，其特征在于以組分b提取物作為有效成分。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分c提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)取主效植物藥草珊瑚(sarcandraglabra(thunb.)naka)1-10份和伴生植物藥甘草(glycyrrhizauralensisfisch)1-10份，粉碎混勻，得物料，上述份為重量份；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入乙醇溶液提取，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，真空干燥得組分c提取物。(經(jīng)hplc分析組分c提取物中的主要成分為延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸)。
步驟(1)中所述的粉碎，優(yōu)選粉碎粒度為10-200目；步驟(2)中所述的乙醇溶液選自體積分數(shù)為60％-90％的乙醇溶液，乙醇溶液的用量為物料質量的3-8倍，所述提取方式選自超聲提取或浸泡提取，提取溫度為室溫至60℃，超聲提取時間為5-30分鐘，超聲頻率為30-60khz，浸泡提取時間為1-6小時；所述真空干燥溫度選自室溫至50℃，真空干燥時間優(yōu)選12-24小時。
本發(fā)明提供上述藥物組合物中組分c提取物的制備方法的另一優(yōu)選實施方案，其特征在于步驟(1)中使用草珊瑚1-5份，甘草2-6份，其他步驟及參數(shù)同上。
本發(fā)明的另一實施方案提供上述組分c提取物在制備中藥戒毒藥物中的應用。
本發(fā)明的另一實施方案提供一種中藥戒毒藥物，其特征在于以組分c提取物作為有效成分。
本發(fā)明的另一實施方案提供本發(fā)明的藥物組合物在制備戒毒藥物中的應用。
本發(fā)明所述的藥物組合物除a、b、c、d組分外，還可包括藥用輔料，例如注射用水、藥用載體、表面活性劑、稀釋劑、賦形劑、抗氧劑、穩(wěn)定劑、增溶劑等。
本發(fā)明的另一實施方案提供一種藥物組合物的制備方法，其特征在于按照主效植物藥、伴生植物藥及聯(lián)合用藥成分在藥物組合物中的重量份，將組分a提取物、組分b提取物、組分c提取物和聯(lián)合用藥成分(即牛黃和維生素b6)按照制藥領域技術規(guī)范和要求分別制備成符合臨床治療和戒毒毒癮需求的制劑及其適宜的各種規(guī)格與劑型(包括固體制劑和液體制劑)如緩釋、控釋和腸溶性膠囊、片劑、混懸劑、微乳劑、亞微乳劑或含有與之相同單一及多成分組合性各種注射劑。
本發(fā)明藥物組合物涉及到的劑型的制備方法，屬于藥劑學領域常規(guī)的制備方法，是本領域技術人員根據(jù)現(xiàn)有技術(例如藥典、教科書及制藥領域的其他技術規(guī)范)就可以實現(xiàn)制備，本發(fā)明對上述劑型的常規(guī)制備方法不再贅述。
本發(fā)明所述牛黃包括牛黃和人工牛黃。
附圖說明
圖1a:10種混合對照品hplc譜圖；b：組合物1的hplc譜圖；c：組合物9的hplc譜圖；峰1-延胡索酸、峰2-琥珀酸、峰3-川芎嗪、峰4-東莨菪堿、峰5-延胡索乙素、峰6-延胡索甲素、峰7-高烏甲素、峰8-人參皂苷rg1、峰9-甘草酸、峰10-人參皂苷rb1。
具體實施方式
為了便于對本發(fā)明的進一步理解，下面提供的實施例對其做了更詳細的說明。但是這些實施例僅供更好地理解發(fā)明而并非用來限定本發(fā)明的范圍或實施原則，本發(fā)明的實施方式不限于以下內(nèi)容。
實施例1組分a提取物的制備
例1
(1)取高烏頭1.0kg和川芎10g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水(約15-20ml)，密閉浸潤10-20分鐘，加入無水乙醇(約3.0kg)，室溫下超聲提取，提取時間為30分鐘，超聲頻率為30khz，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物(約200g)；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入質量分數(shù)為1％鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用氯仿萃取3次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥12小時得組分a提取物(約120g，簡稱產(chǎn)品a1，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品a1的主要成分為高烏甲素和川芎嗪)。
例2
(1)取高烏頭1.0kg和川芎5.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水(約100ml)，密閉浸潤20-30分鐘，加入無水乙醇(約48kg)，60℃下浸泡提取，浸泡時間為6小時，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物(約240g)；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入質量分數(shù)為3％鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用乙酸乙酯萃取5次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得組分a提取物(約135g，簡稱產(chǎn)品a2，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品a2的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品a1的基本一致，主要成分為高烏甲素和川芎嗪)。
例3
(1)取高烏頭10kg和川芎5.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水(約200ml)，密閉浸潤30分鐘，加入無水乙醇(約50kg)，60℃下超聲提取，提取時間為5分鐘，超聲頻率為60khz，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物(約2100g)；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入質量分數(shù)為3％鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用二氯甲烷萃取2次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥18小時得組分a提取物(約1.25kg，簡稱產(chǎn)品a3，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品a3的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品a1的基本一致，主要成分為高烏甲素和川芎嗪)。
例4
(1)取高烏頭500g和川芎300g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水(約12ml)，密閉浸潤15分鐘，加入無水乙醇(約4kg)，室溫下超聲提取，提取時間為15分鐘，超聲頻率為60khz，，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物(約98g)；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入質量分數(shù)為3％鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用乙醚萃取4次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥18小時得組分a提取物(約61g，簡稱產(chǎn)品a4，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品a4的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品a1的基本一致，主要成分為高烏甲素和川芎嗪)。
例5
(1)取高烏頭1.0kg和川芎8g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中噴入適量氨水(約15-20ml)，密閉浸潤10-20分鐘，加入無水乙醇(約3.0kg)，室溫下超聲提取，提取時間為30分鐘，超聲頻率為30khz，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇得粗提物(約115g)；
(3)向步驟(2)得到的粗提物中加入質量分數(shù)為1％鹽酸調ph至2-5，再加入氨水調ph至9-11，然后用氯仿萃取3次，合并有機相，減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥12小時得組分a提取物(約72g，簡稱產(chǎn)品a5，經(jīng)hplc分析雖然產(chǎn)品a5中仍含有高烏甲素和川芎嗪，但產(chǎn)品a5的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品a1的一致性較差；分析可能是伴生植物藥川芎用量減少，導致某些增加主效植物藥中基本活性物質溶解度的伴生物質減少，進而導致產(chǎn)品a5的hplc圖譜的差異)。
實施例2組分b提取物的制備
例1
(1)取延胡索1.0kg和西洋參1.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入質量分數(shù)為0.1％醋酸溶液(4.0kg)和水(4.0kg)，室溫下浸泡提取1小時后，再加熱回流提取3小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥12小時得組分b提取物(約145g，簡稱產(chǎn)品b1，經(jīng)hplc分析，產(chǎn)品b1的主要成分為延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1)。
例2
(1)取延胡索1.5kg和西洋參100g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入質量分數(shù)為12％醋酸溶液(8.0kg)和水(8.0kg)，室溫下浸泡提取4小時后，再加熱回流提取1小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得組分b提取物(約200g，簡稱產(chǎn)品b2，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品b2的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品b1的基本一致，主要成分為延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1)。
例3
(1)取延胡索2.0kg和西洋參9.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入質量分數(shù)為5％醋酸溶液(40.0kg)和水(40.0kg)，室溫下浸泡提取2小時后，再加熱回流提取2小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥18小時得組分b提取物(約350g，簡稱產(chǎn)品b3，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品b3的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品b1的基本一致，主要成分為延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1)。
例4
(1)取延胡索5.0kg和西洋參3.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入質量分數(shù)為1％醋酸溶液(25kg)和水(25kg)，室溫下浸泡提取4小時后，再加熱回流提取3小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，40℃下真空干燥16小時得組分b提取物(約720g，簡稱產(chǎn)品b4，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品b4的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品b1的基本一致，主要成分為延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1)。
例5
(1)取延胡索1.5kg和西洋參90g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入質量分數(shù)為12％醋酸溶液(8.0kg)和水(8.0kg)，室溫下浸泡提取4小時后，再加熱回流提取1小時，自然降至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得組分b提取物(約148g，簡稱產(chǎn)品b5，經(jīng)hplc分析雖然產(chǎn)品b5中仍含有延胡索乙素和人參皂苷rg1、rb1，但產(chǎn)品b5的hplc圖譜與例2中產(chǎn)品b2的一致性較差；分析可能是伴生植物藥西洋參用量減少，導致某些增加主效植物藥中基本活性物質溶解度的伴生物質減少，進而導致產(chǎn)品b5的hplc圖譜的差異)。
實施例3組分c提取物的制備
例1
(1)取草珊瑚1.0kg和甘草1.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入體積分數(shù)為60％的乙醇溶液(6.0kg)，室溫下超聲提取，提取時間為30分鐘，超聲頻率為30khz，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥12小時得組分c提取物(約160g，簡稱產(chǎn)品c1，經(jīng)hplc分析組產(chǎn)品c1的主要成分為延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸)。
例2
(1)取草珊瑚10kg和甘草1.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入體積分數(shù)為90％的乙醇溶液(88kg)，60℃下浸泡提取，浸泡時間為6小時，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得組分c提取物(約1.52kg，簡稱產(chǎn)品c2，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品c2的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品c1的基本一致，主要成分為延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸)。
例3
(1)取草珊瑚1.0kg和甘草6.0kg，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入體積分數(shù)為85％的乙醇溶液(66kg)，60℃下超聲提取，提取時間為5分鐘，超聲頻率為60khz，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，40℃下真空干燥24小時得組分c提取物(約182g，簡稱產(chǎn)品c3，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品c3的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品c1的基本一致，主要成分為延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸)。
例4
(1)取草珊瑚500g和甘草200g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入體積分數(shù)為70％的乙醇溶液(3.5kg)，60℃下超聲提取，提取時間為10分鐘，超聲頻率為60khz，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，50℃下真空干燥16小時得組分c提取物(約86g，簡稱產(chǎn)品c4，經(jīng)hplc分析產(chǎn)品c4的hplc圖譜與例1中產(chǎn)品c1的基本一致，主要成分為延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸)。
例5
(1)取草珊瑚10kg和甘草800g，粉碎至10-200目，混勻，得物料；
(2)向步驟(1)得到的物料中加入體積分數(shù)為90％的乙醇溶液(88kg)，60℃下浸泡提取，浸泡時間為6小時，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得組分c提取物(約960g，簡稱產(chǎn)品c5，經(jīng)hplc分析雖然產(chǎn)品c5中仍含有延胡索酸、琥珀酸、東莨菪堿、甘草酸，但產(chǎn)品c5的hplc圖譜與例2中產(chǎn)品c2的一致性較差；分析可能是伴生植物藥甘草用量減少，導致某些增加主效植物藥中基本活性物質溶解度的伴生物質減少，進而導致產(chǎn)品c5的hplc圖譜的差異)。
實施例4常規(guī)提取物的制備
為比較采用伴生原理制備的提取物中化學成分發(fā)生集聚效應的優(yōu)勢，特將產(chǎn)品a1、b1、c1及產(chǎn)品a3、b3、c3相同配方按照目前常規(guī)中藥提取方法制備常規(guī)提取物a和常規(guī)提取物b。
例1
取高烏頭(1.0kg)、延胡索(1.0kg)、草珊瑚(1.0kg)、川芎(10g)、西洋參(1.0kg)、甘草(1.0kg)六味飲片混勻，粉碎至10-200目，混勻，得物料；加入體積分數(shù)70％乙醇溶液，60℃下超聲提取，提取時間為30分鐘，超聲頻率為60khz，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得常規(guī)提取物a(480g，hplc分析，未檢測到川芎嗪、東莨菪堿和高烏甲素)。
例2
取高烏頭(10kg)、延胡索(2.0kg)、草珊瑚(1.0kg)、川芎(5.0kg)、西洋參(9.0kg)、甘草(6.0kg)六味飲片混勻，粉碎至10-200目，混勻，得物料；加入體積分數(shù)90％乙醇溶液，60℃下超聲提取，提取時間為30分鐘，超聲頻率為60khz，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮物，室溫下真空干燥24小時得常規(guī)提取物b(1.62kg，hplc分析，基本與常規(guī)提取物a的圖譜一致，仍未檢測到川芎嗪、東莨菪堿和高烏甲素)。
本發(fā)明實施例1-4中使用的高烏頭、延胡索、草珊瑚、川芎、西洋參、甘草均為中藥飲片。
實施例5藥物組合物的制備
采用藥物制劑領域常規(guī)的方法，可將實施例1-4制備的提取物、牛黃、維生素b6、任選藥用輔料(例如藥用載體、表面活性劑、稀釋劑、賦形劑、抗氧劑、穩(wěn)定劑、增溶劑等)按照組合物中的重量份，制備成固體制劑(例如片劑、膠囊劑等)、液體制劑(如口服液、注射劑等)。
本發(fā)明以下制備例中片劑采用的通用制備方法為：提取物(a、b、c)、牛黃、維生素b6與適量藥用輔料(無水乙醇、羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂)混勻、壓片制成片劑；注射劑(包括混懸型注射劑)的通用制備方法為：提取物(a、b、c)、牛黃、維生素b6與適量藥用輔料(注射用水、吐溫-80、聚乙二醇400)混合攪拌均勻，濾過，除菌，灌封至西林瓶中，得注射劑。
組合物1：將產(chǎn)品a1、產(chǎn)品b1、產(chǎn)品c1、人工牛黃(10g)、維生素b6(10g)制備成片劑，即組合物1。
組合物2：將產(chǎn)品a2、產(chǎn)品b1、產(chǎn)品c1、人工牛黃(50g)、維生素b6(20g)制備成注射劑，即組合物2。
組合物3：將產(chǎn)品a3、產(chǎn)品b3、產(chǎn)品c3、人工牛黃(200g)、維生素b6(50g)制備成片劑，即組合物3。
組合物4：將產(chǎn)品a4、產(chǎn)品b2、產(chǎn)品c4、人工牛黃(50g)、維生素b6(10g)制備成片劑，即組合物4。
組合物5：將產(chǎn)品a2、產(chǎn)品b1、產(chǎn)品c2、人工牛黃(100g)、維生素b6(20g)制備成片劑，即組合物5。
組合物6：將產(chǎn)品a5、產(chǎn)品b1、產(chǎn)品c1、人工牛黃(10g)、維生素b6(10g)制備成片劑，即組合物6。
組合物7：將產(chǎn)品a4、產(chǎn)品b5、產(chǎn)品c4、人工牛黃(50g)、維生素b6(10g)制備成片劑，即組合物7。
組合物8：將產(chǎn)品a2、產(chǎn)品b1、產(chǎn)品c5、人工牛黃(100g)、維生素b6(20g)制備成片劑，即組合物8。
組合物9：將常規(guī)提取物a與人工牛黃(10g)、維生素b6(10g)制備成片劑，即組合物9。
組合物10：將常規(guī)提取物b與人工牛黃(200g)、維生素b6(50g)制備成片劑，即組合物10。
實施例6組合物1-10(實施例5制備的)對嗎啡依賴小鼠的戒斷作用
動物：昆明小鼠1000只，雄性，6周齡，體重20-24g；由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)合格證號：scxk(軍)字第2012-0007號。
試劑和儀器：組合物1-10由申請者按實施例5中配方及常規(guī)方法制備，批號為20161103，鹽酸美沙酮口服溶液(天津市中央藥業(yè)有限公司)，批號：20161201，規(guī)格：10ml∶10mg，臨用時以生理鹽水稀釋成0.25mg/ml，灌胃(ig)；鹽酸嗎啡注射液(沈陽第一制藥廠)，規(guī)格：10mg/ml，批號：20161102；鹽酸納絡酮注射液(北京四環(huán)醫(yī)藥科技股份有限公司)，規(guī)格：0.4mg/ml，批號：20161202；0.6％醋酸溶液(臨用前取冰醋酸1.2ml加蒸餾水至200ml)。
組合物1-10對小鼠嗎啡成癮戒斷作用：按文獻[1-2]將小鼠隨機分12組，每組12只，分別為模型組、美沙酮陽性組、組合物1、組合物2、組合物3、組合物4、組合物5、組合物6、組合物7、組合物8、組合物9、組合物10。各組小鼠每12小時皮下注射(sc)嗎啡100mg/kg，共14次(7天)，造成嗎啡成癮模型。美沙酮組給藥劑量為5mg/kg，組合物1-10給藥劑量為75mg/kg，模型組灌胃(ig)等體積生理鹽水。各組分別于催癮前3天上午9時給藥，1次/日，催癮前再給藥1次。末次給藥6小時后sc納絡酮5mg/kg催癮，立即稱體重后把小鼠放入40×30cm圓桶內(nèi)，觀察記錄納絡酮注射后30min內(nèi)的跳躍動物數(shù)和每個小鼠的跳躍次數(shù)，1天后再稱體重1次，計算2次體重差及動物跳躍次數(shù)；結果見表1-2。
表1組合物1-10抑制小鼠嗎啡成癮戒斷后的跳躍率
與模型組和美沙酮組比較：*p<0.05，**p<0.01。
表2組合物1-10對小鼠嗎啡成癮戒斷后的跳躍和體重的影響
與模型組比較：*p<0.05，**p<0.01。
上述活性測試結果表明，組合物1-5能明顯抑制小鼠嗎啡成癮戒斷后的跳躍發(fā)生率。組合物1-5給藥3天對小鼠嗎啡成癮戒斷后的跳躍發(fā)生率、跳躍次數(shù)及戒斷后的體重恢復均有顯著作用；其作用顯著優(yōu)于組合物6-10和美沙酮組，其中組合物6-8的活性優(yōu)于組合物9-10及美沙酮組。
組合物1-5與組合物6-8之間的活性差異，說明本發(fā)明組合物中提取物a、b、c中主效植物藥與伴生植物藥比例的選擇對組合物的療效，起到至關重要的作用；組合物1-5與組合物9-10(常規(guī)提取物)之間的活性差異，說明本發(fā)明基于植物提取物伴生原理得到的藥物組合物中確實含有某些伴生物質可增強基本活性物質的作用。
實施例7
為進一步探索實施例6中組合物1-5與組合物6-10的活性差異，對組合物1-10進行hplc分析。
實驗材料與儀器
(1)對照品與試劑
延胡索酸(含量>98％)、琥珀酸(含量>98％)、川芎嗪(含量>98％)、東莨菪堿(含量>98％)、高烏甲素(含量>98％)、延胡索乙素(含量：>98％)、延胡索甲素(含量：>98％)、人參皂苷rb1(含量：>98％)、甘草酸(含量：>98％)、人參皂苷rb1(含量：>98％)購自中國藥品生物制品檢定所；乙睛(色譜純)購自美國fisher科學世界公司；磷酸、三乙胺(色譜純)購自天津市科密歐化學試劑有限公司；濃硫酸、naoh、95％乙醇(分析純)購自天津紅巖化學試劑廠；乙酸乙酯、氯仿購自天津紅巖化學試劑廠；去離子水由millipore水純凈系統(tǒng)自制。
(2)主要儀器
lc-2010ht型高效液相色譜系統(tǒng)，日本島津公司；tgl-16gb型低速離心機，上海安亭科學儀器廠；me2355型電子天平，德國sartorius公司。
實驗方法
(1)hplc檢測條件：美國菲羅門反相鍵合硅膠-c18色譜柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)和c18預柱(10mm×4.6mm，5μm)；流動相為乙睛(ⅰ)-0.1％磷酸(用三乙胺調至ph5.7；ⅱ)；梯度洗脫：0～18min，20％??；10～30min，15～25％?。?0～50min，20～80％??；40～60min，80％ⅰ；流速lml/min；檢測波長280nm；柱溫30℃；進樣量10μl。
(2)檢測樣品制備
①對照品溶液制備：分別精密稱取延胡索酸5.0mg、琥珀酸5.0mg、川芎嗪5.0mg、東莨菪堿5.0mg、延胡索乙素5.0mg、延胡索甲素5.0mg、高烏甲素5.0mg、人參皂苷rg15.0mg、甘草酸5.0mg、人參皂苷rb15.0mg對照品于10ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，作為母液；分別精密量取上述母液適量，置于2ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，并搖勻，制成梯度稀釋混合對照品溶液，置于4℃冰箱保存。
②組合物溶液制備：分別精密稱取組合物1-10樣品5.0mg，加乙腈定容至5ml量瓶，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得組合物溶液；按照hplc檢測條件測定。
檢測結果
(1)標準曲線
取“對照品溶液制備”項下系列混合標準品溶液，按“hplc檢測條件”進行測定。以延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、東莨菪堿、延胡索乙素、延胡索甲素、高烏甲素、人參皂苷rg1、甘草酸、人參皂苷rb1的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸(n＝3)；結果表明，各對照品在一定范圍內(nèi)線性關系良好(表3和圖1中a)。
表3對照品溶液標準曲線(n＝3)
(2)組合物1-10中10種成分的含量
分別對配制的組合物1-10溶液，按“hplc檢測條件”進行測定。結果表明組合物1-5中的hplc圖基本一致(以組合物1的hplc圖為例，見圖1b)，尤其是延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、東莨菪堿、延胡索乙素、延胡索甲素、高烏甲素、人參皂苷rg1等成分的比例基本相同；組合物6、7、8的hplc圖譜各不相同(尤其是在延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、東莨菪堿、延胡索乙素、延胡索甲素、高烏甲素、人參皂苷rg1等成分的比例含量)與組合物1-5的hplc圖譜中上述10種成分的比例含量差異明顯；組合物9-10的hplc圖譜基本一致，其中缺少川芎嗪(峰3)、東莨菪堿(峰4)和高烏甲素(峰7)，而且成分延胡索酸(峰1)、延胡索乙素(峰5)和人參皂苷(峰8、10)和甘草酸(峰9)的相對含量均低于組合物1-5中的相對含量(以組合物9的hplc圖為例，圖1c)。
由于組合物1-5的hplc圖基本一致，且延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、東莨菪堿、延胡索乙素、延胡索甲素、高烏甲素、人參皂苷rg1等成分的比例基本相同。因此，以組合物1為例，組合物1三批重復實驗樣品的檢測及其計算的10種主要成分含量數(shù)據(jù)見表4。
表4組合物1中10種主要成分含量(n＝3，
實施例8
按照實施例7測定的組合物1中10種主要成分的平均值的比例，取對照品延胡索酸(46.7mg)、琥珀酸(25.2mg)、川芎嗪(36.2mg)、東莨菪堿(29.7mg)、延胡索乙素(55.5mg)、延胡索甲素(104.6mg)、高烏甲素(93.2mg)、人參皂苷rg1(20.4mg)、甘草酸(105.6mg)、人參皂苷rb1(28.2mg)、人工牛黃(50mg)、維生素b6(20mg)與適量藥用輔料(無水乙醇、羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂)混勻、壓片制成片劑，即組合物11。
按照實施例6記載的組合物1-10對嗎啡依賴小鼠的戒斷作用的實驗方法，測試組合物11的活性，結果表明組合物11對小鼠嗎啡成癮戒斷后的跳躍發(fā)生率、跳躍次數(shù)顯示出一定的抑制作用，但是其作用明顯低于組合物1-5，略優(yōu)于組合物6-8。
上述實驗結果，進一步證實，本發(fā)明基于植物提取物伴生原理得到的組分a提取物(基本活性物質來自高烏頭，伴生物質來自川芎)、組分b提取物(基本活性物質來自延胡索，伴生物質來自西洋參)、組分c提取物(基本活性物質來自草珊瑚，伴生物質來自甘草)組成的本發(fā)明藥物組合物中含有某些伴生物質可增強基本活性物質的作用，本發(fā)明藥物組合物的藥理作用是單一化學成分組成的組合物無法代替的。
實施例9組合物1、6、9、11對小鼠鎮(zhèn)痛作用
扭體法：按照文獻[3]方法，72只小鼠隨機分成嗎啡組(劑量為50mg/kg)、組合物1、組合物6、組合物9、組合物11(劑量均為75mg/kg)和對照組。小鼠灌胃(ig)，對照組給以等體積生理鹽水；連續(xù)給藥3天，末次ig后30分鐘各組小鼠腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液10ml/kg，觀察ip后出現(xiàn)扭體的時間(潛伏期)和15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體(伸展后肢，腹部收縮內(nèi)凹，臀部抬高)次數(shù)。結果見表5。結果證實組合物1連續(xù)ig3天，能顯著減少ip醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，說明組合物1有顯著鎮(zhèn)痛作用，其作用顯著優(yōu)于組合物6、9和11。
表5組合物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(醋酸扭體法)
與對照組比較：*p<0.05，**p<0.01；與常規(guī)提取物組(組合物9)比較：δp<0.05，δδp<0.01。
實施例10：組合物1對嗎啡依賴大鼠戒斷的thl/th2平衡作用機制
通過檢測大鼠在嗎啡依賴、自然戒斷和給予組合物治療后thl/th2相關細胞因子，探討其對thl/th2平衡的影響，評價本組合物1對阿片類物質依賴和止痛的初步作用機制。具體實驗方法參照文獻：“戒毒中藥玄夏對嗎啡依賴大鼠戒斷過程中th1/th2平衡的影響”，孫莉，等，中國藥物依賴性雜志，2008年第17卷第5期，第337-340頁。
材料與方法
1、動物：成年sd大鼠32只，雄性，6周齡，體重220-240g；由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)合格證號：scxk(軍)字第2012-0007號。
2、試劑和儀器：組合物1，批號20161103；由申請者制備。鹽酸嗎啡，青海制藥廠生產(chǎn)，批號：20161101；刀豆蛋白a(concanavalina，cona)，sigma公司生產(chǎn)：rpmi-1640培養(yǎng)基(含10％胎牛血清、谷氨酰胺2mmol/l，hepes10mmol/l，青霉素100iu/ml，鏈霉素100μg/ml)；大鼠ifn-γ、il-2、il-4和il-6的elisa試劑盒均為美國biosource公司產(chǎn)品；co2細胞孵育箱(napco5400，usa)和sm型酶標分析儀。
實驗方法
1、動物分組與處理方法：大鼠隨機分為對照組、嗎啡依賴組、自然戒斷組和組合物1治療組4組，每組8只。除正常對照組每日兩次(8、16時)sc等容積的生理鹽水外，其余組按文獻[4]方法建立嗎啡依賴模型，每天2次sc嗎啡(8時和l6時)，第1-2天劑量為20mg/kg；第3-5天劑量為30mg/kg；第6-7天劑量為40mg/kg。第8天早8時用20mg/kg劑量一次sc。組合物1治療組于給嗎啡的第4天起每日灌胃(ig)0.15g/kg，直至取脾臟前。于第8天最后一次sc嗎啡后，對照組和嗎啡依賴組大鼠經(jīng)注射戊巴比妥鈉麻醉，在無菌條件下取出脾臟。自然戒斷組和組合物1治療組于停給嗎啡72h后以同法取脾臟。
2、脾細胞懸液的制備：無菌取出的脾臟用冷hank’s液沖洗后，用玻璃組織勻漿器捻碎，過濾后將細胞懸液移到離心管內(nèi)，離心(1200g，10min)，棄上清。加入l0倍體積的tri-nh4cl混合，置室溫10min后，離心(150g，10min)。再用冷hank’s液洗滌細胞2次，最后用含10％胎牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，用臺盼藍染色測細胞存活率并計數(shù)細胞，調節(jié)細胞濃度至5×106ml。
3、細胞因子的測定：將濃度為5×106ml的脾細胞懸液滴人96孔細胞培養(yǎng)板，每孔1ml，每只大鼠的脾細胞懸液滴2孔。每孔內(nèi)加人cona(終濃度為5μg/ml)，將細胞培養(yǎng)板置37℃-5％co2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48h后分別收集每孔中細胞培養(yǎng)上清液，離心、分裝，置-70℃冰箱保存。用elisa測定細胞培養(yǎng)上清液中ifn-γ、il-2、il-4和il-6四種細胞因子的含量。
4、統(tǒng)計方法：測得各細胞因子的水平以
實驗結果
各組大鼠脾細胞培養(yǎng)液經(jīng)cona誘導，從四種細胞因子的測定結果看到，ifn-γ、il-2和il-6三種細胞因子的組間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，il-4組間差異無統(tǒng)計學意義，見表6。
表6大鼠脾細胞上清液中細胞因子水平的比較(n＝8；
與對照組比較：*p<0.05，**p<0.05；與自然戒斷組比較：δp<0.05；與嗎啡依賴組比較：δp<0.05。
實驗結果表明，采用組合物1治療后，thl型細胞因子ifn-γ和il-2能恢復到正常水平，提示組合物1具有抑制大鼠嗎啡依賴時增強了thl型免疫應答，對thl/th2平衡具有顯著調節(jié)作用，說明本發(fā)明組合物的戒斷毒癮作用可能與其調節(jié)thl/th2平衡有關。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考文獻，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領域的技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
參考文獻
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