(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物醫(yī)用敷料及其制備方法。

(二)

背景技術(shù)：

目前，在醫(yī)療領(lǐng)域中，人們還是習(xí)慣采用各種創(chuàng)口貼來進(jìn)行創(chuàng)傷創(chuàng)口的護(hù)理及修復(fù)，而傳統(tǒng)創(chuàng)口貼是處理傷口的首選產(chǎn)品。傳統(tǒng)創(chuàng)口貼由一條長形狀的膠布和一小塊網(wǎng)狀編織的脫脂棉構(gòu)成，盡管它具有價(jià)格低廉、使用便捷等優(yōu)點(diǎn)，傳統(tǒng)創(chuàng)口貼還是具有以下缺點(diǎn)：(1)透氣性差，易使傷口周圍皮膚泛白變皺，不利于傷口愈合；(2)創(chuàng)口貼通過膠布固定在傷口周邊，更換時(shí)易撕扯觸及創(chuàng)面，以及創(chuàng)面肉芽組織易長入脫脂棉的網(wǎng)眼中，更換時(shí)創(chuàng)口貼與創(chuàng)面?zhèn)谡尺B，造成二次損傷并給患者帶來疼痛；(3)不能保持創(chuàng)面濕潤，延遲創(chuàng)面愈合。

針對(duì)傳統(tǒng)創(chuàng)口貼使用中存在的缺陷和問題，近年來出現(xiàn)了一種新型的生物流體敷料膜。生物流體敷料膜主要是將促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)的有效成分與可成膜的高分子材料混合，以涂抹或噴霧的方式，在創(chuàng)口上形成一層透氣保濕的隔離薄膜，保護(hù)創(chuàng)面并形成濕性環(huán)境，此類敷料不需要包扎，覆蓋傷口無縫隙，適用于任意形狀的傷口，也適合人體腔道等難以包扎部位的創(chuàng)口治療。

殼聚糖是廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種天然高分子材料，具有良好的生物相容性、生物降解性、抗菌性、促凝血和促愈合等特點(diǎn)。目前，以殼聚糖為基體的抗菌敷料已有多種，但殼聚糖在水中的溶解性極差，大大限制了其應(yīng)用。

(三)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種成膜速度較快、具有良好生物相容性、抗菌效果好、促進(jìn)傷口愈合、使用便攜、安全可靠的含n-糖基化殼聚糖的流體敷料及其制備方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一種含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，所述敷料由如下原料制成：n-糖基化殼聚糖、5mg/ml生理鹽水、乳酸、聚乙烯醇、去離子水、橄欖油、薄荷腦、質(zhì)量濃度30％雙氧水和體積濃度95％乙醇水溶液；所述n-糖基化殼聚糖與聚乙烯醇和薄荷腦質(zhì)量比為1:2.5-40:0.5-5；所述生理鹽水、乳酸、去離子水、橄欖油、雙氧水和乙醇水溶液體積用量以n-糖基化殼聚糖質(zhì)量計(jì)分別為5-75ml/g、0.5-1.5ml/g、25-200ml/g、0.5-3ml/g、1-7.5ml/g、20-110ml/g。

進(jìn)一步，所述n-糖基化殼聚糖與聚乙烯醇和薄荷腦質(zhì)量比為1:4-20:0.5-4，更優(yōu)選所述n-糖基化殼聚糖與聚乙烯醇和薄荷腦質(zhì)量比為1:5-15:0.5-2.5。

進(jìn)一步，所述生理鹽水、乳酸、去離子水、橄欖油、雙氧水和乙醇水溶液體積用量以n-糖基化殼聚糖質(zhì)量計(jì)分別為25-75ml/g、0.75-1.5ml/g、50-200ml/g、1-3ml/g、2.5-7.5ml/g、40-90ml/g。更優(yōu)選所述生理鹽水、乳酸、去離子水、橄欖油、雙氧水和乙醇水溶液體積用量以n-糖基化殼聚糖質(zhì)量計(jì)分別為25-50ml/g、0.75-1.5ml/g、50-150ml/g、1-2.5ml/g、2.5-5ml/g、40-75ml/g。

本發(fā)明還提供一種所述含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料的制備方法，所述方法為：

(1)底液制備：按配方量，稱取n-糖基化殼聚糖，溶于5mg/ml生理鹽水中，再加入乳酸，攪拌溶解，制得底液；

(2)膜液制備：按配方量，稱取聚乙烯醇加入到去離子水中，在95℃下加熱攪拌2～3h至完全溶解，即得膜液；

(3)將步驟(2)制得的膜液加入到步驟(1)底液中，混合，再依次加入配方量的橄欖油、薄荷腦、質(zhì)量濃度30％雙氧水、體積濃度95％乙醇水溶液，攪拌混合均勻，即得含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料。

本發(fā)明還提供一種所述含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料在制備創(chuàng)傷面愈合藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明n-糖基化殼聚糖制備步驟如下：稱取殼聚糖，加入體積濃度1％乙酸水溶液，室溫下攪拌0.5h，待其充分溶解，再加入4.0殼聚糖氨基當(dāng)量的果糖，30～35℃下磁力攪拌反應(yīng)7h后，加入硼氫化鈉于室溫下還原24h，最后用體積濃度95％乙醇水溶液終止反應(yīng)，將析出產(chǎn)物用無水乙醇洗滌3～4次，離心得沉淀，40℃真空烘干，最后得到n-糖基化殼聚糖，于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆茫凰鲆宜崴芤后w積用量以殼聚糖重量計(jì)為50ml/g，所述果糖與殼聚糖氨基當(dāng)量比為4:1，所述硼氫化鈉與殼聚糖質(zhì)量比為1.7:4。

本發(fā)明制備方法簡單，添加的各組分都具備一定的功效：

n-糖基化殼聚糖，克服了現(xiàn)有技術(shù)中殼聚糖水溶性較差的缺點(diǎn)，且選取脫乙酰度在60％-70％之間的n-糖基化殼聚糖，更能促進(jìn)紅細(xì)胞凝集，從而起到更佳的止血作用；

生理鹽水取代乙酸溶液，作為溶解n-糖基化殼聚糖的溶劑，一方面生理鹽水能用于消毒傷口，另一方面生理鹽水的ph值接近7，改性后的殼聚糖更容易溶于中性溶液中，加速了殼聚糖的溶解速率；

加入乳酸，可以調(diào)節(jié)殼聚糖生物成膜膠的ph值，并且酸性條件有利于乳酸菌的繁殖生長，而對(duì)大腸桿菌等有害微生物產(chǎn)生抑制作用；

聚乙烯醇，是較為常見的水溶性的高分子成膜材料，成膜之后有一定的強(qiáng)度和柔韌性，對(duì)皮膚不會(huì)產(chǎn)生刺激，還具有很好的吸濕性，同時(shí)也具有一定的防水作用；

橄欖油，可作為分散劑，增加膜的柔韌性和可拉伸性，對(duì)傷口具有保濕作用，可防止皮膚皺裂及因皮膚分泌過少引起的瘙癢，可減輕傷口疼痛，促進(jìn)愈合，愈后不留下疤痕。美國、德國等西方國家早已把橄欖油載入藥典；

薄荷腦，常作為賦香劑使用，具有清涼感，同時(shí)可消炎鎮(zhèn)痛止癢，減輕浮腫，添加在敷料中易于被患者接受；

30％雙氧水，常用于醫(yī)用消毒殺菌，其強(qiáng)氧化性可以破壞細(xì)菌的蛋白質(zhì)，使之死亡，另一方面又可以作為致孔劑，雙氧水歧化釋放氧氣而使抗菌膜致孔透氣，加上歧化反應(yīng)會(huì)放熱，能加速抗菌膜固化速度。通常醫(yī)用上使用3％雙氧水，本實(shí)驗(yàn)采用的雙氧水微量，且有添加其他試劑稀釋，最終得到的雙氧水濃度不會(huì)對(duì)皮膚造成刺激傷害；

乙醇溶劑，主要利用乙醇的迅速揮發(fā)特性，使本發(fā)明產(chǎn)品能夠在創(chuàng)面上快速成膜，有效保護(hù)創(chuàng)面。

本發(fā)明提供的一種含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，它采用的是改性之后的n-糖基化殼聚糖，大大提高了殼聚糖的水溶性，此敷料主要由底液和膜液組成，底液為n-糖基化殼聚糖的生理鹽水溶液，其中n-糖基化殼聚糖在底液中的濃度為10～50mg/ml，所述膜液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％的聚乙烯醇溶液。

與現(xiàn)有的傷口敷料相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：

(1)具有止血、抑菌、鎮(zhèn)痛、促進(jìn)傷口愈合等功效；

(2)具有良好的透氣性和防水性；

(3)不受傷口大小、形狀、所在部位的限制，成膜有一定彈性，從而涂覆部位活動(dòng)自如；

(4)良好的生物相容性及生物安全性，無刺激性，不產(chǎn)生過敏等癥狀；

(5)制備工藝簡單、成本低廉，且攜帶和使用均方便。

(四)具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此：

實(shí)施例1

n-糖基化殼聚糖的制備：稱取殼聚糖4.0g，加入體積濃度1％乙酸水溶液200ml，室溫(25-30℃)下攪拌0.5h，待其充分溶解，再加入4.0殼聚糖氨基當(dāng)量的果糖，30～35℃下磁力攪拌反應(yīng)7h后，加入1.7g硼氫化鈉于室溫下還原24h，最后用體積濃度95％乙醇水溶液終止反應(yīng)，將析出產(chǎn)物用無水乙醇洗滌3～4次，離心得沉淀，40℃真空烘干，獲得n-糖基化殼聚糖7.5g，于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例2

含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，由如下配比的原料制成：

其制備的具體步驟是：

(1)底液制備：稱取n-糖基化殼聚糖0.2g，溶于5ml的5mg/ml生理鹽水中，再加入0.15ml乳酸，攪拌溶解，制得濃度為40mg/ml的底液；

(2)膜液制備：稱取聚乙烯醇(聚合度1750±50)1g，加入到10ml去離子水中，在95℃下加熱攪拌2～3h至完全溶解，即得質(zhì)量濃度10％聚乙烯醇膜液；

(3)將步驟(2)制得的膜液加入到步驟(1)底液中，兩者混合均勻，再依次加入橄欖油0.2ml、薄荷腦0.1g、質(zhì)量濃度30％雙氧水0.5ml、體積濃度95％乙醇水溶液8ml，攪拌速度為500r/min，攪拌混合均勻即得含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料22.5ml。

實(shí)施例3

含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，其原料組成和配比為：

其制備方法是：

(1)底液制備：稱取n-糖基化殼聚糖0.2g，溶于5ml的5mg/ml生理鹽水中，再加入0.2ml乳酸，攪拌溶解，制得濃度為40mg/ml的底液；

(2)膜液制備：稱取聚乙烯醇1g，加入到10ml去離子水中，在95℃下加熱攪拌2～3h至完全溶解，即得質(zhì)量濃度10％聚乙烯醇膜液；

(3)將步驟(2)制得的膜液加入到步驟(1)底液中，兩者混合均勻，依次加入橄欖油0.3ml、薄荷腦0.5g、質(zhì)量濃度30％雙氧水1ml、體積濃度95％乙醇水溶液10ml，攪拌速度為500r/min，攪拌混合均勻即得含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料25.4ml。

實(shí)施例4

含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，其原料組成和配比為：

其制備方法是：

(1)底液制備：稱取n-糖基化殼聚糖0.2g，溶于10ml的5mg/ml生理鹽水中，再加入0.2ml乳酸，攪拌溶解，制得濃度為20mg/ml的底液；

(2)膜液制備：稱取聚乙烯醇2g，加入到20ml去離子水中，在95℃下加熱攪拌2～3h至完全溶解，即得質(zhì)量濃度10％聚乙烯醇膜液；

(3)將步驟(2)制得的膜液加入到步驟(1)底液中，兩者混合均勻，依次加入橄欖油0.4ml、薄荷腦0.5g、質(zhì)量濃度30％雙氧水0.9ml、體積濃度95％乙醇水溶液15ml，攪拌速度為500r/min，攪拌混合均勻即得含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料54.6ml。

實(shí)施例5

含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，其原料組成和配比為：

其制備方法是：

(1)底液制備：稱取n-糖基化殼聚糖0.2g，溶于10ml的5mg/ml生理鹽水中，再加入0.2ml乳酸，攪拌溶解，制得濃度為20mg/ml的底液；

(2)膜液制備：稱取聚乙烯醇3g，加入到30ml去離子水中，在95℃下加熱攪拌2～3h至完全溶解，即得質(zhì)量濃度10％聚乙烯醇膜液；

(3)將步驟(2)制得的膜液加入到步驟(1)底液中，兩者混合均勻，依次加入橄欖油0.5ml、薄荷腦0.4g、質(zhì)量濃度30％雙氧水1ml、體積濃度95％乙醇水溶液12ml，攪拌速度為500r/min，攪拌混合均勻即得。

實(shí)施例6

對(duì)實(shí)施例2～5得到的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料分別進(jìn)行了性能和藥理測試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

測試1：產(chǎn)品性能參數(shù)檢測

對(duì)本發(fā)明制備的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料性能參數(shù)進(jìn)行檢測，實(shí)施例2～5的產(chǎn)品均符合以下要求：

(1)性狀：為乳白色的半流動(dòng)性液體，質(zhì)地均勻。

(2)ph：取實(shí)施例2～5的樣品各少許，用ph計(jì)測得ph都在4.0～6.0之間。

(3)成膜時(shí)間：在室溫25±1℃，相對(duì)濕度60％～70％的條件下，取實(shí)施例2～5的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料，將其涂抹在干燥的平板玻璃上，待其自然干燥，觀察可在4～7min之間成膜。

測試2：流體敷料樣品抑菌效果

按《藥品微生物檢驗(yàn)手冊》第18章第1節(jié)管碟法進(jìn)行試驗(yàn)，測定結(jié)果參見表1：

表1各個(gè)試驗(yàn)組的抑菌圈直徑(mm)

從表1的結(jié)果顯示，本發(fā)明的產(chǎn)品均有明顯抑菌圈，說明對(duì)大腸桿菌、金色葡萄球菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌的生長均有明顯的抑制作用。

測試3：流體敷料樣品皮膚刺激指數(shù)(pii)測定

取家兔6只(購于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，于背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，設(shè)置5個(gè)試驗(yàn)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域面積約為1cm×1cm，洗凈脫毛劑，歸籠觀察24h。24h之后，在脫毛區(qū)1～4號(hào)分別涂抹本發(fā)明實(shí)施例2～5生產(chǎn)的流體敷料，分別涂抹0.1ml，5號(hào)脫毛區(qū)不作處理，作為自身對(duì)照。持續(xù)24h后除去藥物，肉眼觀察用藥皮膚局部有無紅斑及水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄等，結(jié)束后用溫水清洗給藥部位。皮膚刺激試驗(yàn)反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)見表2、表3。

表2皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表3皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

皮膚刺激試驗(yàn)反應(yīng)平均值＝(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計(jì)試驗(yàn)數(shù)

表4皮膚刺激性試驗(yàn)

從表4結(jié)果表明，本發(fā)明制備的液體創(chuàng)傷敷料均無皮膚致敏反應(yīng)。

測試4：創(chuàng)傷傷口愈合的對(duì)比試驗(yàn)

供試品：實(shí)施例2～5制備的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料

對(duì)照品：云南白藥止血粉

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用普通家兔(購于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，10％水合氯醛麻醉后用4％硫化鈉脫毛，取俯臥位。常規(guī)消毒皮膚后，于每只兔子距脊柱兩側(cè)1.0cm處切割長1.5cm，寬1.0cm的傷口4個(gè)，深度從皮膚到肌層，傷口的厚度為0.3cm。將4個(gè)傷口分別標(biāo)記為a、b、c、d號(hào)，用生理鹽水沖洗傷口，備用。a號(hào)傷口以0.9％生理鹽水上藥，每次0.1ml，為陰性對(duì)照；b號(hào)傷口以云南白藥止血粉為陽性對(duì)照，每次取藥0.1g，均勻涂抹至完全覆蓋創(chuàng)口，每12h更換一次；c和d號(hào)傷口依次使用本發(fā)明的實(shí)施例2～5流體敷料(每只兔子傷口上均同時(shí)設(shè)置兩組實(shí)驗(yàn)組，即c和d)，每次0.1ml，均勻涂抹至完全覆蓋創(chuàng)口，每12h更換一次，連續(xù)用藥15天(“天”以“d”表示)。每個(gè)實(shí)施組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8只，雌雄各半，體量約為2.0-2.5kg。觀察傷口愈合情況，記錄傷口愈合時(shí)間，記錄時(shí)間點(diǎn)分別為3d、6d、9d、12d、15d，同時(shí)計(jì)算創(chuàng)面愈合率。

計(jì)算創(chuàng)面愈合率的方法如下：先將創(chuàng)面標(biāo)記在透明膜上，再以此為模板將質(zhì)地均勻的硬紙片剪成同樣大小，然后用天平稱重，以硬紙片重量間接地表示創(chuàng)面大小。按下試計(jì)算創(chuàng)面愈合率：

創(chuàng)面愈合率(％)＝(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積。

表5各組別傷口愈合率比較

由表5所知，使用本發(fā)明的流體敷料后，各創(chuàng)面平均愈合率均高于陰對(duì)照組和陽性對(duì)照組，且15天時(shí)創(chuàng)傷平均愈合率為99％以上，高于陰性對(duì)照組20％以上，高于陽性對(duì)照組10％以上，說明本發(fā)明的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料促進(jìn)傷口愈合作用非常好。同時(shí)，觀察各組傷口癡皮自然脫落后，形成的疤痕有較大差別：陰性對(duì)照組形成疤痕凸出皮膚明顯，用手觸摸可感受到硬結(jié)；陽性對(duì)照組形成明顯疤痕，中間皮膚略微凸出；各實(shí)施組形成疤痕凸出皮膚不明顯，用手觸摸無硬結(jié)，且新生皮膚與原皮膚接近，較粉嫩。說明本發(fā)明的含n-糖基化殼聚糖的快速成膜流體敷料還可以抑制傷口組織疤痕的異常增生，具有抑制癱痕形成的作用。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)現(xiàn)方案，除此之外，本發(fā)明還可以其它方式實(shí)現(xiàn)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下任何顯而易見的替換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。