本發(fā)明涉及一種模擬炒制類藥材炮制工藝的方法。

背景技術(shù)：

部分中藥、民族藥須經(jīng)過炮制之后才能入藥，是中醫(yī)、民族醫(yī)用藥的特點(diǎn)之一。中藥炮制是根據(jù)中醫(yī)藥理論，依照辨證施治用藥的需要和藥物自身性質(zhì)，以及調(diào)劑、制劑的不同要求，所采取的制藥技術(shù)。

中藥炮制是中醫(yī)長期臨床用藥經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)。炮制工藝的確定應(yīng)以臨床需求為依據(jù)。炮制工藝是否合理、方法是否恰當(dāng)，直接影響到臨床療效。中藥的凈制、切制、加熱炮制與加輔料制均可影響臨床療效。

加熱是中藥炮制的重要手段，其中炒制、煅制應(yīng)用廣泛。許多中藥經(jīng)炒制后，可殺酶保苷，如芥子，牛蒡子等；煅制常用于處理礦物藥，動(dòng)物甲殼及化石類藥物，能使質(zhì)脆易碎，而且作用也會(huì)發(fā)生變化。如白礬煅后燥濕、收斂作用增強(qiáng)。血余煅炭后能止血。川烏、草烏加熱煮制、蒸制后，其毒性顯著降低，保證了臨床用藥安全有效。中藥經(jīng)輔料制后，在性味、功效、作用趨向歸經(jīng)和毒副作用方面都會(huì)發(fā)生某些變化，從而最大限度地發(fā)揮療效。

炒制工藝的研究是炮制研究的一個(gè)方向。其中，炒制溫度、炒制時(shí)間是炒制工藝合理與否的重要參數(shù)，直接決定了炮制品的質(zhì)量。炒制溫度過高或過低、時(shí)間過長或過短，都不能很好地實(shí)現(xiàn)炮制減毒、增效的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題就是提供了一種模擬炒制類藥材炮制工藝的方法。

本發(fā)明提供了一種模擬炒制類藥材炮制工藝的方法，它包括如下步驟：

a、選擇藥材中的指標(biāo)性成分；

b、采用油浴模擬炒制條件，將指標(biāo)性成分均勻附著于燒瓶底部；

c、不同的油浴溫度和時(shí)間條件下檢測(cè)指標(biāo)性成分含量，分析檢測(cè)結(jié)果得到藥材的最佳炒制溫度和時(shí)間。

其中，所述的藥材為炒制藥材。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的炒制藥材包括烏頭類藥材。更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的烏頭類藥材包括川烏aconitumcarmichaeliidebx.、草烏aconitumkusnezoffiireichb.、鐵棒錘aconitumpendulumbusch.、伏毛鐵棒錘aconitumflavumhand.-mazz.、康定烏頭aconitumtatsienensefinetetgagnep.。

其中，所述的指標(biāo)性成分是與藥效或毒性相關(guān)的成分。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的指標(biāo)性成分是受熱易轉(zhuǎn)化的化合物。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的指標(biāo)性成分包括烏頭堿(aconitine)、3-乙酰烏頭堿(3-acetylaconitine)、去氧烏頭堿(deoxyaconitine)、滇烏頭堿(yunaconitine)、次烏頭堿(hypaconitine)、新烏頭堿(mesaconitine)。

其中，所述的燒瓶是圓底燒瓶或錐形瓶。

本發(fā)明具有下述優(yōu)點(diǎn)：

(1)本發(fā)明通過特定的方式，能夠使指標(biāo)性成分均勻地受熱，如果用藥材直接進(jìn)行炮制工藝研究，不能夠保證指標(biāo)性成分完全受熱均勻；

(2)本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確控制加熱溫度的目的，如果用電爐等加熱裝置，溫度范圍波動(dòng)較大；

(3)本發(fā)明能夠節(jié)約成本，在炮制工藝的研究過程中，不需要用大量藥材進(jìn)行炮制，可以先用少量指標(biāo)性成分為研究對(duì)象篩選工藝參數(shù)，確定出溫度、時(shí)間參數(shù)后，再用藥材進(jìn)行炮制，對(duì)篩選出的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證或微調(diào)。

綜上所述，本發(fā)明方法模擬炒制類藥材炮制工藝的方法尤其針對(duì)含有毒性生物堿的藥材炮制工藝的條件篩選，在不使用藥材的情況下，就能達(dá)到準(zhǔn)確預(yù)測(cè)藥材的炒制溫度和時(shí)間，節(jié)約成本，為工業(yè)化放大加工提供了保障。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1烏頭堿在120℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖2烏頭堿在140℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖3烏頭堿在160℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖4烏頭堿在180℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖5烏頭堿在200℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖6烏頭堿在不同溫度、時(shí)間條件下含量變化趨勢(shì)圖

圖73-乙酰烏頭堿在120℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖83-乙酰烏頭堿在140℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖93-乙酰烏頭堿在160℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖103-乙酰烏頭堿在180℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖113-乙酰烏頭堿在200℃條件下反應(yīng)不同時(shí)間色譜圖

圖123-乙酰烏頭堿在不同溫度、時(shí)間條件下含量變化趨勢(shì)圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1烏頭堿油浴模擬鐵棒錘砂炒炮制工藝參數(shù)研究

以鐵棒錘中的主要毒性成分烏頭堿為研究對(duì)象，采用油浴模擬砂炒過程，采用hplc對(duì)轉(zhuǎn)化過程進(jìn)行分析；外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定；篩選溫度、時(shí)間參數(shù)，為鐵棒錘砂炒炮制工藝的量化標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)。

1儀器與試藥

agilent1260型高效液相色譜儀，uv檢測(cè)器，agilentchemastation色譜工作站；cpa2250電子分析天平(德國sartorius公司)；ulup-i-10t優(yōu)普超純水機(jī)(成都超純科技有限公司)；hh-sj集熱式磁力攪拌器(金壇市城東新瑞儀器廠)；烏頭堿(成都曼斯特生物科技有限公司，批號(hào)must-15121111)；乙腈為色譜純(美國fisher公司)；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：cosmosilpak5c18-ms-ⅱ柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.03mol/l碳酸氫銨溶液(濃氨水調(diào)ph9.5)(39:61)等度洗脫；柱溫30℃，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長230nm，進(jìn)樣量10μl。

2.2對(duì)照品溶液的制備

取烏頭堿對(duì)照品20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加二氯甲烷制成濃度為0.4mg/ml的反應(yīng)儲(chǔ)備液。取4ml該反應(yīng)儲(chǔ)備液，置10ml量瓶中，揮干溶劑，加0.1％鹽酸-甲醇定容，制成0.16mg/ml的對(duì)照品溶液，搖勻，過微孔濾膜(0.45μm)，取續(xù)濾液，即得120℃對(duì)照品溶液。同法依次制備不同溫度下反應(yīng)時(shí)的對(duì)照品溶液。

2.3炮制品供試溶液的制備

分次取圓底燒瓶10個(gè)，分別加入2.2項(xiàng)下反應(yīng)儲(chǔ)備液4ml，揮干溶劑后，分別于120℃、140℃、160℃、180℃、200℃加熱反應(yīng)1、3、5、10、15、20、25、30、35、40min，反應(yīng)結(jié)束后，加0.1％鹽酸-甲醇定容至10ml量瓶中，作為炮制品供試溶液，搖勻，過微孔濾膜(0.45μm)，取續(xù)濾液，即得。

2.4結(jié)果

分別吸取對(duì)照品與炮制品供試溶液注入高效液相色譜儀，照前述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到不同溫度、不同時(shí)間條件下色譜圖，能夠直觀反映出烏頭堿成分的含量變化過程，結(jié)果見圖1～6、表1。

表1不同炮制溫度、時(shí)間供試品中烏頭堿含量(μg/ml)

3結(jié)果與討論

3.1本實(shí)驗(yàn)以鐵棒錘主要毒性成分烏頭堿為研究對(duì)象，采用油浴加熱方式模擬砂炒炮制過程。炮制前烏頭堿含量為160μg/ml，140℃加熱30min后，含量降為19.36μg/ml，35min后含量降為0μg/ml；160℃加熱3min后，含量降為8.26μg/ml，5min后含量降為0μg/ml；180、200℃加熱3min后含量降為0μg/ml。與經(jīng)典的烏頭類藥材水煮法(4～6h)、蒸制法(6～8h)相比，更加簡便高效。

3.2經(jīng)120℃炮制40min后，烏頭堿含量基本保持穩(wěn)定，表明如果溫度過低，即便延長炮制時(shí)間，烏頭堿依然不會(huì)發(fā)生降解，如圖1、表1所示。另外，在180℃、200℃炮制品中，雖然3min就能使烏頭堿含量降為0μg/ml(如圖4、5及表1所示)，但在實(shí)際生產(chǎn)中，如果炮制時(shí)間過短，可能會(huì)造成不同批次炮制品的質(zhì)量穩(wěn)定性下降，可行性不強(qiáng)。因此，篩選出的鐵棒錘砂炒溫度參數(shù)為140℃～160℃，時(shí)間參數(shù)為30～40min。

實(shí)施例2采用3-乙酰烏頭堿油浴模擬鐵棒錘砂炒炮制工藝參數(shù)

以鐵棒錘中主要毒性成分3-乙酰烏頭堿為研究對(duì)象，采用油浴模擬砂炒過程，采用hplc對(duì)轉(zhuǎn)化過程進(jìn)行分析；外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定；篩選溫度、時(shí)間參數(shù)，為鐵棒錘砂炒炮制工藝的量化標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)。

1儀器與試藥

agilent1260型高效液相色譜儀，uv檢測(cè)器，agilentchemastation色譜工作站；cpa2250電子分析天平(德國sartorius公司)；ulup-i-10t優(yōu)普超純水機(jī)(成都超純科技有限公司)；hh-sj集熱式磁力攪拌器(金壇市城東新瑞儀器廠)；3-乙酰烏頭堿(自制，面積歸一法，含量>98％)；甲醇為色譜純(美國fisher公司)；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：cosmosilpak5c18-ms-ⅱ柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.03mol/l碳酸氫銨溶液(濃氨水調(diào)ph9.5)(70:30)等度洗脫；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長：230nm。

2.2對(duì)照品溶液的制備

取3-乙酰烏頭堿對(duì)照品20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加二氯甲烷制成濃度為0.4mg/ml的反應(yīng)儲(chǔ)備液。取4ml該反應(yīng)儲(chǔ)備液，置10ml量瓶中，揮干溶劑，加0.1％鹽酸-甲醇定容，制成0.16mg/ml的對(duì)照品溶液，搖勻，過微孔濾膜(0.45μm)，取續(xù)濾液，即得120℃對(duì)照品溶液。同法依次制備不同溫度反應(yīng)時(shí)的對(duì)照品溶液。

2.3炮制品供試溶液的制備

分次取圓底燒瓶10個(gè)，分別加入2.2項(xiàng)下反應(yīng)儲(chǔ)備液4ml，揮干溶劑后，分別于120℃、140℃、160℃、180℃、200℃加熱炮制1、3、5、10、15、20、25、30、35、20min，反應(yīng)結(jié)束后，加0.1％鹽酸-甲醇定容至10ml量瓶中，作為炮制品供試溶液，搖勻，過微孔濾膜(0.45μm)，取續(xù)濾液，即得。

2.4結(jié)果

分別吸取對(duì)照品與炮制品供試溶液注入高效液相色譜儀，照前述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到不同溫度、不同時(shí)間條件下色譜圖，能夠直觀反映出3-乙酰烏頭堿成分的含量的變化過程，結(jié)果見圖7～12、表2。

表2不同炮制溫度和時(shí)間供試品中3-乙酰烏頭堿含量(μg/ml)

3結(jié)果與討論

3.1本實(shí)驗(yàn)以鐵棒錘主要毒性成分為研究對(duì)象，采用油浴加熱方式模擬砂炒炮制過程。炮制前3-乙酰烏頭堿含量為160μg/ml，在160℃加熱35min后，含量降為39.87μg/ml，40min后，含量降為4.53μg/ml，180℃加熱10min后，含量降為27.67μg/ml，15min時(shí)，含量降為0μg/ml，200℃加熱1min后，含量降為116.19μg/ml，反應(yīng)3min后，含量降為0μg/ml。與經(jīng)典的烏頭類藥材水煮法(4～6小時(shí))，蒸制法(6～8小時(shí))相比較，砂炒法炮制效率更高。

3.2經(jīng)120℃和140℃條件下反應(yīng)40min后，3-乙酰烏頭堿含量基本保持不變，表明如果反應(yīng)溫度過低，即使延長炮制時(shí)間，3-乙酰烏頭堿依然不會(huì)發(fā)生降解，如圖7、8所示。另外，在200℃炮制品中，雖然3min就能使3-乙酰烏頭堿含量降為0μg/ml(如圖11所示)，但在實(shí)際生產(chǎn)中，如果炮制時(shí)間過短，可能會(huì)造成不同批次炮制品的質(zhì)量穩(wěn)定性下降，可行性不強(qiáng)。因此，篩選出的鐵棒錘砂炒溫度參數(shù)為160℃～180℃，炮制時(shí)間為15～40min。

通過對(duì)鐵棒錘中的主要毒性成分烏頭堿、3-乙酰烏頭堿為研究對(duì)象，分別篩選出鐵棒錘砂炒溫度和時(shí)間參數(shù)范圍，為下一步鐵棒錘砂炒工藝提供參考依據(jù)。本發(fā)明模擬炒制類藥材炮制工藝的方法不限于烏頭類藥材，需要通過炮制工藝控制其中與藥效或毒性相關(guān)的成分時(shí)，均適用于本發(fā)明方法。