本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種抗皺抗衰茶油提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
山茶油(又名野山茶油，茶籽油，油茶籽油)取自油茶樹的種籽。山茶油的制作過程可分為：去殼，曬干，粉碎，榨油，過濾，全過程均為物理方法，因此它是真正的純天然綠色食用油。茶油中不含芥酸，膽固醇、黃曲霉素和其它添加劑。經(jīng)測(cè)試：茶油中不飽和脂肪酸高達(dá)90％以上，油酸達(dá)到80～83％，亞油酸達(dá)到7～13％，并富含蛋白質(zhì)和維生素a、b、d、e等，尤其是它所含的豐富的亞麻酸是人體必需而又不能合成的。
茶油具有五大特性，
1.具有綠色食品性質(zhì)的食用油脂：茶油又稱油茶籽油，楂(cha)油，產(chǎn)自野生樹種—油茶(樹)，該樹生長(zhǎng)在崇山峻嶺，不需要人工管理(如施肥，噴灑農(nóng)藥)，沒有任何污染。
2.易于人體消化吸收：在常用食用油脂中，茶油所含優(yōu)質(zhì)脂肪酸最多(達(dá)到90.4℅)，飽和脂肪酸(俗稱脂肪)含量最少，不含難消化的芥酸，根據(jù)油脂理論可知，茶油絕大部分營(yíng)養(yǎng)易于人體組織快速吸收利用。此性質(zhì)也稱為“親膚性”。
3.顯著的降血脂性能：實(shí)踐依據(jù)：不少于數(shù)千萬(wàn)人的生活實(shí)踐。由于茶油能夠清除有害血脂(飽和脂肪酸和膽固醇)，所以它具有清潔血液，降低血液粘度和疏通血管等功效。
4.較強(qiáng)的抗氧化性：茶油為典型的油酸/亞油酸類油脂，較強(qiáng)的抗氧化性是此類不飽和脂肪酸的共性；茶油所含豐富的維生素e是公認(rèn)的強(qiáng)抗氧化劑。
5.良好的生物膜流動(dòng)性：由于茶油具有顯著的降血脂性能，所以它能夠清除附著在血管內(nèi)壁上的脂肪和膽固醇，疏通毛細(xì)血管和動(dòng)脈血管，增大血管輸血截面，軟化滋潤(rùn)血管，恢復(fù)其彈性，使血管保持年輕態(tài)。
而一般山茶油分為食用茶油和外用護(hù)膚茶油，食用型茶油一般選用新鮮茶油，老茶油用于護(hù)膚效果更好，新茶油堿性的，可食用的堿性對(duì)身體好。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的存放，茶油的酸價(jià)增高，變成弱酸性的。人的皮膚本身就是弱酸的，弱酸的化妝品對(duì)皮膚好，所以越老的茶油對(duì)皮膚越好越容易吸收。一般將壓榨過濾好的山茶油密封放置10年以上的被稱為老茶油。
目前，已有許多因素被證實(shí)與衰老有關(guān)，可分為內(nèi)源因素和外源性因素，其中內(nèi)源性因素最大的是自由基對(duì)身體的傷害，就皮膚而言，外源性衰老最大的因素在于紫外線，外源性老化又被稱為“光老化”。在談?wù)摽顾ダ蠒r(shí)我們常常會(huì)從抗氧化、清除自由基開始，自由基是一類非常活躍的活性分子基團(tuán)(因?yàn)榻^大部分含有自由的氧原子，所以通常又叫氧自由基)通常是人體代謝的產(chǎn)物。自由基是目前被確定的、最重要的內(nèi)源性衰老因素，因此，抗衰老在很大程度上，就是抗自由基、抗氧化。如果用于外用護(hù)膚，山茶油需要密封10年以上，需要時(shí)間比較長(zhǎng)，用于外用護(hù)膚效果才會(huì)更好，即使如此，油狀的山茶油用來直接護(hù)膚，油膩感不是很容易讓人接受。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗皺抗衰茶油提取物及其制備方法，通過該方法制備抗皺抗衰茶油提取物，得到的產(chǎn)品可直接應(yīng)用到化妝品或護(hù)膚品中，不需要經(jīng)過多年密封，且保質(zhì)期顯著延長(zhǎng)，不會(huì)由于茶油的油膩感而限制其應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
本發(fā)明提供一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入堿性的乙醇溶液，加熱皂化，冷卻至室溫；
2)加入山茶油9～16倍體積的溶劑，高壓處理；
3)超聲波提取；
4)進(jìn)行微濾膜過濾；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)中，堿性的乙醇溶液中的溶質(zhì)為氫氧化鈉。堿性乙醇溶液加入，更有利于皂化反應(yīng)。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)中，堿性的乙醇溶液的濃度為0.7～1.2mol/l。濃度事宜，有利于反應(yīng)的進(jìn)行。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)中，山茶油和堿性的乙醇溶液的體積比為1:15～25。通過這樣的體積比，更能夠加快反應(yīng)速度。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)中，加熱至75～95℃皂化40～65min。這樣的溫度下，反應(yīng)速度最快，效果最好。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟2)中，溶劑為乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為65～75％的乙醇溶液的混合物。選擇較佳的溶劑搭配，提取有效成分的效果最好，提取率也最大。
更為優(yōu)選地，所述溶劑為體積比為1:3～6的乙酸乙酯和乙醇溶液的混合物。選擇較佳的溶劑配比，提取有效成分的效果最好，提取率也最大。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟2)中，在78～90mpa下高壓處理2～6min。在高壓處理下，在高壓作用下，細(xì)胞破裂，有效成分析出，更有利于提高有效成分提取率，同時(shí)也為后續(xù)的提取做好準(zhǔn)備，縮短制備周期。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟3)中，在230～420w下超聲波提取10～18min。通過高壓處理后，選擇超聲波提取，能夠最大限度提取有效成分，制備得到的提取物，抗皺抗衰老效果也最好。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟4)中，微濾膜的截?cái)喾肿恿繛?00000～250000d，流速為2～4ml/min。通過微濾，過濾雜質(zhì)，能夠進(jìn)一步細(xì)化提取物。
本發(fā)明還提供所述的抗皺抗衰茶油提取物的制備方法制備得到的抗皺抗衰茶油提取物。通過本發(fā)明方法制備抗皺抗衰茶油提取物，不容易酸敗，大大延長(zhǎng)使用周期，同時(shí)，沒有油膩感，能夠用于各種抗皺抗衰老或者提高抗皺抗衰老的產(chǎn)品中，擴(kuò)大應(yīng)用范圍。
通過本發(fā)明方法制備抗皺抗衰老茶油提取物，在不需要經(jīng)過多年密封儲(chǔ)存，就可以直接用于護(hù)膚品中，且效果顯著，此外，能夠顯著提高茶油的使用期限，不容易酸敗，也可作為原料用于食品、護(hù)膚品或者化妝品中，擴(kuò)大應(yīng)用范圍。另外，通過本發(fā)明方法制備得到的茶油提取物具有較好的抗皺抗衰老效果。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積15倍的濃度為1.2mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至75℃皂化65min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油9倍體積的溶劑，在90mpa下高壓處理2min，所述溶劑為體積比為1:5的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為65％的乙醇溶液的混合物；
3)在420w下超聲波提取10min；
4)用截?cái)喾肿恿繛?50000d的微濾膜過濾，流速為2ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
實(shí)施例2
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積18倍的濃度為1.1mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至80℃皂化55min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油11倍體積的溶劑，在87mpa下高壓處理3min，所述溶劑為體積比為1:6的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液的混合物；
3)在370w下超聲波提取12min；
4)用截?cái)喾肿恿繛?20000d的微濾膜過濾，流速為3ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
實(shí)施例3
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積20倍的濃度為0.9mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至85℃皂化50min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油13倍體積的溶劑，在84mpa下高壓處理4min，所述溶劑為體積比為1:5的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液的混合物；
3)在320w下超聲波提取14min；
4)用截?cái)喾肿恿繛?80000d的微濾膜過濾，流速為3ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
實(shí)施例4
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積23倍的濃度為0.8mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至90℃皂化45min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油15倍體積的溶劑，在81mpa下高壓處理5min，所述溶劑為體積比為1:4的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液的混合物；
3)在280w下超聲波提取16min；
4)用截?cái)喾肿恿繛?40000d的微濾膜過濾，流速為4ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
實(shí)施例5
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積25倍的濃度為0.7mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至95℃皂化40min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油16倍體積的溶劑，在78mpa下高壓處理6min，所述溶劑為體積比為1:3的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為65％的乙醇溶液的混合物；
3)在230w下超聲波提取18min；
4)用截?cái)喾肿恿繛?00000d的微濾膜過濾，流速為2ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
對(duì)比例1
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積20倍的濃度為0.9mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至85℃皂化50min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油13倍體積的溶劑，在320w下超聲波提取14min，所述溶劑為體積比為1:5的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液的混合物；
3)用截?cái)喾肿恿繛?80000d的微濾膜過濾，流速為3ml/min；
4)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
對(duì)比例2
一種抗皺抗衰茶油提取物的制備方法，包括以下制備步驟：
1)取山茶油為原料，加入山茶油體積20倍的濃度為0.9mol/l，溶質(zhì)為氫氧化鈉的堿性的乙醇溶液，加熱至85℃皂化50min，冷卻至室溫；
2)加入山茶油13倍體積的溶劑，在84mpa下高壓處理4min，所述溶劑為體積比為1:5的乙酸乙酯和體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液的混合物；
3)在85℃下回流提取3次，每次1個(gè)小時(shí)，合并提取液；
4)用截?cái)喾肿恿繛?80000d的微濾膜過濾，流速為3ml/min；
5)減壓濃縮，噴霧干燥即可得到的抗皺抗衰茶油提取物。
試驗(yàn)例1：本發(fā)明方法制備得到的抗皺抗衰茶油提取物體外抗衰老試驗(yàn)
1、建模與給藥
取昆明種小鼠40只，體重22-26g，由廣西醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為5組(正常組、模型組、實(shí)施例3組，對(duì)比例1組，對(duì)比例2組)，每組8只。正常組，灌胃等體積生理鹽水；模型組，昆明種小鼠頸背部皮下注射d-半乳糖100mg/kg和灌胃等體積生理鹽水；實(shí)施例3組，昆明種小鼠頸背部皮下注射d-半乳糖100mg/kg和灌胃等體積實(shí)施例3制備得到的茶油提取物100mg/kg；對(duì)比例1組，昆明種小鼠頸背部皮下注射d-半乳糖100mg/kg和灌胃等體積對(duì)比例1制備得到的茶油提取物100mg/kg；對(duì)比例2組，昆明種小鼠頸背部皮下注射d-半乳糖100mg/kg和灌胃等體積對(duì)比例2制備得到的茶油提取物100mg/kg；按每天20ml/kg的劑量，一天灌胃一次，連續(xù)給藥50d。(實(shí)施例3、對(duì)比例1和對(duì)比例2以純水為溶劑配制所需濃度樣品)
2、小鼠血清sod活力和mda含量測(cè)定
第50d末次給藥2h后，于昆明種小鼠眼球后靜脈叢毛細(xì)管取血，立即離心分離取血清，按超氧化物歧化酶試劑盒說明書操作，在550nm處測(cè)定各管吸光度,計(jì)算血清中超氧化物歧化酶活力。按丙二醛試劑盒說明書操作,在532nm處測(cè)定各管吸光度,計(jì)算血清中丙二醛含量。
3、小鼠肝組織gsh-px活力測(cè)定
取小鼠肝臟,剔去結(jié)締組織,勻漿器研磨、加預(yù)冷的生理鹽水制備成10％的組織勻漿。冷凍離心(2℃～4℃),取其上清液,用谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶活力。
4、小鼠腦組織cat活力測(cè)定
昆明種小鼠取血后迅速頸椎脫臼處死，剖出腦組織，用4℃生理鹽水沖洗后用濾紙吸干，-20℃冷凍保存。測(cè)定時(shí)，腦組織勻漿，4℃下3000r/min冷凍離心10min，取其上清液,用過氧化氫酶試劑盒測(cè)定過氧化氫酶活力。
5、試驗(yàn)結(jié)果
各組大鼠血清sod、mda、gsh-px及腦組織lpf含量變化
上面的試驗(yàn)可知，使用本發(fā)明方法制備抗皺抗衰茶油提取物，其具有較好的抗衰老功效。
試驗(yàn)例2：本發(fā)明方法制備得到的抗皺抗衰老茶油提取物對(duì)紫外線照射下豚鼠皮膚的防護(hù)作用
將30只豚鼠隨機(jī)分為5組：
a組為陰性對(duì)照組，豚鼠背部受試區(qū)不外用抗皺抗衰老茶油提取物且不照射紫外線；
b組為照射對(duì)照組，豚鼠背部受試區(qū)不外用抗皺抗衰老茶油提取物，但接受紫外線照射；
c組為外用實(shí)施例3抗皺抗衰老茶油提取物組，豚鼠背部受試區(qū)外用實(shí)施例3抗皺抗衰老茶油提取物后接受紫外線照射。
d為外用對(duì)比例1抗皺抗衰老茶油提取物組，豚鼠背部受試區(qū)外用對(duì)比例1抗皺抗衰老茶油提取物后接受紫外線照射。
e組為外用對(duì)比例2抗皺抗衰老茶油提取物組，豚鼠背部受試區(qū)外用對(duì)比例2抗皺抗衰老茶油提取物后接受紫外線照射。
在外用本發(fā)明的抗皺抗衰老茶油提取物時(shí)，加入純凈水?dāng)嚢璩珊隣詈?，再進(jìn)行涂抹。
每次照射前，將豚鼠背部皮膚5cm×6cm范圍內(nèi)毛剃光，c組用棉棒涂實(shí)施例3制得的抗皺抗衰老茶油提取物，d組用棉棒涂對(duì)比例1制得的抗皺抗衰老茶油提取物，e組用棉棒涂對(duì)比例2制得的抗皺抗衰老茶油提取物，對(duì)照組涂水。將受試豚鼠放入照射箱，同時(shí)照射長(zhǎng)波紫外線(uva)和中波紫外線(uvb)，每周照射3次，共照射15周。
a組豚鼠皮膚未出現(xiàn)異常。
b組經(jīng)紫外線照射2周后，照射部位開始出現(xiàn)紅斑，隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng)，紅斑面積逐漸擴(kuò)大并加重。
c組在照射5周后才出現(xiàn)紅斑，且紅斑面積明顯小于b組。
d組在照射4周后出現(xiàn)紅斑，但紅斑面積小于b組。
e組在照射4周后才出現(xiàn)紅斑，且紅斑面積明顯小于b組。
本試驗(yàn)例證實(shí)本發(fā)明方法制備得到的抗皺抗衰老茶油提取物通過皮膚外用途徑可用于保護(hù)皮膚免受紫外線輻射等氧化損傷，并抵抗由此引起的皮膚老化現(xiàn)象，同時(shí)說明通過本發(fā)明的方法制備得到的抗皺抗衰老茶油提取物不需要經(jīng)過多年密封，就具有很好的效果。