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一種用于口服給藥的多糖膽鹽脂質體及其制備方法與流程

文檔序號:11604765閱讀:940來源:國知局

本發(fā)明屬于中藥制劑技術領域,具體的說是一種用于口服給藥來提高機體免疫力的多糖膽鹽脂質體及其制備方法。



背景技術:

蟲草、黃精、黃芪、靈芝等補益類中藥具有固本培元、扶正祛邪之功效,能夠提高機體抗病能力。而某些食物如松花粉、海參等也具備這種增強體質的作用。如松花粉被稱為“益壽粉”,食用歷史久遠,有松花糕、松花酒等諸多傳統(tǒng)食品。松花粉始載于東漢《神農本草經(jīng)》,稱松花粉“氣味甘平無毒,久服輕身益氣延年”。海參不僅是珍貴的食品,也是名貴的藥材,《本草綱目拾遺》中記載“其性溫補,足敵人參”。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),上述中藥及食物提高機體免疫力的主要成分均為多糖,另外還相繼發(fā)現(xiàn)海藻等植物中的多糖也具有相同活性。從這些動植物中提取到的多糖具有促進細胞免疫和體液免疫反應的作用,從而提高機體免疫力,是一種廣譜免疫促進劑。但是,多糖分子量太大,且具有強親水性,因此口服吸收困難,臨床應用難以達到理想的藥理活性。

脂質體是單層或多層磷脂雙分子層形成的封閉球形泡囊,是一種良好的藥物載體。在脂質體膜中加入膽鹽形成的脂質體為膽鹽脂質體,最初主要用于增加藥物的透皮吸收,近幾年來在增加藥物的口服吸收方面受到重視。膽鹽脂質體口服后既可抵抗胃腸道膽汁對脂質體的破壞作用,又具有高度變形性,可透過比自身尺寸小數(shù)十倍的孔隙。因此,將多糖制成膽鹽脂質體,利用其高度變形性和良好的生物相容性可增加多糖的口服吸收,起到提高機體免疫力的作用。



技術實現(xiàn)要素:

本發(fā)明提供了一種用于口服給藥的多糖膽鹽脂質體及其制備方法,可促進多糖的口服吸收,起到提高機體免疫力的作用。

本發(fā)明提供的一種口服給藥的多糖膽鹽脂質體,藥物為蟲草多糖、海藻多糖、松花粉多糖、黃芪多糖、黃精多糖、靈芝多糖、海參多糖,或其混合物,輔料為磷脂、膽固醇和膽鹽。其中,磷脂為大豆磷脂(spc)、氫化大豆磷脂(hspc)、蛋黃卵磷脂(epc)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)、磷脂酰乙醇胺(pe),或其混合物;膽鹽為膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、牛黃膽酸鈉、甘氨膽酸鈉,或其混合物。

本發(fā)明提供的一種口服給藥的多糖膽鹽脂質體,磷脂與膽鹽的摩爾比為2:1-10:1,磷脂與多糖的質量比為5:1-50:1,磷脂與膽固醇的摩爾比為2:1-8:1。

本發(fā)明提供的一種口服給藥的多糖膽鹽脂質體的制備工藝,包括以下步驟:

(1)采用逆向蒸發(fā)法制備多糖膽鹽脂質體,取磷脂、膽固醇和膽鹽,溶于有機溶劑,脂質濃度為5-50mg/ml,得有機相。所述有機溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚、丙酮或混合物;

(2)將多糖溶解于0.01mph7.4磷酸鹽緩沖液,得水相;

(3)將水相注入有機相中,有機相和水相體積比3:1-5:1,冰水浴條件下脈沖超聲,形成穩(wěn)定的w/o型乳劑;

(4)旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入含1-5%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液,繼續(xù)旋蒸至膠質物分散于溶液中,得多糖膽鹽脂質體懸液;

(5)將多糖膽鹽脂質體懸液脈沖超聲1-5min,高壓勻質機乳勻(壓力200-800bar,循環(huán)2-6次),經(jīng)0.45μm/0.22μm微孔濾膜過濾,得到多糖膽鹽脂質體溶液;

(6)溶液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、溫度-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到多糖膽鹽脂質體固體粉末。

將本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體固體粉末加入適宜輔料后,可制成顆粒劑、膠囊劑、片劑(包括口含片、口溶片、分散片、泡騰片、普通片、包衣片等)等口服給藥的劑型。

將本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體固體粉末制成口服劑型,加入的稀釋劑包括但不限于淀粉、預膠化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纖維素等纖維素類、甘露醇等糖醇類、二水硫酸鈣等無機鹽類等。

將本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體固體粉末加工制成口服劑型,加入的粘合劑包括但不限于淀粉、預膠化淀粉、羥丙甲纖維素等纖維素類的衍生物、明膠、阿拉伯膠、聚維酮等。

將本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體固體粉末加工制成口服劑型,加入的崩解劑包括但不限于淀粉、l-hpc、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、泡騰崩解劑等。

將本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體固體粉末加工制成口服劑型,加入的潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、peg-6000、微粉硅膠、十二烷基硫酸鈉等。

本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體具備以下優(yōu)勢:多糖膽鹽脂質體利用其高度變形性、良好的組織相容性等特點可促進多糖的口服吸收;口服給藥后能夠減少膽汁對脂質體的破壞作用,增加脂質體在胃腸道中的穩(wěn)定性;制成多糖膽鹽脂質體凍干粉能夠增加脂質體的體外穩(wěn)定性,并便于制成口服給藥的固體劑型。

本發(fā)明制得的多糖膽鹽脂質體通過口服給藥增加多糖的吸收,主要用于提高機體免疫力。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行闡述:

實施例1:

(1)處方組成:大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、脫氧膽酸鈉100mg、蟲草多糖80mg。

(2)制備:取大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、脫氧膽酸鈉100mg,加入二氯甲烷100ml,溶解形成溶液。取80mg蟲草多糖,溶解于30mlph7.4磷酸鹽緩沖液,注入二氯甲烷溶液中,冰水浴脈沖超聲3min形成穩(wěn)定的w/o型乳劑。30℃旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入3%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液20ml,繼續(xù)旋蒸30min,膠質物分散于溶液中,得脂質體懸液。將脂質體懸液先脈沖超聲5min,然后經(jīng)高壓勻質機乳勻(壓力200bar,循環(huán)3次),經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,得到脂質體溶液。濾液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到蟲草多糖膽鹽脂質體固體粉末。

(3)形態(tài)觀察:取20mg蟲草多糖膽鹽脂質體固體粉末加ph6.8磷酸鹽緩沖液1ml,振搖水化,得到膽鹽脂質體懸液。加適量磷酸鹽緩沖液稀釋,用2.0﹪的磷鎢酸染色,透射電鏡下觀察蟲草膽鹽脂質體形態(tài)為類球形,大小均勻。

(4)粒度分布:用激光粒度分析儀測定蟲草多糖膽鹽脂質體的平均粒徑為339nm,pdi=0.141。

(5)包封率測定:采用sephadexg-200型葡聚糖凝膠柱分離游離藥物和膽鹽脂質體,苯酚硫酸法測定蟲草多糖含量,按照公式包封率%=(總多糖量-游離型多糖量)/總多糖量*100%計算包封率,蟲草多糖平均包封率為62.3%。

實施例2:

(1)處方組成:氫化大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、脫氧膽酸鈉100mg、海藻多糖80mg。

(2)制備:取氫化大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、脫氧膽酸鈉100mg,加入二氯甲烷100ml,溶解形成溶液。將80mg海藻多糖,溶解于25mlph7.4磷酸鹽緩沖液,注入二氯甲烷溶液中,冰水浴脈沖超聲3min形成穩(wěn)定的w/o型乳劑。30℃旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入3%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液20ml,繼續(xù)旋蒸30min,膠質物分散于溶液中,得到脂質體懸液。將脂質體懸液先脈沖超聲5min,然后經(jīng)高壓勻質機乳勻(壓力200bar,循環(huán)3次),經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,得到脂質體溶液。濾液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到海藻多糖膽鹽脂質體固體粉末。

(3)透射電鏡下觀察海藻多糖膽鹽脂質體形態(tài)為類球形,平均粒徑為307nm,pdi=0.133,海藻多糖平均包封率為56.1%。

實施例3:

(1)處方組成:大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、甘氨膽酸鈉100mg、松花粉多糖100mg。

(2)制備:取大豆磷脂800mg、膽固醇100mg、甘氨膽酸鈉80mg,加入氯仿100ml,溶解形成溶液。取100mg松花粉多糖,溶解于30mlph7.4磷酸鹽緩沖液,注入氯仿溶液中,冰水浴脈沖超聲5min形成穩(wěn)定的w/o型乳劑。30℃旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入3.2%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液25ml,繼續(xù)旋蒸30min,膠質物分散于溶液中。脈沖超聲5min,高壓勻質機乳勻(壓力200bar,循環(huán)3次),經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,得到脂質體溶液。濾液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到松花粉多糖膽鹽脂質體固體粉末。

(3)透射電鏡下觀察松花粉多糖膽鹽脂質體形態(tài)為類球形,平均粒徑為296nm,pdi=0.127,松花粉多糖平均包封率為64.0%。

實施例4:

(1)處方組成:大豆磷脂800mg、膽固醇80mg、甘氨膽酸鈉80mg、蟲草多糖60mg。

(2)制備:取大豆磷脂800mg、膽固醇80mg、甘氨膽酸鈉80mg,加入氯仿100ml,溶解形成溶液。取60mg蟲草多糖,溶解于25mlph7.4磷酸鹽緩沖液,注入氯仿溶液中,冰水浴脈沖超聲3min形成穩(wěn)定的w/o型乳劑。30℃旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入3%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液25ml,繼續(xù)旋蒸30min,膠質物分散于溶液中。脈沖超聲5min,高壓勻質機乳勻(壓力200bar,循環(huán)3次),經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,得到脂質體復合物溶液。濾液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到脂質體復合物固體粉末。

(3)透射電鏡下觀察蟲草多糖膽鹽脂質體形態(tài)為類球形,平均粒徑為290nm,pdi=0.130,蟲草多糖平均包封率為71.5%。

實施例5:

(1)處方組成:氫化大豆磷脂800mg、膽固醇120mg、膽酸鈉80mg、蟲草多糖75mg。

(2)制備:取氫化大豆磷脂800mg、膽固醇120mg、膽酸鈉80mg,加入氯仿100ml,溶解形成溶液。取75mg蟲草多糖,溶解于30mlph7.4磷酸鹽緩沖液,注入氯仿溶液中,冰水浴脈沖超聲5min形成穩(wěn)定的w/o型乳劑。30℃旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑,液體形成粘稠膠質狀。加入4%甘露醇的ph6.8磷酸鹽緩沖液25ml,繼續(xù)旋蒸30min,膠質物分散于溶液中。脈沖超聲5min,高壓勻質機乳勻(壓力200bar,循環(huán)3次),經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,得到脂質體復合物溶液。濾液分裝于西林瓶,經(jīng)過-70℃預凍12h,然后壓力30pa、-45℃冷凍干燥24h,25℃干燥8h,即得到蟲草多糖膽鹽脂質體固體粉末。

(3)透射電鏡下觀察蟲草多糖膽鹽脂質體形態(tài)為類球形,平均粒徑為309nm,pdi=0.146,蟲草多糖平均包封率為67.7%。

實施例6:

以實施例1制得的的蟲草多糖膽鹽脂質體為例,考察外壓作用下通過0.22μm微孔濾膜的性能,評價蟲草多糖膽鹽脂質體的變形性。

在0.5mpa壓力下,5ml水通過0.22μm微孔濾膜的時間為t水,相同體積的蟲草多糖膽鹽脂質體懸液通過時間為t脂質體,按照公式p=t脂質體/t水計算相對透過率,蟲草多糖膽鹽脂質體的相對透過率達80.3%,說明其具備良好變形能力。

實施例7:

以實施例1制得的蟲草多糖膽鹽脂質體為例,考察蟲草多糖膽鹽脂質體對免疫低下小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響,評價蟲草多糖膽鹽脂質體口服給藥后的免疫調節(jié)作用。

動物分組及給藥:取昆明種小鼠70只,隨機分為ns對照組、模型組、蟲草多糖膽鹽脂質體低、中、高劑量組(劑量分別為100,200,400mg/kg)、蟲草多糖溶液組(400mg/kg)和蟲草多糖普通脂質體組(400mg/kg),每組10只。腹腔注射環(huán)磷酰胺溶液(100mg/kg)建立小鼠免疫低下模型。對照組和模型組用同體積磷酸鹽緩沖液灌胃,每天灌胃給藥,連續(xù)給藥10d。末次給藥的次日,稱重,處死,取胸腺和脾臟并稱重,計算胸腺/脾臟重量(mg)與體重(g)的比值即為胸腺指數(shù)/脾臟指數(shù),結果見表1。

表1蟲草多糖膽鹽脂質體對小胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響(±s,n=10)

注:與ns對照組比較,a:p<0.01;與模型組比較,b:p<0.01

由表1可見,蟲草多糖膽鹽脂質體組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于ctx模型組,其中,中劑量和高劑量組與模型組有顯著性差異(p<0.01)。蟲草多糖溶液組與模型組的胸腺和脾臟指數(shù)無顯著性差異,說明蟲草多糖口服后吸收較差,對免疫系統(tǒng)功能影響較小。蟲草多糖普通脂質體組的胸腺和脾臟指數(shù)高于與同等劑量的多糖組,說明脂質體可促進蟲草多糖的吸收,而與蟲草多糖膽鹽脂質體組有顯著性差異,證明將蟲草多糖制成膽鹽脂質體可顯著促進蟲草多糖的吸收,提高免疫低下小鼠的免疫系統(tǒng)功能。

實施例8:

以實施例1制得的的蟲草多糖膽鹽脂質體為例,考察蟲草多糖膽鹽脂質體對免疫低下小鼠脾淋巴細胞增殖活性的影響。

將實施例7中各組小鼠在無菌條件下分離脾臟,置于研缽中研磨,加生理鹽水混懸后過濾,濾液1000r/min離心5min,加入紅細胞裂解液,裂解10min。4℃離心棄去上清,用磷酸鹽緩沖液洗滌,加入培養(yǎng)液重懸細胞,制成脾淋巴細胞懸液(5×106個/ml)。取100μl接種于96孔板,加入終濃度為5μg/ml的cona,于37℃5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。吸除上清,每孔分別加入prmi1640培養(yǎng)液90μl和cck8試劑10μl,繼續(xù)培養(yǎng)1h,酶標儀檢測450nm波長處的od值,依據(jù)刺激指數(shù)(si)=刺激孔od值/對照孔od值,結果見表2。

表2蟲草多糖膽鹽脂質體對脾淋巴細胞增殖的影響(±s,n=4)

注:與ns對照組比較,a:p<0.05;與模型組比較,b:p<0.05

由表2可見,模型組脾淋巴細胞增殖指數(shù)顯著低于對照組(p<0.05)。中劑量和高劑量膽鹽脂質體組脾淋巴細胞增殖指數(shù)與模型組有顯著差異(p<0.05),證明將蟲草多糖制成膽鹽脂質體可促進蟲草多糖的吸收,對小鼠脾淋巴細胞增殖具有顯著促進作用,提高細胞免疫應答。

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