本發(fā)明涉及一種具有疏肝和胃、清熱止痛功能的藥物組合物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是指具有上腹飽脹，早飽，噯氣，上腹隱痛，食欲不振，惡心，嘔吐等不適癥狀，經(jīng)檢查排除引起這些癥狀的器質(zhì)性疾病的一組臨床綜合征，癥狀可持續(xù)或反復發(fā)作，病程一般規(guī)定為超過一個月或在十二月中累計超過十二周。FD是臨床上最常見的一種功能性胃腸病，發(fā)病率呈上升趨勢，就診率占消化內(nèi)科門診的30-40％。

目前FD的發(fā)病機制尚未完全明確，西醫(yī)多數(shù)認為胃腸激素分泌異常和胃腸動力障礙是FD發(fā)病的重要機制，因此臨床上主要采用多潘立酮、莫沙必利等促胃腸動力藥物治療，但往往療效不穩(wěn)定，病情易復發(fā)，同時存在一定副作用。

FD屬中藥“痞滿”、“胃脘痛”、“嘈雜”等范疇，其病位在脾胃，與肝密切相關(guān)。因脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾升胃降，則氣血調(diào)暢。若情志不舒、飲食不節(jié)、脾胃虛弱、濕熱郁結(jié)，則使脾胃升降無常，運化失職，導致上腹痛、腹脹、早飽等癥狀.證屬本虛標實。中藥治療功能性消化不良有獨特的病機認識，從中醫(yī)藥中開發(fā)療效理想、安全性更高的藥物非常迫切。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有疏肝和胃、清熱止痛功能的藥物組合物及其制備方法和用途。

本發(fā)明提供了一種具有疏肝和胃、清熱止痛功效的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑：

柴胡80-120份、白芍120-180份、黃連72-108份、吳茱萸48-72份、莪術(shù)80-120份、丹參96-144份、延胡索96-144份、大黃24-36份、黨參120-180份、黃芪160-240份、木香72-108份、枳殼80-120份、甘草24-36份。

其中，它是由下述重量配比的原料藥制備而成的制劑：

柴胡100份、白芍150份、黃連90份、吳茱萸60份、莪術(shù)100份、丹參120份、延胡索120份、大黃30份、黨參150份、黃芪200份、木香90份、枳殼100份、甘草30份。

其中，所述的大黃為酒炙大黃，即《中國藥典》2015版中的酒大黃。

其中，它是由柴胡、白芍、黃連、吳茱萸、莪術(shù)、丹參、延胡索、大黃、黨參、黃芪、木香、枳殼、甘草的原生藥粉、水或有機溶劑提取物為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。

進一步地，所述的制劑是顆粒劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、口服液。

本發(fā)明還提供了上述藥物組合物的方法，它包括如下步驟：

a、稱取各重量配比的原料；

b、丹參、延胡索加乙醇浸提，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮成流浸膏，濾渣備用；

c、將b步驟所述的濾渣與其余原料加水浸泡，煎煮；同時收集揮發(fā)油另置；煎液濾過，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.20～1.25(80℃)，加入b步驟流浸膏，以及藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的制劑。

本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備具有疏肝和胃，清熱止痛功效的藥物中的用途。

其中，所述的藥物是用于治療肝胃不和、肝胃郁熱所致的胃脘脹痛、灼痛噯氣、口干口苦、情志不暢加重的藥物。

其中，所述的藥物是治療功能性消化不良的藥物。

本發(fā)明提供的組合物，配伍合理，具有疏肝和胃，清熱止痛的功效，用于肝胃不和、肝胃郁熱所致的胃脘脹痛、灼痛噯氣、口干口苦、情志不暢加重等癥，臨床療效好?？梢跃徑夤δ苄韵涣家鸬母鞣N不適癥狀，效果顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮；而且本發(fā)明組合物安全性好，無毒副作用，使用方便，為臨床提供了一種新的藥物選擇。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1空白對照組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

圖2模型對照組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

圖3本發(fā)明藥物低劑量組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

圖4本發(fā)明藥物中劑量組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

圖5本發(fā)明藥物高劑量組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

圖6多潘立酮組，ICC免疫組化陽性細胞(×400倍)

具體實施方式

下面以實施例作進一步說明，但本發(fā)明不局限于這些實施例。

實施例1本發(fā)明組合物的制備

處方：柴胡100g、白芍150g、黃連90g、吳茱萸60g、莪術(shù)100g、丹參120g、延胡索120g、酒大黃30g、黨參150g、黃芪200g、木香90g、枳殼100g、甘草30g。

制備工藝：

(1)按處方稱取各原料藥；

(2)將丹參、延胡索加5倍量60％的乙醇浸泡7天，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮成流浸膏，備用。藥渣與其余十一味加7倍量水浸泡0.5小時，煎煮二次，每次1小時。同時收集揮發(fā)油另置；煎液濾過，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.02～1.05(80℃)，靜置12小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.20～1.25(80℃)加入上述流浸膏,混勻，以700g糊精作母核沸騰制粒，整粒，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時，分裝，即得。

【性狀】本品為淺棕黃色的顆粒；氣微香，味苦。

實施例2本發(fā)明組合物的制備

處方：柴胡80份、白芍120份、黃連72份、吳茱萸48份、莪術(shù)80份、丹參96份、延胡索96份、大黃24份、黨參120份、黃芪240份、木香108份、枳殼120份、甘草36份。

制備工藝：除了糊精加入量為560g，其它同實施例1的制備工藝。

實施例3本發(fā)明組合物的制備

處方：柴胡120份、白芍180份、黃連108份、吳茱萸72份、莪術(shù)120份、丹參144份、延胡索144份、大黃36份、黨參180份、黃芪160份、木香72份、枳殼80份、甘草24份。

制備工藝：除了糊精加入量為840g，其它同實施例1的制備工藝。

實施例4本發(fā)明組合物的制備

處方：同實施例1的處方。

制備工藝：按處方稱取各原料藥，粉碎，過篩，加入700g糊精，混合均勻，分裝，即得。

以下用試驗例的方式說明本發(fā)明的有益效果：

試驗例1本發(fā)明組合物對功能性消化不良大鼠胃腸動力的作用

1材料

1.1實驗動物

雄性Wistar大鼠66只，體重(200±20)g，由瀘州醫(yī)學院動物實驗室提供。

1.2藥物

本發(fā)明藥物：按照實施例1方法制備的顆粒；

多潘立酮，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字：H10910003，批號：100622；

1.3試劑

胃動素(MTL)ELISA檢測試劑盒購自武漢博士德公司。

2方法

2.1模型建立與實驗分組：

隨機選取11只作為空白對照組予以常規(guī)喂養(yǎng)外，剩余55只大鼠隨機分成5組：模型對照組、本發(fā)明藥物高、中、低劑量組、多潘立酮組，每組11只，參考“夾尾刺激法”和“不規(guī)則喂養(yǎng)”造模14天：即每日(7:00，10:00，13:00，16:00)用鼠夾大鼠尾巴遠端三分之一處，以不破皮為度，讓大鼠暴怒，從而其會與同籠其它大鼠相互撕打，激怒全籠大鼠。在大鼠相互打斗的過程中，可能會被抓傷，為避免炎癥干擾，用0.5％的碘復涂擦受傷部位，以控制感染。每日正常喂水，單日喂食(記錄每次喂給的飼料的重量)，雙日禁食。每次刺激約30分鐘，在此30分鐘內(nèi)連續(xù)不斷地刺激。兩者方法聯(lián)合，連續(xù)14天。大鼠出現(xiàn)活動減少、倦臥少動、飲食及飲水量減少，然后每組隨機取大鼠1只，處死后取胃觀察胃黏膜，胃黏膜表面無潰瘍及黏膜損害，說明造模成功。

2.2給藥方法：

自造模結(jié)束日起，恢復正常飲食和飲水，開始灌胃給藥，依據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式：dB＝dARB/RA(WA/WB)l/3，計算出本發(fā)明藥物高、中、低劑量組分別予相當于含生藥1.875kg/L、1.25kg/L、0.625kg/L的中藥2mL灌胃，多潘立酮組予0.3g/L的多潘立酮溶液2mL灌胃，模型組及空白對照組予生理鹽水2mL灌胃，均為每日2次，共14天。

2.3觀察指標

2.3.1胃排空率：

在末次給藥后，禁食、禁水24小時，灌胃注入10ml/kg的營養(yǎng)性半固體糊(取5g羧甲基纖維素溶于25ml蒸餾水中，然后分別加入8g奶粉、4g糖、4g淀粉、3g活性炭，攪拌均勻，配成150ml約150g的半固體糊，置冰箱中冷藏12h，使用前2h取出恢復常溫)；注入面糊30分鐘后，腹主動脈取血5ml裝入抗凝管中，斷頭處死大鼠，取出完整的胃，稱質(zhì)量，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物，拭干后稱胃凈質(zhì)量，按公式計算：胃排空率＝【l一(胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量)/灌胃量】×100％。

2.3.2血清胃動素(MTL)：抽取的腹主動脈血，分別按藥盒說明書，分離血漿，-4℃保存?zhèn)溆?，ELISA法測定。

3統(tǒng)計學處理方法

應(yīng)用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，采用F分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示。

4結(jié)果

4.1胃動素

本發(fā)明藥物高、中、低組、多潘立酮組均較模型組明顯升高(P<0.05)，本發(fā)明藥物高劑量組、中劑量組與正?？瞻捉M間無明顯差異(P>0.05)，但較多潘立酮組及本發(fā)明藥物低劑量組升高(P<0.05)，本發(fā)明藥物低劑量組與多潘立酮組無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

4.2胃排空率

本發(fā)明藥物高、中、低組、多潘立酮組均較模型組明顯升高(P<0.05)，本發(fā)明藥物高劑量組、中劑量組與正?？瞻捉M間無明顯差異(P>0.05)，高于低劑量組(P<0.05)，但較多潘立酮組低(P<0.05)。

各組FD大鼠胃動素、胃排空率比較，結(jié)果見表1。

表1各組FD大鼠胃動素、胃排空率的比較

^bP＜0.05vs模型組，^dP＜0.05vs多潘立酮組，^eP＜0，05、^fP＜0.05vs多潘立酮組.

由表1可見，功能性消化不良模型組大鼠血胃動素及排空率均低于正?？瞻捉M及各用藥組，影響到上消化道的傳導動力，模型建立成功。

其中對胃動素(MLT)影響：本發(fā)明藥物高劑量組及中劑量組的胃動素(MLT)最高，顯著高于陽性藥多潘立酮(P<0.05)，本發(fā)明藥物低劑量組與陽性藥多潘立酮的胃動素相當(P>0.05)，說明本發(fā)明藥物具有良好的促進胃動素分泌效果；

對胃排空率影響：本發(fā)明藥物高劑量組及中劑量組的胃排空率接近陽性藥多潘立酮，本發(fā)明藥物具有較好的增加胃排空率效果。

因此，本發(fā)明藥物可以有效恢復功能性消化不良大鼠血中的胃動素水平，促進胃排空，達到疏肝和胃的目的，可用于治療功能性消化不良。

試驗例2本發(fā)明組合物對功能性消化不良大鼠Cajal間質(zhì)細胞表達的影響

1材料

1.1實驗動物

健康SD大鼠60只：清潔級，體重200g±20g，雌雄各半，毛色潔白，光澤度好，由瀘州醫(yī)學院實驗動物中心提供。

1.2藥物

本發(fā)明藥物：按照實施例1方法制備的顆粒；

多潘立酮，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字：H10910003；

1.3試劑

胃泌素(GAS)ELISA檢測試劑盒(批號：20101014)購自南京建成生物有限公司；c-kit多克隆抗體(批號：20101201)購自南京建成生物有限公司；SABC試劑盒(批號：20101211)購自南京建成生物有限公司；DAB顯色試劑盒(批號：20101211)購自上海麥莎生物科技有限公司。

1.4主要儀器設(shè)備：

顯微鏡、電子天平、電子秤、低溫冰箱、離心機、量筒等。

2方法

2.1模型建立與實驗分組：

將60只SD大鼠隨機分成6組：空白對照組、模型對照組、本發(fā)明藥物高、中、低劑量組、多潘立酮組，每組10只。

2.2實驗動物喂養(yǎng)

從瀘州醫(yī)學院實驗動物中心購買了60只SD大鼠后，放置瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院中心實驗室動物房內(nèi)喂養(yǎng)7天以適應(yīng)環(huán)境。喂養(yǎng)環(huán)境為清潔級，室溫18-21℃，每天給予足量飼料，飲用自來水，并每天定時清潔動物房。

2.3模型建立：

2.3.1動物造模：

每日(7:00，10:00，13:00，16:00)用鼠夾大鼠尾巴遠端三分之一處，以不破皮為度，讓大鼠暴怒，從而其會與同籠其它大鼠相互撕打，激怒全籠大鼠。在大鼠相互打斗的過程中，可能會被抓傷，為避免炎癥干擾，用0.5％的碘復涂擦受傷部位，以控制感染。每日正常喂水，單日喂食(記錄每次喂給的飼料的重量)，雙日禁食。每次刺激約30分鐘，在此30分鐘內(nèi)連續(xù)不斷地刺激。兩者方法聯(lián)合，連續(xù)14天。

2.3.2造模期間觀察指標：

①飲水量和進食量的測定：在給水和給鼠糧日時，每組大鼠每日上午8:00給一定量的水(量筒測量)和鼠糧(固體天平稱量)，到次日上午8:00測定剩余量，兩者差值與大鼠數(shù)目的比值即為每只大鼠每日進水量與進食量；

②大鼠體重的測定：禁食日早晨8:00電子稱稱量大鼠的體重；

③毛發(fā)的觀察：色澤、潔凈度、是否柔順等方面；

④糞便的觀察：性狀、氣味、量等方面；

⑤活動狀態(tài)觀察：是否焦慮，活動狀態(tài)等方面；

2.4給藥方法：

自造模結(jié)束日起，恢復正常飲食和飲水，開始灌胃給藥，連續(xù)14天。按照藥理實驗方法學，成人和動物間體表面積換算公式換算：大鼠的劑量＝Xmg/kg×60kg×0.018/0.2kg(X為成人臨床擬用劑量，本發(fā)明藥物為(0.5g/kg/d)。按藥理實驗方法學取高劑量(相當于等效劑量的2倍)(5.4g/kg/d)、中劑量(相當于等效劑量)(2.7g/kg/d)、低劑量(相當于等效劑量的一半)(1.35g/kg/d)給大鼠灌藥。

①本發(fā)明藥物高劑量組：給予本發(fā)明藥物顆粒(5.4g/kg/d)1次/天。

②本發(fā)明藥物中劑量組：給予本發(fā)明藥物顆粒(2.7g/kg/d)1次/天。

③本發(fā)明藥物低劑量組：給予本發(fā)明藥物顆粒(1.35g/kg/d)1次/天。

④多潘立酮組：給予多潘立酮(2.7mg/kg/d)1次/天。

⑤空白對照組和模型對照組給予等容量的生理鹽水，1次/天。

2.5實驗指標及標測方法：

2.5.1一般情況的觀察：

觀察大鼠的進食量、飲水量、體重、活動、毛發(fā)、糞便等基本情況,方法如造模期間觀測指標；

2.5.2大鼠胃及十二指腸解剖觀察：

自造模結(jié)束日起，每組取大鼠2只解剖并觀察大鼠胃部和十二指腸的色澤情況，有無器質(zhì)性改變。

2.5.3大鼠血清胃泌素(GAS)的測定：

血清采集：抽取的腹主動脈血，放入不含任何抗凝劑的無菌試管中室溫下讓血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，分離血清，－4℃保存?zhèn)溆?。按胃泌?GAS)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒說明進行操作。

2.5.4胃竇組織中Cajal間質(zhì)細胞(ICC細胞)觀察：

①ICC免疫組化SABC法測定：4um連續(xù)石蠟切片，按說明進行，DAB顯色。

②染色結(jié)果判定：標準以細胞有棕色或褐色著色細胞為陽性細胞。通過Olympus光學顯微鏡(×400倍)觀察胃竇組織中的ICC免疫陽性細胞的分布，每張切片隨機選取5個視野，用Image-Pro Plus圖文分析系統(tǒng)分析胃竇組織中ICC陽性細胞的灰度值。組織中ICC含量與灰度值呈正比，灰度值越大，表示ICC含量越多。

3.統(tǒng)計學方法：

數(shù)據(jù)分析以計量資料均數(shù)±標準差表示，采用方差分析，應(yīng)用統(tǒng)計學軟件SPSS15.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。

4結(jié)果

4.1大鼠一般情況的觀察：

①造模期間大鼠一般情況的觀察：

造模期間，空白對照組大鼠飲水、飲食量較穩(wěn)定，無明顯變化，體重較造模前明顯增加；毛色潔白、柔軟，有光澤，糞便性狀、量和氣味無特殊改變；精神狀態(tài)良好。

模型對照組大鼠飲水、飲食量逐漸減少，體重呈下降趨勢；毛發(fā)污黃，干澀無光澤，糞便質(zhì)軟，含水份較多，氣味穢臭刺鼻；性情暴躁，易被激惹，甚至相互撕咬，易驚恐，并互相聚集于鼠籠一角；

本發(fā)明藥物組、多潘立酮組：大鼠治療前一般情況與模型對照組大鼠無明顯差別，治療后，進食量、飲水量，體重較前明顯增加；毛色無明顯改變；糞便干燥含水量減少，氣味穢臭；性情稍溫順，活潑，撕打明顯減少。

②藥物治療后大鼠一般情況的觀察：空白對照組同造模期間；模型對照組大鼠一般情況與造模期間基本相同，但飲水、飲食量，體重減少更加明顯；本發(fā)明藥物組、多潘立酮組經(jīng)藥物治療后進食量有所增加，飲水量也趨于穩(wěn)定，體重增加，但高劑量組增加明顯，毛色改變不明顯，糞便干燥含水量減少，性情稍溫順，活潑，撕咬明顯減少。

4.2大鼠胃及十二指腸解剖結(jié)果觀察：

①造模后解剖大鼠觀察胃及十二指腸有無器質(zhì)性病變：

造模結(jié)束后，6個實驗組中，各組隨機取大鼠2只，行腹部解剖剪開胃、十二指腸觀察到胃及十二指腸粘膜色澤正常，無充血水腫，糜爛，出血，無潰瘍、隆起等器質(zhì)性病變，符合FD的鏡下特征。

②實驗結(jié)束后解剖大鼠觀察胃及十二指腸有無器質(zhì)性病變：

實驗結(jié)束后，對所有老鼠處死后行腹部剪開胃部、十二指腸觀察到胃及十二指腸粘膜色澤正常，無充血水腫，糜爛，出血，無潰瘍、隆起等器質(zhì)性病變。

4.3各組大鼠胃泌素(GAS)的比較：

本發(fā)明藥物各組、多潘立酮組的胃泌素均較模型組明顯升高(P<0.01)，其中，以本發(fā)明藥物高劑量組的胃泌素水平最高，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮(P<0.01)，本發(fā)明藥物中、低劑量組與陽性藥多潘立酮胃泌素相當(P>0.05)。

見表2。

表2各組大鼠胃泌素比較(ng/L)

注：與空白對照組比較：^●P＜0.01，^○P＞0.05；與模型對照組比較：^▲P＜0.01；與低劑量組比較：^★P＜0.05，^☆P＞0.05；與中劑量組比較：^■P＜0.05；^□P＞0.05；與高劑量組比較：^◆P＜0.01；

可見，本發(fā)明藥物可以有效恢復功能性消化不良大鼠血中的胃泌素水平，進而促進胃腸動力。其中，尤其以藥物高劑量組效果最好，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮。

4.4各組大鼠胃竇組織中ICC陽性細胞的灰度值的比較：

本發(fā)明藥物各組、多潘立酮組的胃竇ICC陽性細胞灰度值均較模型組明顯升高(P＜0.01)，趨向于空白對照組。其中，以本發(fā)明藥物高劑量組的胃泌素水平最高，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮(P＜0.01)，本發(fā)明藥物中、低劑量組與陽性藥多潘立酮的胃竇ICC陽性細胞灰度值相當(P＞0.05)。

見表3，圖1-6。

表3各組大鼠胃竇組織中ICC陽性細胞的灰度值

注：與空白對照組比較：^●P＜0.01；與模型對照組比較：^▲P＜0.01；與低劑量組比較：^★P＜0.05，^☆P＞0.05；與中劑量組比較：^■P＜0.05，^□P＞0.05；與高劑量組比較：^◆P＜0.01；

可見，本發(fā)明藥物可以有效恢復功能性消化不良大鼠血中的胃竇ICC陽性細胞含量，進而增強胃腸道蠕動，提高胃動力，達到促進消化的效果。其中，尤其以藥物高劑量組效果最好，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮。

因此，本發(fā)明藥物能夠調(diào)節(jié)胃腸激素分泌、促進胃排空，提高cajal間質(zhì)細胞的數(shù)量，從而達到達到疏肝和胃的目的，可用于治療功能性消化不良。而且效果良好，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮。

綜上所述，本發(fā)明組合物配伍合理，可以緩解功能性消化不良引起的各種不適癥狀，對功能性消化不良的療效佳，顯著優(yōu)于陽性藥多潘立酮；而且本發(fā)明組合物安全性好，使用方便，為臨床提供了一種新的藥物選擇。