本發(fā)明涉及護(hù)膚品領(lǐng)域
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種可溶性微針貼片及其制備方法。
背景技術(shù)：
：微針作為一種新型的經(jīng)皮給藥技術(shù)，具有顯著的優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)的經(jīng)皮給藥以皮下注射為主，這種給藥方式的優(yōu)點(diǎn)是突破了角質(zhì)層屏障，直接將藥物輸送到皮膚深層，準(zhǔn)確有效地給藥，缺點(diǎn)是常常引起疼痛、皮膚感染、組織損傷等問題，降低了患者用藥的順應(yīng)性；傳統(tǒng)的透皮給藥如藥物涂覆、膏藥貼片等，其優(yōu)點(diǎn)是使用方便，無痛，可以隨時(shí)停止給藥，繞過了肝臟的第一道代謝，缺點(diǎn)是透皮給藥受限于皮膚角質(zhì)層形成的屏障，藥物吸收效果不理想，不能輸送大分子藥物，尤其是肽類藥物和蛋白質(zhì)藥物。微針經(jīng)皮給藥作為一種傳統(tǒng)的經(jīng)皮給藥與透皮給藥技術(shù)相結(jié)合的新型給藥方式，既結(jié)合了透皮貼劑和皮下注射的優(yōu)點(diǎn)，具有傳輸速度快，能夠?qū)崿F(xiàn)精確給藥等特點(diǎn)，又消除了普通的注射器容易引起皮膚損傷、痛疼及感染等副作用，克服了傳統(tǒng)的透皮給藥貼片難以實(shí)現(xiàn)大分子藥物輸送的缺點(diǎn)。微針給藥不僅可以提高給藥精度和效率，同時(shí)還具有無痛和微量的特點(diǎn)，微針技術(shù)不僅在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，在美容領(lǐng)域更是受到了前所未有的熱捧，微針美容已在歐美、日本、韓國等地廣泛使用。微針在美容領(lǐng)域的用途十分廣泛，它既可以用于美體塑形，也可以用于美容美膚，對(duì)治療脫發(fā)、修復(fù)泡痕等也有很好的效果；總的來說，可以將微針在美容美體方面的應(yīng)用概括為以下幾個(gè)方面：對(duì)抗皮膚衰老、預(yù)防和治療脫發(fā)、減輕體重、治療痤瘡、去除死皮組織、減少脂肪的局部堆積、皮膚干癖等。微針之所以能夠發(fā)揮卓越的美容護(hù)膚功效，并在美容領(lǐng)域備受關(guān)注，其原理可以歸結(jié)為以下兩點(diǎn)：(1)局灶性損傷效應(yīng)：采用微針陣列處理皮膚，可以瞬間在皮膚表面創(chuàng)造成千上萬個(gè)微小的創(chuàng)口，在外界刺激下，機(jī)體會(huì)進(jìn)行修復(fù)，引起一些積極效應(yīng)。(2)微孔道滲透效應(yīng)：采用微針陣列對(duì)皮膚進(jìn)行預(yù)處理，可以短時(shí)間內(nèi)在皮膚表面創(chuàng)造成千上萬的微小通道，從而使美容護(hù)膚用品或者藥物活性成分透過角質(zhì)層障礙直接到達(dá)皮膚深層，將護(hù)膚用品或者藥物活性成分準(zhǔn)確定位、精確定量的輸送到需要修復(fù)、改善或治療的部位，充分發(fā)揮藥物功效?；谝陨显?，可以根據(jù)修復(fù)部位、皮膚狀況的不同，選用化妝品活性成分以及微針的尺寸，提高微針的靈活性和適用性，高效、準(zhǔn)確的實(shí)現(xiàn)治療和保養(yǎng)的目的。然而，近年來流行的美容微針多是采用生物不可降解的實(shí)心微針，例如微針滾輪、微針美塑，納米微針等，均給消費(fèi)者帶來一些不利因素，諸如：第一，高成本高價(jià)格。目前微針的制造大多采用的是激光雕刻方法或者采用高價(jià)格材料制造，導(dǎo)致制造難度大，制造成本或材料成本費(fèi)高，致使美容微針價(jià)格極高，很難實(shí)現(xiàn)大面積推廣。第二，安全性。目前市場(chǎng)出現(xiàn)了金屬微針，或單晶硅微針，但是由于微針本身細(xì)小的特點(diǎn)，相比之下強(qiáng)度降低，易斷裂在皮膚內(nèi)部，造成皮膚下層發(fā)炎損傷，且金屬材質(zhì)造成有很明顯的疼痛感，或者有的采用其他材料制造，對(duì)人體造成傷害，頻繁使用會(huì)造成毛孔增大、色素沉著；醫(yī)療機(jī)構(gòu)微針滾輪如果共用，工具就有機(jī)會(huì)殘留他人血液，易導(dǎo)致艾滋病、肝炎等得傳播。第三，實(shí)用性。目前大多數(shù)美容微針產(chǎn)品只能實(shí)現(xiàn)在美容機(jī)構(gòu)或醫(yī)院由專業(yè)人員或者專業(yè)人員指導(dǎo)下使用，或者由于技術(shù)原因造成使用的安全性無法保證，導(dǎo)致微針的操作難度大，便利性較低。而可溶性微針的面世恰恰彌補(bǔ)了目前微針美容的缺陷，透明質(zhì)酸微針就是其中一種。以透明質(zhì)酸為基質(zhì)制備微針，當(dāng)其刺入人體皮膚后，透明質(zhì)酸在體液作用下溶解滯留于皮膚內(nèi)，不僅可以起到美容作用，而且由于透明質(zhì)酸是人體內(nèi)源性物質(zhì)，不會(huì)引起炎性反應(yīng)。但是，現(xiàn)有的透明質(zhì)酸微針存在硬度不夠，或者強(qiáng)度欠佳，不足以刺穿皮膚，易造成針體斷裂，或者粘度過高不利于制備成型等缺陷。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：基于此，本發(fā)明提供了一種可溶性微針貼片。該可溶性微針貼片具有良好的溶解性，并且具有良好的硬度和機(jī)械強(qiáng)度。具體技術(shù)方案如下：一種可溶性微針貼片，包括針尖和基底，所述針尖由以下重量份的原料制備而成：透明質(zhì)酸或其鹽7-14份功能活性成分0.05-0.2份賦形材料6-11份；所述透明質(zhì)酸或其鹽為小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽和大分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的混合物，所述小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量不大于10kda，所述大分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量不小于1800kda；所述功能活性成分選自寡肽-1、寡肽-3、水解膠原以及透明質(zhì)酸或其鹽中的至少一種；所述賦形材料選自聚乙烯醇(pva)及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)及其衍生物、乳糖、山梨糖醇、葡聚糖(dex)、海藻糖和蔗糖中的至少一種。在其中一些實(shí)施例中，所述針尖由以下重量份的原料制備而成：透明質(zhì)酸或其鹽9-12份功能活性成分0.08-0.15份賦形材料8-10份。在其中一些實(shí)施例中，所述小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為5k-10kda，所述大分量的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為1800k-3000kda。在其中一些實(shí)施例中，所述小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽和所述大分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為100-600：1。在其中一些實(shí)施例中，所述小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽和所述大分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為198-499:1。在其中一些實(shí)施例中，所述小分子量的透明質(zhì)酸或其鹽和所述大分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為198-199:1。在其中一些實(shí)施例中，所述功能活性成分為寡肽-1和/或寡肽-3。在其中一些實(shí)施例中，所述功能活性成分為質(zhì)量比為1:1-4的寡肽-1和寡肽-3的組合物。在其中一些實(shí)施例中，所述賦形材料選自聚乙烯吡咯烷酮和葡聚糖。在其中一些實(shí)施例中，所述賦形材料為質(zhì)量比為1:7-9的聚乙烯吡咯烷酮k30和葡聚糖70的組合物。在其中一些實(shí)施例中，所述基底由基底材料制備而成，所述基底材料選自聚乙烯醇及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮及其衍生物、透明質(zhì)酸或其鹽、乳糖、山梨糖醇、葡聚糖、海藻糖和蔗糖中的至少一種。在其中一些實(shí)施例中，所述基底材料為透明質(zhì)酸或其鹽或者乳糖與透明質(zhì)酸或其鹽的組合物。在其中一些實(shí)施例中，所述乳糖與透明質(zhì)酸或其鹽的組合物中乳糖與透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為1:4-9。本發(fā)明還提供了上述可溶性微針貼片的制備方法。具體技術(shù)方案如下：一種上述的可溶性微針貼片的制備方法，包括以下步驟：將賦形材料溶于水中，加入透明質(zhì)酸或其鹽，攪拌均勻，加入功能活性成分，攪拌均勻，脫氣泡，得針尖液；將基底材料溶于水中，得基底液；將針尖液注入微針模具中，再將基底液平鋪在針尖液上，干燥除水，剝離模具，即得。本發(fā)明的發(fā)明人通過深入研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的透明質(zhì)酸微針之所以存在硬度不夠，或者強(qiáng)度欠佳，或者粘度過高不利于制備成型等缺陷，是因?yàn)檫x用的透明質(zhì)酸的分子量過高或者過低造成的。透明質(zhì)酸是線性大分子，在水中溶解較低濃度的透明質(zhì)酸時(shí)，水溶液粘度就急劇增加，并且是隨透明質(zhì)酸分子量增加而增大的。例如，水中溶解5％的分子量1500kda的透明質(zhì)酸時(shí)，溶液幾乎成半固體狀態(tài)。因此，透明質(zhì)酸的這種性質(zhì)不利于微注模法生產(chǎn)微針貼片，且制造出來的針體固含量不足，導(dǎo)致針體雖不易斷裂，但硬度不足。而分子量較低的透明質(zhì)酸的水溶液在較高濃度時(shí)(例如10％)，粘度比高分子量的透明質(zhì)酸低，但是分子量太低的透明質(zhì)酸制備的微針陣列，針體硬度足夠，但強(qiáng)度欠佳，不足以刺穿皮膚，易造成針體斷裂。發(fā)明人在其大量的實(shí)驗(yàn)過程中意外的發(fā)現(xiàn)當(dāng)將分子量不大于10kda的透明質(zhì)酸或其鹽以及分子量不小于1800kda的透明質(zhì)酸或其鹽以一定比例復(fù)配后，再通過加入特定種類的賦形材料，制備得到的微針可有效解決現(xiàn)有透明質(zhì)酸微針存在的硬度不夠，機(jī)械強(qiáng)度欠佳，或者粘度過高不利于制備成型等缺陷。因此，本發(fā)明的可溶性微針貼片及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：本發(fā)明的可溶性微針貼片針體固含量大，具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、具有足夠的硬度、利于刺入皮膚，同時(shí)不易折斷，制備過程中具有合適的粘度，有利于微針成型。本發(fā)明的可溶性微針貼片能夠迅速在皮膚內(nèi)溶解并被人體快速吸收，減少對(duì)皮膚的刺激性，生物相容性及安全性好，且含有多種功能活性成分，具有撫平細(xì)紋、美白、保濕、抗皺、祛斑、防曬的功效等護(hù)膚效果。本發(fā)明的可溶性微針貼片，其微針基底膜具有良好的柔韌性，能夠與皮膚緊密接觸無異物感?；啄げ牧峡蛇M(jìn)一步優(yōu)選為具有活性的透明質(zhì)酸鈉，能夠短時(shí)間在皮膚上溶解，作用于皮膚，可進(jìn)一步增強(qiáng)可溶性透明質(zhì)酸微針貼片的護(hù)膚效果。附圖說明圖1為實(shí)施例2中的處方1的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖2為實(shí)施例2中的處方2的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖3為實(shí)施例2中的處方3的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖4為實(shí)施例2中的處方4的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖5為實(shí)施例2中的處方5的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖6為實(shí)施例2中的處方6的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖7為實(shí)施例2中的處方7的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖8為實(shí)施例2中的處方8的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖9為實(shí)施例2中的處方9的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖10為實(shí)施例2中的處方10的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖11為實(shí)施例2中的處方11的微針經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的顯微鏡圖。圖12為實(shí)施例4中的處方1的微針電鏡掃描圖。圖13為實(shí)施例4中的處方2的微針電鏡掃描圖。圖14為實(shí)施例4中的處方3的微針電鏡掃描圖。圖15為實(shí)施例4中的處方4的微針電鏡掃描圖。圖16為實(shí)施例4中的處方5的微針電鏡掃描圖。圖17為實(shí)施例4中的處方6的微針電鏡掃描圖。圖18為實(shí)施例4中的處方7的微針電鏡掃描圖。圖19為實(shí)施例4中的處方8的微針電鏡掃描圖。圖20為實(shí)施例4中的處方9的微針電鏡掃描圖。圖21為實(shí)施例4中的處方10的微針電鏡掃描圖。圖22為實(shí)施例4中的處方11的微針電鏡掃描圖。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的可溶性微針貼片及其制備方法做進(jìn)一步詳細(xì)的說明。實(shí)施例1微針貼片基底膜的溶解速度以及揭膜完整度測(cè)試按照表1的處方制備基底液，其中，ha-thm是指高分子透明質(zhì)酸鈉(其分子量為1800k～3000kda)，tl100是指透明質(zhì)酸彈性體(ha通過交聯(lián)反應(yīng)得到的超高分子量聚合物)，pva是指聚乙烯醇。將平鋪的基底液用刮器刮平并調(diào)整至相應(yīng)的厚度，得到所需厚度的基底膜，常溫干燥設(shè)備中干燥24小時(shí)，取出，即得微針貼片的基底膜樣品。表1揭膜完整率是指揭膜后最完整的那塊膜重與所有膜重的比值，按下式計(jì)算:fi＝m1/(m1+m2)×100％式中，fi為揭膜完整率(％)；m1為最完整膜重；m2為小塊膜重。稱取1g的基底膜放入60℃、100ml水中，快速攪拌至溶液中無碎片為止，記錄溶解單位質(zhì)量的基底膜所需的時(shí)間，以表示溶解速度(min/g)。結(jié)果如表2所示。表2由實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，處方f3、f4、f5制備的基底具有良好的柔韌性以及揭膜完整性，且無異物感，效果較好。另外，隨著低分子輔料的不斷添加，微針基底膜的柔軟度上升，溶解速度上升，但韌性和揭膜完整性會(huì)下降。實(shí)施例2用不同配方材料制備的透明質(zhì)酸鈉微針貼片的硬度和延展性將賦形材料與透明質(zhì)酸鈉(ha，分子量5k～10kda)和高分子透明質(zhì)酸鈉(ha-thm，分子量1800k～3000kda)按照表3的比例于30℃攪拌條件下溶于50g注射用水，溶解完全后得針尖液。將上述針尖液倒入含有大量圓錐微孔的微針模具中，抽真空后回收多余針尖液，圓錐孔底邊直徑200μm，深400μm，再將基底液(ha-thm:水＝1:40)平鋪在針尖液上，最后將微針模具置于真空干燥箱中，30℃加熱下抽真空干燥48h。剝離微針模具即得含有寡肽-1和寡肽-3活性成分的可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片。所得微針長(zhǎng)400μm。表3將以上制備得到的微針貼片的針尖向上放置于水平的測(cè)試平臺(tái)上，應(yīng)用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)試不同配方的微針硬度和延展性。通過p/6型平頭不銹鋼圓柱探頭，以穩(wěn)定的0.1mm/sec的速度進(jìn)行測(cè)試，激發(fā)力為0.05n，施加軸向垂直力，設(shè)定測(cè)定參數(shù)如表4。分析儀記錄探頭接觸針尖直到達(dá)到預(yù)設(shè)高度(微針高度400μm)期間的力學(xué)變化。表4測(cè)試完成后，取出測(cè)試平臺(tái)上已測(cè)試過的微針樣品，用顯微鏡觀察經(jīng)過質(zhì)構(gòu)儀探頭作用力后的微針局部形態(tài)變化。應(yīng)用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)試不同配方的微針硬度、延展性結(jié)果見表5，采用數(shù)字顯微鏡觀測(cè)微針測(cè)試完后的外觀形態(tài)圖片如圖1-圖11所示。表5不同配方的微針硬度和延展性結(jié)果分析：微針在被施壓的過程中力量的變化呈緩慢遞增，表示微針處于緩慢的形變過程，沒有突然的斷裂使壓力波動(dòng)說明該配方所制備的微針的延展性良好(最佳范圍為0.95～1.35mm之間)，即該配方擁有良好的針體強(qiáng)度，但如果延展性過大則表明針體的形變耐受值過大，反而不利于針體刺進(jìn)皮膚。而硬度(最佳范圍為大于22n)與延展距離的比值表示單位延展距離內(nèi)的硬度值，比值越大表明針體更易刺進(jìn)皮膚(最佳范圍為大于18n/mm)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果從顯微鏡圖與表5中發(fā)現(xiàn)f1～f8處方的微針具備明顯剛性與硬度，硬度依序?yàn)閒1>f3>f2>f4>f9>f6>f5>f7>f10>f8>f11。而f9～f11的樣品如圖9～圖11所示則出現(xiàn)斷裂，表明其延展性差，強(qiáng)度差。而未斷裂樣品(f1～f8)相對(duì)于前三個(gè)樣品(f9～f11)顯示具備較強(qiáng)延展性，即表明樣品具有較好的強(qiáng)度。這主要是由于低分子量的透明質(zhì)酸鈉與高分子量的透明質(zhì)酸鈉在分子量上具有良好的協(xié)同作用，再配合賦形材料(如葡聚糖、pvp、乳糖等)使得所制備的微針樣品兼?zhèn)鋸?qiáng)度和硬度。在硬度和延展距離的比值上，處方f1～f4相對(duì)更大，說明處方f1～f4制備的微針更有可能插入皮膚，其中f1號(hào)處方在硬度、延展性以及硬度延展性的比值均優(yōu)于其他處方，即通過調(diào)節(jié)ha與ha-thm的配比以及賦形材料的用量和種類，可產(chǎn)生良好的協(xié)同作用，使制備得到的微針樣品同時(shí)具有的良好的硬度以及延展性，且硬度和延展距離的比值也符合使用要求，使微針針體更容易刺進(jìn)皮膚。可見，處方f1-f8制備的微針的綜合效果遠(yuǎn)好于處方f9～f11，這是高分子透明質(zhì)酸鈉(分子量大于1800kda)以及低分子透明質(zhì)酸鈉(分子量小于10kda)以及賦形材料共同配合的結(jié)果。其中，處方f1制備的微針的綜合效果最好，具有最好的硬度以及延展性，同時(shí)具備最佳的硬度延展性比值，這表明該處方制備的樣品最利于刺進(jìn)人體的皮膚。由于f9只用了低分子透明質(zhì)酸鈉，f10沒有添加賦形材料，f11所用透明質(zhì)酸鈉的分子量不合適，導(dǎo)致f9-f11所制備的微針硬度或者延展性上效果不佳，甚至出現(xiàn)斷裂，不利于實(shí)際臨床應(yīng)用。實(shí)施例3可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片的溶解度測(cè)定精密稱量不同質(zhì)量的明膠，純化水，蔗糖按表6比例配制，置于50ml離心管中，90℃水浴鍋中過夜溶解，離心，脫氣，快速轉(zhuǎn)移至透明的培養(yǎng)皿中，冷卻，凝固成不同含水量的明膠蔗糖凝膠體。表6明膠凝膠體成分組成將實(shí)施例2中制備的可溶性微針貼片沿著培養(yǎng)皿邊緣插入凝膠體表面，從側(cè)面用電子顯微鏡在不同時(shí)間點(diǎn)觀察，采圖，記錄不同時(shí)間點(diǎn)的溶解情況，觀察至無明顯可見微針體作為溶解終點(diǎn)，取出微針在顯微鏡下進(jìn)一步觀察確認(rèn)溶解時(shí)間點(diǎn)?？扇苄晕⑨樤诓煌棵髂z中的溶解性見表7，由于皮膚的生理架構(gòu)，皮膚的分層層次是以角質(zhì)層為最外層，含水量最低約20％，依次向內(nèi)有透明層、顆粒層、棘細(xì)胞層、基底層，各層占比在皮膚表層比例不同，并且越向內(nèi)部水分越高越接近人體組織含水量大約70％左右，所以將不同層占比根據(jù)皮膚表皮層解剖結(jié)構(gòu)比列為：角質(zhì)層：透明層：顆粒層：棘細(xì)胞層：基底層＝2:1.5:2.5:3:1，規(guī)定不同溶解時(shí)間與不同層數(shù)的百分比相乘之和作為綜合溶解時(shí)間，能綜合的評(píng)價(jià)體外溶解時(shí)間和預(yù)測(cè)微針在體內(nèi)的溶解時(shí)間。即綜合評(píng)價(jià)溶解時(shí)間＝t30×20％+t40×15％+t50×25％+t60×30％+t60×10％。表7不同配方材料的可溶性微針插入明膠的溶解性結(jié)果分析：不同處方的綜合溶解時(shí)間大小:f11>f9>f10>f6>f1>f4>f2>f5>f8>f3>f7，通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)處方f1-f8的微針體外綜合溶解時(shí)間都基本控制在10min以內(nèi)，溶解速度較快，與其它配方比較溶解相對(duì)較快，且各處方差異不大，均滿足微針貼片作為化妝品的使用要求。從處方組成發(fā)現(xiàn)，f11使用分子量為100kda以及1500kda的透明質(zhì)酸鈉制備的可溶性微針溶解速度最慢，為12.48min。f1到f7進(jìn)行比較，含有k30,dex40的微針(f7)溶解性較含有k90，dex70的微針(f1)的溶解性好，原因主要是在于dex70，k90的分子量分別大于dex40和k30，而導(dǎo)致制備出來的微針樣品溶解性能的下降；而在f1到f5的比較中發(fā)現(xiàn)，在其他配比相同的情況下，隨著ha含量的上升以及ha-thm的下降，所制備出的微針樣品溶解性能有所上升，這主要是由于低分子量的ha比例的上升以及高分子量ha-thm比例的下降影響了微針樣品的溶解能力，表明低分子量物質(zhì)含量上升或者高分子物質(zhì)含量下降有利于溶解速度的上升。而將k90以及dex70替換成pva以及乳糖后，由于材料在明膠中吸水性質(zhì)以及分子量的變化，導(dǎo)致制備出的微針樣品的溶解速度也有所提升。另外，在其他配比相同的情況下，把透明質(zhì)酸鈉的分子量替換為100kda以及1500kda后，微針的溶解速度大幅度下降，表明該分子量下的透明質(zhì)酸鈉組合的溶解性能差，這主要與不同分子量的材料在明膠中的吸水能力以及溶解能力有關(guān)。而f9與f10中，高分子透明質(zhì)酸鈉以及其他高分子輔料的去除也降低了微針樣品的溶解速度，這可能與不同高分子材料之間的性質(zhì)互補(bǔ)，以及各種材料在明膠中的吸水能力以及溶解能力有關(guān)。實(shí)施例4冷場(chǎng)掃描電鏡法觀察評(píng)價(jià)可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片的外觀形態(tài)將實(shí)施例2制備的12組可溶性透明質(zhì)酸鈉微針樣品，用剪刀裁剪呈適當(dāng)大小的規(guī)格，針尖朝上用導(dǎo)電膠布固定在金屬板上，在不同微針樣品與金屬板之間用導(dǎo)電膠搭建導(dǎo)電橋，放在離子濺射儀上噴金后，通過jfc-1600自動(dòng)噴金儀用鉑金進(jìn)行包被，在20ma電流下作用30s以產(chǎn)生5nm厚度金屬層。將微針樣品在5kv電壓下，采集圖像。利用冷場(chǎng)電子掃描顯微鏡采集到的不同處方的微針電鏡圖片如圖12-圖22所示。結(jié)果分析：不同處方對(duì)應(yīng)的圓錐狀的微針表面有類似螺紋或等高線一樣的紋理，部分配方制備的微針有多處暗斑，推測(cè)可能是由于局部有較大面積的缺損而形成的凹槽或缺口，其中以配方f9、f10、f11表面暗斑較多，配方f1、f2、f3、f4、f5、f6、f7、f8表面紋理相對(duì)致密。微針表面螺紋的致密度直觀的表征了針體表面的形態(tài)，螺紋越密，則表面趨于越光滑，不連續(xù)性暗斑則表示此處可能存在較大幅度的升降或局部存在不規(guī)則的孔隙等，這可能與高分子材料的種類與配比的不同在干燥過程所顯現(xiàn)的性質(zhì)不同有關(guān)。實(shí)施例5可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片安全性考察對(duì)實(shí)施例2處方1制備的可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片進(jìn)行安全性考察。一、取6只大鼠，試驗(yàn)前24小時(shí)對(duì)給藥區(qū)進(jìn)行脫毛處理。在大鼠背部左右兩側(cè)各選取兩塊對(duì)稱區(qū)域，去毛范圍為2cm×2cm(給藥前應(yīng)檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行試驗(yàn))。6只大鼠背部皮膚選擇兩塊區(qū)域分別設(shè)為刺激后72h組，刺激后48h組、刺激后24h組，刺激后1h組，連續(xù)多次刺激組，空白對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組僅去毛，不給藥；刺激后72h組用于考察微針材料對(duì)大鼠皮膚刺激后72h的變化；刺激后48h組用于考察微針材料對(duì)大鼠皮膚刺激后48h的變化；刺激后24h組用于考察微針材料對(duì)大鼠皮膚刺激后24h的變化；刺激后1h組用于考察微針材料對(duì)大鼠皮膚刺激后1h的變化；連續(xù)多次刺激組用于考察連續(xù)5d對(duì)大鼠皮膚刺激的變化。刺激后72h組：取待測(cè)微針直接按壓于已去毛的左右背部皮膚上，按壓2min，然后用無刺激性膠布加以固定，固定時(shí)間2h。2h后除去背部微針。待除去微針后72h，對(duì)左右背部皮膚進(jìn)行刺激性評(píng)分。刺激后48h組：取待測(cè)微針直接按壓于已去毛的左右背部皮膚上，按壓2min，然后用無刺激性膠布加以固定，固定時(shí)間2h。2h后除去背部微針。待除去微針后48h，對(duì)左右背部皮膚進(jìn)行刺激性評(píng)分。刺激后24h組：取待測(cè)微針直接按壓于已去毛的左右背部皮膚上，按壓2min，然后用無刺激性膠布加以固定，固定時(shí)間2h。2h后除去背部微針。待除去微針后24h，對(duì)左右背部皮膚進(jìn)行刺激性評(píng)分。刺激后1h組：取待測(cè)微針直接按壓于已去毛的左右背部皮膚上，按壓2min，然后用無刺激性膠布加以固定，固定時(shí)間2h。2h后除去背部微針。待除去微針后1h，對(duì)左右背部皮膚進(jìn)行刺激性評(píng)分。連續(xù)多次刺激組：取待測(cè)微針直接按壓于已去毛的左右背部皮膚上，按壓2min，然后用無刺激性膠布加以固定，固定時(shí)間2h。2h后除去背部微針。24h后重復(fù)上述過程，連續(xù)5d，在第5d對(duì)左右背部皮膚進(jìn)行刺激性評(píng)分。去除藥物后在全光譜燈光下肉眼觀察5組大鼠給藥部位的皮膚反應(yīng)，并記錄給藥部位有無紅斑和水腫等情況，按皮膚刺激性的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分和刺激性評(píng)價(jià)。皮膚刺激性評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如表8和表9所示。表8皮膚刺激性評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)表9皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)注：刺激分值＝(紅斑反應(yīng)總分+水腫反應(yīng)總分)/動(dòng)物數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表10-表14所示。表10多次刺激性結(jié)果(左邊背部/右邊背部)紅斑水腫總分刺激性程度1d0/00/00極小2d0/20/01輕度3d0/00/00極小4d0/00/00極小5d0/00/00極小表11單次72h組的結(jié)果(左邊背部/右邊背部)紅斑水腫總分刺激性程度1h0/00/00極小24h0/00/00極小48h0/00/00極小72h0/00/00極小表12單次48h組的結(jié)果(左邊背部/右邊背部)表13單次24h組的結(jié)果(左邊背部/右邊背部)紅斑水腫總分刺激性程度1h2/20/02極小24h0/00/00極小表14單次1h組的結(jié)果(左邊背部/右邊背部)紅斑水腫總分刺激性程度1h0/00/00極小二、將皮膚刺激性評(píng)分完畢后的5組大鼠及空白大鼠處死并在給藥部位取皮，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法研究取下的各組皮膚中il-6、tnf-a在皮膚刺激實(shí)驗(yàn)后各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)表達(dá)的差異；用福爾馬林固定石蠟包埋的組織，切片厚3-4微米，置60±5℃的烤箱中烤干(約2小時(shí))。脫蠟，將已烤干的切片依次置于二甲苯i、ii中脫蠟，每次5分鐘，移至無水乙醇i、ii中各浸泡4分鐘，移至95％酒精中浸泡4分鐘，移至85％酒精中浸泡4分鐘，再移至70％酒精中浸泡4分鐘，流水沖洗2分鐘?？乖迯?fù)，將已沖洗干凈的組織切片放入高壓鍋內(nèi)，加入約3000ml左右的citrate抗原修復(fù)液(ph6.0)，蓋好高壓檢查安全筏，用高火加熱煮沸后調(diào)至低火保持沸騰噴氣3分鐘，關(guān)掉正在工作中的電磁爐開關(guān)。兩分鐘后將高壓鍋移至冷水中冷卻。待高壓鍋內(nèi)抗原修復(fù)液完全冷卻后，打開高壓鍋將組織切片用流水沖洗干凈移至蒸餾水中浸泡2分鐘。阻斷，再將組織切片在3％h2o2中浸泡8分鐘，流水沖洗，蒸餾水沖洗。取出切片，擦干組織周圍的水，用dako畫圈筆在組織塊周圍畫一圓圈注意圈接頭要接好，防止抗體跑出圈外造成假陰性。再用pbs緩沖液沖洗。滴加抗體(一抗)，甩去待測(cè)組織切片上多余的pbs，滴加一抗。放置在孵育盒內(nèi)4℃冰箱中過夜孵育約12小時(shí)。滴加抗體(二抗)，將孵育盒從冰箱取出，恢復(fù)至室溫后取出切片，插回玻片架中，用pbs洗3次，每次5分鐘。滴加dakochemmateenvisionhrp試劑盒中的試劑a，試劑應(yīng)充分覆蓋組織。將切片放入孵育濕盒中，蓋上蓋子，連孵育盒一起放入37℃恒溫箱中孵育30分鐘。顯色、襯染、封片，dab顯色液的配制：取5ml塑料試管一支，分別加入dakochemmateenvision試劑盒中的試劑b2ml和dakochemmateenvision試劑盒中的試劑c10μl，混勻，備用。取出切片，擦掉組織周圍的多余的pbs，加入配好的dab顯色液中顯色5分鐘，在顯微鏡下控制染色的強(qiáng)度。待強(qiáng)度適中后將切片置自來水中終止顯色，再用流水沖洗5-10分鐘，蘇木素染液復(fù)染1分鐘，0.5％鹽酸酒精分化3秒鐘，流水沖洗5-10分鐘，脫水、透明、封片、鏡檢。結(jié)果判讀：對(duì)全片多個(gè)區(qū)域均染色強(qiáng)度較低的病例，隨機(jī)選取五個(gè)視野進(jìn)行評(píng)分，對(duì)全片染色強(qiáng)度較高的病例，則隨機(jī)選取一個(gè)視野進(jìn)行評(píng)分。要求顯微下每個(gè)20倍視野至少有200個(gè)可用于評(píng)價(jià)的細(xì)胞。分析每個(gè)視野中陽性細(xì)胞數(shù)的平均數(shù)作為該切片的陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行積分：6％～25％為1分，26％～50％為2分，51％～75％為3分，＞75％為4分；染色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特征為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。二者相加，0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強(qiáng)陽性(+++),其中(-)和(+)記為低表達(dá)組，(++)和(+++)記為高表達(dá)組。染色強(qiáng)度：弱染色：在40x物鏡視野才能看到細(xì)胞染色。強(qiáng)染色：在4x或10x物鏡視野能看到的細(xì)胞染色。檢測(cè)結(jié)果如表15-表24所示：表15表16表17表18表19表20表21表22表23表24結(jié)果分析：在皮膚刺激性評(píng)分中，微針對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的大鼠背部皮膚無刺激性或僅有極小刺激性，表現(xiàn)出良好的安全性。而在各實(shí)驗(yàn)組的大鼠背部皮膚中炎癥因子il-6、tnf-a的表達(dá)，表皮基底層、棘層、顆粒層、透明層、角質(zhì)層未見明顯異常，多見于真皮的毛囊及汗腺、皮脂腺。綜上所述，本發(fā)明的透明質(zhì)酸鈉可溶性微針貼片對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的大鼠背部皮膚無刺激性或僅有極小刺激性。實(shí)施例6可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片護(hù)膚效果考察測(cè)試實(shí)施例2處方1制備的可溶性透明質(zhì)酸鈉微針貼片的護(hù)膚效果。測(cè)試方法：受試者8人，眼角均有魚尾狀細(xì)紋。將上述微針貼片按壓刺入受試者右眼下部，半小時(shí)后揭除，左眼不予貼敷，作為空白對(duì)照。每周使用兩次。測(cè)試結(jié)果：使用一周后8人都有明顯祛皺效果，使用3周后，8人右眼魚尾紋均顯著改善。以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁12