一種酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠及其制備方法與應(yīng)用與流程

文檔序號：11605385閱讀：751來源：國知局

導(dǎo)航： X技術(shù)> 最新專利>醫(yī)藥醫(yī)療技術(shù)的改進(jìn);醫(yī)療器械制造及應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明涉及創(chuàng)傷敷料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

常用的創(chuàng)傷敷料為水凝膠狀，可以直接作用于病灶，作用于相應(yīng)受體，發(fā)揮藥理作用，產(chǎn)生臨床療效。但水凝膠狀創(chuàng)傷敷料在接觸病灶部位后，載有的藥物會迅速進(jìn)入體內(nèi)，使得藥物濃度超過發(fā)揮藥效的濃度，達(dá)到毒性濃度；此外，由于藥物過快地進(jìn)入體內(nèi)，并被代謝，產(chǎn)生臨床療效的時間過短，以至于病灶并未恢復(fù)，藥物已代謝排出體外，需要通過頻繁更換創(chuàng)傷敷料的方法來解決。為了避免藥物短時間內(nèi)達(dá)到藥物峰值濃度對機(jī)體產(chǎn)生毒副作用，以及藥物代謝太快造成多次換藥帶來的不便和痛苦，急需一種把藥物分子包載于穩(wěn)定載體中，形成緩釋體系，在傷口部位逐漸釋放的創(chuàng)傷敷料。

但是，目前具有藥物緩釋體系的創(chuàng)傷敷料不能廣泛使用，原因如下：首先，藥物包載于穩(wěn)定載體形成懸浮液的情況下，不易于貼合在創(chuàng)口表面，容易造成藥物分子流失，導(dǎo)致藥物不能到達(dá)病灶，最終造成單次使用劑量不能最大化，仍無法解決多次換藥的問題。其次，由于許多藥物分子水溶性較差，難以在機(jī)體內(nèi)水溶性液體環(huán)境下有效溶解，達(dá)到起效濃度，從而不能發(fā)揮臨床藥理作用。再次，包載藥物分子的載體在體內(nèi)解體釋放藥物分子的效果不夠理想，例如，載體在機(jī)體內(nèi)不能溶解，造成藥物分子無法釋放并發(fā)揮藥理作用；載體進(jìn)入機(jī)體內(nèi)即發(fā)生崩潰式溶解，藥物分子釋放無法控制；藥物顆粒分子從創(chuàng)口表面局部富集之后，會進(jìn)入微循環(huán)進(jìn)而入全身循環(huán)系統(tǒng)，導(dǎo)致藥物在病灶局部無法達(dá)到有效治療濃度，而分布至身體其他組織可能引發(fā)非預(yù)期毒副作用。

因此，一種能夠緩釋控釋且使用安全的水凝膠敷料是目前急需的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，第一方面，提供一種能夠分級逐步緩釋并將藥物顆粒富集在創(chuàng)口部位的酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠，按質(zhì)量百分含量，原料包括以下成分：

納米化的藥物0.01-1％；

明膠0.5-25％；

泊洛沙姆f12710-30％；

泊洛沙姆f682-15％；和

余量的溶劑；

所述納米化的藥物與明膠形成粒徑為1-20μm(優(yōu)選5-20μm，最優(yōu)選5-10μm)的載藥明膠微球；優(yōu)選的，所述載藥水凝膠的相變溫度為33±1℃。

按質(zhì)量百分含量，納米化的藥物優(yōu)選0.05-0.5％，最優(yōu)選0.1％；明膠優(yōu)選1-15％，最優(yōu)選10％；泊洛沙姆f127優(yōu)選15-25％，最優(yōu)選20％；泊洛沙姆f68優(yōu)選4-10％，最優(yōu)選6％。

所述溶劑選自生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液或培養(yǎng)基等等滲溶液。

所述藥物選自鎮(zhèn)痛劑、退熱劑、抗真菌藥、降壓藥、解熱鎮(zhèn)痛消炎藥、抗腫瘤藥、腫瘤并發(fā)癥輔助治療生物技術(shù)藥物、抗菌劑(如多粘菌素b)、抗病毒藥、抗微生物藥、激素、蛋白質(zhì)、核酸、紅血球生成刺激劑、抗?jié)兯幬铩⒖狗戳魉幬?、抗氧化藥?如姜黃素)等中的一種。

所述納米化的藥物的粒徑為10-200nm，優(yōu)選10-100nm。

第二方面，本發(fā)明提供一種制備上述酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠的方法，將藥物納米化后加入明膠形成水相，再與油相形成乳液，向乳液中加入交聯(lián)劑反應(yīng)形成載藥明膠微球，最后將載藥明膠微球與泊洛沙姆f127、泊洛沙姆f68和溶劑混合，得到所述酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠。

所述載藥明膠微球的粒徑在1-20μm，優(yōu)選5-20μm，最優(yōu)選5-10μm。

包括如下步驟：

(1)、藥物的納米化：將藥物溶解于其良性溶劑(良性溶劑可選自四氫呋喃、乙醇、氯仿等中的一種或幾種)中，形成濃度為0.1-5mg/ml的藥物溶液(濃度優(yōu)選0.2-2mg/ml，更優(yōu)選0.2-1mg/ml，最優(yōu)選0.5mg/ml)；向攪拌轉(zhuǎn)速為700-2000rpm(優(yōu)選1000-1800rpm，更優(yōu)選1300-1600rpm，最優(yōu)選1500rpm)的溶劑中加入藥物溶液，藥物溶液與溶劑的體積比為(1-10)：100，繼續(xù)攪拌10min-1h，形成藥物納米顆粒溶液；靜置24h后，去除良性溶劑，然后真空冷凍干燥處理(真空度在10pa以下，優(yōu)選在5pa以下，更優(yōu)選在1pa以下；溫度低于-50℃)，得到藥物納米顆粒；

(2)、形成載藥明膠微球：將明膠加入到55℃的雙蒸水中，800-1500rpm攪拌，得到10wt％的明膠溶液；將步驟(1)得到的藥物納米顆粒加入明膠溶液中，攪拌0.5-2h，形成水相；取液體石蠟加入55℃的司盤-80(span-80)中，液體石蠟與司盤-80的體積比為100:1，800-1500rpm攪拌，形成油相；將水相滴加到55±1℃的油相中，水相和油相體積比為1：(2-20)，攪拌速度為800-1500rpm，乳化30min，形成乳液；乳液移到4℃的冰水浴中，轉(zhuǎn)速保持在800-1500rpm，乳化攪拌30min，加入25wt％戊二醛溶液交聯(lián)30min(戊二醛溶液的加入體積為乳液體積的1-5％)，1000-3000rpm離心，棄上清，得到明膠固態(tài)微球，再加入明膠固態(tài)微球體積10-20倍的異丙醇脫水20min，1000-6000rpm下(優(yōu)選3000-5000rpm，更優(yōu)選3500-4500rpm)離心，乙醚、異丙醇交替沖洗三次，得到流動性粉末，40℃下真空干燥去除有機(jī)溶劑，得到載藥明膠微球；

(3)、形成載藥水凝膠：步驟(2)得到的載藥明膠微球與泊洛沙姆f127、泊洛沙姆f68混合，得到酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠。

第三方面，本發(fā)明提供上述酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠在制備傷口敷料中的應(yīng)用。

所述傷口敷料為用來治療燒傷、戰(zhàn)創(chuàng)傷、手術(shù)傷口、凍傷、皮膚相關(guān)腫瘤、皮膚感染疾病、性傳播疾病、口腔疾病、禿發(fā)、腳氣等疾病的敷料。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明提供的酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠采用藥理活性物質(zhì)(即藥物)二級自組裝，第一級為藥物自組裝成納米顆粒，第二級為納米化藥物與明膠溶液自組裝為微米球，微米球的粒徑在1-20μm范圍內(nèi)。二級自組裝的水凝膠可分散于水溶性溶液中，外敷于病灶部位，藥物可在病灶周圍富集；且在病灶特征分子mmp9作用下，納米化藥物從第二級組裝到第一級組裝逐步緩釋，富集于靶位點，發(fā)揮藥理作用。采用本發(fā)明的載藥水凝膠，其中納米化藥物對人皮膚上皮細(xì)胞hacat和人皮膚成纖維細(xì)胞bj的抗過氧化氫氧化作用和促細(xì)胞遷移作用明顯優(yōu)于未經(jīng)處理的藥物，且其藥物具有緩慢釋放的效果，作用時間得到有效延長。本發(fā)明載藥水凝膠使用方便，操作簡單，不需要頻繁換藥，減少病患痛苦。

附圖說明

圖1為本發(fā)明未載藥明膠微球和載藥明膠微球的光鏡圖。

圖2為本發(fā)明未載藥明膠微球和載藥明膠微球的粒徑分布圖。

圖3為本發(fā)明載藥明膠微球的光鏡圖。

圖4為溫敏水凝膠泊洛沙姆f127和f68對hacat和bj細(xì)胞增殖的影響效果圖。

圖5為本發(fā)明載藥明膠微球?qū)mp9的酶響應(yīng)性效果圖。

圖6為本發(fā)明載藥明膠微球隨時間變化的藥物釋放情況。

圖7為本發(fā)明載藥水凝膠作用于小鼠傷口的效果圖。

具體實施方式

本發(fā)明提供了一種酶與溫度雙響應(yīng)載藥水凝膠，所負(fù)載的藥理活性物質(zhì)(即藥物)需經(jīng)納米化處理，水凝膠既對基質(zhì)金屬蛋白酶9(mmp9)有響應(yīng)性，又是溫度敏感型水凝膠，從而實現(xiàn)對mmp9酶與溫度的雙響應(yīng)。其中，

基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，mmp9)，屬于基質(zhì)金屬蛋白酶超家族成員，又稱明膠酶b(gelatinaseb)；其基本結(jié)構(gòu)包括信號肽區(qū)、n-末端前肽區(qū)、催化基團(tuán)區(qū)、c-末端血紅素結(jié)合蛋白樣區(qū)和鉸鏈區(qū)；主要表達(dá)于單核-巨噬細(xì)胞、角化細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、破骨細(xì)胞、骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及各種腫瘤細(xì)胞等。mmp9可以在正常生理ph值和金屬鋅離子的存在下，參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解與重建，其底物主要有ⅳ、ⅴ、ⅶ、ⅹ型膠原、明膠及彈性蛋白。因此，明膠作為mmp9的底物，可以形成對mmp9響應(yīng)性載藥體系，針對病灶部位mmp9表達(dá)而裂解釋放藥物。

本發(fā)明水凝膠所負(fù)載的藥物需經(jīng)納米化處理，原因有三：其一，納米技術(shù)可以通過納米顆粒本身在機(jī)體內(nèi)藥物代謝過程而改善藥理活性成分在機(jī)體內(nèi)藥代藥動過程。其二，納米技術(shù)能夠提高藥物在病灶和靶點的富集程度，并且有利于其與靶位點結(jié)合，發(fā)揮藥理作用。其三，納米技術(shù)能夠有效提高疏水藥物的溶解度和溶解速度，提高藥物的生物可利用度?？梢姡{米技術(shù)對提高藥物療效有突出的價值。但是，納米技術(shù)的使用必須考慮其安全性，即制備納米組合物所使用的材料必須是臨床安全的，制備得到的藥物必須保持其穩(wěn)定性。因此，經(jīng)大量實驗和探索得出，納米化藥物的粒徑在10-200nm范圍內(nèi)，能夠在納米尺寸發(fā)揮更好的藥理效果，并且適合分散于明膠固態(tài)微球中。

本發(fā)明水凝膠對mmp9有響應(yīng)性，原因有四：其一，選擇病灶的標(biāo)志分子作為被響應(yīng)分子，藥物分子作為響應(yīng)分子，可形成一種動態(tài)平衡。即當(dāng)標(biāo)志分子的含量升高，對載體的溶解性能增強(qiáng)，可釋放更多的藥物；當(dāng)標(biāo)志分子含量降低，對載體的溶解性降低，藥物的釋放量降低。這樣就形成了一種針對病灶標(biāo)志分子的智能緩釋體系。其二，作為能夠載帶藥物的載體，被酶降解后必須可以作為小分子活性物質(zhì)繼續(xù)發(fā)揮藥理活性作用，包括細(xì)胞遷移和促進(jìn)細(xì)胞增殖作用。其三，該酶響應(yīng)性緩釋系統(tǒng)可以對藥物毒性有效控制，只要在病灶部位表達(dá)相應(yīng)的活性物質(zhì)，載體才被降解，藥物釋放；而在其它不存在該活性物質(zhì)的部位，載體不能被降解，藥物不能釋放。這樣可以減少藥物在非病灶部位的釋放而產(chǎn)生的毒性作用，還可以減少藥物用量，節(jié)約成本，減少藥物代謝負(fù)擔(dān)，盡可能降低肝腎毒性。其四，藥物酶響應(yīng)性還要具有生物富集作用，并且在被酶降解之前載體分子粒徑要在5μm左右時，才可充分富集在病灶周圍，而不至于進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)被代謝。這種酶響應(yīng)性緩釋系統(tǒng)在藥物緩釋以及在病灶富集中起到突出作用。

然而，酶響應(yīng)性緩釋體系的選擇和制備必須考慮以下幾點：第一，載體的生物安全性；第二，載體降解產(chǎn)物的生物安全性；第三，載體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性；第四，載體對底物反應(yīng)的敏感性和特異性；第五，載體的免疫原性。

發(fā)明人在載體的制備過程中，盡量選擇自然材料或者臨床批準(zhǔn)的材料作為原料，比如明膠，殼聚糖，改性淀粉等。這些原料與納米化的藥物組合，能夠盡量保證藥物具有較好的臨床安全性；并最終確定載體粒徑在1-20μm時，在局部用藥的情況下，可以富集到病灶周圍，不進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。

明膠是豬皮經(jīng)過酸變性而成的細(xì)胞外基質(zhì)的類似物。由于脊椎動物(甚至包括某些無脊椎動物)細(xì)胞外基質(zhì)在進(jìn)化上的保守性(比如膠原從低等動物到人類都保持著gly-x-y的結(jié)構(gòu)模式)，在生物體內(nèi)引起免疫排斥的可能性較低。明膠是變性的細(xì)胞外基質(zhì)，可以作為基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)的底物，具有響應(yīng)性和特異性，而且體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)重排很普遍，存在大量的細(xì)胞外基質(zhì)降解產(chǎn)物，這些降解產(chǎn)物生理毒性在機(jī)體可以承受的范圍之內(nèi)。明膠的降解產(chǎn)物和細(xì)胞外基質(zhì)的降解產(chǎn)物是相同的，其成分對機(jī)體的安全性可以預(yù)測。而使用殼聚糖或者改性淀粉等其它常用物質(zhì)作為載體，會產(chǎn)生以下后果：其一，殼聚糖或者改性淀粉不能形成針對mmp9的智能響應(yīng)體系，藥物不能在mmp9的作用下緩慢釋放；其二，殼聚糖和改性淀粉等的降解產(chǎn)物不能形成小分子短肽梯度，不利于細(xì)胞遷移，難以使特定細(xì)胞在特定部位聚集，不能產(chǎn)生生理活性，改變疾病進(jìn)展過程；而明膠來源于皮膚固有成分，且其細(xì)胞外基質(zhì)成分與人類細(xì)胞外基質(zhì)成分同源性較高，沒有免疫排斥；且其蛋白成分含有rgd多肽片段，能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞遷徙；其三，殼聚糖和改性淀粉分別來源于無脊椎動物和植物，在進(jìn)化上和人距離較遠(yuǎn)，易發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。

本發(fā)明水凝膠為溫度敏感型，原因有三：其一，作為溫度響應(yīng)性制劑，在2-8℃保存時呈現(xiàn)液態(tài)，使低溫保存到方便使用過程成為可能，而在體表溫度時迅速凝結(jié)為固態(tài)，便于敷貼，延長藥物與創(chuàng)口的接觸時間。其二，溫敏水凝膠可以結(jié)合體外皮膚噴槍使用，給藥途徑方便，適合單次大劑量給藥。其三，溫敏水凝膠的固液兩相性可以使藥物成為均勻的分散系。

溫敏水凝膠在作為體外用藥載體中起到突出作用，但應(yīng)用于藥物載體時必須考慮兩個方面，一方面是其生物安全性，一方面是其藥物釋放的性能。

本發(fā)明選擇泊洛沙姆f127和泊洛沙姆f68的混合物作為溫敏水凝膠的基質(zhì)，是因為泊洛沙姆f127和泊洛沙姆f68均具有熱固性，但泊洛沙姆f127在最低成膠濃度時，無法達(dá)到體表溫度的要求，加入泊洛沙姆f68制成兩種物質(zhì)的混合物后，通過調(diào)節(jié)配比，可以使其相變溫度在在33℃左右，略低于成人體表溫度，利于在皮膚表面貼合；而在低溫時表現(xiàn)為均一液相，方便在低溫保存和藥物分散。此外，兩者皆為fda批準(zhǔn)的食品藥品添加劑，在生物安全性能上符合要求。

本發(fā)明的設(shè)計理念為：假使載體是病灶內(nèi)部某種物質(zhì)的底物，就可以實現(xiàn)有針對性的緩釋，直至疾病痊愈，藥物分子將不再釋放的智能釋放形式。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提出了一種酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠，按質(zhì)量百分含量，其原料包括以下成分：

納米化的藥物0.01-1％，優(yōu)選0.05-0.5％，最優(yōu)選0.1％；

明膠0.5-25％，優(yōu)選1-15％，最優(yōu)選10％；

泊洛沙姆f12710-30％，優(yōu)選15-25％，最優(yōu)選20％；

泊洛沙姆f682-15％，優(yōu)選4-10％，最優(yōu)選6％；

余量的溶劑，溶劑可選生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液或培養(yǎng)基等等滲溶液。

其中，藥物可以選自以下種類：

解熱鎮(zhèn)痛消炎藥：如，阿斯匹林，對乙酰氨基酚，布洛芬，萘普生鈉，鹽酸叔丁啡，鹽酸丙氧酚，萘磺酸丙氧酚，鹽酸哌替啶，鹽酸二氫嗎啡酮，硫酸嗎啡，鹽酸羥考酮，磷酸可待因，酒石酸二氫可待因，鹽酸鎮(zhèn)痛新，重酒石酸二氫可待因酮，酒石酸左啡諾，二氟尼酸，水楊酸三乙醇胺，鹽酸納布啡，甲芬那酸，環(huán)丁嗎喃醇酒石酸鹽，水楊酸膽堿，布他比妥，檸檬酸芐苯醇胺，檸檬酸苯海拉明，甲氧異丁嗪，鹽酸桂麻黃堿眠爾通，等。

抗生素：如，新霉素，鏈霉素，氯霉素，頭孢菌素，氨比西林，青霉素，四環(huán)素，等)；抗糖尿病藥(如，胰島素，雙胍類，激素，硫酰脲衍生物類，等。

抗真菌藥：如，灰黃霉素，酮康唑，兩性霉素b，制霉菌素，殺念菌素，等。

降壓藥：如，普萘洛爾，普羅帕酮，烯丙氧心安，硝苯吡啶，利血平，樟腦磺酸咪噻芬，鹽酸酚芐明，帕吉林鹽酸鹽，脫甲氧利血平，二氮嗪，硫酸胍乙啶，長壓定，蘿芙木堿，硝普鈉，緩脈靈，蛇根混合堿，甲磺酸酚妥拉明，利血平，等。

抗腫瘤藥：如，紫杉醇(taxol)及其衍生物，多西紫杉醇(taxotere)及其衍生物，鹽酸阿霉素，阿霉素，表阿霉素，柔紅霉素，多柔比星，佐柔比星，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，苯乙酸氮芥，美法倫(melphalan)，烏拉莫司汀(uramustine)，磷酸雌莫司汀(estramustine)，潑尼莫司汀(prednimustine)，氮甲(formylmerphalan)，異芳芥(betamerphalan)，鄰脂芳芥(ocaphane)，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)，異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)，曲磷胺(trofosfamide)，放線菌素，博來霉素，正定霉素，曲他胺(tretamine)，替哌(triethylenephosphoramide，tepa)，塞替派(thiotepa)，亞胺醌(solaziquone)，三亞胺醌(triaziquone)，卡波醌(carboquone)，絲裂霉素，米托蒽醌，比生群(bisantrene)，依托泊苷，依托泊苷磷酸酯，替尼泊苷，5-氟尿嘧啶，替加氟(tegafur)，雙喃氟啶(tegadifur)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，卡莫氟(carmofur)，卡培他濱(capecitabine)，鹽酸阿糖胞苷(cytarabinehydrochloride)，阿糖胞苷(cytarabine)，單磷酸阿糖胞苷，二磷酸阿糖胞苷，三磷酸阿糖胞苷，依諾他賓(enocitabine)，棕櫚酰阿糖胞苷(n-palmitoyl-ara-c)，安西他濱(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，吉西他濱(gemcitabine)，6-嘌呤硫醇一水合物，6-硫代次黃嘌呤核苷酸，磺巰嘌呤鈉(sulfomercaprinesodium)，硫鳥嘌呤，硫唑嘌呤，噴司他丁(pentostatin)，氨基蝶呤(aminopterin)，甲氨蝶呤(methotrexate)，金屬鉑類衍生物(卡鉑，順鉑，奧沙利鉑，奈達(dá)鉑，舒鉑，等)，高三尖杉酯堿(homoharringtonine)及其衍生物，白消安(busulfan)，卡莫司汀(bcnu)，洛莫司汀(lomustine，ccnu)，司莫司汀(semustine，me-ccnu)，尼莫司汀(nimustine，acnu)，尼莫司汀鹽酸鹽，雷莫司汀(ranimustine)，鏈佐星(鏈脲霉素，streptozotocin)，氯脲霉素(chlorozotocin，dcnu)，雷替曲塞(raltitrexed)，培美曲塞(pemetrexed)，秋水仙堿(colchicine)，秋水仙胺，鬼臼乙叉甙，干擾素，喜樹堿及其衍生物(喜樹堿，伊立替康，鹽酸伊立替康，10-羥基喜樹堿，拓?fù)涮婵担?-乙基-10羥基喜樹堿，鹽酸拓?fù)涮婵担?0-羥基喜樹堿，等)，苯芥膽甾醇，長春堿及其衍生物(長春堿，長春新堿，長春地辛(vindesine)，長春瑞濱(vinorelbine)，酒石酸長春瑞濱，鹽酸長春瑞濱，等)，甲磺酸伊馬替尼(imatinibmesylate)，達(dá)沙替尼(dasatinib)，吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)，索拉菲尼(sorafenib)，蘋果酸舒尼替尼(sunitinibmalate)，硼替佐米(bortezomib)，三苯氧胺，鬼臼乙叉甙，哌酰硫烷，卟吩姆鈉，二氫卟吩e6(chlorine6，ce6)，5-氨基酮戊酸(5-aminolaevulinicacid，ala)，維替泊芬(verteporfin)，替莫泊芬(temoporfin)，酞菁硅，二氯酞菁硅，酞菁鋅，靶向cd52重組人源化單抗(campath，mabcampath)，重組靶向人上皮生長因子受體igg2k單抗(vectibix)，¹¹¹in-標(biāo)記和⁹⁰y-標(biāo)記靶向cd20鼠單抗(zevalin)，靶向cd20¹³¹i-標(biāo)記和非標(biāo)記鼠單克隆抗體(bexxar)，碘[¹³¹i]腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌合單克隆抗體(唯美生，vivatuxin)，靶向cd33結(jié)合化療藥單抗(mylotarg)，靶向白介素2(白喉毒素融合蛋白(ontak，onzar)，kadcyla(ado-trastuzumabemtansine)，天然lhrh多肽(布舍瑞林，buserelin)及其衍生物，那法瑞林(nafarelin)，亮丙瑞林(leuprolide)，戈舍瑞林(goserelin)，曲普瑞林(triptorelin)，天冬酰胺酶，聚乙二醇化天冬酰胺酶，重組白介素2，重組腫瘤壞死因子，干擾素α2a，干擾素α2b，內(nèi)皮抑制素)，等。

腫瘤并發(fā)癥輔助治療生物技術(shù)藥物：如，重組角化細(xì)胞生長因子palifermin，重組尿酸氧化酶rasburicase，等。

抗菌劑：如，硫酸丁胺卡那霉素，氨曲南，氯霉素，棕櫚酸氯霉素，琥珀酸氯霉素鈉，鹽酸環(huán)丙沙星，鹽酸克林霉素，棕櫚酸克林霉素，磷酸克林霉素，甲硝唑，鹽酸甲硝唑，硫酸慶大霉素，鹽酸林可霉素，硫酸妥布拉霉素，鹽酸萬古霉素，硫酸多粘菌素b，多粘菌素e甲磺酸鈉，硫酸多粘菌素e，銀納米粒子，等。

抗病毒藥：如，γ干擾素，疊氮胸苷，鹽酸金剛烷胺，利巴韋林，無環(huán)鳥苷，等。

抗微生物藥：如，頭孢菌素(頭孢唑啉鈉，頭孢拉定，頭孢克羅，頭孢匹林鈉，頭孢唑肟鈉，頭孢哌酮鈉，頭孢替坦二鈉，頭孢呋肟酯，頭孢噻肟鈉，一水合頭孢羥氨芐，頭孢他啶，頭孢氨芐，頭孢噻吩鈉，鹽酸一水合頭孢氨芐，頭孢孟多鈉，頭孢西丁鈉，頭孢尼西鈉，頭孢雷特，頭孢三嗪鈉，頭孢他啶，頭孢羥氨芐，頭孢拉定，頭孢呋新鈉，等)；青霉素類(氨芐西林，阿莫西林，芐星青霉素g，鄰氯青霉素，氨芐青霉素鈉，青霉素g鉀，青霉素v鉀，氧哌嗪青霉素鈉，苯唑青霉素鈉，鹽酸氨芐青霉素碳酯，鄰氯青霉素鈉，替卡西林鈉，阿洛西林鈉，羧茚青霉素鈉卡茚西林，青霉素g鉀，普魯卡因青霉素g，甲氧西林鈉，新青霉素iii鈉，等)；

紅霉素類(琥乙紅霉素，紅霉素，無味紅霉素，乳糖醛酸紅霉素，紅霉素硬脂酸酯，琥乙紅霉素，等)；

四環(huán)素類(鹽酸四環(huán)素，鹽酸強(qiáng)力霉素，鹽酸二甲胺四環(huán)素，等)。

抗感染藥：如，gm-csf，等。

激素：雄性激素類(如：達(dá)那唑，環(huán)戊丙酸睪酮，氟甲睪酮，乙基睪酮，庚酸睪酮，甲基睪酮，氟甲睪酮，環(huán)戊丙酸睪酮)；

雌激素類(如：雌二醇，雌酮，結(jié)合雌激素)；

孕酮類(如：醋酸甲氧孕酮，醋炔諾酮)；

皮質(zhì)類固醇類(如：去炎松，倍他米松，磷酸倍他米松鈉，地塞米松，磷酸地塞米松鈉，醋酸地塞米松，強(qiáng)的松，甲基強(qiáng)的松龍懸液，去炎松縮酮，甲基強(qiáng)的松龍，磷酸強(qiáng)的松龍鈉，琥珀酸甲基強(qiáng)的松龍鈉，琥珀酸氫化考的松鈉，琥珀酸甲基強(qiáng)的松龍鈉，六氯化曲安縮松，氫化可的松，環(huán)戊丙酸氫化可的松，強(qiáng)的松龍，醋酸氟化可的松，醋酸帕拉米松，強(qiáng)的松龍叔丁乙酯，強(qiáng)的松龍醋酸酯，強(qiáng)的松龍磷酸鈉，琥珀酸氫化可的松鈉，等)；

甲狀腺激素類(如：左旋甲狀腺素鈉，等)。

蛋白質(zhì)：如，脫氧核糖核酸酶，藻酸酶，超氧化歧化酶，脂肪酶，等。

核酸：如，編碼任何治療用蛋白質(zhì)的正義或反義核酸，包括這里提到的任何蛋白質(zhì)，cpg寡核苷酸，等。

紅血球生成刺激劑：如，紅細(xì)胞生成素，等。

抗?jié)?抗反流藥物：如，法莫替丁，甲氰咪胍，鹽酸雷尼替丁，等。

抗氧化藥物：如，姜黃素等。

在臨床使用中，姜黃素可以用作促進(jìn)傷口愈合，抗氧化，抗腫瘤，促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用，但是其溶解度較低，易于降解，姜黃素改性藥物分子出現(xiàn)藥效不完全和成本過高等問題。又由于腫瘤、創(chuàng)傷等部位基質(zhì)金屬蛋白酶9(mmp9)表達(dá)量升高，mmp9的底物主要是細(xì)胞外基質(zhì)成分，包括ⅳ型膠原等。于是，本發(fā)明試圖使用明膠作為載體，搭載納米化的姜黃素顆粒，在mmp9的作用下，明膠微米球降解，釋放姜黃素顆粒，作用于病灶，姜黃素產(chǎn)生藥理作用，mmp9降低，最終導(dǎo)致明膠微米球降解減少，使姜黃素納米球釋放減少，最終達(dá)到一種平衡狀態(tài)。在病灶周圍達(dá)到這種平衡狀態(tài)有利于針對病灶的治療，可以根據(jù)病灶的需要而釋放相應(yīng)量的藥物，組成智能酶反饋緩釋載藥體系。這一過程中需要控制明膠微米球的粒徑在1-20μm，主要集中在5-15μm，略小于細(xì)胞直徑，不至于被細(xì)胞內(nèi)吞。

本發(fā)明還提供了一種制備上述酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠的方法，適用于水溶性差、易于降解、生理活性持續(xù)時間短、共同作用于受體發(fā)揮作用的藥物；先按以上質(zhì)量百分含量稱取各原料，制備方法包括如下步驟：

(1)、藥物的納米化：將藥物溶解于其良性溶劑中，形成濃度為0.1-5mg/ml的藥物溶液(濃度優(yōu)選0.2-2mg/ml，更優(yōu)選0.2-1mg/ml，最優(yōu)選0.5mg/ml)，良性溶劑根據(jù)藥物理化性質(zhì)選擇，可選自四氫呋喃、乙醇、氯仿等中的一種或幾種；在溶劑的攪拌轉(zhuǎn)速為700-2000rpm(優(yōu)選1000-1800rpm，更優(yōu)選1300-1600rpm，最優(yōu)選1500rpm)的條件下，緩慢加入藥物溶液(藥物溶液與溶劑的體積比為(1-10)：100)，攪拌10min-1h，通過藥物自組裝作用，形成藥物納米顆粒溶液；靜置24h后，旋蒸去除良性溶劑，然后真空冷凍干燥處理(真空度在10pa以下，優(yōu)選在5pa以下，更優(yōu)選在1pa以下；溫度低于-50℃)，得到藥物納米顆粒。藥物納米顆粒的平均粒徑為10-200nm，這樣易于包被于微米級載體中，實現(xiàn)緩釋功能；該納米顆粒在今后的溶液稀釋、冷凍干燥處理過程中不解離且不聚集。

(2)、形成載藥明膠微球：將明膠加入到雙蒸水中，55℃，800-1500rpm攪拌，得到10wt％的明膠溶液；將步驟(1)得到的藥物納米顆粒緩慢加入明膠溶液中，充分?jǐn)嚢?.5-2h，形成水相。取液體石蠟加入司盤-80(span-80)中，55℃，800-1500rpm攪拌均勻，形成油相；液體石蠟與司盤-80的體積比為100:1。將水相緩慢均勻滴加到油相中，滴加時油相保持在55±1℃，攪拌速度為800-1500rpm，乳化30min，形成均勻的乳黃色乳液(水相和油相體積比為1：(2-20))，然后快速移到4℃的冰水浴中，轉(zhuǎn)速保持在800-1500rpm，乳化攪拌30min，加入乳黃色乳液體積1-5％的25wt％戊二醛溶液交聯(lián)30min(即戊二醛溶液的加入體積為乳黃色乳液體積的1-5％)，1000-3000rpm離心，棄上清，得到明膠固態(tài)微球，加入明膠固態(tài)微球10-20倍體積的異丙醇脫水20min(即異丙醇的加入體積為明膠固態(tài)微球體積的10-20倍)，用離心機(jī)1000-6000rpm下(優(yōu)選3000-5000rpm，更優(yōu)選3500-4500rpm)離心，乙醚、異丙醇交替沖洗三次，得到流動性粉末，把流動性粉末平鋪在表面皿上，40℃下真空干燥去除有機(jī)溶劑，得到載藥明膠微球，備用，載藥明膠微球的粒徑在5μm左右。該載藥明膠微球在今后的冷凍干燥和溶液稀釋過程中不解離、不團(tuán)聚。

(3)、形成載藥水凝膠：步驟(2)得到的載藥明膠微球與泊洛沙姆f127、泊洛沙姆f68混合，得到酶與溫度雙響應(yīng)性智能型緩釋載藥體系，即酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠。

用本發(fā)明方法制備得到的酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠，是將納米化的藥物(或游離、配伍的藥物)包被于明膠固態(tài)微球載體內(nèi)部形成的均一三維網(wǎng)格結(jié)構(gòu)中，可避免使用兩種以上藥物相互接觸而產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)影響藥效，并能保證載藥明膠微球作為mmp9的底物而酶解時，使載藥明膠微球逐步降解并逐步釋放藥物，達(dá)到緩釋的目的。

本發(fā)明提供一種智能型病灶自控制藥物緩釋系統(tǒng)，載藥明膠微球可以對創(chuàng)傷和腫瘤為代表的表達(dá)mmp9的病灶表現(xiàn)出酶響應(yīng)性。載藥明膠微球粒徑在1-20μm，可以懸浮于生理鹽水、培養(yǎng)基等等滲溶液中，與其他黏性溶劑混合貼合于病灶表面，可形成局部富集；并在富集部位形成藥物釋放和病灶mmp9表達(dá)的正反饋動態(tài)平衡，病灶mmp9表達(dá)升高，則載藥明膠微球降解量升高，使藥物釋放量增加，富集至受體部位；反之亦然；實現(xiàn)了智能地調(diào)節(jié)藥物釋放，既可以減少藥物對正常組織的毒性，又可以根據(jù)病灶需要釋放有效劑量的藥物。

上述酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠外敷于病灶表面后，首先固化為膏狀，緊密貼合于病灶周圍，并在病灶所釋放的mmp9的作用下，載藥明膠微球逐步裂解，并釋放藥物，藥物分階段逐步釋放，并在病灶周圍富集，發(fā)揮藥理活性。本發(fā)明的載藥水凝膠充分結(jié)合了納米技術(shù)、酶響應(yīng)性智能緩釋體系和溫度響應(yīng)性熱固貼合系統(tǒng)的三個優(yōu)點(現(xiàn)有技術(shù)則不能同時具備這三個優(yōu)點)，使藥物富集于病灶周圍，并具有酶響應(yīng)性緩釋特點，與病灶靶位點特異性結(jié)合，減少藥物富集在血液中，從而減少肝臟和腎臟負(fù)擔(dān)。

本發(fā)明制備得到的酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠可用來載帶抗菌藥，消炎藥，抗真菌藥，抗病毒藥，抗氧化藥物，抗癌藥等，使用時緊密貼合創(chuàng)傷表面，為機(jī)體緩慢釋放上述藥物，發(fā)揮藥理作用，可用于燒傷、戰(zhàn)創(chuàng)傷、手術(shù)傷口、凍傷、皮膚相關(guān)腫瘤、皮膚感染疾病、性傳播疾病、口腔疾病、禿發(fā)、腳氣等疾病。

以下結(jié)合具體實施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容，并對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實施例絕非對本發(fā)明進(jìn)行限制。

本發(fā)明特別研究生理鹽水作為溶劑的水凝膠，其中，含1mg/ml納米化的藥物的生理鹽水中，納米化的藥物粒徑在100nm左右，包載納米藥物的明膠微米球粒徑在1μm以上，優(yōu)選為5-20μm，最優(yōu)選5-10μm。

按本發(fā)明方法制備得到一系列酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠，其中各成分的終濃度見表1所示。

表1各實施例的水凝膠中成分的質(zhì)量百分含量

實施例1：

(1)、藥物的納米化：將姜黃素作為藥物溶解于四氫呋喃中，形成濃度為0.1mg/ml的藥物溶液，轉(zhuǎn)速為2000rpm的條件下攪拌生理鹽水，然后向其中緩慢加入藥物溶液，均勻攪拌30min，形成姜黃素的納米顆粒溶液；靜置24h后，旋蒸去除thf，然后在9pa真空度，溫度低于-50℃冷凍干燥，得到姜黃素納米顆粒。姜黃素納米顆粒的平均粒徑為50-100nm。

(2)、形成載藥明膠微球：將明膠加入到雙蒸水中，55℃，800rpm攪拌，得到10wt％的明膠溶液；將步驟(1)得到的姜黃素納米顆粒緩慢加入明膠溶液中，充分?jǐn)嚢?h，形成水相。取4.5ml的液體石蠟，加入45μl的司盤-80(span-80)，55℃，800rpm攪拌均勻，形成油相。將水相緩慢均勻滴加到油相中，滴加時油相保持在55±1℃，攪拌速度為800rpm，乳化30min，形成均勻的乳黃色乳液，然后快速移到4℃的冰水浴中，轉(zhuǎn)速保持在800rpm，乳化攪拌30min，加入2ml25wt％戊二醛溶液交聯(lián)30min，加入20ml異丙醇脫水20min，用離心機(jī)6000rpm轉(zhuǎn)速下離心，乙醚、異丙醇交替沖洗三次，得到流動性粉末，把流動性粉末平鋪在表面皿上，40℃下真空干燥去除有機(jī)溶劑，得到載藥明膠微球，備用，載藥明膠微球的粒徑在5μm左右。

(3)、形成載藥水凝膠：步驟(2)得到的載藥明膠微球與泊洛沙姆f127、泊洛沙姆f68混合，得到酶與溫度雙響應(yīng)性載藥水凝膠，其相變溫度為33℃，涂布于皮膚表面并能迅速凝固。

實施例2：

(1)、藥物的納米化：將姜黃素作為藥物溶解于乙醇中，形成濃度為5mg/ml的藥物溶液，轉(zhuǎn)速為700rpm的條件下攪拌生理鹽水，然后向其中緩慢加入藥物溶液，均勻攪拌2h，形成姜黃素的納米顆粒溶液；靜置24h后，旋蒸去除乙醇，然后在7pa真空度，溫度低于-50℃冷凍干燥，得到姜黃素納米顆粒。在掃描電鏡下觀察姜黃素納米顆粒的平均粒徑為100nm。

(2)、形成載藥明膠微球：將明膠加入到雙蒸水中，55℃，1500rpm攪拌，得到10wt％的明膠溶液；將步驟(1)得到的姜黃素納米顆粒緩慢加入明膠溶液中，充分?jǐn)嚢?.5h，形成水相。取4.5ml的液體石蠟，加入45μl的司盤-80(span-80)，55℃，1500rpm攪拌均勻，形成油相。將水相緩慢均勻滴加到油相中，滴加時油相保持在55±1℃，攪拌速度為1500rpm，乳化30min，形成均勻的乳黃色乳液，然后快速移到4℃的冰水浴中，轉(zhuǎn)速保持在1500rpm，乳化攪拌30min，加入2ml25wt％戊二醛溶液交聯(lián)30min，加入20ml異丙醇脫水20min，用離心機(jī)1000rpm轉(zhuǎn)速下離心，乙醚、異丙醇交替沖洗三次，得到流動性粉末，把流動性粉末平鋪在表面皿上，40℃下真空干燥去除有機(jī)溶劑，得到載藥明膠微球，備用，載藥明膠微球的粒徑在5μm左右。