本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及圓苞車前子殼膳食纖維在腸道損傷防護(hù)中的新用途，包括圓苞車前子殼膳食纖維在制備預(yù)防腸道損傷藥物或功能性食品中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

圓苞車前子殼膳食纖維提取自車前科車前屬圓苞車前種子外殼，圓苞車前子外殼纖維含量豐富，其含量約占80％，此外，圓苞車前子外殼中還含有膠質(zhì)、葡萄糖甙、蛋白質(zhì)、多糖、維生素B1和膽堿等營養(yǎng)成分。膳食纖維具有吸水作用、粘滯作用、結(jié)合有機(jī)化合物、陽離子交換及細(xì)菌發(fā)酵作用，已經(jīng)做為維持腸道健康、防治便秘的營養(yǎng)補(bǔ)充劑廣泛應(yīng)用。

文獻(xiàn)報(bào)道圓苞車前子殼膳食纖維具有如下功效：1.幫助維持腸道菌群平衡；促進(jìn)腸蠕動(dòng)，提供有益菌所需養(yǎng)分，減少有害菌的數(shù)量；2.調(diào)節(jié)養(yǎng)分吸收；減少糖類吸收，調(diào)整血糖值、減少饑餓感，強(qiáng)化對(duì)糖尿病病情的控制；減少中性脂肪的吸收，降低心血管疾病發(fā)生率；3.具吸水、保水及膨潤效果；增加排便量，使腸管內(nèi)壓正常、減少憩室病等的發(fā)生；4.促進(jìn)唾液分泌：促進(jìn)食物消化吸收。專利KR101487769報(bào)道利用圓苞車前子殼、米曲霉及蘆薈提取物制成一種促進(jìn)新陳代謝、增加腸道蠕動(dòng)、防治便秘的食品，主要利用圓苞車前子殼改善糞便與腸道的潤滑程度，防治便秘；專利KR20140028749也發(fā)明了一種主成份是圓苞車前子殼和藜草的保健食品，主要作用為減肥和改善便秘。此外專利CN105796662A發(fā)明了一種圓苞車前子殼粉和菊粉的組合物，具有潤腸通便、改善人體腸道菌群分布、調(diào)節(jié)腸道健康，平衡礦物質(zhì)吸收的作用。綜上所述，圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)腸道健康具有積極的促進(jìn)作用。

腸道損傷是由包括在抗生素療法、放射療法、化療、外科手術(shù)、腸道感染、炎性腸病、結(jié)腸炎、腸梗阻和慢性應(yīng)激所引起的病理性損傷，臨床主要表現(xiàn)為腸黏膜和血管結(jié)締組織損傷，其中小腸、結(jié)腸及直腸均可受到不同程度的損傷。目前臨床用治療腸道損傷的藥物雖然部分藥物具有一定的藥理活性，但是存在一些不可避免的缺點(diǎn)，包括作用濃度高、毒副作用強(qiáng)等。因此開發(fā)新型腸道損傷防護(hù)藥物是醫(yī)藥領(lǐng)域開發(fā)的熱點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種毒副作用小、療效顯著的圓苞車前子殼膳食纖維在制備腸道損傷防護(hù)藥物或功能性食品中的應(yīng)用，可有效緩解臨床治療腸道損傷藥物不足的現(xiàn)狀。

本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，圓苞車前子殼膳食纖維在制備腸道損傷防護(hù)制劑中的應(yīng)用，圓苞車前子殼膳食纖維提取自圓苞車前子殼，以圓苞車前種子外殼為原料，經(jīng)碾磨后制得。

所述制劑為藥物或功能性食品，制劑類型為：片劑、糖衣片劑、薄膜衣、片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、混懸劑或粉劑。

所述制劑包含藥學(xué)上可接受的載體，藥學(xué)上可接受的載體選自稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、潤滑劑、表面活性劑和吸附載體中的一種或幾種。

所述腸道損傷包括在抗生素療法、放射療法、化療、外科手術(shù)、腸道感染、炎性腸病、結(jié)腸炎、腸梗阻和慢性應(yīng)激中引起的腸道損傷。

圓苞車前子殼膳食纖維服用劑量為100mg/kg，且經(jīng)由口服給藥。

對(duì)圓苞車前子殼膳食纖維的腸道防護(hù)作用進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，首先通過輻射照射誘導(dǎo)小鼠腸道損傷模型，比較預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠腸道損傷程度及生存率，并通過比較實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道上皮細(xì)胞形態(tài)、腸道通透性、炎癥因子表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡情況，系統(tǒng)評(píng)價(jià)圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)腸道的防護(hù)作用。證明了圓苞車前子殼膳食纖維具有增加腸道損傷小鼠的生存率，維持腸道組織完整性，減少腸道細(xì)胞內(nèi)炎癥因子的表達(dá)，降低腸道細(xì)胞凋亡的發(fā)生率。說明圓苞車前子殼膳食纖維具有腸道損傷防護(hù)的作用。

本發(fā)明開辟了圓苞車前子殼膳食纖維在腸道損傷防護(hù)藥物中的新用途，其具有安全有效，無不良反應(yīng)等優(yōu)勢(shì)，能夠有效用于腸道損傷防護(hù)藥物或功能性食品的制備，具有廣泛應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是不同處理組小鼠存活天數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果；

圖2是不同處理組小鼠體重變化情況；

圖3是不同處理組小鼠腹瀉情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果；

圖4是不同處理組小鼠小腸組織HE染色結(jié)果；

圖5是不同處理組小鼠血清熒光強(qiáng)度檢測(cè)結(jié)果；

圖6是不同處理組小鼠血清中內(nèi)毒素含量檢測(cè)結(jié)果；

圖7是不同處理組小鼠腸道菌群向腸系膜淋巴結(jié)及肝臟易位分析；

圖8是不同處理組小鼠小腸上皮細(xì)胞中IFN-γ、iNOS及TNF-α分子的免疫組化結(jié)果；

圖9是不同處理組小鼠小腸上皮細(xì)胞中IFN-γ、iNOS及TNF-α分子的Western-Blot分析；

圖10是不同處理組小鼠小腸上皮細(xì)胞Tunnel染色結(jié)果；

圖11是不同處理組小鼠小腸上皮細(xì)胞凋亡數(shù)目統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明通過下列實(shí)施例予以進(jìn)一步闡明，這些實(shí)施例是僅用于說明性的，而不是以任何方式限制本發(fā)明權(quán)利要求的范圍。

實(shí)施例1.圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠生存率及體重的影響

選用6-8周齡C57BL/6小鼠，雌雄各半(體重25±2g)，隨機(jī)分為四組：

空白組：正常飼養(yǎng)，未經(jīng)任何處理的小鼠10只；

腸道損傷陰性對(duì)照組：正常飼養(yǎng)1周后采用X射線照射機(jī)對(duì)小鼠腹腔進(jìn)行照射(15Gy)10只；

實(shí)驗(yàn)組：正常飼養(yǎng)時(shí)向飼料中添加圓苞車前子殼膳食纖維，1周后進(jìn)行采用X射線照射機(jī)對(duì)小鼠腹腔進(jìn)行照射(15Gy)10只；

圓苞車前子殼膳食纖維空白對(duì)照組：正常飼養(yǎng)時(shí)向飼料中添加圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠10只。

其中實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組飼喂圓苞車前子殼膳食纖維劑量為100mg/kg，每天1次。

考察四組小鼠的生存率。小鼠存活天數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖1所示，結(jié)果顯示飼喂圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)正常小鼠的生存率無影響，且圓苞車前子殼膳食纖維可有效延長(zhǎng)輻射照射后小鼠的存活時(shí)間。同時(shí)發(fā)現(xiàn)腸道損傷陽性對(duì)照組小鼠在照射后1天即出現(xiàn)活動(dòng)度顯著下降，飲食量顯著降低，而輻射照射前給予圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠活動(dòng)度顯著優(yōu)于對(duì)照組，小鼠體重變化情況見圖2。說明圓苞車前子殼膳食纖維能夠顯著延長(zhǎng)腸道損傷小鼠的生存率并有效改善腸道損傷小鼠的生存狀態(tài)。

實(shí)施例2.圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠的腸道結(jié)構(gòu)及功能的影響

輻射照射小鼠后發(fā)生腸道損傷，會(huì)導(dǎo)致小鼠發(fā)生腹瀉，根據(jù)小鼠糞便形態(tài)將腹瀉等級(jí)劃分為四級(jí)：0(健康),1(輕度),2(中度),3(重度)?？瞻捉M，腸道損傷陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組小鼠處理方式同實(shí)施例1，觀察統(tǒng)計(jì)輻射處理后一周內(nèi)小鼠腹瀉情況，結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示，預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠經(jīng)輻射照射后腹瀉發(fā)生率及腹瀉程度明顯低于對(duì)照組。說明圓苞車前子殼膳食纖維能減輕輻射誘導(dǎo)的腸道功能紊亂。

為進(jìn)一步觀察小鼠腸道結(jié)構(gòu)變化，取處死后小鼠的小腸組織，分別經(jīng)固定、蠟塊包埋，切片及HE染色，結(jié)果如圖4所示，結(jié)果顯示輻射處理會(huì)明顯導(dǎo)致小鼠小腸絨毛斷裂、脫落，小腸絨毛高度明顯下降；而預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠腸道結(jié)構(gòu)與空白組類似，組織完整性明顯優(yōu)于對(duì)照組，且小腸絨毛高度明顯高于對(duì)照組，同樣說明了圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)腸道組織的完整性具有保護(hù)作用。

為觀察輻射處理后小鼠腸道通透性的影響，在輻射照射處理3.5天后處死小鼠，于處死前4h腹腔注射熒光染料FITC-Dextran(劑量：10mg/kg)，處死后立即取小鼠血清檢測(cè)熒光強(qiáng)度。結(jié)果見圖5，其中血清中的熒光強(qiáng)度與腸道完整性呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果顯示，預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠經(jīng)輻射照射后血清中的熒光強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組。通過鱟試驗(yàn)法測(cè)定血清中內(nèi)毒素含量，結(jié)果見圖6，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中內(nèi)毒素含量顯著低于對(duì)照組。以上結(jié)果說明圓苞車前子殼膳食纖維能夠改善輻射誘導(dǎo)的腸道通透性下降，有助于維持腸道組織的完整性。

實(shí)施例3.圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠腸道菌群易位的影響

空白組，腸道損傷陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組小鼠處理方式同實(shí)施例1，并于輻射照射處理3.5天后處死小鼠，取小鼠腸系膜淋巴結(jié)及肝臟分別進(jìn)行細(xì)菌含量分析。具體方法為：首先利用熒光定量PCR法對(duì)已知數(shù)量的大腸桿菌進(jìn)行16SrDNA的擴(kuò)增，繪制基因循環(huán)閾值與細(xì)菌含量關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)待測(cè)樣品中的16SrDNA基因循環(huán)閾值計(jì)算相應(yīng)的細(xì)菌含量。結(jié)果見圖7，結(jié)果顯示與正常小鼠相比，對(duì)照組小鼠經(jīng)輻射照射后腸系膜淋巴結(jié)中的細(xì)菌含量顯著升高，說明小鼠腸道菌群發(fā)生了明顯的易位，而實(shí)驗(yàn)組預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠腸道菌群易位情況得到了顯著改善。此外，三組小鼠均為未發(fā)現(xiàn)腸道菌群易位到肝臟組織。說明圓苞車前子殼膳食纖維能有效緩解小鼠腸道損傷引發(fā)的菌群易位。

實(shí)施例4.圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠腸道中炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的影響

炎癥是機(jī)體應(yīng)對(duì)組織損傷的一種防御反應(yīng)，表現(xiàn)在炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)增加并伴隨組織器官的損傷。為探究圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠腸道中炎癥關(guān)鍵細(xì)胞因子表達(dá)的影響，采用免疫組化及Western-Blot方法對(duì)小腸組織中IFN-γ(γ干擾素)、iNOS(誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶)及TNF-α(腫瘤壞死因子α)的表達(dá)量進(jìn)行分析?？瞻捉M，腸道損傷陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組小鼠處理方式同實(shí)施例1，于輻射照射3.5天后處死小鼠，分別取小腸組織進(jìn)行固定、蠟塊包埋，切片及IFN-γ、iNOS及TNF-α分子的免疫染色，免疫組化結(jié)果見圖8。采用Western-Blot方法以GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)為內(nèi)參蛋白，對(duì)小腸組織中的IFN-γ、iNOS及TNF-α蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果見圖9。免疫組化及Western-Blot結(jié)果均表明輻射誘導(dǎo)的腸道損傷小鼠腸道中炎癥因子IFN-γ、iNOS及TNF-α的表達(dá)量顯著增加，與對(duì)照組相比預(yù)先飼喂圓苞車前子殼膳食纖維的小鼠腸道上皮細(xì)胞保持了較好的完整性，且炎癥因子的表達(dá)量得到顯著控制，其表達(dá)水平與空白組相當(dāng)，說明圓苞車前子殼膳食纖維能顯著改善小鼠腸道損傷引發(fā)的炎癥反應(yīng)。

實(shí)施例5.圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)輻射誘導(dǎo)的小腸細(xì)胞凋亡的影響

為探究圓苞車前子殼膳食纖維對(duì)損傷腸道的細(xì)胞凋亡的影響，空白組，腸道損傷陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組小鼠處理方式同實(shí)施例1，于輻射照射3.5天后處死小鼠，取小腸組織進(jìn)行固定、蠟塊包埋，切片及細(xì)胞Tunnel染色，結(jié)果見圖10。其中正常細(xì)胞核染色后呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞發(fā)生凋亡后細(xì)胞核基因出現(xiàn)斷裂，斷裂基因被Tunnel試劑特異性染色，呈現(xiàn)紅色，對(duì)發(fā)生凋亡的細(xì)胞個(gè)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見圖11。結(jié)果表明與空白組相比，對(duì)照組小鼠經(jīng)輻射照射后腸道細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著增加，實(shí)驗(yàn)組由于預(yù)先飼喂了圓苞車前子殼膳食纖維，小鼠腸道細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著低于對(duì)照組，說明圓苞車前子殼膳食纖維能夠減少輻射誘導(dǎo)的腸道細(xì)胞凋亡。