本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別是涉及一種kindlin-2蛋白作為靶點(diǎn)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝性疾病，由胰島素分泌缺陷或其生物作用受損引起。隨著人們生活水平的提高，糖尿病的病例數(shù)和患病率呈逐年上升的趨勢(shì)。最新的第七版《idfdiabetesatlas》報(bào)告(2015年)中指出，全球目前約有4.15億人患有糖尿病，而在中國(guó)，糖尿病患者人數(shù)約為1.096億，占世界糖尿病總數(shù)的1/4。預(yù)計(jì)到2040年，世界糖尿病患病者數(shù)目可能達(dá)到6.42億。無(wú)論是在發(fā)達(dá)國(guó)家還是在發(fā)展中國(guó)家，糖尿病形勢(shì)都是非常嚴(yán)峻的。

然而，目前臨床上仍然缺乏有效的治療糖尿病的藥物及治療方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種kindlin-2蛋白作為靶點(diǎn)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。

kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用，所述藥物靶向kindlin-2蛋白。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物靶向胰腺中的kindlin-2蛋白。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物能夠調(diào)節(jié)kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物能夠提高胰腺中的kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

kindlin-2蛋白在制備治療二型糖尿病的藥物中的應(yīng)用，所述藥物靶向kindlin-2蛋白。

一種治療糖尿病的藥物，所述藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

一種治療糖尿病的藥物組合物，包括kindlin-2蛋白促進(jìn)劑以及靶向劑，所述kindlin-2蛋白促進(jìn)劑負(fù)載于所述靶向劑上，所述靶向劑靶向kindlin-2蛋白。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述靶向劑選自aav病毒、mirna和聚合物膠束中的至少一種。

kindlin-2蛋白在制備糖尿病的檢測(cè)試劑中的應(yīng)用，所述檢測(cè)試劑以kindlin-2蛋白作為糖尿病的生物標(biāo)記物。

經(jīng)研究表明，kindlin-2蛋白與胰島素的表達(dá)區(qū)域基本重合，其表達(dá)量與糖尿病存在密切的相關(guān)性。kindlin-2基因特異性敲除后的小鼠空腹胰島素水平明顯低于對(duì)照組，葡萄糖耐受能力顯著下降，但對(duì)外周組織的胰島素的敏感性卻沒(méi)有明顯差別。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以為治療糖尿病的藥物提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中用胰島素抗體以及kindlin-2抗體對(duì)小鼠胰腺免疫熒光染色后的結(jié)果圖；

圖2為實(shí)施例1中用胰高血糖素抗體以及kindlin-2抗體對(duì)小鼠胰腺免疫熒光染色后的結(jié)果圖；

圖3為實(shí)施例1中分別對(duì)兩個(gè)月齡的小鼠以及二十個(gè)月齡的小鼠的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體以及vegf(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)抗體進(jìn)行ihc染色后的結(jié)果圖；

圖4為實(shí)施例1中分別對(duì)正常飲食的小鼠以及高脂飲食處理小鼠的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體進(jìn)行ihc染色后的結(jié)果圖；

圖5為實(shí)施例1中分別對(duì)正常人的胰島β細(xì)胞以及t2d患者的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體進(jìn)行ihc染色后的結(jié)果圖；

圖6為實(shí)施例2中kindlin-2基因敲除后不同組織中的kindlin-2mirna含量統(tǒng)計(jì)圖；

圖7為實(shí)施例2中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線圖；

圖8為實(shí)施例2中兩個(gè)月齡的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的外觀；

圖9為實(shí)施例2中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的生存率結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；

圖10為實(shí)施例3中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的空腹血糖水平測(cè)試結(jié)果圖；

圖11為實(shí)施例3中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的葡萄糖耐受能力測(cè)試結(jié)果圖；

圖12為實(shí)施例4中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的空腹胰島素水平測(cè)試結(jié)果圖；

圖13為實(shí)施例4中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的胰島素耐受性測(cè)試結(jié)果圖；

圖14為實(shí)施例5中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的β細(xì)胞面積/胰腺面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；

圖15為實(shí)施例5中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的β細(xì)胞總量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；

圖16為實(shí)施例5中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的胰島面積/胰腺面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；

圖17為實(shí)施例6中采用胰島素抗體和ki67抗體分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的β細(xì)胞免疫熒光染色后的結(jié)果圖；

圖18為實(shí)施例7中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在葡萄糖刺激下胰島素分泌量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖；

圖19為實(shí)施例7中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在高濃度的葡萄糖刺激下胰島素分泌量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類(lèi)似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施的限制。

一實(shí)施方式的kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用，其中，該藥物靶向kindlin-2蛋白。

kindlin-2蛋白是一種粘著斑蛋白，可參與整合素的激活，有研究表明其在肌肉細(xì)胞的延長(zhǎng)上扮演重要角色。然而關(guān)于kindlin-2蛋白作為靶點(diǎn)治療的研究較少，目前尚未見(jiàn)其在糖尿病方面的研究報(bào)道。而本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究后意外發(fā)現(xiàn)kindlin-2蛋白與胰島素的表達(dá)區(qū)域基本重合，且其表達(dá)量與糖尿病存在密切的相關(guān)性。kindlin-2基因特異性敲除后的小鼠空腹胰島素水平明顯低于對(duì)照組，葡萄糖耐受能力顯著下降，但對(duì)外周組織的胰島素的敏感性卻沒(méi)有明顯差別。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以為治療糖尿病的藥物提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。藥物通過(guò)靶向kindlin-2蛋白，從而調(diào)劑體內(nèi)kindlin-2蛋白的表達(dá)量，協(xié)助糖尿病治療。

具體的，本文中所說(shuō)的“治療糖尿病的藥物”可以是為治療已經(jīng)確診為糖尿病的病人制備的藥物，也可以是為預(yù)防糖尿病而制備的藥物。

在一個(gè)實(shí)施方式的kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用中，該藥物靶向胰腺中的kindlin-2蛋白。胰腺與糖尿病具有密切的關(guān)聯(lián)，通過(guò)藥物靶向胰腺中的kindlin-2蛋白，能夠進(jìn)一步的增強(qiáng)藥物的特異性，減少副作用。

在一個(gè)實(shí)施方式的kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用中，該藥物能夠調(diào)節(jié)kindlin-2蛋白的表達(dá)量。以kindlin-2作為靶點(diǎn)，針對(duì)不同的患者的病情，調(diào)節(jié)體內(nèi)的kindlin-2蛋白的表達(dá)量，從而使得體內(nèi)的kindlin-2蛋白表達(dá)量分泌正常。

具體的，在kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。研究結(jié)果表明，kindlin-2基因特異性敲除后的小鼠空腹胰島素水平明顯低于對(duì)照組，葡萄糖耐受能力顯著下降，但對(duì)外周組織的胰島素的敏感性卻沒(méi)有明顯差別。提示當(dāng)kindlin-2蛋白分泌量降低時(shí)，葡萄糖耐受能力較差，可通過(guò)藥物提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量來(lái)提高體內(nèi)吸收利用葡萄糖的能力。

進(jìn)一步的，在kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用中，該藥物能夠提高胰腺中的kindlin-2蛋白的表達(dá)量。通過(guò)藥物提高胰腺中的kindlin-2蛋白的表達(dá)量，增強(qiáng)藥物的特異性，進(jìn)而提高體內(nèi)吸收利用葡萄糖的能力，進(jìn)一步預(yù)防或治療糖尿病。

一實(shí)施方式的kindlin-2蛋白在制備治療二型糖尿病的藥物中的應(yīng)用，其中，該藥物靶向kindlin-2蛋白。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究后發(fā)現(xiàn)kindlin-2蛋白在二型糖尿病病人的胰島β細(xì)胞中表達(dá)量明顯下降，提示kindlin-2蛋白可以作為治療糖尿病的藥物的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

進(jìn)一步的，kindlin-2蛋白在制備治療二型糖尿病的藥物中的應(yīng)用中，該藥物可以靶向胰腺中的kindlin-2蛋白。在一個(gè)實(shí)施方式中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。具體為能夠提高胰腺中的kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

綜上，研究結(jié)果表明，kindlin-2蛋白與胰島素的表達(dá)區(qū)域基本重合，其表達(dá)量與糖尿病存在密切的相關(guān)性。kindlin-2蛋白可以作為制備治療糖尿病的藥物的一個(gè)新靶點(diǎn)，在制備預(yù)防或治療糖尿病特別是二型糖尿病的藥物中的應(yīng)用中具有良好的應(yīng)用前景。

此外，本申請(qǐng)還提供一實(shí)施方式的治療糖尿病的藥物，其中，該藥物能夠提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

在一個(gè)實(shí)施方式中，該治療糖尿病的藥物靶向胰腺中的kindlin-2蛋白，并能夠提高胰腺中的kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

研究結(jié)果顯示，當(dāng)kindlin-2蛋白分泌量降低時(shí)，葡萄糖耐受能力較差，可通過(guò)藥物提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量來(lái)提高體內(nèi)吸收利用葡萄糖的能力，從而治療糖尿病。上述藥物以kindlin-2蛋白作為治療靶點(diǎn)，提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量從而治療糖尿病。

進(jìn)一步的，本申請(qǐng)還提供一實(shí)施方式治療糖尿病的藥物組合物，該組合物包括kindlin-2蛋白促進(jìn)劑以及靶向劑，kindlin-2蛋白促進(jìn)劑負(fù)載于靶向劑上，靶向劑靶向kindlin-2蛋白。

其中，kindlin-2蛋白促進(jìn)劑為能夠提高kindlin-2蛋白表達(dá)量的藥物或試劑，靶向劑為能夠靶向kindlin-2蛋白。kindlin-2蛋白促進(jìn)劑可以通過(guò)化學(xué)鍵連接或包覆等物理方式負(fù)載于靶向劑上。

在一個(gè)實(shí)施方式中，靶向劑可以選自aav病毒(adeno-associatedvirus，腺相關(guān)病毒)、mirna(microrna)和聚合物膠束中的至少一種。

具體的，aav病毒、mirna或聚合物膠束作為載體將kindlin-2蛋白促進(jìn)劑攜帶至體內(nèi)特定的部位，kindlin-2蛋白促進(jìn)劑釋放促進(jìn)體內(nèi)kindlin-2蛋白的表達(dá)，從而提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量，促進(jìn)體內(nèi)葡萄糖的吸收利用，預(yù)防或治療糖尿病。

在一個(gè)實(shí)施方式中，aav病毒上還可以攜帶表達(dá)kindlin-2蛋白的基因，從而在體內(nèi)表達(dá)kindlin-2蛋白，提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量。

上述治療糖尿病的藥物組合物，包括kindlin-2蛋白促進(jìn)劑以及靶向劑，兩者協(xié)同作用，提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量，進(jìn)而預(yù)防或治療糖尿病。

此外，本申請(qǐng)還提供一實(shí)施方式的kindlin-2蛋白在制備糖尿病的檢測(cè)試劑中的應(yīng)用，其中，該檢測(cè)試劑以kindlin-2蛋白作為糖尿病的生物標(biāo)記物。

通過(guò)研究表明，kindlin-2蛋白的表達(dá)量與糖尿病存在密切的相關(guān)性，因此kindlin-2蛋白可作為糖尿病的生物標(biāo)記物。具體地，檢測(cè)試劑可以通過(guò)kindlin-2蛋白的表達(dá)量來(lái)判定糖尿病的病情。

綜上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究后意外發(fā)現(xiàn)kindlin-2蛋白與胰島素的表達(dá)區(qū)域基本重合，且其表達(dá)量與糖尿病存在密切的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示kindlin-2蛋白可以作為治療糖尿病的一個(gè)新靶點(diǎn)。kindlin-2蛋白在制備治療糖尿病的藥物或者制備糖尿病的檢測(cè)試劑中具有良好的應(yīng)用前景。

以下為具體實(shí)施例。

實(shí)施例中采用藥物和儀器如非特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域常規(guī)選擇。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如文獻(xiàn)、書(shū)本中所述的條件或者試劑盒生產(chǎn)廠家推薦的方法實(shí)現(xiàn)。

未特別說(shuō)明，以下實(shí)施例中rip-cre表示對(duì)照小鼠，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠。實(shí)驗(yàn)用小鼠由美國(guó)拉什大學(xué)提供，均為雄性鼠。

實(shí)施例1

免疫熒光檢測(cè)kindlin-2蛋白的表達(dá)區(qū)域及表達(dá)量

1、免疫熒光染色

將兩個(gè)月齡的小鼠胰腺石蠟包埋切片，分別用胰島素抗體、kindlin-2抗體以及胰高血糖素抗體進(jìn)行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察。結(jié)果如圖1～圖2所示，其中圖1中(a)圖表示胰島素抗體染色結(jié)果，(b)圖表示kindlin-2抗體染色結(jié)果，(c)圖表示胰島素抗體和kindlin-2抗體共同染色的結(jié)果。圖2中(a)圖表示胰高血糖素抗體染色結(jié)果，(b)圖表示kindlin-2抗體染色結(jié)果，(c)圖表示胰高血糖素抗體和kindlin-2抗體共同染色的結(jié)果，(d)圖表示(a)圖方框區(qū)域的局部放大圖，(e)圖表示dapi(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)的染色結(jié)果，(f)圖表示(c)圖方框區(qū)域的局部放大圖。從圖1中可以看出，kindlin-2和胰島素的表達(dá)區(qū)域完全重合。從圖2中可以看出，kindlin-2與外圍的胰高血糖素的表達(dá)區(qū)域沒(méi)有重疊，說(shuō)明kindlin-2在小鼠的胰島β細(xì)胞中大量表達(dá)。

2、免疫組織化學(xué)染色(ihc)

分別將兩個(gè)月齡的小鼠以及二十個(gè)月齡的小鼠(老年小鼠)的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體以及vegf(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)抗體進(jìn)行ihc染色，并在顯微鏡下觀察。vegf抗體組作為陰性對(duì)照，結(jié)果如圖3所示，圖3中(a)圖表示兩個(gè)月齡的小鼠的kindlin-2抗體染色結(jié)果，(b)圖表示二十個(gè)月齡的小鼠的kindlin-2抗體染色結(jié)果，(c)圖表示兩個(gè)月齡的小鼠的vegf抗體染色結(jié)果，(d)圖表示二十個(gè)月齡的小鼠的vegf抗體染色結(jié)果。從圖3中可以看出，kindlin-2在兩個(gè)月齡的小鼠胰島β細(xì)胞中表達(dá)量較高，而在老年小鼠的胰島β細(xì)胞中表達(dá)量明顯下降。

分別將正常飲食的小鼠(nd)以及高脂飲食處理小鼠(hfd)的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體進(jìn)行ihc染色，兩組均為兩個(gè)月齡的小鼠，并在顯微鏡下觀察，結(jié)果如圖4所示，圖4中(a)圖表示正常飲食的小鼠的kindlin-2抗體染色結(jié)果，(b)圖表示高脂飲食處理小鼠的kindlin-2抗體染色結(jié)果。從圖4中可以看出，kindlin-2在高脂飲食處理的小鼠的胰島β細(xì)胞中表達(dá)量明顯下降，預(yù)示kindlin-2的減少可能導(dǎo)致糖尿病。

分別將正常人以及二型糖尿病病人(t2d)的胰島β細(xì)胞用kindlin-2抗體進(jìn)行ihc染色，并在顯微鏡下觀察，結(jié)果如圖5所示，圖5中(a)圖表示正常人的胰島β細(xì)胞kindlin-2抗體染色結(jié)果，(b)圖表示t2d患者的胰島β細(xì)胞kindlin-2抗體染色結(jié)果。從圖5中可以看出，kindlin-2在二型糖尿病病人的胰島β細(xì)胞中表達(dá)量明顯下降。

實(shí)施例2

敲除kindlin-2基因?qū)π∈篌w重以及生存率的影響

采用基因敲除技術(shù)特異性敲除小鼠的kindlin-2，其中，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠，rip-cre表示正常對(duì)照的小鼠。敲除后提取相應(yīng)組織的總rna，然后進(jìn)行實(shí)時(shí)qpcr定量分析，并以測(cè)的的相應(yīng)組織中總rna與甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gapdh)的比值作為縱坐標(biāo)作圖，結(jié)果如圖6，結(jié)果顯示kindlin-2^rip小鼠的kindlin-2的敲除是特異的，僅限于胰島，其他組織例如肝臟、腎臟、心臟、肺等與正常組無(wú)明顯差異。

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均從小鼠出生后一周開(kāi)始量體重，每組12只鼠，每周一次，連續(xù)稱(chēng)量8周，作圖，結(jié)果如圖7，動(dòng)物生長(zhǎng)曲線顯示kindlin-2^rip小鼠生長(zhǎng)比對(duì)照組緩慢。

兩個(gè)月齡的對(duì)照小鼠(rip-cre)和kindlin-2特異敲除小鼠(kindlin-2^rip)的外觀如圖8，顯示kindlin-2^rip小鼠的個(gè)體明顯變小。

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均從小鼠出生后就記錄小鼠的死亡時(shí)間，每組10只小鼠，作圖，結(jié)果如圖9，顯示kindlin-2^rip小鼠在出生后10周左右有50％的小鼠死亡。

以上結(jié)果表明，胰島β細(xì)胞中的kindlin-2對(duì)小鼠的體重以及存活具有重要的影響。

實(shí)施例3

敲除kindlin-2基因?qū)π∈罂崭寡撬揭约把悄褪苄缘挠绊?/p>

空腹血糖的測(cè)定：分別取兩個(gè)月齡的兩組小鼠饑餓過(guò)夜，然后尾巴采血，用血糖試紙測(cè)量空腹血糖濃度，每組5只鼠。結(jié)果如圖10，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠，rip-cre表示正常對(duì)照的小鼠，結(jié)果顯示kindlin-2^rip小鼠的空腹血糖水平顯著高于對(duì)照組。

糖耐量實(shí)驗(yàn)(gtt)：分別取兩個(gè)月齡的兩組小鼠饑餓過(guò)夜，然后進(jìn)行葡萄糖腹腔注射，劑量為2g/kg體重，然后在不同時(shí)間點(diǎn)采血，測(cè)血糖，每組10只鼠。結(jié)果如圖11，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠，rip-cre表示正常對(duì)照的小鼠，結(jié)果顯示kindlin-2^rip小鼠的葡萄糖耐受能力顯著下降。

以上結(jié)果顯示胰島中kindlin-2的表達(dá)量減少或不足對(duì)血糖水平有重要的影響。預(yù)示可以采用藥物靶向kindlin-2蛋白，從而提高kindlin-2蛋白的表達(dá)量來(lái)治療糖尿病。

實(shí)施例4

敲除kindlin-2基因?qū)π∈笱阂葝u素水平以及胰島素耐受性的影響

空腹胰島素測(cè)定：分別取兩個(gè)月齡的兩組小鼠饑餓過(guò)夜，然后尾巴采血，用elisa試劑盒測(cè)定胰島素水平，每組10只鼠。結(jié)果如圖12，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠，rip-cre表示正常對(duì)照的小鼠，結(jié)果顯示kindlin-2^rip小鼠的空腹胰島素水平明顯低于對(duì)照組。

胰島素耐受實(shí)驗(yàn)(itt)：分別取兩個(gè)月齡的兩組小鼠饑餓過(guò)夜，然后腹腔注射胰島素，劑量為1unit/kg體重，然后在不同時(shí)間點(diǎn)采血，用血糖試紙測(cè)定血糖水平，每組10只鼠。結(jié)果如圖13，kindlin-2^rip表示胰島β細(xì)胞kindlin-2特異敲除的小鼠，rip-cre表示正常對(duì)照的小鼠，結(jié)果顯示kindlin-2基因敲除的小鼠與正常對(duì)照組的小鼠的外周組織對(duì)胰島素的敏感性沒(méi)有明顯差別。

以上結(jié)果顯示胰島中kindlin-2的表達(dá)量與胰島素的表達(dá)量相互關(guān)聯(lián)，kindlin-2可作為治療糖尿病藥物的靶點(diǎn)從而協(xié)同用于治療糖尿病。

實(shí)施例5

敲除kindlin-2基因?qū)π∈螃录?xì)胞的量、胰島面積以及胰腺面積的影響

將兩個(gè)月齡的小鼠胰腺石蠟包埋切片，然后對(duì)切片用胰島素抗體進(jìn)行免疫組化染色，分別測(cè)量敲除kindlin-2基因后的小鼠以及正常對(duì)照組的小鼠的胰島β細(xì)胞面積以及胰腺面積，每組10只小鼠，結(jié)果顯示如圖14～圖16顯示，圖14為兩組小鼠的β細(xì)胞面積/胰腺面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，顯示kindlin-2^rip小鼠的β細(xì)胞面積所占的比例顯著下降。圖15為兩組小鼠的β細(xì)胞的量，顯示kindlin-2^rip小鼠的β細(xì)胞的量顯著減少。圖16為兩組小鼠的胰島面積/胰腺面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，顯示敲除kindlin-2基因的小鼠與正常對(duì)照組的小鼠沒(méi)有明顯差別。

以上結(jié)果顯示敲除kindlin-2基因?qū)π∈蟮囊葝u面積/胰腺面積無(wú)顯著的影響，但對(duì)胰島β細(xì)胞面積影響較大，進(jìn)一步預(yù)示kindlin-2可作為治療糖尿病藥物的特異性的靶點(diǎn)。

實(shí)施例6

敲除kindlin-2基因?qū)π∈螃录?xì)胞增值的影響

將兩個(gè)月齡的小鼠胰腺石蠟包埋切片，用胰島素抗體和ki67抗體(用于檢測(cè)增值細(xì)胞)進(jìn)行免疫熒光染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察。正常對(duì)照組的小鼠以及敲除kindlin-2基因后的小鼠的結(jié)果如圖17所示，為了便于區(qū)分，圖17中的較小的圓圈圈出的顯示ki67抗體標(biāo)記增值細(xì)胞。以上結(jié)果顯示kindlin-2^rip小鼠的β細(xì)胞的增殖明顯減慢，預(yù)示可通過(guò)藥物提高kindlin-2的表達(dá)量來(lái)治療糖尿病。

實(shí)施例7

敲除kindlin-2基因?qū)π∈笠葝u素分泌量的影響

葡萄糖刺激的胰島素分泌實(shí)驗(yàn)(gsis)：將兩個(gè)月齡的小鼠饑餓過(guò)夜，分別對(duì)兩組小鼠的腹腔注射葡萄糖，劑量為2k/kg體重，然后在不同的時(shí)間點(diǎn)采血，用elisa試劑盒檢測(cè)胰島素的水平。每組8只鼠，結(jié)果圖18所示，顯示在有葡萄糖刺激時(shí)，kindlin-2^rip小鼠的β細(xì)胞分泌胰島素的能力顯著降低。

體外gsis實(shí)驗(yàn)：分別采用2.5mmol/l以及16.7mmol/l的葡萄糖檢測(cè)兩組小鼠的胰島素分泌量，每組10只鼠，結(jié)果如圖19所示。體外gsis實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也顯示在高濃度的葡萄糖刺激下，kindlin-2^rip小鼠的胰島分泌胰島素的能力顯著下降。

以上結(jié)果顯示敲除kindlin-2基因后的小鼠的分泌胰島素的能力顯著下降，預(yù)示kindlin-2可作為治療糖尿病藥物的靶點(diǎn)從而協(xié)同用于治療糖尿病。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。