本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及su6656在制備治療疼痛藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

src蛋白激酶家族(sfk)包括src、lyn、fyn、lck、hck、fgr、blk、yes和yrk。根據(jù)氨基酸序列，sfk可分為2個(gè)亞族：一族為c-src、fyn、yes和fgr，在不同組織中廣泛表達(dá)；另一族為lck、blk、lyn和hck，與造血細(xì)胞密切相關(guān)。src激酶是目前研究最為深入同時(shí)也是與人類疾病聯(lián)系最為密切的sfk成員，以往的研究發(fā)現(xiàn)其通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控細(xì)胞生長、分化和存活，影響細(xì)胞黏附、遷移和侵襲，同時(shí)還參與突觸傳遞的調(diào)節(jié)。

su6656是一src蛋白激酶家族抑制劑。su6656還可以抑制其他蛋白激酶，如camkkα，camkkβ，chk2和srpk1。su6656抑制nih3t3成纖維細(xì)胞中pdgf刺激的dna合成和細(xì)胞生長，并抑制src和血清促進(jìn)的細(xì)胞增殖。而且，在巨核細(xì)胞ut-7/tpo中加入su6656后，細(xì)胞停止分離，但是通過核內(nèi)有絲分裂仍然繼續(xù)積累dna。su6656還可以減弱放射誘導(dǎo)的akt磷酸化，并提高放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，在照射前服用su6656可以顯著提高照射誘導(dǎo)的血管損傷，分次照射時(shí)服用su6656可以促進(jìn)腫瘤生長延遲。

su6656(分子式c19h21n3o3s，相對(duì)分子質(zhì)量為371.45，化學(xué)結(jié)構(gòu)如式i)主要抑制src，yes，lyn，和fyn。近年來研究發(fā)現(xiàn)，su6656可部分阻斷高頻刺激下c纖維的誘發(fā)放電，以及在細(xì)胞水平上可抑制鈉通道的表達(dá)。但至今尚未見到在清醒自由運(yùn)動(dòng)的整體動(dòng)物(invivo)身上觀察su6656的鎮(zhèn)痛效果的報(bào)告。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了src蛋白激酶家族抑制劑su6656可以明顯緩解慢性炎癥痛和神經(jīng)病理性疼痛，從而提供了用于制備治療抗炎癥痛和神經(jīng)痛藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：su6656在制備治療疼痛藥物方面的應(yīng)用。

優(yōu)選地，su6656在制備治療抗炎癥痛藥物方面的應(yīng)用。

優(yōu)選地，su6656在制備治療神經(jīng)病理性疼痛藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明中的su6656作為主要活性成分制備治療抗炎癥痛藥物和療神經(jīng)病理性疼痛藥物，可以加入一種或多種天然或合成的與其具有協(xié)同或輔助作用的活性成分。一種治療疼痛的藥物，其由0.1-100％的su6656和99.9-0％的藥用輔料組成藥物制劑。

本發(fā)明su6656制備的治療疼痛藥物包括藥物學(xué)上的任何劑型。

本發(fā)明中，所述炎癥是指外周組織損傷或炎癥(如關(guān)節(jié)或肌肉損傷和炎癥)引起的持續(xù)性或慢性關(guān)節(jié)或肌肉痛。

本發(fā)明中，所述神經(jīng)病理性疼痛是指神經(jīng)損傷引起的持續(xù)性或慢性神經(jīng)痛(如坐骨神經(jīng)痛，三叉神經(jīng)痛等)。

劑量和給藥途徑

本文描述的施用給個(gè)體(例如，人類)的su6656劑量可因特定組合物、施用方法、以及病情的特定階段而變化。其量應(yīng)足以產(chǎn)生期望的反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，組合物的量是治療有效量。在一些實(shí)施方式中，組合物的量是預(yù)防有效量。在一些實(shí)施方式中，su6656在組合物中的總量低于誘導(dǎo)毒理學(xué)效應(yīng)的水平(即該水平高于在臨床上可接受的毒性水平)，或處于當(dāng)組合物被施用給個(gè)體時(shí)潛在副作用可被控制或容忍的水平。

在一些實(shí)施方式中，su6656在所述藥物中的量在以下任一范圍內(nèi)：約0.5mg至約5mg，約5mg至約10mg，約10mg至約15mg，約15mg至約20mg，約20mg至約25mg，約20mg至約50mg，約25mg至約50mg，約50mg至約75mg，約50mg至約100mg，約75mg至約100mg，約100mg至約125mg。

在一些實(shí)施方式中，su6656在藥物中的給藥量至少約為一天0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg或20mg/kg。

藥學(xué)制劑和給藥

根據(jù)在本領(lǐng)域中已知的用于制備各種劑型的常規(guī)方法，su6656可被配制成溶液、乳液、懸浮液、分散液，或諸如環(huán)糊精之類的在合適藥物溶劑或載體中的包合配合物，或被配制成丸劑、片劑、錠劑、栓劑、小藥囊、糖衣丸、顆粒劑、粉劑、重組粉劑、或連同固體載體的膠囊。實(shí)施方式中的藥物組合物可通過適當(dāng)?shù)倪f送路徑被施用，例如口服、腸胃外、直腸、鼻部、局部、或眼部途徑，或通過吸入。優(yōu)選地，組合物被配制成用于靜脈內(nèi)或口服給藥。

對(duì)于口服給藥，藥物可以以固體的形式來提供，例如片劑或膠囊，或被配制成溶液、乳液或懸浮液。口服片劑可包括與藥學(xué)上可接受的相容賦形劑混合的活性組分，所述賦形劑例如稀釋劑、崩解劑、結(jié)合劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑。適當(dāng)?shù)亩栊蕴畛鋭┌ㄌ妓徕c和碳酸鈣、磷酸鈉和磷酸鈣、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。示例性的液體口服賦形劑包括乙醇、甘油、水等。示例性崩解劑包括淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)、淀粉羥乙酸鈉、微晶纖維素和藻酸。結(jié)合劑可包括淀粉和明膠。潤滑劑—如果存在的話—可以是硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。如果需要，片劑可通過諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之類的材料而被包衣，以延緩在胃腸道中的吸收，或可通過腸溶衣而被包衣?？诜苿┛梢砸韵铝行问酱嬖冢阂噪x散單位的形式，例如膠囊、扁囊劑或片劑，各包含預(yù)定量的活性組分；以粉劑或顆粒劑的形式；以溶液或在水性液體或非水性液體中的懸浮液形式；或以水包油液體乳液或油包水液體乳液的形式?；钚越M分也可被制成大丸劑、藥糖劑或糊劑。

口服膠囊包括硬的和軟的明膠膠囊。為制備硬明膠膠囊，活性組分可與固體、半固體或液體稀釋劑混合。軟明膠膠囊的制備可通過將活性組分與以下物質(zhì)混合而實(shí)現(xiàn)：水，諸如花生油或橄欖油之類的油，液體石蠟，短鏈脂肪酸的甘油單酯與甘油二酯的混合物，聚乙二醇400，或丙二醇。

可通過壓制或模制而制成片劑，且可任選一種或多種輔助組分加入到片劑中?？赏ㄟ^在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中壓制以諸如粉末或顆粒之類的自由流動(dòng)形式存在的活性組分而制得制片劑，且可向其中任選混入粘合劑(例如，聚維酮、明膠、羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、分解劑(例如，淀粉羥乙酸鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑?？赏ㄟ^在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中對(duì)被惰性液體稀釋劑潤濕的粉狀化合物的混合物進(jìn)行模制而制得模制片劑。片劑可任選被包衣或刻痕，且可被配制成使其中的活性組分緩慢或受控制地被釋放，這例如可通過按不同比例使用羥丙基甲基纖維素而實(shí)現(xiàn)，以獲得所需的釋放曲線。

口服液可具有以下形式：懸浮液、溶液、乳液、或糖漿，或可被凍干或呈現(xiàn)為干燥產(chǎn)品，其可在被服用之前使用水或其他適當(dāng)?shù)妮d體重新配制。這類液體組合物可任選包含下列物質(zhì)：藥學(xué)上可接受的諸如懸浮劑之類的賦形劑(例如，山梨醇、甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠等)；諸如油之類的非水性載體(例如，杏仁油或分餾椰子油)，丙二醇，乙醇或水；防腐劑(例如，甲基或丙基對(duì)羥基苯甲酸或山梨酸)；諸如卵磷脂之類的潤濕劑；以及—如果需要—調(diào)味劑或著色劑。

對(duì)于包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或皮下途徑在內(nèi)的腸胃外施用，可將組合物制成如下形式：緩沖至適當(dāng)ph值和等滲性的無菌水溶液或懸浮液，或腸胃外可接受的油。適當(dāng)?shù)乃暂d體包括林格氏溶液和等滲氯化鈉。這類形式可被呈現(xiàn)如下：單位劑量形式，例如安瓿或一次性注射裝置；多劑量形式，例如從中可抽取適當(dāng)劑量的小瓶；或可用于制備可注射制劑的固體形式或預(yù)濃縮物。適用于包括靜脈內(nèi)給藥在內(nèi)的腸胃外給藥的制劑包括以下形式：可包含抗氧化劑的水性和非水性無菌注射液，緩沖液，抑菌劑，以及使制劑與預(yù)期接受者的血液等滲的溶質(zhì)；以及可包含懸浮劑和增稠劑的水性和非水性無菌懸浮液。制劑可被存放在單位劑量或多劑量容器中，例如密封安瓿和小瓶，且可被存儲(chǔ)在冷凍干燥(凍干)狀態(tài)下，僅需在使用之前即刻加入無菌液態(tài)載體，例如注射用水。臨時(shí)注射液和懸浮液可由先前所述的無菌粉劑、顆粒劑和片劑類型制得。

優(yōu)選的單位劑量制劑是指那些包含一活性組分的每日劑量或單位、每天亞劑量或適當(dāng)分量的制劑。

附圖說明

下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述：

圖1顯示給大鼠腹腔和靜脈注射su6656，不影響正常大鼠的機(jī)械痛閾和熱痛閾。圖1a為腹腔注射su6656(n＝10)和靜脈注射su6656(n＝10)前后正常大鼠的機(jī)械痛閾。圖1b為腹腔注射su6656(n＝10)和靜脈注射su6656(n＝10)前后正常大鼠的熱痛閾。

圖2顯示給大鼠腹腔和靜脈注射su6656，可明顯翻轉(zhuǎn)cfa大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏。圖2a為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su6656(1μm，300μl)cfa3d大鼠的機(jī)械痛閾。圖2b為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su6656(1μm，300μl)cfa3d大鼠的熱痛閾。***p<0.001vs.cfa3d(i.p.)；###p<0.001vs.cfa3d(i.v.)。

圖3顯示給大鼠腹腔和靜脈注射su6656，可明顯翻轉(zhuǎn)snl大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏。圖3a為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su6656(1μm，300μl)前后snl3d大鼠的機(jī)械痛閾。圖3b為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su66561μm，300μl)前后snl3d大鼠的熱痛閾。**p<0.01vs.snl3d(i.p.)；##p<0.01vs.snl3d(i.v.)；***p<0.001vs.snl3d(i.p.)；###p<0.001vssnl3d(i.v.)。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)上述方案做進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體廠家的條件做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。

本實(shí)施例運(yùn)用行為學(xué)測(cè)定方法，腹腔和靜脈注射注射su6656對(duì)正常大鼠，炎癥大鼠和神經(jīng)痛大鼠的行為學(xué)影響，研究su6656對(duì)炎癥痛和神經(jīng)病理性疼痛的鎮(zhèn)痛作用。

實(shí)驗(yàn)材料

成年雄性健康的sprague-dawley大鼠，體重200～250g，由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物中心的衛(wèi)生級(jí)核定文件編號(hào)：syxk(蘇)2007-0035。實(shí)驗(yàn)前，讓動(dòng)物在飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)三天。

完全弗氏佐劑購自美國sigma公司。su6656購自美國selleck公司。vonfrey纖維絲購自stoelting公司(nc12775)。足底測(cè)痛儀購自iitclifescience公司(model390series8)。

一、動(dòng)物模型的建立

1.1佐劑性炎癥動(dòng)物模型的建立

采用實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的做法(方法參考bu,f.,etal.,phosphorylationofnr2bnmdasubunitsbyproteinkinasecinarcuatenucleuscontributestoinflammatorypaininrats.scirep,2015.5:p.15945)，在正常大鼠右側(cè)后肢足墊皮下注射完全弗氏佐劑(completefreund’sadjuvat,cfa)100μl/只。cfa炎癥模型是常用的持續(xù)性炎癥疼痛模型之一，在注射局部可產(chǎn)生明顯炎癥現(xiàn)象。選取注射cfa后3天的右側(cè)后肢足墊、踝關(guān)節(jié)腫脹，表現(xiàn)痛覺過敏的個(gè)體作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象即實(shí)驗(yàn)組大鼠。

2.坐骨神經(jīng)分支選擇結(jié)扎模型(sparednerveligation,snl)動(dòng)物模型的建立

正常大鼠經(jīng)4％水合氯醛麻醉后，剪去右側(cè)脛骨部分毛發(fā)，碘酊消毒后剪開皮膚，小心分離股二頭肌，暴露坐骨神經(jīng)。分離脛神經(jīng)、腓總神經(jīng)和腓腸神經(jīng)，用5-0的結(jié)扎線結(jié)扎脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)，保持腓腸神經(jīng)完整并不受拉伸及損傷。手術(shù)過后涂抹青霉素防止炎癥發(fā)生。用縫合線縫合肌肉和皮膚。選取snl后3天的右側(cè)后肢足蜷縮，表現(xiàn)痛覺過敏的個(gè)體作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象即實(shí)驗(yàn)組大鼠。

二、行為學(xué)的測(cè)定

2.1機(jī)械痛閾值的測(cè)定(測(cè)定方法參考chaplan,s.r.,etal.,quantitativeassessmentoftactileallodyniaintheratpaw.jneuroscimethods,1994.53(1):p.55-63)

大鼠在行為學(xué)測(cè)定之前，首先要置于鐵絲網(wǎng)架上的有機(jī)玻璃箱中適應(yīng)環(huán)境，該過程持續(xù)三天，每次1h。參照chanplan的經(jīng)典方法，用vonfrey纖維絲垂直刺激大鼠右后足，刺激的力度以使探針彎成90度為準(zhǔn)，持續(xù)時(shí)間不大于4s，當(dāng)大鼠出現(xiàn)受試足快速抬起、躲避、舔咬等動(dòng)作時(shí)則視為陽性反應(yīng)，否則視為陰性反應(yīng)。當(dāng)出現(xiàn)陽性反應(yīng)時(shí)給予小一級(jí)強(qiáng)度的刺激，當(dāng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)時(shí)給予大一級(jí)強(qiáng)度的刺激。當(dāng)出現(xiàn)一次陽性反應(yīng)和陰性反應(yīng)的騎跨，再按上述方法測(cè)定4次刺激。最終的機(jī)械傷害性縮腿閾(mechanicalwithdrawthreshold,mwt)根據(jù)“上下法”計(jì)算得到，公式為：50％threshold(g)＝(10[xf+kδ])/10000。其中xf為最后一根用于測(cè)定的纖維絲的刺激強(qiáng)度，kδ：根據(jù)上下法陽性反應(yīng)和陰性反應(yīng)出現(xiàn)的模式所對(duì)應(yīng)得到的數(shù)值。

2.2熱痛閾值的測(cè)定(測(cè)定方法參考wu,x.b.,etal.,cxcl13/cxcr5enhancessodiumchannelnav1.8currentdensityviap38mapkinaseinprimarysensoryneuronsfollowinginflammatorypain.scirep,2016.6:p.34836.)

大鼠在熱痛閾值測(cè)定前，首先置于玻璃板上的有機(jī)玻璃箱中適應(yīng)環(huán)境，該過程持續(xù)三天，每次約10min。在熱痛閾測(cè)試開始之前，擦拭玻璃板使其保持清潔。使用光源照射大鼠右后足，每組動(dòng)物在基礎(chǔ)熱痛閾測(cè)定時(shí)調(diào)整光源至適合強(qiáng)度，并以此強(qiáng)度測(cè)定該組動(dòng)物的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。當(dāng)大鼠出現(xiàn)縮足，舔咬等行為時(shí)，迅速關(guān)閉光源，并記下時(shí)間值。間隔5min后重復(fù)測(cè)定，取三次平均值作為熱傷害性縮腿閾(thermalwithdrawlatency,twl)。

三、實(shí)驗(yàn)及結(jié)果和分析

3.1取正常的大鼠20只分成兩組，每組n＝10,在第一組大鼠的腹腔注射su6656(1μm，1ml)，在第二組大鼠靜脈注射su6656(1μm，300μl)后，分別經(jīng)過1h，3h，24h，48h，72h檢測(cè)各組的機(jī)械痛閾和熱痛閾。

檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，顯示給大鼠腹腔和靜脈注射su6656，不影響正常大鼠的機(jī)械痛閾和熱痛閾。

3.2取如前述方法制備得到的cfa3d大鼠16只，分成兩組，每組n＝8,在第一組大鼠的腹腔注射su6656(1μm，1ml)，在第二組大鼠靜脈注射su6656(1μm，300μl)后，分別經(jīng)過1h，3h，24h，48h，72h檢測(cè)各組的機(jī)械痛閾和熱痛閾。

檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，顯示給cfa3d大鼠腹腔和靜脈注射su6656后1h，3h，24h，48h，72h可明顯翻轉(zhuǎn)cfa大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏。圖2a為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su6656(1μm，300μl)cfa3d大鼠的機(jī)械痛閾。圖2b為腹腔注射su6656(1μm，1ml)和靜脈注射su6656(1μm，300μl)cfa3d大鼠的熱痛閾。***p<0.001vs.cfa3d(i.p.)；###p<0.001vs.cfa3d(i.v.)。

3.3取如前述方法制備得到的snl3d大鼠26只，分成兩組，每組n＝13,在第一組大鼠的腹腔注射su6656(1μm，1ml)，在第二組大鼠靜脈注射su6656(1μm，300μl)后，分別經(jīng)過1h，3h，24h，48h，72h檢測(cè)各組的機(jī)械痛閾和熱痛閾。

檢測(cè)結(jié)果如圖3所示，顯示給大鼠腹腔和靜脈注射su6656后1h，3h可翻轉(zhuǎn)snl大鼠的機(jī)械痛敏和熱痛敏。圖3a為腹腔注射su6656(n＝10)和靜脈注射su6656(n＝13)前后snl3d大鼠的機(jī)械痛閾。圖3b為腹腔注射su6656(n＝10)和靜脈注射su6656(n＝13)前后snl3d大鼠的熱痛閾。**p<0.01vs.snl3d(i.p.)；##p<0.01vs.snl3d(i.v.)；***p<0.001vs.snl3d(i.p.)；###p<0.001vssnl3d(i.v.)。。

本發(fā)明公開的用于制備治療疼痛藥物是由0.1-100％的su6656和99.9-0％的藥用輔料組成藥物制劑。

為了制備適于胃腸道外途徑的溶液劑型，可以使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液，或者低濃度(如1-100mm)磷酸緩沖鹽水pbs作為載體或賦形劑。、

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)例的限制，上述實(shí)例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。